2014HBV-DNA室内质控品说明书

中医院PCR实验室
乙型肝炎病毒核酸定量室内质控图年月
仪器型号：质控项目：HBV-DNA 单位：IU/ml 质控日期：质控批号：
靶值：质控范围:
标准差： CV(%):
本月小结：
制表人：质量主管：
注：1、X线为靶线，X±2SD为警告线，X±3SD为失控线。

2.如果检测结果在X±3SD线以外，则为失控，应立即报告有关责任人，迅速查找原因。

必要时复查标本，然后方可发出报告，并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录。

3、如果检测结果在X±2SD线以外，或连续6点以上在一侧等规律变化，均应及时向有关责任人反映，并积极查找原因。

但当天的检验结果一般可以发出。

乙肝抗原、抗体免疫测定室内质控品的制备及使用摘要】目的：探讨分析乙肝抗原、抗体免疫测定室内质控品的制备和使用情况。

方法：将我院2014年1月至2015年期间接受乙肝抗原、抗体免疫测定的149例患者作为研究对象，用全自动酶免疫分析仪测定其标本，分析总结测定结果。

结果：自制乙肝抗原质控品最佳批内CV和均值，并观察其稳定性均较为良好。

结论：在进行乙肝抗原、抗体免疫测定室内质控品使用和制备上，可采用低值质控，此对正确掌握和判定可疑结果上存在有利作用，临床推广应用价值较为明显。

【关键词】免疫；制备；室内；质控品；抗体；乙肝抗原【中图分类号】R37 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）33-0366-02目前，临床进行免疫测定的准确性已得到明显性提升，同时对临床进行疾病预后评估和诊疗考核等均有促进作用，在确保免疫检验结果更加可靠上面较为重要。

为此，本文采用全自动酶免疫分析仪Rayto进行分析，因所采用的酶联免疫乙肝试剂盒中无低值血清，所以，在制备室内质控品时需从临检中心进行购买，因此单一质控品、批号过期、购买不及时等状况均会导致室内质控品出现成本较高、使用不方便等状况[1]。

本研究按照实验室检测实际状况，将两个复合自制免疫质控品应用到全自动酶免疫分析过程中内，使用时间为六个月，效果较为满意。

具体报告如下。

1.资料及方法1.1 一般资料将我院2014年1月至2015年期间接受乙肝抗原、抗体免疫测定的149例患者作为研究对象，其中包含男性共89例，女性共60例，最小年龄为26岁，最大年龄为65.5岁，平均年龄为（45.1±2.7）岁。

1.2 方法确定cut-off指数方式为标本对阴性比值方式，此试剂对照阴性A指数<0.05，按照此试剂相关说明操作流程，阴性对照组<0.05，依据0.05进行计算，COV指数为0.105。

制备质控品方式：（1）乙肝抗原免疫测定质控品制备：临床检验过程中选取乙型肝炎核心抗体、肝炎e抗原、表面抗原阳性的标本，也就是大三阳标本，给予相应分量的阴性乙肝五项血清降其调节为浓度一定的成分，56度环境下，灭活10小时，离心处理，将沉淀物去除，一年用量为总量，加叠氮钠0.5%进行防腐处理。

乙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书-模板1.目的采用PCR技术、实时荧光探针技术，用于临床血清或血浆标本中的乙型肝炎病毒核酸的定量检测，或用于乙型肝炎的辅助诊断和抗病毒药物治疗中的疗效观察。

2.范围适用于乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）定量检测（PCR-荧光探针法）。

3.职责3.1操作人员：负责标本制备检测、仪器操作、报告发送。

3.2专业组组长：负责本组耗材的请购，监督本组标本检测、仪器操作、报告发送、质控管理等各方面工作。

3.3实验室主任：负责监督和指导实验室各方面工作。

4.原理采用荧光PCR技术，以HBV基因组中相对保守区为靶区域，设计特异性引物及荧光探针，在样品核酸纯化之后，通过荧光定量PCR对HBV DNA进行扩增，并检测荧光信号，仪器软件系统自动绘制出实时扩增曲线，根据阈循环值（CT）实现对未知样品的检测。

另外，本试剂盒带有内标物质，用于对核酸提取的整个过程进行监控，减少假阴性结果的出现。

5.样品要求5.1适用样品类型：血清或血浆。

5.2样品采集：5.2.1血清用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2:^，注入无菌的真空采血管中（未加抗凝剂），室温（22-25℃）放置30-60min血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管。

5.2.2血浆用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2ml，注入含EDTA （乙二胺四乙酸二钠）抗凝剂的真空采血管，立即轻轻颠倒混匀5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后分离血浆于无菌的1.5ml 灭菌离心管。

5.3样品保存和运送使用专用样品0c冰壶送检，温度约维持在4℃左右。

分离后的血清或血浆可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月。

5.4拒收样品：拒绝重度溶血样品、肝素抗凝的血浆。

6.仪器和试剂6.1仪器AB7500核酸扩增仪、恒温金属浴、生物安全柜、低温离心机等。

乙型肝炎病毒DNA定量检测临界室内质控品的制备与初步应用曹季军;吕心路;许爱萍;杨剑虹;李晓红;王金湖【摘要】目的制备乙型肝炎病毒(HBV)-DNA定量检测的临界室内质控品并评价其在日常工作中的应用价值.方法留取健康体检者血清作为基质,稀释阳性标准品,与临床标本采用实时荧光定量聚合酶链反应一起检测,根据结果计算出x、s、CV 值并在L-J室内质控图上作图,应用Westgard多规则质控判断方法.结果x=3.55×104 copy/mL,s=0.24(对数值),CV=5.27%.结论自制HBV DNA临界质控品结果稳定,具有一定实用价值.【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2011(008)022【总页数】2页(P2771-2772)【关键词】乙型肝炎病毒4;荧光定量聚合酶链反应;室内质控品【作者】曹季军;吕心路;许爱萍;杨剑虹;李晓红;王金湖【作者单位】江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400;江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400;江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400;江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400;江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400;江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400【正文语种】中文长期以来，我国人群一直呈乙型肝炎病毒（HBV）高感染率，约有1.3亿人感染[1]，因此乙型肝炎的诊断和治疗显得格外重要。

随着科学技术的发展和基因检测技术的成熟，HBV DNA的检测在乙型肝炎的诊断、治疗和疗效观察方面发挥了不可替代的作用，尤其是实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术。

但是为了保证检测的质量，必须要有严格室内质量控制措施。

因PCR检测结果为指数增长，目前尚无统一的室内质控品。

本实验室根据自身条件，自行制备了HBV DNA室内质控血清，并进行了初步应用和评价，现报道如下。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 血清健康体检者血清，要求无黄疸、无溶血、无脂血，丙氨酸氨基转移酶小于40 U/m L，HBV表面抗原阴性，HBV DNA无扩增趋势。

自制质控品在实时荧光法HBV-DNA定量室内质控中的应用摘要】目的研究实时荧光定量(RT-PCR)检测乙肝病毒核酸(HBV—DNA)时，自制质控品的扩增循环阈值(CT)作为靶值在室内质控中应用的可行性。

方法留取已知HBV—DNA浓度的患者血清和甲、乙、丙、戊肝和HIV血清学标志物全阴性的患者血清，通过一定比例稀释得到预期浓度的质控物，分装并-70℃保存。

分别计算出靶值，标准差和变异系数(OCV％、RCV％)，以CT值在±2S为质控警告线±3S为质控失控线，绘制Levey—Jennings质控图。

分析结果质控物最佳条件下的、S和OCV分别为27.5、0.65和2.36％；常规条件下的、S和RCV分别为28.7、0.73和2.54％。

RCV值<2 OCV值，此RCV可以接受。

结论自制质控品的CT值作为靶值应用于RT-PCR法HB—VDNA定量的室内质控中，制图方便，结果准确可靠，可以推广。

【关键词】HBV-DNA 扩增循环阈值室内质控【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）51-0159-02实时荧光定量PCR具有特异性强，能有效解决PCR产物污染、自动化程度高等特点。

在临床PCR检验中，通常使用质控样本扩增后的“拷贝数／ml”或“U／ml”来进行质控数据的统计分析[1]，但应用起来很不方便，本研究试用自制血清质控品的扩增循环阈值(CT)绘制质控图，研究其在HBV-DNA检测室内质控中的应用价值。

1 材料和方法1.1材料1.1.1质控品来源：质控血清来自抚顺市中心医院门诊和住院患者血清，经乙肝五项和甲、丙、戊肝血清学标志物全阴性的患者血清20人份；已知HBV-DNA检测结果为5.67×106IU／ml的血清样本一份。

以上血清均无肉眼可见的脂血、溶血和黄疸，将其进行56℃30min灭活处理。

1.1.2仪器设备：德国凯杰Rotor-GeneQ实时荧光定量PCR分析仪。

2020年3月自制乙型肝炎病毒DNA 检测室内质控品及效果评价孙文鲜，刘毅，李元捷，李灵*（新郑市人民医院检验科，河南新郑，451100）摘要：目的用新鲜混合血清制备乙型肝炎病毒DNA 检测室内质控品，并进行效果评价。

方法采用实时荧光定量PCR 技术对收集的新鲜阳性混合血清和新鲜阴性混合血清进行灭活，将阳性混合血清稀释成103、107IU/mL ，分别作为低值（HBV-L ）质控品和高值（HBV-H ）质控品，分装冷冻于-80℃，并初定靶值。

评价自制质控品的精密度和稳定性，绘制室内质控图。

结果自制HBV-L 质控品的批内精密度、批间精密度为3.22%、3.49%，HBV-H 质控品的批内精密度、批间精密度为1.57%、1.69%，均小于5%，符合要求。

结论自制HBV DNA 2个水平室内质控品成功，可作为HBV DNA 定量检测实验室内的质量控制。

关键词：乙型肝炎病毒DNA ；荧光定量PCR 技术；质控品中图分类号：R446.1文献标志码：A 文章编号：2096-1413(2020)09-0103-02DOI:10.19347/ki.2096-1413.202009043作者简介：孙文鲜（1984-），男，汉族，河南杞县人。

*通讯作者：李灵，E -mail:361871917@.Indoor quality control products for detection of hepatitis B virus DNA andthe effectiveness evaluationSUN Wen-xian,LIU Yi,LI Yuan-jie,LI Ling *(Clinical Laboratory Department,Xinzheng People's Hospital,Xinzheng 451100,China)ABSTRACT:Objective To prepare quality control products for hepatitis B virus DNA detection with fresh mixed serum and evaluate the effect.Methods Fresh positive and negative mixed serum were inactivated by real-time fluorescence quantitative PCR and the positive mixed serum were diluted to 103and 107IU/mL,which were used as low-value (HBV-L)quality control products and high-value (HBV-H)quality control products,respectively.The quality control products were subpacked and frozen at -80℃,and the initial target values were determined.The precision and stability of the self-made quality control products were evaluated,and the indoor quality control chart was drawn.Results The intra-batch precision and inter-batch precision of self-made HBV-L quality control products were 3.22%and 3.49%,respectively.The intra-batch precision and inter-batch precision of HBV-H quality control products were 1.57%and 1.69%.All of them were less than 5%and met the requirements.Conclusion The home-made quality control products of HBV DNA at two levels are successful and can be used as quality control in the laboratory of quantitative detection of HBV DNA.KEYWORDS:hepatitis B virus DNA;fluorescence quantitative PCR technology;quality control product临床医学HBV DNA 定量测定可精确了解患者体内的乙型肝炎病毒（HBV ）数量，为患者抗病毒治疗提供依据[1]。

康彻思坦质控品HBV说明书质控品HBV是检测样品中HE和EGF的实验试剂。

其目的是检验样品中的HE/EGF, HE/EGF 含量水平。

它适用于各种HE/EGF检测。

一、试剂说明本试剂是用化学方法测定HBV的试剂，不属于特异性分析方法，不需要做检测。

它是用生物法测定HWO抗体中血清HE和EGF中HET指标的方法。

该试剂属于特异性测定法，其使用方法和操作与特异性分析法相同，具有很强的针对性。

它可以用于血液或尿液检测。

二、使用方法使用前，必须将样品溶液稀释至4 ppm。

使用时，请将质量浓度为100μg/mL HBV置于100 ml标准试管中，加60μL HBV溶液使其与3 ml或更多的HBV溶液混合，然后稀释到一定浓度，再将其加入到LC缓冲液中溶解样品并加至质量浓度为100μg/mL HBV溶液，加入2滴已标记的待测基因(signals)和蛋白质组学数据进行分析。

在3分钟内，用HBV溶液稀释并记录分析结果。

三、注意事项将HBV转移到含有HE和EGF的液体中时，请立即用NaCl溶液稀释该液体以获得HBV。

稀释前请彻底检查液体的质量并确保充分稀释，然后在不稀释实验样品的情况下进行检测。

使用该方法时，应注意防止操作不当而造成样品HBV污染或HE/EGF干扰实验试剂盒中其他试剂的使用，并及时报告结果。

如需获得其他产品或试剂，请向有资质的实验室咨询或购买。

四、储存条件保存温度：室温。

保存时间：至少8个月，并在运输和储存过程中注意保持干燥。

运输和储存条件：应储存在阴凉干燥无异味的室内环境中。

储存温度：不应超过30°C;不应在高湿或高湿度条件下储存；避免阳光直射。

五、质控品的使用注意事项：使用前请检查质控品是否在溶剂中，如果没有则不需要更换。

在使用时应充分稀释。

在稀释过程中，用无菌注射器泵入质控品溶液，然后使用无菌注射器注入少量新的或未稀释的样品中，如用玻璃管，应先放入约0.5 ml样品。

再用注射器吸取5 ml样品加入无菌注射器中至容量瓶中，并与等量试剂混合，以确保混合液充分混合。