2014HBV-DNA室内质控品说明书

中医院PCR实验室
乙型肝炎病毒核酸定量室内质控图年月
仪器型号：质控项目：HBV-DNA 单位：IU/ml 质控日期：质控批号：
靶值：质控范围:
标准差： CV(%):
本月小结：
制表人：质量主管：
注：1、X线为靶线，X±2SD为警告线，X±3SD为失控线。

2.如果检测结果在X±3SD线以外，则为失控，应立即报告有关责任人，迅速查找原因。

必要时复查标本，然后方可发出报告，并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录。

3、如果检测结果在X±2SD线以外，或连续6点以上在一侧等规律变化，均应及时向有关责任人反映，并积极查找原因。

但当天的检验结果一般可以发出。

率可达 ９０ ％ 】 ．９ Ｊ 。长期 以来 ， 乙肝的实验室诊断大 多靠抗 原抗 体反 应 来 进 行 定 性 ， 来 又发 展 到更 为 后
展， 乙肝 诊断 已 由原 来 的定 性 飞跃 到可 以利 用 Ｐ Ｒ Ｃ
１ 材 料 与方法 １１ 标本来源 ． 所 有标 本 均 取 自昆 明医 学 院
李 关兰 ， 旭 胡 莹。 杨 ， （． １ 大理 学院 附属 医院检验科 ， 南 大理 云
２ 昆 医附二 院检 验科 ， 南 昆 明 ． 云
【 摘要 】 目的
６ １０ ； ７ ０ ０
６００ ） ５ １ １
采用
探讨实时荧光定量技术在 Ｈ Ｖ— Ｎ Ｂ Ｄ Ａ定量检测 过程 中的室 内质控 问题 。方法
准确 、 敏度 更 高 的酶 法 。 随 着 捡 验 技 术 的 迅猛 发 第 二附属 医院 的门诊 和住 院病人 。 灵
１２ 试 剂 ．
Ｐ Ｒ试 剂盒 由深 圳 匹基 公 司提供 ， Ｃ
技术 检 测 病 毒 载 量 ， 与传 统 的 Ｐ Ｒ技术 相 比 ， 时 荧光 Ｐ Ｒ检 测仪 为 Ｍ ｏｔ ｏ ｎｔ 。 Ｃ 实 Ｃ ｊｐｉ ｎＭｏ ｉ ｒ ｃ ｏ 荧光 定 量技术 具 有 特异 性 高 ， 能有 效解 决 Ｐ Ｒ产物 Ｃ １３ 方法 严格按试剂盒 的操作说明 ， ． 待检血 污染 问题 ， 而且 自动化程度较高 等特点Ｃ ｓ ２ － 。为了 Ｊ 清 与试 剂盒 中的质粒标 准 品在 同一条 件下 进行 Ｄ Ａ Ｎ
参 考 文 献
［ ］ 宓庆 梅 ， 巍字 ， 婉莹， Ｅ Ｔ １ 施 郝 等． Ｄ Ａ依赖性假性血小板 减少症 １
例［ ］ 中华检验 医学杂志 ， ０ ， （０ ： １ ． Ｊ． ２ ４ ２ １ ）７ ９ ０ ７ ［ ］ 叶应妩 ， ２ 王毓三 ． 国临床检验操作规程 ［ ． 全 Ｍ］ ２版． 南京 ： 东南

பைடு நூலகம்
７０ ３ ） ３ ０ ０
探 讨 ＨＢ — ＮＡ 定 量检 测 的 室 内质 量控 制 措 施 ， 定 可 行 的 室 内质 量 控 制 方 法 。方 法 自制 乙肝 病 毒 栽 量 ＶＤ 制 临
为 １ 的 室 内质 控 物 ， 临 床 标 本 的 同步 处理 检 测进 行 １ ０次试 验 ， 不 同批 号 试 剂 求 出试 剂 盒 携 带 对 照 样 本 、 准 曲 线 Ｏ 与 ０ 按 标
有 效 的 室 内质 量 控 制 措 施 。
关键 词 ： 内质 量控 制 ； 室 标准差 ； 变异 系数
中图分类 号 ： ４ ． ９ 文献 标志码 ： Ｒ４ ６ ６ Ａ
文章编 号 ：６ １７ １ （０ ０ ０ — ５ ＂３ １ ７— ４ ４ ２ １ ） ３１ ２０
ｄ ｉ １ ． ９ ９ ｊ ｉｓ ． ６ １ ７ １ ． ０ ０ ０ ． ５ ｏ ： ０ ３ ６ ／ ．ｓｎ １ ７ — ４ ４ ２ １ ． ３ ０ ６
Ａｂ ｔａ ｔ Ｏｂ ｅｔｖ Ｔｏｓｕ ｙｔ ｅｍｅ ｓ ｒ ｆｉｔｒ ａ ｕ ｎ ｉｙｃ ｎ ｒ ｌ（ＱＣ）ｏ ｅ Ｖ— ｓｒ ｃ ． ｊｃｉｅ ｔ ｄ ｈ ａ ｕ ｅｏ ｅｎ ｌ ａ ｔｔ ｏ ｔｏ Ｉ ｎ ｑ ｖ ｒＨＢ ＤＮＡ ｕ ｎ ｉａｉｅｄ ｔｃｉｎｔ ｅ ｑ ａ ｔｔｔ ｅｅｔｏ ｏｄ — ｖ
在 ０ ０ ６６ Ｏ １ ４ ６ ２ ２ ～ ５ １ ， ． １ ～ １ １ ５ ． ７ ～ ． ７ 和 ． ４ ． ７ ０８ ９ ４ ． １ ８和 １ ７ ～ ３ Ｏ 。 内质 控 物 在 不 同批 号试 剂 同 的标 准差 和 ．９ ．６ 室
变异 ＿ 范 围 分 别 在 ０ １ ５２ ． ３ 系数 ． ９ ～Ｏ ４ ６５和 ３ １ ～７ ６ ， 批 次 正 常 累加 计 算标 准 差 和 变异 系数 为 ０ ３７和 ６ ５ 。 ．２ ．２ 五 ．８ ．５ 结 论 对 Ｈ Ｖ－ Ｂ ＤＮＡ 定 量 检 测 实行 试 剂 盒 的 有 效性 、 准 曲线 的有 效性 和 室 内质 控 物 是 否 在 控 三个 层 次 的 质 量控 制 是 最 标

乙肝抗原、抗体免疫测定室内质控品的制备及使用摘要】目的：探讨分析乙肝抗原、抗体免疫测定室内质控品的制备和使用情况。

方法：将我院2014年1月至2015年期间接受乙肝抗原、抗体免疫测定的149例患者作为研究对象，用全自动酶免疫分析仪测定其标本，分析总结测定结果。

结果：自制乙肝抗原质控品最佳批内CV和均值，并观察其稳定性均较为良好。

结论：在进行乙肝抗原、抗体免疫测定室内质控品使用和制备上，可采用低值质控，此对正确掌握和判定可疑结果上存在有利作用，临床推广应用价值较为明显。

【关键词】免疫；制备；室内；质控品；抗体；乙肝抗原【中图分类号】R37 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）33-0366-02目前，临床进行免疫测定的准确性已得到明显性提升，同时对临床进行疾病预后评估和诊疗考核等均有促进作用，在确保免疫检验结果更加可靠上面较为重要。

为此，本文采用全自动酶免疫分析仪Rayto进行分析，因所采用的酶联免疫乙肝试剂盒中无低值血清，所以，在制备室内质控品时需从临检中心进行购买，因此单一质控品、批号过期、购买不及时等状况均会导致室内质控品出现成本较高、使用不方便等状况[1]。

本研究按照实验室检测实际状况，将两个复合自制免疫质控品应用到全自动酶免疫分析过程中内，使用时间为六个月，效果较为满意。

具体报告如下。

1.资料及方法1.1 一般资料将我院2014年1月至2015年期间接受乙肝抗原、抗体免疫测定的149例患者作为研究对象，其中包含男性共89例，女性共60例，最小年龄为26岁，最大年龄为65.5岁，平均年龄为（45.1±2.7）岁。

1.2 方法确定cut-off指数方式为标本对阴性比值方式，此试剂对照阴性A指数<0.05，按照此试剂相关说明操作流程，阴性对照组<0.05，依据0.05进行计算，COV指数为0.105。

制备质控品方式：（1）乙肝抗原免疫测定质控品制备：临床检验过程中选取乙型肝炎核心抗体、肝炎e抗原、表面抗原阳性的标本，也就是大三阳标本，给予相应分量的阴性乙肝五项血清降其调节为浓度一定的成分，56度环境下，灭活10小时，离心处理，将沉淀物去除，一年用量为总量，加叠氮钠0.5%进行防腐处理。

• 暂定标准差的设定：同暂定靶值的设 定。
• 对于标准差，使用的数据量越大，其 标准差估计值将更好。
WESTGARD质控规则
• 13S：失控规则，提示有一水平质控值超出 ±3S，提示随机误差或系统误差增大造成的 失控。
• 22S：失控规则，是系统误差，有二种表现 ①同一个水平的质控品连续2次控制值同方向 超出+2S或-2S限值；②在1批检测中，2个 水平的质控值同方向超出+2S或-2S限值。
研究现状
• 目前国内具有HBV –DNA质控品甚少， 价格昂贵，保质期短，运输要求条件高。
技术方法和路线
• 1. 收集正常血清 • 2. 选择病人标本 • 3. 配置质控血清 • 4.分装 • 5.保存 • 6.稳定性及瓶间差评价
• 1. 收集正常血清
• 收集经HBV -DNA检测无扩增的样本血 清（无脂血、无溶血）。放入经过高温消 毒离心管内、3000rpm离心10分钟。取 上清备用。
• 2.选择病人标本
• 选择DNA含量在1.0E+07 IU/mL4.0E+07 IU/mL的血清标本，充分混匀， 3000rpm离心10分钟。取上清备用。
• 3.配置质控血清：
• 将阳性血清用正常血清稀释10倍、1000 倍振荡混匀。
• 4.分装
• 5.保存：
• 将两个浓度质控品离心管随机分为4组， 分别放入室温（A组）、—20±5℃（B 组）、—40±5℃（C组）、—80±5℃ （D组）的低温冰箱保存备用，进行稳定 性的监测。
• 6. 稳定性及瓶间差评价
• 评价其不同温度条件下的稳定性。各组质 控品应用HBV—DNA荧光实时定量PCR 检测试剂盒分别检测20次；分别计算各 组均值的对数值、标准差和变异系数。

乙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书-模板1.目的采用PCR技术、实时荧光探针技术，用于临床血清或血浆标本中的乙型肝炎病毒核酸的定量检测，或用于乙型肝炎的辅助诊断和抗病毒药物治疗中的疗效观察。

2.范围适用于乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）定量检测（PCR-荧光探针法）。

3.职责3.1操作人员：负责标本制备检测、仪器操作、报告发送。

3.2专业组组长：负责本组耗材的请购，监督本组标本检测、仪器操作、报告发送、质控管理等各方面工作。

3.3实验室主任：负责监督和指导实验室各方面工作。

4.原理采用荧光PCR技术，以HBV基因组中相对保守区为靶区域，设计特异性引物及荧光探针，在样品核酸纯化之后，通过荧光定量PCR对HBV DNA进行扩增，并检测荧光信号，仪器软件系统自动绘制出实时扩增曲线，根据阈循环值（CT）实现对未知样品的检测。

另外，本试剂盒带有内标物质，用于对核酸提取的整个过程进行监控，减少假阴性结果的出现。

5.样品要求5.1适用样品类型：血清或血浆。

5.2样品采集：5.2.1血清用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2:^，注入无菌的真空采血管中（未加抗凝剂），室温（22-25℃）放置30-60min血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管。

5.2.2血浆用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2ml，注入含EDTA （乙二胺四乙酸二钠）抗凝剂的真空采血管，立即轻轻颠倒混匀5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后分离血浆于无菌的1.5ml 灭菌离心管。

5.3样品保存和运送使用专用样品0c冰壶送检，温度约维持在4℃左右。

分离后的血清或血浆可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月。

5.4拒收样品：拒绝重度溶血样品、肝素抗凝的血浆。

6.仪器和试剂6.1仪器AB7500核酸扩增仪、恒温金属浴、生物安全柜、低温离心机等。

乙型肝炎病毒DNA定量检测临界室内质控品的制备与初步应用曹季军;吕心路;许爱萍;杨剑虹;李晓红;王金湖【摘要】目的制备乙型肝炎病毒(HBV)-DNA定量检测的临界室内质控品并评价其在日常工作中的应用价值.方法留取健康体检者血清作为基质,稀释阳性标准品,与临床标本采用实时荧光定量聚合酶链反应一起检测,根据结果计算出x、s、CV 值并在L-J室内质控图上作图,应用Westgard多规则质控判断方法.结果x=3.55×104 copy/mL,s=0.24(对数值),CV=5.27%.结论自制HBV DNA临界质控品结果稳定,具有一定实用价值.【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2011(008)022【总页数】2页(P2771-2772)【关键词】乙型肝炎病毒4;荧光定量聚合酶链反应;室内质控品【作者】曹季军;吕心路;许爱萍;杨剑虹;李晓红;王金湖【作者单位】江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400;江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400;江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400;江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400;江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400;江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400【正文语种】中文长期以来，我国人群一直呈乙型肝炎病毒（HBV）高感染率，约有1.3亿人感染[1]，因此乙型肝炎的诊断和治疗显得格外重要。

随着科学技术的发展和基因检测技术的成熟，HBV DNA的检测在乙型肝炎的诊断、治疗和疗效观察方面发挥了不可替代的作用，尤其是实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术。

但是为了保证检测的质量，必须要有严格室内质量控制措施。

因PCR检测结果为指数增长，目前尚无统一的室内质控品。

本实验室根据自身条件，自行制备了HBV DNA室内质控血清，并进行了初步应用和评价，现报道如下。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 血清健康体检者血清，要求无黄疸、无溶血、无脂血，丙氨酸氨基转移酶小于40 U/m L，HBV表面抗原阴性，HBV DNA无扩增趋势。

自制质控品在实时荧光法HBV-DNA定量室内质控中的应用摘要】目的研究实时荧光定量(RT-PCR)检测乙肝病毒核酸(HBV—DNA)时，自制质控品的扩增循环阈值(CT)作为靶值在室内质控中应用的可行性。

方法留取已知HBV—DNA浓度的患者血清和甲、乙、丙、戊肝和HIV血清学标志物全阴性的患者血清，通过一定比例稀释得到预期浓度的质控物，分装并-70℃保存。

分别计算出靶值，标准差和变异系数(OCV％、RCV％)，以CT值在±2S为质控警告线±3S为质控失控线，绘制Levey—Jennings质控图。

分析结果质控物最佳条件下的、S和OCV分别为27.5、0.65和2.36％；常规条件下的、S和RCV分别为28.7、0.73和2.54％。

RCV值<2 OCV值，此RCV可以接受。

结论自制质控品的CT值作为靶值应用于RT-PCR法HB—VDNA定量的室内质控中，制图方便，结果准确可靠，可以推广。

【关键词】HBV-DNA 扩增循环阈值室内质控【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）51-0159-02实时荧光定量PCR具有特异性强，能有效解决PCR产物污染、自动化程度高等特点。

在临床PCR检验中，通常使用质控样本扩增后的“拷贝数／ml”或“U／ml”来进行质控数据的统计分析[1]，但应用起来很不方便，本研究试用自制血清质控品的扩增循环阈值(CT)绘制质控图，研究其在HBV-DNA检测室内质控中的应用价值。

1 材料和方法1.1材料1.1.1质控品来源：质控血清来自抚顺市中心医院门诊和住院患者血清，经乙肝五项和甲、丙、戊肝血清学标志物全阴性的患者血清20人份；已知HBV-DNA检测结果为5.67×106IU／ml的血清样本一份。

以上血清均无肉眼可见的脂血、溶血和黄疸，将其进行56℃30min灭活处理。

1.1.2仪器设备：德国凯杰Rotor-GeneQ实时荧光定量PCR分析仪。

2020年3月自制乙型肝炎病毒DNA 检测室内质控品及效果评价孙文鲜，刘毅，李元捷，李灵*（新郑市人民医院检验科，河南新郑，451100）摘要：目的用新鲜混合血清制备乙型肝炎病毒DNA 检测室内质控品，并进行效果评价。

方法采用实时荧光定量PCR 技术对收集的新鲜阳性混合血清和新鲜阴性混合血清进行灭活，将阳性混合血清稀释成103、107IU/mL ，分别作为低值（HBV-L ）质控品和高值（HBV-H ）质控品，分装冷冻于-80℃，并初定靶值。

评价自制质控品的精密度和稳定性，绘制室内质控图。

结果自制HBV-L 质控品的批内精密度、批间精密度为3.22%、3.49%，HBV-H 质控品的批内精密度、批间精密度为1.57%、1.69%，均小于5%，符合要求。

结论自制HBV DNA 2个水平室内质控品成功，可作为HBV DNA 定量检测实验室内的质量控制。

关键词：乙型肝炎病毒DNA ；荧光定量PCR 技术；质控品中图分类号：R446.1文献标志码：A 文章编号：2096-1413(2020)09-0103-02DOI:10.19347/ki.2096-1413.202009043作者简介：孙文鲜（1984-），男，汉族，河南杞县人。

*通讯作者：李灵，E -mail:361871917@.Indoor quality control products for detection of hepatitis B virus DNA andthe effectiveness evaluationSUN Wen-xian,LIU Yi,LI Yuan-jie,LI Ling *(Clinical Laboratory Department,Xinzheng People's Hospital,Xinzheng 451100,China)ABSTRACT:Objective To prepare quality control products for hepatitis B virus DNA detection with fresh mixed serum and evaluate the effect.Methods Fresh positive and negative mixed serum were inactivated by real-time fluorescence quantitative PCR and the positive mixed serum were diluted to 103and 107IU/mL,which were used as low-value (HBV-L)quality control products and high-value (HBV-H)quality control products,respectively.The quality control products were subpacked and frozen at -80℃,and the initial target values were determined.The precision and stability of the self-made quality control products were evaluated,and the indoor quality control chart was drawn.Results The intra-batch precision and inter-batch precision of self-made HBV-L quality control products were 3.22%and 3.49%,respectively.The intra-batch precision and inter-batch precision of HBV-H quality control products were 1.57%and 1.69%.All of them were less than 5%and met the requirements.Conclusion The home-made quality control products of HBV DNA at two levels are successful and can be used as quality control in the laboratory of quantitative detection of HBV DNA.KEYWORDS:hepatitis B virus DNA;fluorescence quantitative PCR technology;quality control product临床医学HBV DNA 定量测定可精确了解患者体内的乙型肝炎病毒（HBV ）数量，为患者抗病毒治疗提供依据[1]。

康彻思坦质控品HBV说明书质控品HBV是检测样品中HE和EGF的实验试剂。

其目的是检验样品中的HE/EGF, HE/EGF 含量水平。

它适用于各种HE/EGF检测。

一、试剂说明本试剂是用化学方法测定HBV的试剂，不属于特异性分析方法，不需要做检测。

它是用生物法测定HWO抗体中血清HE和EGF中HET指标的方法。

该试剂属于特异性测定法，其使用方法和操作与特异性分析法相同，具有很强的针对性。

它可以用于血液或尿液检测。

二、使用方法使用前，必须将样品溶液稀释至4 ppm。

使用时，请将质量浓度为100μg/mL HBV置于100 ml标准试管中，加60μL HBV溶液使其与3 ml或更多的HBV溶液混合，然后稀释到一定浓度，再将其加入到LC缓冲液中溶解样品并加至质量浓度为100μg/mL HBV溶液，加入2滴已标记的待测基因(signals)和蛋白质组学数据进行分析。

在3分钟内，用HBV溶液稀释并记录分析结果。

三、注意事项将HBV转移到含有HE和EGF的液体中时，请立即用NaCl溶液稀释该液体以获得HBV。

稀释前请彻底检查液体的质量并确保充分稀释，然后在不稀释实验样品的情况下进行检测。

使用该方法时，应注意防止操作不当而造成样品HBV污染或HE/EGF干扰实验试剂盒中其他试剂的使用，并及时报告结果。

如需获得其他产品或试剂，请向有资质的实验室咨询或购买。

四、储存条件保存温度：室温。

保存时间：至少8个月，并在运输和储存过程中注意保持干燥。

运输和储存条件：应储存在阴凉干燥无异味的室内环境中。

储存温度：不应超过30°C;不应在高湿或高湿度条件下储存；避免阳光直射。

五、质控品的使用注意事项：使用前请检查质控品是否在溶剂中，如果没有则不需要更换。

在使用时应充分稀释。

在稀释过程中，用无菌注射器泵入质控品溶液，然后使用无菌注射器注入少量新的或未稀释的样品中，如用玻璃管，应先放入约0.5 ml样品。

再用注射器吸取5 ml样品加入无菌注射器中至容量瓶中，并与等量试剂混合，以确保混合液充分混合。

PCR室内质量控制标准操作程序1．目的：随时了解并控制实验室检测的精密度变化。

2．适用范围：核酸扩增荧光定量检测实验室。

3．负责人：操作人：4．程序：4．1血清质量控制品制备及操作4．1．1质控品制备：收集本室检测的临床样本，HBV DNA定量为106copies/ml的样本混匀，并分装于0.5ml的离心管中，每支110µl，编号后（如Qb0201-n），-20℃保存。

4．1．2 操作：每次检测过程中将此分装的室内质控品与样本同时检测，记录此标本的检测结果；计算前10次检测结果的平均值作为本批质控品的靶值。

4．1．3如果使用商品化的质控品，按4．１．２要求执行。

4．2 室内质控图的使用方法4．2．1 描点a）图中X线为靶线，X±2s为警告线，X±3s为失控线。

对于同一批号的质控血清不论使用几个月，其空图均不变化。

只要将图纸上方“起止日期”项填入每个月的实际起止日期即可。

b）每天将该批号质控血清按有关规定程序复融随同病人的标本同时检测。

将日期、检测结果和操作者如实记录在图下方的相应位置，并按前面的方法画出图上的对应点，用直线将该点与前一天的点连接。

c）月底计算当月全部质控血清检测结果的X、s和CV，并进行图形分析和小结，将质量控制图存入质控资料档案。

4．2．2 图形分析a）如果在X±3s线以外，则为失控，应立即报告有关负责人，迅速查找原因。

必要时复测标本，然后方可发出报告，并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录。

b）如果在X±2s线以外，或出现连续6点以上在一侧等规律变化，均应即使向有关负责人反映，并积极查找原因。

但当天的检验结果一般可以发出。

4．2．3 通过观察图形的规律性变化进行误差分析，消除误差来源a）曲线漂移：提示有系统误差，准确度发生了一次性的向上或向下改变。

这种变化往往是由于一个新的情况引起的。

如更换不同批号试剂，启用新批号的质控血清、操作人员的变换等。

人民医院基因扩增实验室室内质量控制操作规程1 目的在实验过程中加入质控品，对实验的有效性及精密度进行监控。

2 质控品HBV DNA 使用上海市临床检验中心提供的2 个浓度室内质控品（高值红盖、低值黄盖）；HCV RNA 使用上海市临床检验中心提供的1 个浓度室内质控品；其它项目上海市临床检验中心尚未提供统一的质控品，则选用试剂盒自带的质控品；质控品保存：-20 C保存。

3 操作方法3.1 质控品准备3.1.1 HBV DNA 质控品的准备：质控品为液体血浆，使用时从-20 C 冰箱取出，室温放置15分钟使其充分复融，颠倒或旋涡振荡混匀后使用。

3.1.2 HCV RNA 质控品的准备：HCV-RNA 室内质控品为HCV-RNA阳性血浆的冻干品，使用时用350卩I DEPC水复溶，室温放置15 分钟使其充分溶解，颠倒或旋涡振荡混匀、低速离心数秒后使用。

3.1.3 试剂盒自带质控品准备：参见各项目操作规程。

3.2 质控品检测：3.2.1 质控品应与临床标本在同样的条件下检测，获得的质控结果值应及时输入临检中心质控软件；3.3 失控判断：3.3.1 上海市临检中心质控项目：质控结果输入质控软件后，由软件判断是否失控；3.3.2 试剂盒自带质控品：结果应与试剂盒说明书所指示的结果一致，否则可判为失控；3.4 失控后的处理：3.4.1 当出现失控情况时，应停发本次实验报告；认真分析失控原因并纠正。

分析原因时可按以下步骤进行：①认真回顾操作全过程, 是否有人为因素存在, 导致失控；②检查试剂批号是否改变, 检查试剂是否变质或被污染；③检查仪器是否正常运作, 温控系统等是否有问题；④如果上述步骤未发现问题, 再进行重复测定, 以确认质控品是有问题；⑤更换一瓶新质控品, 重新测定；⑥如果还不能解决失控的问题, 则考虑是否操作人员技术的原因。

可更换其他人员重新进行操作342 填写《失控分析报告》。

肿瘤标志物室内质控品使用说明1.2014年肿瘤标志物室内质控样品分别为中值和高值两个水平，可用项目有：17-羟-孕酮、AFP、β2-微球蛋白、CA15-3、CA19-9、CA125、卡马西平、CEA、可的松、硫酸脱氢表雄酮、地高辛、铁蛋白、叶酸、游离T3、游离T4、FSH、生长激素、HCG、IgE、胰岛素、雌二醇、LH、PTH、苯妥英、孕酮、催乳素、游离PSA、总PSA、性激素结合球蛋白、睾酮、茶碱、甲状腺球蛋白、促甲状腺激素、总T3、总T4、丙戊酸、维生素B12。

2.可提供回报数据的检测项目包括：AFP、CEA、CA15-3、CA19-9、CA125、PSA、游离PSA、铁蛋白、β2-微球蛋白。

注：CY-211今年质控品不含概，请注意。

3.质控品状态：冻干品，5ml蒸馏水溶解，溶解时不要摇晃，避免产生气泡。

4.贮存条件：溶解后2-8℃可保存一周，-20℃可保存1个月。

(1) 质控品开瓶溶解后，按每周使用的量分装于仪器所用的样品杯中。

分装好的质控品放-20℃保存，有效期为一个月；将当周使用的质控品放2-8℃保存，确保样品未受污染，有效期为一周。

每次使用后剩余的质控品不宜倒回原来的容器中，以防污染。

(2) 未开瓶的质控品，贮存于2-8℃，其稳定性可保持到保质期。

5.为了考核质控品的稳定性，请各实验室实事求是记录和上报实验数据。

6．质控统计要求：在本中心的质控软件中累积≥20 次的室内质控调查品测定数据，完成质控数据的初始化，使用Levey-Jennings质控图开展室内质量控制（具体方法参见软件应用说明）。

进口试剂，全自动检测的当月CV应＜10％；国产试剂，手工检测的当月CV应＜25％。

检测标本量少，检测频次较低的单位，初始阶段采用即刻法统计。

每月通过计算机网络向本中心上报结果。

7. 注意事项：该调查品以人血清为基质，已经过病毒灭活。

使用中请仍视同传染性样本对待。

备注：由于厂家的定值要在2月底发给中心，故肿瘤标志物的室内质控品定值将在3月中旬放于临检中心的网站上。

乙型肝炎病毒DNA定量检测室内质控品的制备及应用研究目的自制乙型肝炎病毒DNA室内质控血清并探讨其在临床标本检验中的应用价值。

方法用检测后的患者标本自制阳性室内质控血清，用实时荧光定量PCR检测血清HBV-DNA，记录2013年1～5月质控结果、标准曲线的斜率、截距、相关系数和相关结果的均值（x）、标准差（s）及变异系数（cv）；结果自制质控物结果对数的累计数据x±2s范围为 4.3～5.34，在该质控的参考值范围内；结论本实验室采用Taqman实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA实验中，质控品稳定性良好，可联合运用多参数同时监测的质控方法进行，能保证为临床提供有效可靠的准确结果。

标签：聚合酶链式反应；室内质控；斜率；截距；相关系数乙型肝炎属于我国高发的流行性疾病。

日前为止，我国慢性乙型肝炎病毒感染者约为1.3亿，其中慢性乙型肝炎患者约5000万例。

HBV DNA定量检测可反映病毒复制水平，主要用于慢性HBV感染的诊断、治疗适应证的选择及抗病毒疗效的判断[1]。

一般当患者肝功波动，转氨酶升高，乙肝病毒复制指标阳性，肝功处于代偿阶段的时候，抗病毒治疗最为合适[2]。

实时荧光定量PCR是目前核酸定量检测较为理想和方便的方法之一，而Taqman探针技术的应用更大大增加了探针的杂交稳定性，使结果更精确、分辨率更高[3]。

但其结果因反应体系、系统误差、检测条件、人员等多种因素影响，易致结果的批内、批间差异较大，因此需要好的质控方法和质控品保证结果的稳定性和可靠性。

我室收集2013年1～5月对自制HBV-DNA阳性质控血清检测的质控结果、标准曲线和相关结果的均值（x）、标准差（s）及变异系数（cv）进行累积数据评价，斜率、截距、相关系数结果分析如下。

1 材料与方法1.1 试剂与仪器仪器为广州中山大学达安基因股份有限公司生产的DA7600荧光定量扩增分析仪，试剂为该公司配套试剂。

1.2 质控血清来源选取日常患者无溶血、无脂血、无黄疸的阳性血清标本（乙肝病毒定量值104～105），收集标本血清20ml，混匀，进行HBV-DNA定量检测，结果为6.93×104，对数值为4.84，在预期范围内。

乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测标准操作规程（PCR-荧光探针法）1.目的: 规范乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测操作流程，保证检测结果的准确性。

2.应用范围: HBV DNA 荧光定量检测。

3.职责:3.1 文件编写：实验室技术员。

3.2 文件审核：实验室主管。

3.3 文件审批：实验室主任。

3.4 执行：PCR实验室所有工作人员。

4. 参考文献：4.1 中山大学达安基因股份有限公司乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书。

4.2 中山大学达安基因股份有限公司核酸扩增荧光检测系统DA7600型使用说明书。

5. 内容：5.1 检测方法：PCR-荧光探针法。

5.2 实验原理：用一对乙型肝炎病毒特异性引物和一条乙型肝炎病毒特异性荧光探针，配以PCR反应液、耐热DNA聚合酶（Taq酶）、核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR体外扩增法，即高温变性、低温退火、适温延伸进行DNA扩增，并对PCR全过程进行实时监测，从而定量检测乙型肝炎病毒DNA。

5.3 性能参数：5.3.1 精密度：检测下限为5.0x102IU/ml。

5.3.2 线性范围：1.0x103～1.0x108IU/ml。

5.4 标本采集：由合作单位按照以下要求进行采集5.4.1 标本类型：血清。

5.4.2 标本采集：用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2毫升，注入无菌的干燥玻璃管，室温（22～25℃）放置30～60 min，全血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500 rpm离心5min；吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管。

5.4.3 标本保存：标本可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月，应避免反复冻融。

5.4.4 运送条件：标本运送采用0℃冰壶。

5.4.5 标本拒收标准：污染、严重溶血、脂血类或肝素抗凝剂标本。

5.5 设备和试剂：5.5.1 设备： DA7600荧光定量PCR仪、低速水平离心机、生物安全柜、台式高速离心机、移液器、混匀器、恒温水浴箱/干式恒温器、冰箱（4℃、-20℃）、移动/固定紫外灯、冷冻离心机。

不同实验室得到的结果差别很大。
HCV国际单位与拷贝数换算 HCV国际单位与拷贝数换算
NGI SuperQuant: Roche Amplicor Monitor v2.0 1 IU/mL = 3.4 copies/ml 1 IU/mL = 0.9 copies/ml 1 IU/mL = 2.7 copies/ml 1 IU/mL = 3.8 copies/ml 1 IU/mL = 5.2 copies/ml
1.70×106～ 1.70×107 (6.23 1.00×106～ 1.00×107 (6.00 2.95×105～ 2.95×106 (5.47 8.13×104～ 8.13×105 (4.19 2.40×104～ 2.40×105 (4.38
该质控品为液体血清，每支500µ 使用时室温放置15分 该质控品为液体血清，每支500µl，使用时室温放置15分 500 15 钟使其充分复融，颠倒或漩涡振荡并瞬时离心后使用。 钟使其充分复融，颠倒或漩涡振荡并瞬时离心后使用。
IU（ units)的确定 的确定： IU（international units)的确定：
22家实验室 间隔1周 实验1 实验2 实验3 实验4
7次10倍稀释
8次101/2倍稀释(终点浓度附近）
“终点”
Report on the evaluation of a candidate standard for NAT assays for HCV RNA。 WHO BS/97.1861
使用注意事项
10 9 8 7 6 对数值 5 4 3 2 1 0 10 15 20 25 ct值 30 35 40 45 R 2 = 0.9755 R 2 = 0.9218 R 2 = 0.9671 系列1 系列2 系列3 线性 (系列1) 线性 (系列2) 线性 (系列3)

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