酵母菌形态观察及死活鉴别

实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。

2.学习鉴别死活细胞的实验方法。

二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。

酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。

芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。

本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。

美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。

三、实验器材1.材料：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。

2.试剂：O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。

3.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。

四、实验步骤1.美蓝浸片观察（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑去少量酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。

注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。

（2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。

注：盖玻片不宜平着放，以免产生气泡。

（3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。

（4）染色约0.5h后再次观察，注意死细胞数量是否增加。

2.水-碘浸片观察在载玻片中央滴一滴碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。

微生物及应用技术
酵母菌形态观察及活性鉴别
1.熟练掌握显微镜的使用技术，通过高倍镜观察了解酵母菌的形态结构。

2.掌握鉴别酵母菌细胞死活的染色方法
酵母菌是单细胞的真核微生物，细胞核和细胞质有明显分化，个体比细菌大得多。

酵母菌的形态通常有球状、卵圆状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。

酵母菌的无性繁殖有芽殖、裂殖;酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。

酵母菌母细胞在一系列的芽殖后，如果长大的子细胞与母细胞并不
分离，就会形成藕节状的假菌丝。

普通光学镜下的酵母菌细胞电子显微镜下的酵
母菌细胞
1.菌种：酵母菌标准片、酵母菌菌悬液
2.染色液或试剂：革兰氏染色用碘液、0.1％氏碱性美蓝染色液
3.仪器和其他用品：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子等。

（一）酵母菌细胞的形态观察
1.酵母菌样片制作：取一洁净的载玻片，用滴管取一小滴革兰氏染色用碘液，将其滴于载玻片中央，然后滴加酵母菌悬液放入其中混匀，盖上盖玻片，小心将其一端与菌液接触，然后缓慢放下，避免产生气泡；
2.镜检：先用低倍镜观察，再用高倍镜观察。

观察时注意酵母菌细胞的形状和出芽情况，并绘制视野中看到的酵母菌形态结构图。

用同样的方法观察其他酵母菌标本片。

（二）死活酵母菌细胞的染色鉴别
1.涂片：视频
2. 染色：视频
3.镜检：视频
课程思政
生产中区分酵母菌活性的方法大家要多多练习，你会有许多不同感受与发现，科学的精神只有通过反复实验，不断的探索才能缔造，希望在微生物世界的探索者中有你们在座的身影。

谢谢观看。

二、基本原理——酵母菌形态 基本原理——酵母菌形态
酵母菌为单细胞真核微生物， 菌体比细菌大。 酵母菌为单细胞真核微生物 ， 菌体比细菌大 。 无 性繁殖主要是出芽生殖 出芽生殖， 性繁殖主要是 出芽生殖 ， 仅裂殖酵母属是以分裂 方式繁殖； 有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。 方式繁殖 ； 有性繁殖是通过接合产生子囊孢子 。 本实验通过用美蓝染色浸片 美蓝染色浸片来观察生活的酵母形 本实验通过用 美蓝染色浸片 来观察生活的酵母形 态和出芽生殖方式。 态和出芽生殖方式。
还原剂 美蓝（氧化型） 美蓝（氧化型） 蓝色 氧化剂 美蓝（还原型） 美蓝（还原型） 无色
二、基本原理——美蓝染色液 基本原理——美蓝染色液
酵母活细胞 新陈代谢 还原能力
美蓝（氧化型） 美蓝（氧化型） 蓝色
美蓝（还原型） 美蓝（还原型） 无色
二、基本原理——子囊孢子观察 基本原理——子囊孢子观察
四、操作步骤——美兰染色 操作步骤——美兰染色
在载玻片中央加一滴0.05%吕氏碱性美蓝染色液， 在载玻片中央加一滴0.05%吕氏碱性美蓝染色液，用接种环 0.05%吕氏碱性美蓝染色液 染液不宜过多或过少） 挑取少量酵母菌苔，混合均匀； 挑取少量酵母菌苔，混合均匀；（注：染液不宜过多或过少） 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触， 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖 玻片放下使其盖在菌液上； 盖玻片不宜平着放下） 玻片放下使其盖在菌液上；（注：盖玻片不宜平着放下）
四、操作步骤——悬滴标本制作 操作步骤——
①取清洁的凹玻片和盖玻片各一片 ； ②用火柴杆取少许凡士林涂一圈于凹玻片凹窝周围 ； ③在盖玻片中央用接种环蘸取一小滴无菌水，然后用 在盖玻片中央用接种环蘸取一小滴无菌水， 无菌操作取少许菌苔在水滴上轻沾一下， 无菌操作取少许菌苔在水滴上轻沾一下，注意水滴大 小要适宜，放菌苔时不要使水滴破散； 小要适宜，放菌苔时不要使水滴破散； ④将凹玻片翻转向下，使凹窝中央对准盖玻片中央液 将凹玻片翻转向下， 然后轻压。使凹玻片与盖玻片粘合紧密， 滴，然后轻压。使凹玻片与盖玻片粘合紧密，以免蒸 然后很快将凹玻片翻转， 发，然后很快将凹玻片翻转，使盖片向上 ⑤将制作好的悬滴片置于显微镜下观察。 将制作好的悬滴片置于显微镜下观察。

第3组：3倍浓缩乳糖蛋白胨培养基100ml： 蛋白胨3g，氯化钠1.5g，水100ml 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液0.5ml，每管加5ml，共15管,内装倒置 小管，121℃灭菌20min。
第4-5组：普通浓度乳糖蛋白胨发酵培养基700ml：P244 蛋白胨7g，氯化钠3.5g，水700ml 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1.2ml， 每管加7ml，共45管，内装倒置小管 每管加10ml，共35管，内装倒置小管，121℃灭菌20min。
实验七 酵母菌的形态观察 与死活细胞鉴别
目的要求
1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式 2、学习区分酵母菌死活细胞的方法
实验原理
酵母菌是单细胞真核微生物， 其大小为常见细菌的几倍至几 十倍。大多数酵母采用出芽方 式进行繁殖。 美蓝是一种弱氧化剂，其氧化 态呈蓝色，还原态呈无色。用 美蓝对酵母细胞进行染色时， 由于新陈代谢，活细胞具有较 强的还原能力，可使美蓝由蓝 色的氧化型转变为无色的还原 型，染色后细胞呈无色。死细 胞或代谢能力弱的衰老细胞其 还原能力弱，染色后细胞呈蓝 色。
• 第8组：蛋白胨水培养基：250ml，p244 蛋白胨2.5g，氯化钠1.25g，水250ml，每管7ml， 121℃ 灭菌20min
实验材料
• 1. 培养2d的面包酵母斜面培养物 • 2. 0.1%吕氏碱性美蓝染液
实验方法
美蓝染液水浸片法
1. 滴一滴吕氏碱性美蓝染液于载玻片中央，无菌操作取酵母培 养物置于染液中，混合均匀。 2. 取盖玻片，将盖玻片一端与菌液接触，缓慢将盖玻片倾斜并 盖在菌液上。 3. 3min后，镜检。观察酵母菌形态及出芽情况，并根据细胞 颜色区别死活细胞。 4. 30min后，再次观察。
• 第6组：固体淀粉培养基：600ml，P243 蛋白胨6g，氯化钠3g，牛肉膏3g，可溶性淀粉1.2g，水 600ml，琼脂10g， 121℃灭菌20min。 • 第7组：明胶培养基，500ml，P243 蛋白胨5g，氯化钠2.5g，牛肉膏1.5g，明胶80g，水500ml ，每管7ml， 121℃灭菌20min。

酵母的形态观察及死活细胞鉴别
一、目的要求 二、基本原理 三、器材： ——菌种：酿酒酵母 ——试剂：0.05%和0.1%吕氏碱性美蓝染色液、
碘液 ——其他器皿及用具：显微镜等
基本原理
★美蓝是一种无毒的染料，它的氧化型呈蓝行染色时，由于细 胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，使 美蓝由蓝色的氧化型变为 无色的还原型。因此，具 有还原能力的酵母活细胞 是无色的，而死细胞或代 谢作用微弱的衰老细胞则 呈蓝色，借此即可对酵母 菌的死活细胞进行鉴别。
思考题
P55（10）
下一个实验
霉菌的形态观察
基本原理
★细胞中的颗粒是啤酒酵母的贮藏营养物质和 细胞的代谢产物，包括异染颗粒、肝糖和脂肪 粒等。主要存在于细胞质中。肝糖颗粒是酵母 的贮藏营养物质，在繁殖旺盛时的幼小细胞中 含量明显。一般啤酒酵母经24h培养后，其达 到高峰，它可被碘化钾染成棕色。
操作步骤
一、美蓝浸片 1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液， 然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染 液中，混合均匀。 2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然 后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。 3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高 倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区 别死活细胞。
操作步骤
4）染色约0.5h后再次进行观察，注意死活细胞数量 是否增加。 5）用0.05%吕氏碱性美蓝染液重复上述操作。
2、水一碘液浸片的观察 在载玻片中央加一小滴革兰氏染色用碘液，然后在 其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水一碘液中混 匀，盖上盖玻片后镜检。
结果与分析
★结果 ——绘图表示所观察到的酵母菌的形态特征 ——制表列出不同浓度吕氏碱性美蓝染色后 细菌死活细胞比例及变化

二、基本原理 基本原理
1、酵母菌形态观察和死活细胞鉴别
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物， 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常 见细菌大几倍甚至十几倍。大多数酵母以芽殖 少数以裂殖 见细菌大几倍甚至十几倍。大多数酵母以芽殖、少数以裂殖进 芽殖、 裂殖进 行无性繁殖；有性繁殖则通过结合产生子囊孢子。 子囊孢子。 行无性繁殖；有性繁殖则通过结合产生子囊孢子 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型 氧化型呈蓝色， 无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时， 无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代 谢作用，细胞内具有较强的还原能力， 谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化 型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞 型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无 活细胞是 色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则分别呈蓝色和淡 死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则分别呈蓝色和 或代谢作用微弱的衰老细胞则分别呈蓝色 蓝色。 蓝色。
四、操作步骤
在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液 子挑取少许菌丝， 子挑取少许菌丝，浸于染液中 散开 盖上盖玻片 用镊 用解剖针将菌丝分 用高倍
低倍镜观察
镜观察菌丝局部
操作要点： 操作要点： • 挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态。 挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态。 • 尽可能将菌丝分开，加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。 尽可能将菌丝分开，加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。 • 挑取菌丝前镊子和解剖针要在酒精灯上灼烧灭菌。 挑取菌丝前镊子和解剖针要在酒精灯上灼烧灭菌。
实验三 酵母菌的形态观察及死、 酵母菌的形态观察及死、活细胞 的鉴别和霉菌的形态观察 的鉴别和霉菌的形态观察

细菌形态观察简单染色法
一、目的要求:
1、显微镜下观察细菌个体的形态。
2、学习环境中微生物的检查方法，并加 深对微生物分布广泛性的认识。
二、基本原理:
形态观察主要包括群体的形态和个体的形态观察。
细菌的基本形态主要分为球菌、杆菌、螺旋菌三大类，近 年还发现星状和四方形细菌等。细菌形态受培养时间、培养 基成分、浓度、培养温度、培养时间等发生变化。
死活细胞鉴定原理
美蓝是一种无毒性的染料。 美蓝有氧化型和还原型两种状态。 氧化型为蓝色，还原型无色。 酵母活细胞由于体内的新陈代谢作用，细胞内
具有较强的还原能力，能使美蓝由氧化型变为 还原型。 酵母死细胞或者代谢作用微弱的细胞，还原能 力弱，不能使美蓝由氧化型转变为还原型。
实验步骤
在载玻片中央加一滴0.1％美蓝染色液，染色 液过多会溢出，过少会在盖玻片下出现大量气 泡。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色。 细菌在中性、碱性或弱酸性溶液环境中通 常带负电荷，碱性染料（解离时分子的染 色部分带正电荷）如美兰、结晶紫等易与 细菌结合使其着色。
操作方法
1、涂片—枯草芽孢杆菌 2、干燥：室温自然干燥 3、固定：有菌膜的一面向上，通过火焰2－3次，
细 胞质凝固
4、染色：滴加染液(美蓝或者番红或者结晶 紫）染色时间为两分钟
细菌菌落大多表面光滑湿润，有光泽，一般菌落较小，质 地颜色均匀，同培养基结合不紧密。菌落特征与组成菌落的 细胞结构、生长状况、排列方式、好气性和运动性直接相关。
细菌个体微小，较透明，必须染色方可呈现。根据细菌个 体形态观察的不同要求，可将染色分为3种类型：简单染色、 鉴别染色、特殊染色。
简单染色法原理:
吸取少量酵母菌液，稀释后滴半滴在载玻片的 美篮染色液中，混合均匀；

血球计数法结果
通过血球计数板对酵母菌进行计数，我们得到了每毫升菌 液中酵母菌的数量。结果显示，菌液中酵母菌的数量在合 理范围内，计数结果准确可靠。
对实验过程的反思与总结
实验操作方面
在实验过程中，我们需要注意无菌操作 ，避免杂菌污染。同时，需要准确配制 试剂，保证实验结果的准确性。
VS
实验设计方面
在实验设计时，需要考虑实验的可行性和 可重复性。本实验中，血球计数法的操作 较为简便，且结果准确可靠，是一种有效 的计数方法。
死活细胞鉴定结果分析
死活细胞鉴定结果
通过染色法和荧光染色法，我们成功地对酵母菌的死活细胞进行了鉴定。活细胞能够吸 收染料并发出荧光，而死细胞则不能。在显微镜下观察，活细胞呈现明显的荧光，而死
细胞则无荧光。
分析
死活细胞鉴定结果表明，大部分酵母菌为活细胞，仅有少量酵母菌为死细胞。这说明在 实验过程中，酵母菌的生长条件较为适宜，且培养基的营养成分能够满足酵母菌生长的
实验七酵母菌的形 态观察、死活细胞 鉴定及血球计数法
目 录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 结论
01
CATALOGUE
实验目的
掌握酵母菌的形态观察方法
了解酵母菌的形态特征
通过显微镜观察，了解酵母菌的单细 胞形态，包括其形状、大小、细胞壁 、细胞膜等结构特点。
学习染色法
THANKS
感谢观看
酵母菌是单细胞真菌，通常呈卵圆形或圆柱形，具有细胞壁、细胞膜、细胞质和 细胞核等基本结构。通过显微镜观察酵母菌的形态，可以了解其生长状态和繁殖 方式。
酵母菌在生长过程中，会经历由单倍体到二倍体的过程，通过观察其形态变化， 可以了解其生长周期和繁殖特点。

啤酒酵母来自母出芽酵母菌出芽繁殖及芽体
三、器材
1、染液：吕氏碱性美蓝染液 2、菌种：酿酒酵母的斜面培养物 3、仪器和其他用具： 显微镜、载玻片、 盖玻片等

四、操作步骤

1、美蓝浸片的观察： 1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝 染色液，然后按无菌操作用接种环挑取少 量少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。 染液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片 时菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。 2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液 接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌 液上。盖玻片不宜平放着放下，以免产生 气泡影响观察。
实验六 酵母菌细胞 的形态观察、死活细胞 的鉴别
一、目的和要求
1．观察酵母菌的出芽繁殖方式，学习区 分酵母菌死活细胞的实验方法。 2．掌握酵母菌的一般形态特征及其与细 菌的区别。

二、基本原理

1．形态观察：酵母菌是不运动的单细胞真 核微生物，通常比常见细胞大几倍甚至十 几倍。大多数酵母菌以出芽方式进行无性 繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接 合产生子囊孢子。
3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然 后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并 据颜色来区别死活细胞。 4）染色约0.5h后再次进行观察，注意死活细 胞数量是否增加。 5）用0.05%吕氏碱性美蓝染液重复上述操作。

2、水-碘液浸片的观察 在载玻片中央加一小滴革兰氏染色用碘液， 然后在其上加三滴水，取少量酵母菌苔放 在水-碘液中混匀，盖上盖玻片镜检。

2．死活鉴定：美蓝是一种无毒性的染料， 它的氧化型呈蓝色，还原型呈无色。用美 蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞 的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原 能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色 的还原型。因此，具有还原能力的酵母活 细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱 的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。

五、实验报告
1、绘图说明你所观察的酵母菌的形态特征 填表： 2、填表：
各中格中菌数 1 2 3 4 5 二次平均值 菌数/mlAຫໍສະໝຸດ B 5二、实验原理
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物， 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见 细菌大几倍甚至十几倍。大多酵母菌以出芽方式进行无性繁殖， 细菌大几倍甚至十几倍。大多酵母菌以出芽方式进行无性繁殖， 有的分裂繁殖，有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。 有的分裂繁殖，有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验是通 过美蓝染液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方式。 过美蓝染液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方式。
菌种： 1、菌种：酿酒酵母 仪器或其他用品：血细胞计数板，显微镜， 2、仪器或其他用品：血细胞计数板，显微镜，盖玻 片，载玻片等 0.1%美蓝染色液等 3、0.1%美蓝染色液等
四、实验内容： 实验内容：
1、美蓝浸片观察 在载玻片中央加一滴0.1%的美蓝染色液， 在载玻片中央加一滴0.1%的美蓝染色液，然后用 0.1%的美蓝染色液 接种环取少量酵母菌于染液中，混合均匀； 接种环取少量酵母菌于染液中，混合均匀； 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触， 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然 后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上。 后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上。将玻片放置 约三分钟后，用显微镜观察酵母的形态和出芽情况， 约三分钟后，用显微镜观察酵母的形态和出芽情况， 并判断细胞的死活。 并判断细胞的死活。
利用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生 物计数方法。该计数板是一块特制的载玻片， 物计数方法。该计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构 成三个平台，中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半， 成三个平台，中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边 的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为几个大方格， 的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为几个大方格， 中间的大方格即为计数室。血细胞计数板构造如图1 中间的大方格即为计数室。血细胞计数板构造如图1，计数室的 刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格，而 刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格， 25个中方格 每个中方格又分成16个小方格，另一种是一个大方格分成16 16个小方格 16个 每个中方格又分成16个小方格，另一种是一个大方格分成16个 中方格，而每个中方格又分成25个小方格， 25个小方格 中方格，而每个中方格又分成25个小方格，但无论是哪一种规 格的计数板，每一个大方格中的小方格400 400个 格的计数板，每一个大方格中的小方格400个，每一个大方格 边长为1毫米，则每一个大方格的面积为1mm 盖上盖玻片后， 边长为1毫米，则每一个大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后， 盖玻片与载玻片之间的高度为0.1毫米， 0.1毫米 盖玻片与载玻片之间的高度为0.1毫米，所以计数室的容积为 万分之一毫升）。 0.1mm3（万分之一毫升）。

实验六酵母形态观察、死活细胞鉴别和显微镜直接计数法酵母形态观察、死活细胞鉴别一、实验目的• 1 观察酵母菌的形态和出芽生殖方式• 2 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法二、基本原理•酵母菌是单细胞真核微生物，通常以出芽方式进行无性繁殖，有的进行分裂繁殖；通过接合产生子囊孢子进行有性繁殖，有性繁殖要在特定培养条件下才能进行。

•染料美蓝氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞分泌的还原酶，能使美蓝由蓝色的氧化型转变为无色的还原型。

借此即可对酵母菌的死活细胞进行鉴别。

三、实验器材• 1 菌种：酿酒酵母• 2 仪器：显微镜、载玻片、盖玻片等四、实验步骤美蓝浸片的观察(1)在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。

（染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。

）(2)用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。

镜检。

(3)将制片放置约3min后再次镜检并对照，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。

滴加染液－涂片－加盖玻片－镜检－3min后再次镜检五、实验报告绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征思考题1、酵母死活细胞鉴别的基本原理是什么？微生物大小测定一、实验目的•学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法二、基本原理•测微尺：包括目镜测微尺和镜台测微尺。

•镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长0.01mm(即10um)。

镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。

•目镜测微尺是放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度。

由于放大倍数不同，目镜测微尺每小格代表的实际长度不一样。

因此，需首先校正目镜测微尺。

三、实验器材• 1 菌种：酿酒酵母• 2 仪器：目镜测微尺、镜台测微尺、显微镜、载玻片、盖玻片等四、实验步骤• 1 装目镜测微尺• 2 校正目镜测微尺•在40×镜下，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动载物台，使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。

实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。

2.学习鉴别死活细胞的实验方法。

二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。

酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。

芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。

本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。

美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。

三、试剂与器材1.材料酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。

2.试剂0.05％和O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。

3.器材显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。

四、实验内容1.美蓝浸片观察酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检2.水-碘浸片观察五、关键步骤及注意事项1.染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液溢出或出现大量气泡。

2.用镊子取一块盖玻片，先将一侧与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上，盖玻片不宜平着放下，避免气泡产生。

六、思考题1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。

2.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌? 实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。

酵母菌的形态观察及死活鉴别与显微直接计数法酵母菌的形态观察及死活鉴别与显微镜直接计数法I 酵母菌的形态观察及死活鉴别一、目的要求观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。

二、基本原理酵母菌是多形的、不运动的单细胞微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。

繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。

本实验通过用美蓝染色制成水浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。

美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的。

用它采对酵母细胞进行染色。

活细胞内由于新陈代谢作用而具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母活细胞染色后无色。

而死细胞或代谢缓慢的老细胞因无还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。

三、器材酿酒酵母（Saccharomyces cerevissiae）；0.1％吕氏碱性美蓝染液，革兰氏染色用的碘液；显微镜，载玻片，盖玻片等。

四、操作步骤（美蓝浸片观察）(1)在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染液，液滴不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。

然后按无菌操作法取在豆芽汁琼脂斜面上培养48小时的酿酒酵母少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。

(2)用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。

盖片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触；然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。

(3)将制好的水浸片放置3分钟后镜检。

先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。

五、实验报告(1) 绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征。

II 显微镜直接计数法一、目的要求1．明确显微镜计数的原理。

2．学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。

一、实验目的1. 观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式。

2. 学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法。

二、实验原理酵母菌是一种单细胞真菌，其细胞结构包括细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核等。

酵母菌主要通过出芽生殖进行繁殖，即在母细胞的一端形成芽体，芽体逐渐长大并与母细胞分离，形成新的个体。

美蓝是一种无毒性的染料，其氧化型呈蓝色，还原型无色。

活细胞具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此，活细胞无色，而死细胞或代谢缓慢的老细胞则呈蓝色或淡蓝色。

三、实验器材1. 酿酒酵母或卡尔酵母（Saccharomyces calsbergensis）2. 0.1%吕氏碱性美蓝染液3. 革兰氏染色用的碘液4. 显微镜5. 载玻片6. 盖玻片7. 接种针8. 烧杯9. 火柴四、实验步骤1. 准备酵母菌培养物：取少量酿酒酵母，接种于土豆平板培养基上，28-30℃培养3-5天。

2. 制备美蓝浸片：a. 在载玻片中央滴一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液。

b. 用接种针挑取少量酵母菌，均匀涂布在染液上。

c. 盖上盖玻片，轻压使酵母菌与染液充分接触。

3. 制备水浸片：a. 在载玻片中央滴一滴无菌水。

b. 用接种针挑取少量酵母菌，均匀涂布在水中。

c. 盖上盖玻片，轻压使酵母菌与水充分接触。

4. 显微镜观察：a. 将美蓝浸片和水浸片置于显微镜下观察。

b. 观察酵母菌的细胞形态、大小、细胞核、芽体等特征。

c. 比较美蓝浸片和水浸片中酵母菌的形态差异。

5. 死活细胞鉴别：a. 观察美蓝浸片中酵母菌的染色情况。

b. 活细胞呈无色，死细胞或代谢缓慢的老细胞呈蓝色或淡蓝色。

五、实验结果1. 酵母菌细胞形态：a. 酵母菌细胞呈椭圆形、圆形或卵圆形，大小不一。

b. 细胞核位于细胞中央，呈圆形或椭圆形，核膜清晰。

c. 细胞质均匀，无色或淡蓝色。

2. 出芽生殖方式：a. 观察到酵母菌细胞一端形成芽体，芽体逐渐长大。

b. 芽体与母细胞分离，形成新的个体。

实验二酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别一、目的要求1.进一步学习并掌握光学显微镜低倍镜和高倍镜的使用方法；2.观察并掌握酵母菌的个体形态及其子囊、子囊孢子和假菌丝的形态；3.学习并掌握鉴别酵母菌细胞死活的方法；4.了解酵母菌子囊孢子的染色方法及假菌丝观察的压片培养法。

二、实验材料1.菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、热带假丝酵母（Candida tropicalis）、粟酒裂殖酵母（Sachizosaccharomyces pombe）2.染色液：0.1％美蓝染色液、孔雀绿染色液、沙黄染色液、95％乙醇等3.其他：显微镜、载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸等三、基本原理酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见的细菌大几倍甚至几十倍，因此，不必染色即可用显微镜观察其形态。

大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的二分裂殖；子囊菌纲中的酵母菌在一定条件下，可产生子囊孢子的方式进行有性生殖。

酵母菌假菌丝的生成与培养基的种类、培养条件等因素有关。

美蓝是一种弱氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。

用美蓝对酵母细胞进行染色时，活细胞由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能将美蓝由兰色的氧化态转变为无色的还原态型，从而细胞呈无色；而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则由于细胞内还原力较弱而不具备这种能力，从而细胞呈蓝色，据此可对酵母菌的细胞死活进行鉴别。

四、操作步骤1。

水浸片观察：1）制片：在干净的载玻片中央加一滴预先稀释至适宜浓度的酵母液体培养物，从侧面盖上一片盖玻片（先将盖玻片一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上），应避免产生气泡，并用吸水纸吸去多余的水分（菌液不宜过多或过少，否则，在盖盖玻片时，菌液会溢出或出现气泡而影响观察；盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡）。

2）镜检：将制作好的水浸片置于显微镜的载物台上，先用低倍镜，后用高倍镜进行观察，注意观察各种酵母的细胞形态和繁殖方式，并进行记录。

酵母菌形态观察、死活细胞的鉴别及子囊孢子的观察姓名：班级：生科二班学号：组别：二同组者：【目的要求】1.了解酵母菌的形态及出芽方式2.学习区分酵母菌的死细胞和活细胞3.掌握酵母菌子囊孢子的观察方法【基本原理】酵母菌繁殖方式：单细胞的酵母菌个体是常见细菌的几倍甚至几十倍，大多数采取出芽方式（在PDF酵母合成培养基中）进行无性繁殖，也可以通过结合产生子囊孢子（麦氏培养基中）进行有性繁殖。

美蓝染色原理：由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。

同时，采用美蓝染液水浸片法还可以对酵母菌的死、活细胞进行鉴别。

美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色。

由于新陈代谢，活细胞胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型变成无色的还原型，染色后活细胞呈无色。

死细胞或代谢能力微弱的衰老细胞还原能力弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色。

子囊孢子：是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。

在酵母菌种，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要指标之一。

酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。

麦氏（Meclary）培养基（葡萄糖-醋酸钠培养基）有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。

孢子染色原理：孢子壁厚不易着色，但是一旦着色就很难被脱色。

因此先用强染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入菌体和孢子，水洗时菌体中染色被洗脱而孢子中染料保留。

在用对比度大的复染色剂染色后，菌体染上复染色剂的颜色而孢子保留原来颜色，这样可将两者区别开来。

【实验器材】1.菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）。

2.溶液与试剂：0.1%吕氏碱性美蓝染液，5%孔雀绿，番红染液，95%乙醇。

3.培养基：麦氏（Meclary）琼脂斜面培养基。

4.仪器或其他用品：显微镜，载玻片，盖玻片，酒精灯，接种环等。

【操作步骤】1.两种培养基的配置分别配置100ml麦氏培养基和200ml酵母合成培养基，其成分配比详见附录一。

实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别一、实验目的与要求1. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式；2. 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；3. 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。

二、实验原理1. 酵母菌酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍，不必染色即可用显微镜观察其形态。

但由于细胞个体大，采用涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。

大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。

本实验通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式，并对酵母细胞进行死活染色鉴别。

2. 美蓝染液美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。

图1：酵母菌美兰浸片观察3min（10×40）图2：酵母菌美兰浸片观察30min（10×40）三、实验设备及材料1. 菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) 或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2 天左右的豆芽汁液体培养物(实验时需稀释20~50倍，分装至烧杯中给学生用)。

2. 溶液或试剂：0.1%和0.05%吕氏碱性美蓝溶液(或0.01%美篮水溶液)，革兰氏染色用碘液等。

3．器材：显微镜，擦镜纸，吸水纸，盖玻片、酒精灯、接种环、镊子、胶头滴管、小烧杯、洗瓶等等。

四、实验步骤与内容1．美蓝浸片的观察（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌放在染液中，并用接种环将其混合均匀，酒精灯上灼烧清洗接种环。