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人工诱发条件下41份烟草品种(系)对PVY的抗性鉴定及抗性分类陈博;吴委林;郑大浩;冯月;王蕾;朴世领【摘要】为筛选抗马铃薯Y病毒(PVY)的优良种质,以41份烟草品种(系)为试材,在烟叶的苗期进行了人工诱发抗性鉴定和分类.结果表明:不同烟草品种(系)对PVY的抗性差异很大,其病情指数(D)和抗性指数(RI)范围分别为(10.32±0.40)～(66.33±2.31)和(-2.64±0.09)～(-0.13±0.06).通过聚类分析法,将其划分为抗病、感病2大类群和高抗、中抗、中感、感病4个亚类群,2大类群之间均存在极显著差异,而4个亚类群之间存在显著差异.抗病类群包括高抗和中抗2个亚类群,共占参试材料的46.34％;其中,高抗亚类群包括SY04-3、SY04-6、SZ08-04等5个品种(占12.20％),中抗亚类群包括8107、SY04-5、SZ08-1等14个品种(占34.14％).感病类群包括中感和感病2个亚类群,共占参试材料的53.66％;其中,中感亚类群包括延晒三号、SZ08-2、SZ12-01等19份品种(占46.34％),感病亚类群仅包括NC95、NC89、K326等3个品种(占7.32％).基于病情指数(D)和抗性指数(RI)并通过欧氏距离-Ward's聚类分析法划分的类群及亚类群中所包含的品种(系)及其数量都相同,抗病性分类结果也一致.【期刊名称】《延边大学农学学报》【年(卷),期】2017(039)001【总页数】7页(P9-15)【关键词】烟草;马铃薯Y病毒;聚类分析;抗性鉴定【作者】陈博;吴委林;郑大浩;冯月;王蕾;朴世领【作者单位】延边大学农学院,吉林延吉133002;延边大学农学院,吉林延吉133002;延边大学农学院,吉林延吉133002;延边大学农学院,吉林延吉133002;延边大学农学院,吉林延吉133002;延边大学农学院,吉林延吉133002【正文语种】中文【中图分类】S435.72马铃薯Y病毒病(PVY)是一种侵染烟草引起的病害，又被称作脉坏死病，褐脉病等，是由 PVY引起的蚜传病毒病，它是我国烟叶生产中的主要病害之一，在中国北方烟区危害严重，在南方烟区的危害呈上升趋势[1-3]。
马铃薯Y病毒的株系种类、分子特征及鉴定方法研究进展吴兴泉;李月;孙强;李萌萌;王梦科【摘要】There are many strains of potato virus Y ( PVY ) identified in the last few decades. As molecular technology and immunity technology were applied in the identification of the PVY strains, a series of strain identification methods were developed. Here the types of the strains and substrains, molecular characters and the identification methods of PVY are reviewed.%马铃薯Y病毒( PVY)株系分化现象明显，具有多个株系类型。
随着分子生物学技术和免疫学技术逐渐被引入PVY的株系鉴定中，产生了一系列的株系鉴定方法。
为此，对PVY的主要株系、亚株系的种类及分类依据、分子特征以及近年来应用于PVY株系鉴定的传统生物学方法、分子生物学方法、免疫学方法等进行了综述。
【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】4页(P5-8)【关键词】马铃薯Y病毒;株系;分子特征;鉴定【作者】吴兴泉;李月;孙强;李萌萌;王梦科【作者单位】河南工业大学生物工程学院，河南郑州450001;河南工业大学生物工程学院，河南郑州450001;黑龙江北大荒农业股份有限公司八五四分公司，黑龙江虎林158403;河南工业大学生物工程学院，河南郑州450001;河南工业大学生物工程学院，河南郑州450001【正文语种】中文【中图分类】S435.32马铃薯Y病毒(potato virus Y, PVY)是马铃薯上危害最严重的病毒之一，可造成马铃薯严重减产。
PVX病毒载体介导2种马铃薯Y病毒科病毒VPg蛋白表达诱导烟草叶片系统坏死的研究作者：刘洋周鹏庹德财唐庆华言普黎小瑛沈文涛来源：《热带作物学报》2021年第08期摘要：芜菁花叶病毒（Turnip mosaic virus， TuMV）和槟榔坏死环斑病毒（Areca plam necrotic ringspot virus， ANRSV）是马铃薯Y病毒科（Potyviridae）中分别可诱导十字花科作物和槟榔产生坏死病症的2种不同属病毒。
VPg（Viral protein genome linked）作为与马铃薯Y 病毒科病毒基因组5′端的结合蛋白，在病毒复制、翻译和运动等侵染过程中发挥重要作用。
本研究利用In-Fusion克隆策略分别构建了可表达3′端融合Strep蛋白标签序列的ANRSV和TuMV VPg全长编码基因的马铃薯X病毒（Potato virus X， PVX）载体pPVX-VPg-AR和pPVX-VPg-Tu。
通过农杆菌渗透注射接种本生烟（Nicotiana benthamiana），利用RT-PCR、Strep蛋白标签亲和层析和Western blot等方法证明了PVX病毒载体能够介导VPg-AR和VPg-Tu蛋白在本生烟中系统表达，且发现这2种VPg蛋白的过量表达诱导本生烟叶片产生了不同程度的系统性坏死病症。
进一步采用DAB和NBT染色，在产生坏死症状叶片中检测到大量活性氧（reactive oxygen species， ROS）的积累。
因此，推测VPg可能是TuMV和ANRSV诱发植物病症产生的一个决定因子，为后续研究这2种病毒诱导症状形成机制奠定了基础。
关键词：芜菁花叶病毒;槟榔坏死环斑病毒;马铃薯X病毒;VPg蛋白;侵染;本生烟Abstract： VPg （viral protein genome-linked）is a protein that is covalently attached to the 5′ end of positive strand viral RNA and acts as a primer during RNA synthesis in Potyviridae. Turnip mosaic virus （TuMV， genus Potyvirus） and Areca plam necrotic ringspot virus （ANRSV，genus Arepavirus） are typical members of in the family Potyviridae and cause damaging disease in many kinds of Brassicaceae and Areca catechu， respectively. In this study， we constructed Potato virus X （PVX） -based vectors pPVX-VPg-AR and pPVX-VPg-Tu for individually expressing TuMV， ANRSV- encoded VPg protein （VPg-AR and VPg-Tu） with a Strep-tag in Nicotiana benthamiana plants by agroinfiltration. The expression of recombinant VPg-AR and VPg-Tu was identified using RT-PCR of total RNA and western blot analysis of strep-tagged proteins from PVX-VPg-AR and pPVX-VPg-Tu -infected plant leaves， respectively. The ectopic expression of VPg-AR and VPg-Tu caused severe systemic necrosis in N. benthamiana. Further study revealed that the overexpression of VPg-AR and VPg-Tu resulted in accumulation of reactive oxygen species （ROS） after 3，3′-diaminobenzidine （DAB）-HCl and nitroblue tetrazolium （NBT） staining for detect ion of H2O2 and O2− radicals in PVX-VPg-AR and PVX-VPg-Tu-infected plant leaves.The results demonstrated that VPg might be a pathogenicity determinant that plays key roles in symptom formation of TuMV and ANRSV.Keywords： Turnip mosaic virus; Areca nut necrotic ringspot virus; Potato virus X; VPg protein; infection; Nicotiana benthamiana馬铃薯Y病毒科（Potyviridae）是仅次于双生病毒科（Geminiviridae）的第二大植物病毒科和第一大植物RNA病毒科[1-2]。
马铃薯病毒种类及主姜病毒检测方法•农学论文马铃薯病毒种类及主要病毒检测方法罗燕娜,刘江娜,王航（兵团第六师农业科学研究所,新疆五家渠831300 ）收稿日期：2 015—01—20摘要：本文对：Ibli地区马铃薯主要病莓的特性和致病症状逬行了描述”并简要介绍了马铃薯主要病毒的检测技术。
关键词：马铃薯；病莓；检测方法马铃薯在我国广泛种植,已成为仅次于水稻、小麦、玉米的第四大粮食作物。
由于光照强、昼夜遍差大、气候冷凉等优势，新疆北疆沿天山一带的昌吉州、乌鲁木齐、昭苏、新源等地都非常适宜种植马铃薯，现种植面积已达2310hm2［l］.然而在当前的马铃薯生产中，病壽病发生普遍而严重，成为制约马铃薯产业发展的主要障碍，是生产上亟待解决的突出问题［2］。
目前，已报道的马铃薯病毒种类超过25种、类病壽1种，其中，侵染乌鲁木齐地区马铃書的主要病原病莓有PVX、PVY、PVA、PLRV,类病莓为PSTVd。
主要检测的马铃薯病毒有马铃薯X病毒（PVX X马铃薯Y病量PVY 1马铃S S病頡PVS \马铃薯M病毒（PVM \马铃薯卷叶病毒（PLRV ）及马铃薯纺锤块茎类病莓（PSTVd ）⑴。
1马铃薯主要病莓种类及致病症状1.1马铃薯X病毒（PVX）X病莓又称普通花叶病莓,病莓粒子为长杆状,大小为515nmxl3nm ,基因组全长6.4kb［3］。
该病莓可通过叶片汁液摩擦传播，也可通过蜗虫以非持久性方式传播,还可通过种暮传播［1］。
感病植株症状多种多样,因栽培品种的敏感性不同和病莓株系的不同而存在差异，多数表现为轻花叶或潜隐症状，症状严重的则表现为严更的花叶或皱缩,产量损失可达50%。
1.2马铃薯Y病毒（PVY）Y病莓又称为重花叶病莓，病莓粒子形状为弯曲的线形,大小为750nmxllnm ,多数通过桃妈和大戟长管妈传播。
PVY包括3个株系组：马铃薯Y病毒普通株系组（PVYO X马铃薯点条斑株系（PVYC ）和马铃薯Y病毒褐脉株系（PVYN L前2个株系组引起的主要初期症状是叶片坏死、斑驳，后期则表现为矮化、皱缩、斑驳和卷曲；第3个株系组初期表现为不同程度的花叶, 后期为花叶和斑驳,当溫度低于10°C或高于25°C时，花叶症状消失。
马铃薯三种主要病毒的ELISA和RT-PCR检测技术的研究马铃薯是世界上重要的食物作物之一，也是我国主要的经济作物之一。
然而，马铃薯生产中常常受到病毒的威胁。
病毒感染会导致马铃薯产量下降、品质降低甚至全面减产。
因此，准确快速地检测病毒感染对于指导马铃薯的种植和防控病害具有重要意义，可以提供科学依据、减少经济损失和保证农作物的质量安全。
马铃薯主要受到三种病毒的感染，分别是马铃薯病毒Y (Potato Virus Y, PVY)、马铃薯块茎坏死病毒 (PotatoVirus X, PVX)和马铃薯花叶病毒 (Potato Leafroll Virus, PLRV)。
传统的病毒检测方法包括生物学观察法、传统PCR等。
然而，这些方法存在耗时、复杂、低灵敏度等问题。
因此，研究人员对使用ELISA和RT-PCR等技术进行马铃薯病毒检测进行了深入研究。
ELISA法是一种高效的酶联免疫吸附法，利用抗原与特异抗体结合，通过比色反应检测样品中是否存在目标病毒。
ELISA方法具有高度敏感性和特异性，且结果易于观察和分析。
针对马铃薯病毒检测，研究人员首先制备了目标病毒的抗原，并将其与马铃薯样品中的病毒结合，然后添加酶标记的二抗，形成抗原-抗体-酶标记-底物复合物。
最后，通过添加酶底物，观察是否有颜色反应产生。
ELISA法不仅操作简便、检测速度快，而且可以批量检测多个样品。
但是，ELISA法的敏感性对样品前处理和样品质量要求较高。
与ELISA法相比，RT-PCR法可以在基因水平上对目标病毒进行检测。
RT-PCR法首先需要提取马铃薯样品中的总RNA，然后通过反转录将RNA转化为cDNA，再进行聚合酶链反应扩增。
PCR反应中使用特异引物，使得目标病毒的RNA序列扩增得到特异性产物，经过电泳分析可以确定是否存在目标病毒。
RT-PCR法具有快速、准确、高灵敏度和高特异性等优点，可以在较短的时间内对多个样品进行检测。
但是，RT-PCR法技术门槛较高，操作复杂，需要专业的实验室和设备。
马铃薯种薯病毒检测现已发现，造成马铃薯退化的病毒有30余种，严重为害马铃薯的病毒有七种：马铃薯卷叶病毒（PLRV）、马铃薯Y病毒（PVY）、马铃薯X病毒（PVX）、马铃薯A病毒（PV A）、马铃薯M病毒（PVM）、马铃薯S病毒（PVS）及马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTVd）。
在马铃薯栽培过程中，出现叶片皱缩卷曲，叶色浓淡不均，茎秆矮小细弱，块茎变形龟裂，产量逐年下降等现象，就表明马铃薯已经发生“退化”。
种薯“退化”是病毒的侵染及其在薯块内积累造成的，也是引起产量降低和商品性状变差的主要原因。
采用现代生物技术将种薯内的病毒去掉，恢复马铃薯品种本身的生理功能和生产特性，才能防止马铃薯的“退化”，使之达到育种家培育品种本身的商品性状和产量。
这就是种薯需要脱毒和采用脱毒种薯能够大幅度提高产量的重要原因。
1.种薯分类复合国家标准（GB18133-2012 表1）规定的相应质量要求的种薯为原原种、原种、一级种薯和二级种薯。
表1 各级别种薯田间检查植株质量要求1.1原原种（G1）用脱毒组培苗或试管薯在防虫网、温室等隔离条件下生产，经过质量检测达到国家标准（表1）要求的，用于原种生产的种薯。
1.2原种（G2）用原原种作种薯，在良好隔离环境条件下生产的，经过质量检测达到国家标准（表1）要求的，用于生产一级种的种薯。
1.3一级种薯（G3）在良好隔离环境中，用原种作种薯生产的，经过质量检测达到国家标准（表1）要求的，用于生产二级种的种薯。
1.4二级种薯（G4）在相对隔离环境中，用一级种作种薯生产，经过质量检测后达到国家标准（表1）要求的，用于生产商品薯的种薯。
1.5种薯批来源相同、同一块地、同一品种、同一级别以及同一时期收获、质量基本一致的马铃薯植株或块茎作为一批。
2.主要检测病毒2.1马铃薯X病毒（Potato virus X,PVX）2.2马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）2.3马铃薯A病毒（Potato virus A,PV A）2.4马铃薯M病毒（Potato virus M,PVM）2.5马铃薯卷叶病毒（Potato leafroll virus,PLRV）2.6马铃薯S病毒（Potato virus S,PVS）2.7马铃薯纺锤块茎类病毒（Potato spindle tuber viroid,PSTVd）3.检测方法3.1病毒检测采用酶联免疫（ELISA）或反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法。
我国烟区病毒病种类的血清学鉴定罗朝鹏;杨军;王燃;李峰;金立锋;魏春阳;林福呈【摘要】In order to better understand the occurrence of tobacco virus diseases in China status quo, 409 symptomatic tobacco samples were collected from 13 major tobacco growing areas of China in 2010 and 2011. Tobacco mosaic virus (TMV), cucumber mosaic virus (CMV), potato virus Y (PVY) and tobacco etch virus (TEV) were detected by ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). The results showed that the infection rate of TMV was the highest, which was 64.6% and 48.2% in 2010 and 2011, respectively; that of CMV was 32.1% and 28.2%, respectively; and that of PVY was 15.6% and 11.4%, respectively; while that of TEV was the lowest. There presented 7 types of mixed infection. The mixed infection ofTMV+CMV topped the highest rate of 34.9% and 28.6% in 2010 and 2010, respectively. It indicated that TMV and CMV were the predominant viruses infecting tobacco in China, and the mixed infection occurred seriously in tobacco field.%为了全面掌握我国烟草病毒病的发生现状,于2010和2011年连续两年对全国13个主要烟区共409份病毒病样品进行了烟草普通花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)和烟草蚀纹病毒(Tobacco etch virus,TEV) ELISA检测.结果表明,TMV侵染率最高,2010年样品侵染率高达64.6％,2011年为48.2％;2010年CMV侵染率为32.1％,2011年为28.2％;PVY侵染率2010年为15.6％,2011年为11.4％；TEV的侵染率最低.共存在7种复合侵染类型,TMV和CMV复合侵染最普遍,2010和2011年样品复合侵染率分别为34.9％和28.6％.说明TMV和CMV是侵染我国烟草的主要病毒,病毒病田间复合侵染较为严重.【期刊名称】《烟草科技》【年(卷),期】2012(000)012【总页数】6页(P72-77)【关键词】烟草;病毒;复合侵染;ELISA【作者】罗朝鹏;杨军;王燃;李峰;金立锋;魏春阳;林福呈【作者单位】中国烟草总公司郑州烟草研究院,郑州高新技术产业开发区枫杨街2号 450001;中国烟草总公司郑州烟草研究院,郑州高新技术产业开发区枫杨街2号450001;中国烟草总公司郑州烟草研究院,郑州高新技术产业开发区枫杨街2号450001;中国烟草总公司郑州烟草研究院,郑州高新技术产业开发区枫杨街2号450001;中国烟草总公司郑州烟草研究院,郑州高新技术产业开发区枫杨街2号450001;中国烟草总公司郑州烟草研究院,郑州高新技术产业开发区枫杨街2号450001;中国烟草总公司郑州烟草研究院,郑州高新技术产业开发区枫杨街2号450001【正文语种】中文【中图分类】S432.41烟草病毒病是危害烟草的主要病害之一，给烟叶生产造成巨大损失[1-2]。
2021年8月Aug.2021第45卷第4期Vol.45,No.4热带农业工程TROPICAL AGRICULTURAL ENCINEERING贵州省烟草常见病虫害及其防治方法①——以威宁县为例管育春②（贵州大学经济学院贵州贵阳550025）摘要基于贵州省威宁县烟草常见病虫害及其防治方法进行探讨，提出关于烟草常见的黑胫病、病毒病（花叶病）、根黑腐病、赤星病、青枯病、野火病、根结线虫病、烟叶蚜虫、烟青虫、小地老虎、野蛞蝓等病虫害的虫害原理及特点、发病规律和防治方法，以期能为贵州省烟草实际生产中的病虫害防治提供参考。
关键词烟草；病虫害；防治方法中图分类号S572Common Tobacco Diseases and Insect Pests and its Control Methods in GuizhouProvince —A Case Study of WeiningGUAN Yuchun(School of economics,Guizhou University,Guiyang,Guizhou 550025)Abstract In this paper,the common diseases and insect pests of tobacco in Weining county of Guizhou province and their control methods were briefly discussed.The special pest principles,characteristics,occur ‐rence rules and control methods of common tobacco diseases and insect pests were put forward,such as black shank disease,virus disease (mosaic disease),black rot disease of root,red spot disease,bacterial wilt,wildfire disease,root knot nematode disease,tobacco aphid,tobacco green worm,small field tiger,wild slug,etc.It is expected to provide reference experience for tobacco pest control in Guizhou province.Keywords tobacco ;diseases and insect pests ;control methods目前，中国烟草产量和销量全球第一，全国四大烟草生产基地分别是云南、贵州、四川和湖南，而贵州省更是家喻户晓的“烟草、白酒、茶叶”的重要产地。
马铃薯病毒PVY,PVS和PLRV多重RT-PCR检测黄丹;余琨;陈建斌;蔡红;朱有勇【摘要】病毒是马铃薯生产过程中危害较大的一类病原,为快速检测出云南省马铃薯主要病毒种类,依据病毒外壳蛋白基因序列设计合成了马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯S病毒(PVS)、马铃薯卷叶病毒(PLRV)的特异性引物,从退火温度、最低检测浓度、热反应循环条件、病毒间的模板及引物间的最佳组合浓度进行优化,建立了三重RT-PCR反应体系.结果表明:该优化体系可同步扩增出上述3种病毒,分别得到480 bp (PVY)、187 bp (PVS)、336 bp (PLRV)大小的扩增片段.优化的三重RT-PCR反应体系可快速、灵敏、简便的检测到单一或复合侵染的马铃薯病毒,有利于马铃薯病毒病的早期检测和防治,将为云南省马铃薯种苗脱毒、继代、田间植株的高产栽培等有重要实践作用.【期刊名称】《云南农业大学学报》【年(卷),期】2015(030)004【总页数】6页(P535-540)【关键词】马铃薯;病毒;多重RT-PCR检测【作者】黄丹;余琨;陈建斌;蔡红;朱有勇【作者单位】云南农业大学植物病理重点实验室,云南昆明650201;云南省建水县农业技术推广所,云南建水654399;云南农业大学植物病理重点实验室,云南昆明650201;云南农业大学植物病理重点实验室,云南昆明650201;云南农业大学植物病理重点实验室,云南昆明650201【正文语种】中文【中图分类】S435.32马铃薯病毒病是马铃薯非常重要的一类病害，病毒的侵染可引起马铃薯种质退化，导致产量急剧下降[1]。
我国各马铃薯主产区均有马铃薯病毒病发生[2]。
主要的马铃薯病毒种类有马铃薯X病毒(Potato virus X，PVX)、马铃薯卷叶病毒(Potato leaf roll virus，PLRV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y，PVY)、马铃薯A病毒(Potato virus A，PVA)和马铃薯S病毒(Potato virus S，PVS)[3-4]。
贵州黔南烟草马铃薯Y病毒(PVY)株系的血清学鉴定罗红香;李余湘;刘会忠;徐明勇;王林玉;赵中汇;何玉安;李章海;江彤【摘要】2010年从贵州省黔南州烟草产区共采集201个表现明显马铃薯Y病毒病症状的烟草样本.采用Tas-ELISA检测PVY的3个株系PVYN、PVYO和PVYC.结果显示,201个样本中共检测出171个样本受到PVY侵染,其中PVYN 37个,占21.6%；PVYO 133个,占77.8%；PVYC 0个,PVYN和PVYO复合侵染1个,占0.6%.PVY株系分布具有一定规律,侵染黔南州烟草的PVY以PVYO为主要株系,PVYN侵染相对较少,为次要株系,所有样本均没有检测到PVYC侵染,复合侵染零星发生.%10.3969/j.issn.1007-5119.2012.05.011【期刊名称】《中国烟草科学》【年(卷),期】2012(000)005【总页数】3页(P60-62)【关键词】贵州;烟草;马铃薯Y病毒;ELISA;株系鉴定【作者】罗红香;李余湘;刘会忠;徐明勇;王林玉;赵中汇;何玉安;李章海;江彤【作者单位】贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;中国科学技术大学烟草研究中心,合肥 230051;安徽农业大学植保学院,合肥 230036【正文语种】中文【中图分类】S572.08马铃薯Y病毒（Potato virus Y，PVY）是马铃薯Y病毒属（Potyvirus）的典型成员，能侵染烟草、马铃薯、番茄和辣椒等多种茄科作物[1]。
根据PVY的鉴别寄主症状反应和血清学反应类型，进一步将其划分为多个株系，常见的有PVYO、PVYN和PVYC等株系。
PVYO在不同马铃薯品种上引起轻重不一的花叶，而在烟草上引起斑驳和花叶；PVYN在马铃薯上一般表现为叶片无症或轻型斑驳，而在烟草上引起叶脉和叶柄坏死；PVYC在马铃薯栽培品种上引起条痕花叶症状[2-3]。
我国植病工作者在上世纪 90年代以来也做过一些PVY株系鉴定工作。
吴元华等[4]鉴定东北烟区烟草上发生的 PVY有普通株系（PVYO）、脉坏死株系（PVYVN）、点刻条斑株系（PVYC）和茎坏死株系（PVYNS）4个株系。
王劲波等[5]鉴定山东烟区主要有PVYO和PVYN 2个株系。
江彤等[6]鉴定安徽烟草可能存在PVYO株系和PVYNTN株系。
由于PVY不同株系发生复合侵染以及不断发现新的PVY株系和亚株系，PVY株系的鉴定变得越来越复杂。
PVY侵染烟草引起的马铃薯Y病毒病在国内烟区广泛分布[7-8]，特别在东北烟区和黄淮烟区危害严重[9-10]，大幅度降低烟叶产量和质量，成为阻碍烟叶生产的瓶颈。
近年来，贵州省烟草马铃薯Y病毒也呈现逐年加重趋势，特别是黔南烟区 PVY大面积流行，在局部地区甚至造成毁灭性损失[11]。
为减轻贵州黔南烟草病毒病危害，摸清当前贵州黔南烟区马铃薯Y病毒病发生发展的变化趋势，鉴定黔南烟区 PVY株系已成为当务之急。
本研究采用以 Tas-ELISA为主的血清学检测手段来鉴定PVY株系，血清学鉴定方法较快速且可短时间鉴定大量样本，因此，利用血清学方法加强对黔南烟草上 PVY的株系变化进行系统鉴定和检测，明确黔南烟草 PVY株系的分布，将为选育适合黔南烟区PVY重病区种植的抗病品种以及制定烟草PVY的防治措施提供理论依据。
1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 病样来源 2010年从贵州省黔南州瓮安、福泉、贵定、龙里4个县烟草产区共采集201个表现明显马铃薯Y病毒病症状的烟草样本。
样本表现为叶脉坏死、叶缘纵向下卷、叶片叶面皱缩、脉间轻花叶、矮化等症状。
其中瓮安县珠藏镇、牛场坝乡；福泉县龙昌镇；贵定县新浦乡、新巴镇；龙里县巴江乡、洗马镇的样本数分别为34、28、36、44、7、27、25个。
1.1.2 试剂马铃薯 Y 病毒各个株系诊断试剂：Potato Virus Y necrotic strain Reagent Set，Potato Virus Y strain C Reagent Set，Potato Virus Y strains O and C Reagent Set（美国Agdia公司）；碱性磷酸酶标记的羊抗鼠IgG （Promega公司）；硝基苯磷酸酯钠盐（Sigma公司）；96孔酶标板（美国Corning公司）。
1.2 试验方法Tas-ELISA检测方法参照Agdia公司马铃薯Y病毒各个株系诊断试剂使用说明并略加调整。
PVY多克隆抗体1:200稀释后分别包被酶标板，4 ℃孵育过夜；加入1:10稀释的病汁液样品，25 ℃孵育2 h；加酶标记物稀释液（含A酶标抗体和B 酶标抗体），25 ℃孵育2 h；硝基苯磷酸酯钠盐（PNP）显色，25 ℃孵育1 h，酶标仪测定吸光值（OD405）。
每步用含吐温的磷酸盐缓冲液（PBST）洗涤3～5次，测定时每个样品均设2次重复。
2 结果黔南州瓮安、福泉、贵定、龙里4县201个烟草样本的ELISA检测结果见表1。
从表1可看出，201个样本中，共检测出171个样本受到PVY侵染，阳性率为85.1%。
其中瓮安、福泉、贵定、龙里PVY的阳性率分别为88.7%、75.0%、80.4%、92.3%。
171个受PVY侵染的样本中，PVYN 37个，占21.6%；PVYO 133个，占77.8%；PVYC 0个，PVYN和 PVYO复合侵染 1个，占 0.6%。
其中，瓮安县55个阳性样本全部是PVYO，占100%；福泉县27个阳性样本中，PVYN占11.1% ，PVYO占88.9%；贵定县41个阳性样本中，PVYN占34.1%，PVYO占65.9%；龙里县48个阳性样本中，PVYN占41.7%，PVYO占56.3%，PVYN和PVYO复合侵染占2.1%。
侵染黔南州烟草的 PVY株系分布具有一定规律，PVYO在4县分布均为主要株系，PVYN侵染相对较少，为次要株系，所有样本均没有检测到PVYC侵染，复合侵染零星发生。
表1 贵州省黔南州201个烟草样本的PVY株系鉴定结果Table 1 The results of ELISA detection of 201 of tobacco samples from Qannan, GuizhouPVY各株系检出率/%地点检测样本数/个检出PVY样本数/个 PVY阳性率/% PVYN PVYO PVYC PVYN＋PVYO瓮安 62 55 88.7 0.0 100.0 0.0 0.0福泉 36 27 75.0 11.1 88.9 0.0 0.0贵定 51 41 80.4 34.1 65.9 0.0 0.0龙里 52 48 92.3 41.7 56.3 0.02.1合计 201 171 85.1 21.6 77.8 0.0 0.63 讨论从贵州省黔南州瓮安、福泉、贵定、龙里4县采集烟草样本时发现，黔南烟区疑似感染 PVY的烟株普遍表现为叶脉坏死、叶缘纵向下卷、叶片叶面皱缩、脉间轻花叶、矮化等症状。
ELISA检测进一步证明，叶片背面支脉坏死的烟株基本都能检测到PVY的侵染，但PVY在烟草上的症状表型与PVY株系之间没有明确的关系，无论 PVYN还是PVYO都在烟草上表现出叶脉坏死症状。
因此，根据脉坏死症状仅可以初步诊断烟株受到PVY侵染，但无法确定 PVY的株系，必须进一步通过血清学检测才可以明确PVY的株系类型。
本试验采用Tas-ELISA检测了黔南烟草PVY的3个株系PVYN、PVYO和PVYC，发现侵染黔南烟草的PVY以PVYO为主，PVYN为次要株系。
黔南 PVY株系分布在该地区具有一定规律，瓮安县位于黔南州的最北部，感染瓮安烟草的 PVY样本全部是PVYO，没有检测到PVYN侵染；福泉县位于瓮安县南部，该县烟草样本以PVYO侵染为主，也能检测到少量PVYN侵染。
贵定县的新浦乡、新巴镇以及龙里县的巴江乡、洗马镇相距不远，位于黔南州的西部。
总体上，这4个乡镇烟草样本仍然以 PVYO侵染为主，但龙里县巴江乡烟草样本以PVYN侵染为主，占66.7%（数据未列出），与其他地方PVYO为优势株系有差异。
贵定县新巴镇烟草PVY发病很轻，田间病株率低于1%（数据未列出），可能与该镇处于相对较封闭的山区，高带毒率的介体蚜虫尚没有大量迁入有关。
笔者在黔南州采样时，也做了PVY病情普查。
瓮安县PVY发病最为严重，发病田块病株率30%～70%（数据未列出）不等，病情特别严重田块呈枯黄一片，后期无法控制，烟农甚至弃烤。
有的烟农因为马铃薯 Y病毒病损失巨大，不愿意再种植烤烟，PVY造成的危害和损失在黔南烟区已成为烤烟生产瓶颈。
因此，明确黔南烟草 PVY株系分布，为筛选出适合黔南烟草 PVY重病区种植的抗病品种具有重要意义。
鉴于黔南烟区以PVYO为优势株系，进行地方性品种抗病性选育时，就应该选择PVYO作为接种毒源。
另外，黔南PVY株系种类可能随蚜虫的迁飞或烤烟品种的改变发生变化，因此，还需要继续监测黔南烟草PVY株系的变化。
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