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第39卷第12期2020年12月分析测试学报FENXI CESHI XUEBAO( Journal of Instrumental Analysis)Vol. 39 No. 12 1487-1493d o i: 10.3969/j.issn.1004 -4957. 2020.12. 008黄芪药材提取纯化过程中黄芪皂苷IV含量变化及相关成分分析陈超，吴惠勤*，黄晓兰，黄芳，刘梦云(广东省科学院广东省测试分析研究所（中国广州分析测试中心）广东省中药质量安全工程技术研究中心，广东广州510070)摘要：该文建立了准确测定黄芪药材中游离黄芪皂苷W含量的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC- MS/MS)法，并研究了2015年版《中国药典》黄芪项下黄芪皂苷W(黄芪甲苷)含量测定前处理操作对黄芪皂苷W含量的影响。
分别比较索氏提取后、正丁醇萃取后和氨试液除杂后黄芪皂苷W的含量变化，并利用具有超高分辨率的傅里叶变换离子回旋共振质谱仪（FT- ICR- MS)分析其成分的差异性。
结果表明，在优化条件下，黄芪药材中黄芪皂苷汉在0.387 0-24. 75 mg/L范围内呈良好的线性关系，相关系数（）为0.999 8,检出限（LOD)为1.0mg/kg，定量下限（LOQ)为3.0mg/k g，力口标回收率为94.5%~105%，相对标准偏差（RSD，™ =6)为1.4%。
研究发现甲醇直接提取的黄芪皂苷I相对含量最高，正丁醇萃取后的氨试液除杂过程会导致黄芪皂苷I及其他黄芪皂苷W同系物水解，黄芪皂苷I的相对含量显著降低，而黄芪皂苷W的含量显著升高；并发现黄芪药材中存在目前尚未报道的黄芪皂苷n异构体，将其命名为新黄芪皂苷n。
关键词：黄芪；游离黄芪皂苷含量变化；新黄芪皂苷n;超高效液相色谱-串联质谱中图分类号：O657.7; R284 文献标识码：A文章编号：1004 -4957(2020)12 -1487 -07Analysis of Content Variation of Astra/aloside W and Related ChemicalComponents During the Extraction and Purification of Astragali RadixC H E N C h a o，W U H u i-q in*，H U A N G X ia o-la n，H U A N G F a n g，L IU M eng-yun(Guangdong Engineering and Technology Research Center for Quality and Safety of Traditional Chinese Medicine，GuangdongInstitute of Analysis(China National Analytical Center Guangzhou)，Guangdong Academy ofSciences，Guangzhou510070，China)A b s t r a c t:A valida ted a n a lytic a l m ethod was developed fo r the d e term in ation o f free astragaloside Win A stra g a li R a dix by u ltra-h ig h perform ance liq u id chrom atography- tandem mass spectrom etry(U P-LC - MS/M S).E ffects o f each step o f pretreatm ent w ere studied on the de term in ation o W in Chinese pharm acopoeia(2015) (C h P).F u rth e rm o re，im pacts o f n-b u ta n o l e xtractio n and amm onia im p u rity rem oval on the de term in ation and content va ria tio n o f astragaloside W were in te d.The differences o f com ponents caused by pretreatm ent were analyzed by F o u rie r trac lo tro n resonance mass s pectrom etry(F T- IC R- M S).R esults showed that there was a good lin e a rre la tio n sh ip o f the proposed m ethod fo r astragaloside W in the range o f0.387 0 -24. 75 ma co rre la tio n c o e ffic ie n t r)o f0.999 8.The lim it o f detection(L O D)and lim it o f q u a n tita tio n(L O Q)were 1.0 m g/k g and 3.0 mg/k g，re sp e ctive ly.The recoveries at three spiked levels ranged from94. 5% to 105%，w ith a re la tive standard d e v ia tio n(R S D，^ = 6)o f1.4% .The re la tive content o fastragaloside I was the highest when A stra g a li R a d ix was d ire c tly extracted w ith m etha no l.p u rity rem oval process w ith am m onia after n-b u ta n o l extractio n le d to the hom ologues tu galoside W by h y d ro ly s is，w h ic h s ig n ific a n tly increased the content o f astragaloside W.M o re o ve r，itwas fou nd th a t there exists a new isom er o f astragaloside n，nam ed as neoastragaloside n in A stragal i R a d ix.Key words：A stra g a li R a d ix；free astragaloside W;content ch a n g e;neoastragaloside n ;u ltra-收稿日期：2020-06 -22;修回日期：2020-07 -14*通讯作者：吴惠勤，研究员，研究方向：质谱分析应用，E-mail:138****9756@139.o m1488分析测试学报第39卷h ig h perform ance liq u id chrom atography- tandem mass spectrom etry黄苗为見科植物蒙古黄 Y AVragaZiw(F is c h. )Bge.var.(Bge. )H siao 或膜荚黄苗也^§"〇^«應7716「£1疆；6«_15化8<：；11.)886.的干燥根[1]。
不同产地黄芪药材质量的差异性分析段琦梅;梁宗锁;杨东风;聂小妮;刘婷;兰晓继【摘要】[目的]结合<中国药典>(2005年版)规定指标及HPLC指纹图谱,对不同来源黄芪药材质量进行综合评价.[方法]测定来源于甘肃渭源、吉林舒兰、陕西凤县、甘肃陇西、山西浑源、陕西旬邑和陕西杨凌7个产区黄芪的总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物及黄芪甲苷的含量;建立黄芪药材样品的HPLC指纹图谱;对不同产地黄芪药材的质量指标和指纹图谱进行比较分析.[结果]不同产地黄芪样品的总灰分和水溶性浸出物均符合<中国药典>标准;醇溶性浸出物存在一定差异性;黄芪甲苷含量差异较大;不同样品HPLC指纹图谱共有15个共有峰,图谱间相似性较高.[结论]不同产地黄芪药材质量存在差异,多个指标综合评价能够更准确地反映黄芪药材的质量.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2010(038)010【总页数】6页(P187-191,198)【关键词】黄芪;药材质量;HPLC指纹图谱【作者】段琦梅;梁宗锁;杨东风;聂小妮;刘婷;兰晓继【作者单位】西北农林科技大学,生命科学学院,陕西,杨凌,712100;陕西省中药指纹图谱与天然产物库研究中心,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,生命科学学院,陕西,杨凌,712100;陕西省中药指纹图谱与天然产物库研究中心,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,生命科学学院,陕西,杨凌,712100;陕西省中药指纹图谱与天然产物库研究中心,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,生命科学学院,陕西,杨凌,712100;陕西省中药指纹图谱与天然产物库研究中心,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,生命科学学院,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,生命科学学院,陕西,杨凌,712100【正文语种】中文【中图分类】R282.710.5黄芪为豆科植物蒙古黄芪（Astragalus membranaceus （Fisch.）Bge.var.mongholicus（Bge.）Hisao）或膜荚黄芪（Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.）的干燥根，为常用大宗药材，主要功能为补气固表，利尿脱毒，排脓，敛疮生肌［1］。
4个主要黄芪产地黄芪质量比较杨长花;程芬;李慧;胡亚刚【摘要】目的:比较4个主产地黄芪浸出物、总黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、总皂苷及黄芪甲苷的含量差异,为种植、资源开发及合理使用提供参考依据.方法:应用浸出物测定法测定浸出物的含量;应用紫外可见分光光度法测定总黄酮、总皂苷的含量;应用高效液相色谱法测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芪甲苷的含量.结果:黑龙江、甘肃、内蒙古和山西黄芪的冷浸法测定水溶性浸出物的含量分别为18.52％、21.13％、24.46％和19.33％;冷浸法测定醇溶性浸出物含量分别为8.11％、9.83％、11.44％和10.26％;总黄酮的含量分别为0.356％、0.574％、0.693％和0.492％;毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量分别为0.040％、0.111％、0.135％、0.021％;总皂苷的含量分别为0.171％、0.283％、0.342％、0.240％;黄芪甲苷的含量分别为0.042％、0.068％、0.079％、0.058％.结论:不同产地黄芪浸出物、总黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、总皂苷、黄芪甲苷含量不同,黄芪水溶性浸出物含量内蒙古＞甘肃＞山西＞黑龙江;醇溶性浸出物的含量内蒙古＞山西＞甘肃＞黑龙江;总黄酮含量内蒙古＞甘肃＞山西＞黑龙江;毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量内蒙古＞甘肃＞黑龙江＞山西;总皂苷的含量内蒙古＞甘肃＞山西＞黑龙江;黄芪甲苷含量内蒙古＞甘肃＞山西＞黑龙江.4个产地黄芪质量有较大差异,应建立多成分的评价指标,更科学地评价黄芪质量.%Objective: To provide the reference for the growth, resources development and rational utilization by comparing the differences existed in the contents of the extracts, total flavonoids, Isoflavone glucose, total saponins and astragaloside A contained in HuangQi from four major producing areas. Methods: The contents of the extracts were measured by extract determination method; the contents oftotal flavonoids and total saponins were determined by ultraviolet visible spectrophotometry; the contents of Isoflavone glucose and astragaloside A were detected by HPLC. Results: The contents of water soluble extractives collected from Heilongjiang, Gansu, Neimenggu and Shanxi Huangqi determined by cold soaking method were 18.52％, 21.13％, 24.46％ and 19.33％ respectively; the contents of alcohol-soluble extractive detected by cold soaking method were 8.11％, 9.83％, 11.44％ and 10.26％respectively; the contents of total flavonoids were 0.356％, 0.574％, 0.693％ and 0.492％respectively; the contents of Isoflavone glucose were 0.040％, 0.111％,0.135％ and 0.021％; the contents of total flavonoids were 0.171％, 0.283％, 0.342％ and 0.240％; the contents of astragaloside A were 0.042％, 0.068％, 0.079％ and 0.058％. Conclusion:The contents of HuangQi extractives, total flavonoids, Isoflavone glucose, total saponins and astragaloside A are different, the contents of water soluble extractives are in the order: Neimenggu＞Gansu＞Shanxi＞Heilongjiang; the contents of alcohol-soluble extractives rank: Neimenggu＞Shanxi＞Gansu＞Heilongjiang; the contents of total flavonoids are in the order: Neimenggu＞Gansu＞Shanxi ＞Heilongjiang; the contents of Isoflavone glucose are in the order of Neimenggu＞Gansu＞Heilongjiang＞Shanxi; the contents of Isoflavone glucose rank in the order: Neimenggu＞Gansu＞Shanxi＞Heilongjiang; the contents of total saponins are in the order: Neimenggu＞Gansu＞Shanxi＞Heilongjiang; the contents of astragaloside A rank in the order of Neimenggu＞Gansu＞Shanxi＞Heilongjiang. There are the greater differences in the comparisons of the quality of HuangQi from fourproducing areas, the assessment indexes of many ingredients should be established to assess the quality of HuangQi more scientifically.【期刊名称】《西部中医药》【年(卷),期】2019(032)001【总页数】5页(P27-31)【关键词】黄芪;浸出物;总黄酮;毛蕊异黄酮葡萄糖苷;总皂苷;黄芪甲苷【作者】杨长花;程芬;李慧;胡亚刚【作者单位】陕西国际商贸学院, 陕西咸阳 712046;陕西国际商贸学院, 陕西咸阳712046;陕西步长制药有限公司;陕西国际商贸学院, 陕西咸阳 712046【正文语种】中文【中图分类】R282黄芪是豆科植物蒙古黄芪Astragalusmembranceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根，具有补气升阳，固表止汗，利水消肿，脱毒排脓等功效，可用于气虚乏力，中气下陷，表虚自汗，气虚水肿，血虚萎黄等的治疗［1］，黄芪的化学成分众多，主要含有黄酮类、皂苷类、多糖类及氨基酸类等。
黄芪炮制品中皂苷成分含量的比较研究
赵霞
【期刊名称】《光明中医》
【年(卷),期】2011(26)7
【摘要】目的研究黄芪不同炮制品中皂苷成分的差异.方法通过溶剂法和沉淀法提取精制了总皂苷.利用香草醛-冰醋酸、高氯酸显色法测定黄芪不同炮制品中总皂苷成分的含量.结果黄芪不同炮制品中总皂苷含量不同,其中以蜜黄芪和盐麸炒黄芪总皂苷含量最高,生黄芪总皂苷含量次之,炒黄芪总皂苷含量较少.结论不同的炮制方法可以明显影响黄芪中总皂苷等成分的含量.
【总页数】2页(P1349-1350)
【作者】赵霞
【作者单位】河南南阳医学高等专科学校,南阳473058
【正文语种】中文
【相关文献】
1.UPLC/Q-TOF-MS方法测定黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ含量并研究水解对黄芪皂苷类成分的影响
2.不同来源黄芪中黄芪总皂苷含量比较研究
3.黄芪中有效成分环黄芪醇皂苷和黄芪甲苷的含量测定
4.黄芪药材提取纯化过程中黄芪皂苷Ⅳ含量变化及相关成分分析
5.黄芪炮制品中多糖成分含量的比较研究
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不同提取方法对黄芪总皂苷含量的影响张军武;赵琦【摘要】Objective: To select the best extraction process of total saponin in HuangQi (Radix Astragali). Method: The contents of astragaloside IV, extracted with ethanol reflux method as well as water extraction and alcohol precipitation method, were detected by HPLC-ELSD by taking astragaloside IV as an index. Result: The content of astragaloside IV extracted by ethanol reflux method was 40% higher than that got by water extraction and alcohol precipitation method. Conclusion: All the results suggested that ethanol reflux method could be taken as an extraction method of total saponin from HuangQi (Radix Astragali) in a large scale production.%目的优选黄芪总皂苷的提取方法.方法采用平行试验法,以黄芪甲苷为指标,测定用HPLC-ELSD 法测试乙醇回流法和水提醇沉法提取的总皂苷中黄芪甲苷的含量.结果乙醇回流法比水提醇沉法提取的总皂苷中黄芪甲苷含量高出约40%.结论乙醇回流法较水提醇沉法提取率高,是黄芪总皂苷的最佳提取工艺.【期刊名称】《西部中医药》【年(卷),期】2012(025)004【总页数】2页(P26-27)【关键词】黄芪;总皂苷;乙醇回流法;水提醇沉法【作者】张军武;赵琦【作者单位】陕西中医学院,陕西咸阳712046;咸阳市卫生学校【正文语种】中文【中图分类】R282.5黄芪为常用的“补气”药，中医认为黄芪有补气升阳、利水消肿、益气固表之功效［1］。
甘肃永登产黄芪与陇西产黄芪主要成分对比分析高克立王永昌夏小军雷旭东李娟段赟1.甘肃省医学科学研究院/甘肃省肿瘤医院，甘肃兰州730050【摘要】目的：了解甘肃永登产黄芪与陇西产黄芪主要成分的含量差异。
方法：用水煎煮法提取黄芪中的活性成分，低温干燥，计算煎膏得率。
采用紫外分光光度法，分别以芦丁、黄芪甲苷、葡萄糖为对照品，测定永登产黄芪和陇西产黄芪水煎膏中总黄酮、总皂苷和总多糖的含量。
结果：永登产黄芪与陇西产黄芪的水煎膏得率分别为30.78%和29.78%。
永登产黄芪和陇西产黄芪水煎膏中总黄酮含量分别为0.48%和0.69%、总皂苷含量分别为7.86%和6.15%、多糖含量为14.3%和13.1%。
结论：甘肃永登产黄芪与陇西产黄芪中中总黄酮、总皂苷和总多糖含量存在差异，永登产黄芪水煎膏得率比陇西产黄芪高出1个百分点，水煎膏中总皂苷、总多糖的含量永登产黄芪高于陇西产黄芪，总黄酮的含量永登产黄芪低于陇西产黄芪。
【关键词】黄芪；总黄酮；总皂苷；总多糖；含量分析中图分类号：R93文献标识码：A文章编号：1004-2725（2020）1-0068-04黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membrana-ceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membraneceus（Fisch.）Bge.的干燥根［1］。
始载于《神农本草经》，有补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血、行滞通痹、托毒排脓、敛疮生肌之功效，被广泛应用于临床［2］。
黄芪中的主要活性成分为黄芪黄酮（astragalus isoflavones）、黄芪皂苷（astragalus sap-onins）和黄芪多糖（astragalus polysaccharides）［2-4］。
药理学研究表明，黄芪具有调节机体免疫功能、强心、降血糖、抗衰老、抗疲劳、抗病毒、抗肿瘤、镇静、镇痛、利尿等作用。
山西、内蒙古及河北安国产地黄芪性状及主要含量分析目录一、原植物来源和分布二、药材性状三、药材主要鉴别与含量分析1、显微鉴别2、其他主要含量2.1总灰分2.2酸不溶性灰分2.3重金属及有害物质2.4有机氯农药残留量2.5浸出物2.6黄芪甲苷四、讨论五、致谢内容提要：本文从山西黄芪、内蒙古黄芪、河北安国黄芪的原植物来源和分布、药材性状及主要含量等方面进行比较和分析。
结果显示，在性状外观显微结构方面，山西黄苠与内蒙古黄芪有相近之处，与河北安国黄芪差异很大；其他鉴别和黄芪甲甙测定显示，山西黄芪优于内蒙古黄芪及河北安国黄芪，文中对山西地道黄芪的地域资源、生长环境、内在含量等内容进行了阐述；并提出为保证中药材质量和其稳定性，建议使用道地药材。
关键词：黄芪山西内蒙古河北安国性状含量黄芪是一味历史悠久、临床应用十分广泛，为历代中医最为常用的中药之一。
黄耆(或芪)始载于《神农本草经》，列为上品。
李时珍释其名日，耆长也，黄耆色黄，列为补药之长，故名。
今俗通作黄芪。
陶弘景说：“第一出陇西（今甘肃岷县之南）者，洮阳(今甘肃临潭县西南)，色黄白，甜美，今亦难得：次用黑水(今四川黑水)，宕昌(今甘肃岷县之南)者，色白，肌理粗，新者亦甘而温补。
又有蚕陵(今四川茂波西北)白水者，色理胜蜀芪者而冷补”。
唐.苏敬说：“今出原州(今宁夏自治区固原县或甘肃镇原)及华原(今陕西耀县)者最良，蜀汉不复采用，直州、宁州（甘肃、四川、陕西边界地区）者亦佳。
”。
宋《图经本草》载：“夸河东陕西州郡多有之”。
明《本草蒙筌》载：“绵耆出山西沁州绵上，此品极佳”。
清《植物名实图考》载：“黄芪有数种，山西、内蒙古者最佳”。
由此可知，我国黄芪正品的产地有从甘肃、四川向宁夏、陕西、山西、内蒙古过渡的情况。
根据《中华人民共和国药典》2005年版一部规定其药材来源为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch) Bge. var.mongholicus（Bge.）Hsiao或膜荚黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch) Bge. 的干燥根。
不同来源黄芪中黄芪总皂苷含量比较研究刘凤波;侯俊玲;王文全;于福来;赵志刚;郜舒蕊;韩亚男【摘要】目的:比较全国不同来源黄芪中总皂苷含量.方法:采用紫外分光光度法测定黄芪总皂苷含量,以黄芪甲苷为对照品,测定波长为541 nm.结果:全国黄芪总皂苷平均含量为20.18 mg·g-1,蒙古黄芪总皂苷平均含量为21.06 mg·g-1,膜荚黄芪总皂苷平均含量为19.37 mg·g-1；野生黄芪药材总皂苷平均含量为21.33 mg·g-1,人工种植黄芪药材总皂苷平均含量为19.06 mg·g-1,半野生栽培黄芪药材总皂苷平均含量为18.97 mg·g-1.结论:不同来源黄芪药材总皂苷含量具有明显差异.【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2013(015)008【总页数】5页(P650-654)【关键词】蒙古黄芪;膜荚黄芪;黄芪总皂苷;紫外分光光度法;含量比较【作者】刘凤波;侯俊玲;王文全;于福来;赵志刚;郜舒蕊;韩亚男【作者单位】北京中医药大学中药学院,北京 100102;北京中医药大学中药学院,北京 100102;北京中医药大学中药学院,北京 100102;中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所,北京 100193;中药材规范化生产教育部工程研究中心,北京100102;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所/农业部华南作物基因资源与种质创制重点开放实验室,海南儋州571737;北京中医药大学中药学院,北京100102;北京中医药大学中药学院,北京 100102;北京中医药大学中药学院,北京100102【正文语种】中文黄芪是我国重要的大宗常用中药材之一，为豆科植物膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.或蒙古黄芪A.membranaceus(Fisch.)Bge. var. mongholicus(Bge.)Hsiao的干燥根，具有补气升阳，固表止汗，利水消肿，生津养血，行滞通痹，托毒排脓，敛疮生肌功能[1]。
其中皂苷类成分为黄芪中主要的有效成分之一，具有降压、抗炎、镇静、镇痛、调节代谢等作用[2-4]，是黄芪注射液[5]、参芪注射液[6]、补中益气丸[7]等常用中成药的主要有效成分。
黄芪在我国分布较广，主要生长于内蒙古、山西、甘肃、黑龙江、吉林、辽宁、陕西、河北、山东、宁夏等地，此外青海、四川、新疆等地区以及朝鲜、蒙古、俄罗斯亦有分布[8]。
有关学者对不同产地黄芪中所含化学成分种类研究成果大致相同，但由于环境及人为等因素致使其有效成分含量并不完全一样[9-10]。
作者依据黄芪的道地产区和主产区，并兼顾其他分布区的原则，对内蒙古、山西、甘肃等10个省份不同基原、不同种植方式的黄芪药材进行调查与采集，利用紫外分光光度法测定黄芪药材中总皂苷(astragali total saponins，ATS)的含量，以期明确我国黄芪药材中黄芪总皂苷的整体含量，进而对以黄芪为主的中成药的生产、临床使用以及药理作用研究产生一定的指导意义。
1.1 仪器BP211D型电子分析天平；KQ500DE型数控超声波清洗器；FW100型高速万能粉碎机；DHG-9140A鼓风干燥箱；SP-754(PC)紫外可见分光光度计(杭州艾普仪器设备有限公司)。
1.2 试药黄芪甲苷对照品(上海融禾医药科技有限公司，批号：110702)，水为娃哈哈纯净水。
正丁醇、氨水、冰醋酸、高氯酸均为分析纯。
1.3 材料于2010年7～8月调查采集山西、内蒙古、甘肃、河北、黑龙江、吉林、宁夏、陕西、辽宁以及山东等10省份共计118个样方黄芪药材，包括55个蒙古黄芪和63个膜荚黄芪样方在内的61个野生样方，52个人工种植样方及5个半野生栽培(即将种子播种在山上，6～8年后采挖，此栽培方式为半野生栽培)样方。
经北京中医药大学王文全教授鉴定，为豆科黄芪属植物膜荚黄芪A.membranaceus(Fisch.)Bge.或蒙古黄芪A.membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao的干燥根，凭证标本保存于北京中医药大学中药资源系实验室。
将黄芪药材分别烘干、称重、粉碎，粉末全部过60目筛，于50 ℃烘干，备用。
实验材料来源情况汇总见表1。
2.1 对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品2.07 mg，精密称定，置于10 mL容量瓶中，加适量甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得0.207 mg·mL-1黄芪甲苷的对照品溶液。
2.2 供试品溶液的制备取黄芪药材粉末(过60目筛)0.5 g，精密称定，加甲醇25 mL，加热回流1 h，过滤，减压回收甲醇(65 ℃)，残渣用25 mL水饱和正丁醇分3次转移至分液漏斗中，氨试液洗涤3次，每次15 mL，正丁醇层减压回收至干，用甲醇溶解，溶液转移至25 mL量瓶中并定容至刻度，摇匀，即得黄芪总皂苷的供试品溶液。
2.3 溶液的显色分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各0.5 mL，于具塞玻璃试管中，空气吹干后，加质量分数为5%的香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL，高氯酸溶液0.8 mL，于60 ℃水浴加热20 min，取出后立即冰浴，冷却至室温，再加入冰醋酸5 mL，摇匀，用于吸光度测定。
2.4 测定波长的选择分别精密量取对照品溶液和样品(浑源县半野生蒙古黄芪)溶液各1 mL于具塞玻璃试管中，按照2.3中方法进行显色，在200～800 nm波长范围内进行扫描，对照品溶液和样品溶液在541 nm均有较大吸收，故确定黄芪总皂苷测定波长为541 nm。
2.5 方法学考察2.5.1 标准曲线绘制精密量取黄芪甲苷对照品溶液(0.207 mg·mL-1)0.2，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，分别按2.3项溶液显色中相应要求同法操作，以空白溶剂同法处理作参比，于541 nm波长下测定，以吸光度A为纵坐标(Y)，对照品质量为横坐标(X)，绘制标准曲线并进行回归计算，得到黄芪甲苷标准曲线回归方程Y=1.778X-9×10-3，r=0.999。
黄芪甲苷在41.4～517.5 μg内呈良好线性关系。
2.5.2 精密度试验分别取黄芪甲苷对照品溶液适量，依次按2.3项下要求同法操作，连续测定5次，测得吸光度值，外标一点法求得总皂苷含量，RSD=1.02%，结果表明仪器精密度良好。
2.5.3 重复性试验取同一批药材(浑源县半野生蒙古黄芪)，依次按2.2和2.3项下要求同法操作，测得吸光度值，外标一点法求得黄芪总皂苷含量，RSD=1.04%(n=6)，结果表明本方法重复性良好。
2.5.4 稳定性试验分别取对照品溶液3份(1.0 mL)，依次按2.3项下要求同法操作，室温放置，分别在0，1，2，4，6，8，10，12，24 h测定吸光度值，外标一点法求得黄芪总皂苷含量，计算RSD=1.01%，结果表明对照品溶液显色后室温放置24 h内稳定性良好。
分别取同一批药材(浑源县半野生蒙古黄芪)3份，依次按2.2和2.3项下要求同法操作，室温放置，分别在0，1，2，4，6，12 h测定吸光度值，外标一点法求得黄芪总皂苷含量，计算RSD=1.00%，结果表明供试品溶液显色后室温放置24 h内稳定性良好。
2.5.5 回收率试验取黄芪药材9份(锡林郭勒盟野生蒙古黄芪)，每份0.5 g，精密称定，分别加入不同量的黄芪甲苷对照品适量，制备低、中、高不同浓度的供试品溶液，每一浓度3份，按2.2和2.3项下要求同法操作，测定吸光度，黄芪总皂苷平均回收率为98.5%(RSD=1.49%)。
2.6 实际样品测定每批黄芪药材平行取3份，每份0.5 g，精密称定，按2.2和2.3项下操作，测定吸光度，代入标准曲线，计算黄芪总皂苷含量。
使用SPSS统计分析软件对数据进行分析，结果如下。
3.1 不同基原黄芪总皂苷含量分析通过对所有样方中黄芪药材进行测定，全国黄芪总皂苷含量平均为20.18 mg·g-1。
其中，全国各产地的蒙古黄芪和膜荚黄芪总皂苷含量平均值分别为21.06 mg·g-1和19.37 mg·g-1，通过进行独立样本t检验，两者差异具有统计学意义(P<0.05)。
3.2 不同种植方式黄芪总皂苷含量分析通过对野生黄芪、半野生黄芪、人工种植黄芪3种不同种植方式的黄芪药材进行总皂苷含量的测定，经分析，不同种植方式的黄芪药材中总皂苷含量差异具有统计学意义(P<0.05)，野生黄芪与人工种植黄芪药材中总皂苷含量差异具有统计学意义(P<0.01)。
其中，野生黄芪含量最高(21.33 mg·g-1)，为半野生黄芪(18.97 mg·g-1)及人工种植黄芪(19.06 mg·g-1)的1.13倍和1.12倍。
3.3 全国不同产地黄芪总皂苷含量分析通过对内蒙古、山西、甘肃、陕西、河北、宁夏、黑龙江、吉林、辽宁及山东共10个省份产黄芪药材总皂苷测定分析，结果表明不同产地之间黄芪药材总皂苷含量差异有统计学意义(P<0.01)。
其中总皂苷含量最高的省份为内蒙古自治区(22.93 mg·g-1)，为总皂苷含量最低的山东省(15.74 mg·g-1)的1.46倍，其次为河北省(22.32 mg·g-1)和辽宁省(22.18 m g·g-1)。
全国不同产地黄芪总皂苷含量对比见图1。
多重比较分析结果表明，内蒙古黄芪总皂苷含量(22.93 mg·g-1)显著高于山西、甘肃、黑龙江、吉林以及山东(P<0.05)。
河北省黄芪总皂苷含量(22.32 mg·g-1)和辽宁省黄芪总皂苷含量(22.18 mg·g-1)显著高于山东省(P<0.05)。
山西、陕西、宁夏、黑龙江及吉林黄芪总皂苷含量差异相互之间无统计学意义。
3.3.1 各产地蒙古黄芪中总皂苷含量分析通过对内蒙古、山西、甘肃、陕西、河北及宁夏产蒙古黄芪进行总皂苷测定，各产地总皂苷含量差异具有统计学意义(P<0.05)。
总皂苷平均含量最高的为河北省和内蒙古自治区，分别为23.75 mg·g-1和23.55 mg·g-1，为总皂苷含量最低的甘肃省样品(16.55 mg·g-1)的1.44倍和1.42倍。
各产地蒙古黄芪总皂苷含量测定结果对比见图2。
3.3.2 各产地膜荚黄芪中总皂苷含量分析通过对内蒙古、黑龙江、吉林、辽宁、宁夏、甘肃、山东、河北以及陕西产膜荚黄芪进行总皂苷测定，各产地总皂苷含量差异具有统计学意义(P<0.05)，总皂苷平均含量最高的陕西省(23.14 mg·g-1)为含量最低的甘肃省样品(15.64 mg·g-1)的1.48倍。
