K-B纸片琼脂扩散法检测细菌药物敏感试验的影响因素分析
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纸片扩散法药物敏感试验若只根据是否出现抑菌环而不考虑抑菌环的直径大小来判断细菌是否对抗菌药物敏感的实验方法,其结果是不正确的。
而纸片扩散法试验是应用标准的方法学原理,根据抑菌环直径大小与最低抑菌浓度的相关性,结合临床上已知敏感或耐药菌株的状态,其结果是可靠的。
WHO推荐K-B法,其目的在于技术的简单和可重复性。
本法特别适用于肠杆菌科细菌,也可用于快速生长的致病菌,但不适用于其他细菌,如嗜血杆菌、奈瑟菌、专性厌氧菌及酵母样菌等。
无论用哪种方法接种,只要质控菌株的抑菌环在预期范围内,均可按同一解释标准报告结果。
但并非从感染患者分离到的微生物都必须做敏感试验,对于污染、机体共生的正常细菌群和那些与感染无关的细菌,可不必做敏感试验,只有那些被认为引起感染的微生物,应先分离提纯、鉴定菌种后再做敏感试验。
试验方法:一、试验材料:(一)培养基:Kirby-Bauer法指定用Mueller-Hinton琼脂。
多年大量的有关敏感试验的方法学研究,均采用该培养基;维持细菌正常发育,绝大多数细菌在此培养基上生长良好。
此培养基不拮抗抗菌药物活性以及商品的批次间差异等方面均优于其他培养基。
若检测肺炎链球菌的敏感性时,须在培养基中加5%的脱纤维羊血,制成血平板。
测嗜血杆菌及淋病奈瑟菌的敏感性时,在培养基中须加入1%血红素和 2.5mg/ml 辅酶I后应校正pH 7.2~7.4。
制备MH琼脂平板应用直径90cm平皿。
在水平的实验台上倾制。
琼脂厚为4mm,允许误差为土1mm。
琼脂凝固后,应测一下pH。
琼脂于板应放4℃保存,在7日内用完。
若当天不用,用塑料袋密封包装贮藏于冰箱(2-8℃)。
每批平板都应抽样,在30-50℃下培养24h或更长时间检查是否被感染。
MH琼脂培养基配方(1L):Beef Extract 2.0g Acid Hydrolysis of Casein 17.5gStarch 1.5g Agar 17.0gFinal PH 7.3 at 25℃高压灭菌后立即水浴冷却至45-50℃。
纸片扩散法药敏试验(KB法)纸片扩散法药敏试验,又称为KB法,是一种广泛应用于临床微生物实验室的抗生素敏感性检测方法。
通过该方法,可以快速、准确地评估病原菌对抗生素的敏感性,为临床医生提供治疗选择的依据。
纸片扩散法药敏试验的基本原理是将含有定量抗生素的纸片贴在接种有病原菌的培养基上,抗生素在培养基中扩散形成浓度梯度,抑制病原菌的生长。
通过测量纸片周围形成的抑菌圈直径,可以判断病原菌对抗生素的敏感性。
抑菌圈直径越大,表示病原菌对该抗生素越敏感。
纸片扩散法药敏试验具有操作简便、成本低廉、结果易于判读等优点,是目前临床上使用最广泛的药敏试验方法之一。
然而,该方法也存在一定的局限性,如受环境因素影响较大,结果受操作人员技术熟练程度影响等。
1. 选择合适的培养基:纸片扩散法药敏试验需要使用含有适量营养物质的培养基,以保证病原菌的生长。
2. 控制接种量:接种量过多或过少都会影响试验结果,因此需要严格控制接种量。
3. 选择合适的抗生素纸片:根据病原菌的种类和临床需求,选择合适的抗生素纸片进行试验。
4. 观察抑菌圈:在规定时间内观察抑菌圈的形成情况,测量抑菌圈直径,判断病原菌对抗生素的敏感性。
5. 结果报告:根据抑菌圈直径,按照相应的标准判断病原菌对抗生素的敏感性,并将结果报告给临床医生。
纸片扩散法药敏试验(KB法)是一种简单、实用的抗生素敏感性检测方法,在临床微生物实验室中具有广泛的应用。
通过规范操作,可以提高试验结果的准确性,为临床治疗提供有力支持。
纸片扩散法药敏试验(KB法)的进一步探讨我们需要了解KB法的基本操作步骤。
将含有特定抗生素的纸片贴在已经接种了细菌的琼脂平板上。
随着时间的推移,抗生素会从纸片中扩散到琼脂中,形成抗生素浓度梯度。
如果细菌对该抗生素敏感,那么在纸片周围就会形成一个无细菌生长的区域,即抑菌圈。
抑菌圈的大小与抗生素的浓度和细菌的敏感性有关。
KB法的准确性受到多种因素的影响。
纸片的抗生素含量必须准确,以保证试验的重复性。
平板霉素类似物生物活性评价平板霉素对耐甲氧西林金葡菌(MRSA)和耐万古霉素肠球菌(VREF)等耐药菌具有很好的抑制活性。
抗菌活性的测试主要针对MRSA和VREF进行测定和相比。
最小抑制浓度(MIC)被确定抑制细菌生长的最低浓度。
通过生物活性数据的反馈,进一步指导平板霉素类似物的合成方向,希望获得活性更高、药效活性更好的抗耐药菌抗生素和药物先导化合物。
纸片扩散法测定抗生素敏感试验及MIC:1.原理:将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。
纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。
在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制,从而形成透明的抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度,并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关关系,即抑菌圈愈大,MIC愈小。
2.仪器及试剂仪器:纸片、试管、移液枪、烘箱、培养皿、培养箱、镊子、pH试纸、量筒、天平、高压灭菌锅、三角瓶、打孔器、超净工作台试剂:样品溶液、培养基3.菌液的配置从琼脂平板挑取新鲜分离的菌落数个或从保存的斜面上移种至3~5mL LB肉汤培养液中37℃培养2~8h,以待生长至轻微或中等浊度。
也可直接从孵育18~24h的琼脂平板上挑去纯菌落制成肉汤。
为保证药敏试验的准确度和精度,必须对接种菌液的浓度做相应的控制。
因此,将菌液稀释并校正浊度至0.5麦氏标准浓度,稀释时使用无菌肉汤或生理盐水,此时菌液的浓度约为1.5×108CFU/mL。
4.接种平板在超净工作台中,用量筒量取15mL配置好的灭菌培养基,倒在平板中,冷却凝固。
吸取稀释好的菌液500μL于洁净的灭菌试管中,加入4500μL的培养基,冷却到不烫手,摇匀,均匀倾倒置已凝固的平板表面,放置冷却至凝固。
5.粘贴药敏纸片用纸片分配器或无菌镊子取纸片(直径6mm,厚度1mm),贴于平板表面,并用镊子尖轻压一下纸片,使其贴平。
每张纸片的间距不小于24mm,纸片的中心距平板的边缘不小于15mm。
试验研究LIVESTOCKANDPOULTRYINDUSTRYNo.8,2019影响琼脂扩散试验因素分析张 军1,黄宇翔1,王志强1,邹 跃1,侯美如1,金振华1,翟 莹2(1.黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院,黑龙江齐齐哈尔161005;2.齐齐哈尔大学,黑龙江齐齐哈尔161005)摘 要:由于琼脂扩散试验操作简单、所用仪器少、结果容易判断,因此临床中常用于各种疾病诊断及抗体效价检测但是琼脂扩散试验容易受到多种因素的干扰而导致试验特异性、敏感性、精确性等受到影响,甚至出现无法判定结果的情况。
就琼脂扩散试验的主要影响因素进行分析,为能给实验室技术人员做琼脂扩散试验时提供参考和帮助。
关键词:琼脂扩散试验;影响因素DOI:10.19567/j.cnki.1008-0414.2019.08.008! 引言琼脂扩散试验通常是指双向双扩散试验,试验原理是通过抗原、抗体在琼脂凝胶中由近及远不断自由扩散形成一定的浓度梯度,在适当比例相遇形成肉眼可见的沉淀线,并由此来检测抗体的效价或抗原鉴定和区分的一种技术。
琼脂扩散试验操作简单、使用仪器少、结果容易判断,。
因此被越来越多的实验室技术人员所采用,但琼脂扩散试验容易受到多种因素的干扰而导致试验准确性降低,甚至结果无法判读,从而造成试验失败,因此了解琼脂扩散试验影响因素及处理方法有助于提高试验结果准确度。
" 琼脂板厚度琼脂扩散试验使用的琼脂板凝胶厚度应为2~4mm。
琼脂板凝胶过厚,使用抗原和抗体体积增加,增加采样难度及试验成本提高,相反,琼脂板太薄也会影响实验结果,所加抗原和抗体总量减少,形成的沉淀线非常模糊甚至不出现沉淀线。
# 打孔器孔距及孔径琼脂扩散试验的原理是利用可溶性抗原和抗体在琼脂凝胶中形成的网格自由扩散,在适当位置结合,形成沉淀线。
打孔器孔径大小影响添加抗原及抗体的量,孔距大小与沉淀线形成的时间有关系,孔距过大及过小都不能形成沉淀线。
孔径4mm比3mm的反应快且清晰[1]。
简述k-b法纸片琼脂扩散实验原理及影响因素The K-B (Kirkwood-Buff) paper disk electrophoresis is a technique used to study the interactions between charged macromolecules in solution. In this experiment, a paper disk is soaked with agarose gel containing the sample mixture of interest.K-B法(Kirkwood-Buff方法)纸片电泳是一种用于研究溶液中带电大分子相互作用的技术。
在这个实验中,将纸片浸泡在含有感兴趣样品混合物的琼脂糖凝胶中。
When an electric field is applied across the disk, the charged macromolecules will migrate towards either the anode or cathode, depending on their charge. The migration rate of each macromolecule can be determined by measuring the distance it travels over a certain period of time.当在纸片上施加一个电场时,带电大分子会沿着阳极或阴极方向迁移,取决于它们的电荷。
通过测量每个大分子在一定时间内所移动的距离,可以确定其迁移速率。
The principle behind this technique lies in the fact that different macromolecules have different migration rates due to differences in their charge and size. These differences can be used to characterize and identify unknown samples based on their electrophoretic behavior.这种技术的原理是不同的大分子由于其电荷和大小的差异而具有不同的迁移速率。
怎样做好药敏试验(K-B法)近年来,细菌感染性疾病严重威胁着人类的健康,抗生素的合理使用是治疗和控制此类疾病的有效手段,抗生素体外药敏试验结果的正确与否对抗生素的选择至关重要,药敏试验的结果受到诸多因素的影响,如培养基、试纸片以及菌液的浓度等。
1、培养基细菌药敏试验所用的培养基种类较多,多数情况下,采用WHO 组织统一要求的M-H培养基,这种培养基中含有的低胸腺嘧啶是与磺胺类药物竞争的物质,因此进行的药敏试验效果较好。
此外,还有适量的Ca2+、Mg2+,在培养基中起到触媒的作用。
但是,有些细菌对培养基中的成分有特殊的要求,特殊的菌要用特殊的培养基才能进行药敏试验。
例如,流感嗜血杆菌的药敏试验培养基用HTM琼脂;淋球菌的药敏试验培养基用加5%羊血的巧克力M-H琼脂;肺炎链球菌的药敏实验用M-H琼脂加5%的脱纤维羊血培养基。
培养基中还有适量的Ca2+、Mg2+,在培养基中起到溶酶的作用,其含量的变化,可影响氨基糖苷类和四环素对铜绿假单胞菌的试验结果,含量过高,抑菌圈会变小,含量过低,抑菌圈会大得不可接受。
细菌药敏试验的培养基厚度大约为4mm,若培养基厚度大于4mm,会使细菌出现耐药;若小于4mm,本应耐药的易出现敏感。
所以,试验时一定不要把药敏纸片放在中央部位,而应均匀地排布在平皿周围的培养基上。
制作药敏试验的培养基用水,主要是Ca2+、Mg2+等矿物质离子,也在很大程度上影响着药敏试验的结果。
2、试纸片试纸片材质的好坏,对药物稳定性和活性有很大影响。
加工药敏试纸片的试纸一般是使用加厚型的滤纸,杂质少,对药物保存无太大影响。
然而,临床中很多用的是普通纸,被水浸润后会呈碱性,并且含有大量无机离子,因此使用普通纸加工的试纸片药物有较大的影响。
药敏纸片的PH值一般要求为中性,这样才适合药的活度。
药敏纸片的厚度要求大约1mm,这样才有利于细菌的生长和药物的扩散速度。
药敏纸片的直径在6.00~6.35mm之间,纸片的厚度和直径大小都会影响药敏试验的结果。
纸片扩散法药敏试验纸片扩散法(K-B法)药物敏感试验是在涂有细菌的琼脂平板培养基上按照一定要求贴浸有抗菌药的纸片,培养一段时间后测量抑菌圈大小,并根据相关解释标准进行结果分析,从而得出受试菌株药物敏感性的结论。
中文名纸片扩散法药敏试验临床意义得出受试菌株药物敏感性的结论目录.1试验原理.2试验步骤.3结果分析.4注意事项基本信息中文名纸片扩散法药敏试验临床意义得出受试菌株药物敏感性的结论试验原理纸片扩散药敏试验的原理:将含有定量的抗菌药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上,通过抗菌药物在培养基上的扩散,观察是否出现抑菌环,推断是否抑制细菌的生长。
药物扩散的距离越远,药物浓度越低抑菌能力越强,因此可根据抑菌环的大小,判定药物对细菌的抑制作用强弱。
试验步骤1. 待测菌株接种物制备(1)通用情况:从过夜孵育的平板,优先选择哥伦比亚血琼脂平板上的菌落上挑取数个单个菌落,直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液,使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位,使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌(1-2)*1012CFU/mL浓度。
(2)特殊情况:嗜血杆菌属(本程序中所指的嗜血杆菌仅包括流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌):从过夜孵育的HTM平板,直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液,使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位,使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌(1-2)*1012CFU/mL浓度。
2.接种平板(1)调整好悬液的浊度后,用无菌棉签浸入悬液内,紧贴试管内壁在液体上方旋转拭子数次,除去棉签上多余的液体,但也应适度。
(2)用拭子划线整个琼脂表面,从平板顶部到底部,均匀涂布,重复两次此过程(一共三次)每次旋转平板约60度,确保每次接种菌液均匀分布,最后在琼脂平板的边缘涂抹一圈,防止有流动的菌悬液,并使菌液涂布于整块平板的每个角落。
(3)涂布菌液完成的平板,可在室温放置一会(3-5分钟),以便在放置含有药物的纸片前使琼脂吸收表面多余的水分,但放置时间不应超过15分钟。
纸片扩散法药敏试验纸片扩散法(K-B法)药物敏感试验是在涂有细菌的琼脂平板培养基上按照一定要求贴浸有抗菌药的纸片,培养一段时间后测量抑菌圈大小,并根据相关解释标准进行结果分析,从而得出受试菌株药物敏感性的结论。
中文名纸片扩散法药敏试验临床意义得出受试菌株药物敏感性的结论目录.1试验原理.2试验步骤.3结果分析.4注意事项基本信息中文名纸片扩散法药敏试验临床意义得出受试菌株药物敏感性的结论试验原理纸片扩散药敏试验的原理:将含有定量的抗菌药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上,通过抗菌药物在培养基上的扩散,观察是否出现抑菌环,推断是否抑制细菌的生长。
药物扩散的距离越远,药物浓度越低抑菌能力越强,因此可根据抑菌环的大小,判定药物对细菌的抑制作用强弱。
试验步骤1. 待测菌株接种物制备(1)通用情况:从过夜孵育的平板,优先选择哥伦比亚血琼脂平板上的菌落上挑取数个单个菌落,直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液,使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位,使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌(1-2)*1012CFU/mL浓度。
(2)特殊情况:嗜血杆菌属(本程序中所指的嗜血杆菌仅包括流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌):从过夜孵育的HTM平板,直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液,使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位,使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌(1-2)*1012CFU/mL浓度。
2.接种平板(1)调整好悬液的浊度后,用无菌棉签浸入悬液内,紧贴试管内壁在液体上方旋转拭子数次,除去棉签上多余的液体,但也应适度。
(2)用拭子划线整个琼脂表面,从平板顶部到底部,均匀涂布,重复两次此过程(一共三次)每次旋转平板约60度,确保每次接种菌液均匀分布,最后在琼脂平板的边缘涂抹一圈,防止有流动的菌悬液,并使菌液涂布于整块平板的每个角落。
(3)涂布菌液完成的平板,可在室温放置一会(3-5分钟),以便在放置含有药物的纸片前使琼脂吸收表面多余的水分,但放置时间不应超过15分钟。
影响K-B法药敏试验结果的因素[摘要]细菌的耐药性和抗生素的合理使用是全球广泛关注的问题.其中细菌对抗生素敏感试验(以下简称药敏试验)在延缓和控制细菌耐药性、合理使用抗生素方面发挥着重要作用,是临床合理用药的重要依据,为确保其结果的准确性,必须了解试验中培养基种类及质量、试验用药的纯度和菌液的浓度、药物的含量及孵育时间等诸多因素的影响。
[关键词]细菌;药敏试验;琼脂;药片;室内质控细菌感染性疾病严重威胁人类的健康,抗生素的合理使用是治疗和控制此类疾病的有效手段,其中抗生素体外药物敏感试验(以下简称药敏试验)结果的正确与否对抗生素的选择至关重要,而药敏试验会受到诸多因素的影响,如培养基种类及质量、试验用药的纯度和菌液的浓度、药物的含量及孵育时间等。
纸片法药敏试验是将抗菌药物吸收到特定的纸片中,然后置于已接种待测定菌的固体培养基上,抗菌药物通过向培养基内的扩散,抑制敏感细菌的生长,从而出现抑菌圈.抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度,并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(mic)呈负相关关系,即抑菌圈愈大,mic愈小。
本文就k-b纸片琼脂扩散法中的影响因素加以阐述,以提高药敏试验结果的准确性,为临床合理用药提供可靠依据。
1培养基对药敏试验的影响首先应根据试验菌的营养需要选择适宜的培养基。
培养基的成分的不同,不仅影响敏感菌株的生长繁殖并可影响到抑制圈的直径。
who要求统一使用muellerhinton(m-h)琼脂作为纸片法药敏试验的常规用培养基,该培养基中含有的低量胸腺嘧啶或胸腺嘧啶核苷是与磺胺类药物和甲氧苄啶竞争的物质,若过量可能会逆转磺胺类和甲氧苄啶的抑菌效应,使得抑菌圈变小变模糊,甚至消失,从而导致假耐药报告。
培养基中还有适量的钙,镁离子,在培养基中起到溶酶的作用,其含量的变化,可影响氨基糖苷类和四环素对铜绿假单胞菌的试验结果,含量过高,抑菌圈会变小,含量过低,抑菌圈会大得不可接受。
一般细菌,如大肠杆菌及葡萄球菌可使用普通营养琼脂;做磺胺类药物敏感试验时应选用无蛋白胨平板;链球菌和巴氏杆菌可用绵羊血琼脂平板。
隐匿性肾炎的表现为单纯性血尿,类似于中医尿血,多因湿热下注所致。
金顺英等[14]将35例单纯血尿患者随机分组,治疗组每日服鲜车前草汁,对照组注意休息,预防感染,对症治疗。
8周后治疗组总有效率达85%以上,而对照组尿常规改变不明显,仅38.7%有效,二者有显著差异。
表明用此法治疗肾性血尿作用明显,且取材服用简便,久服未见毒副反应。
2.2.5 治疗阴道炎陈晓飞等[15]取新鲜车前草煎汁,对48例阴道炎患者进行浸泡治疗,结果29例外阴湿疹患者全部痊愈,l3例非特异性阴道炎及6例老年性阴道炎患者,治疗后症状明显减轻。
2.2.6 治疗急性乳腺炎急性乳腺炎为初产妇的常见病,分为未化脓型和化脓型两种。
陈福仁等[9]将捣烂的车前草捏成鼻孔大小的圆锥状,塞入患者鼻腔,15h/次,最多经3次治疗后,31例未化脓型者均可痊愈,但该法对化脓性乳腺炎无效。
王寿昌等[16]在10年期间对21例患者使用拍打尺泽穴加外敷车前草治疗急性乳腺炎,效果亦较好。
2.2.7 其他研究发现,车前草还可用来治疗运动性血红蛋白尿[17]、角膜翳[18]、痢疾[19]” 以及小儿迁延性肺炎、尿血、胃肠性感冒等儿科病症[20],均取得了满意的结果。
3 小 结车前草资源丰富,用途广泛,且毒副作用小,随着现代技术的不断发展以及各学科间的不断完善,车前草会给人类带来更大的经济和社会效益。
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纸片琼脂扩散法检测抗菌药物敏感试验方法分析抗菌药物敏感试验(AST)是指在体外测定药物抑制或杀死细菌能力的试验,纸片琼脂扩散法又称K-B法,是将含有一定量抗菌药物的纸片贴在已接种待测菌的琼脂平板表面,药物将在培养基中由纸片往周围扩散,且浓度递减。
在抑菌浓度范围内待测菌的生长被抑制,形成透明的抑菌圈。
根据抑菌圈的大小可判断待测菌对测定药物的敏感程度[1]。
该法操作简便、选药灵活,适用于快速生长的需氧菌及兼性厌氧菌。
1 实验材料抗菌药物纸片选择直径6.35mm,吸水量20μL的专用药敏纸片,灭菌后,经逐片加样或浸泡的方法使每片的含药量相当于所示浓度。
纸片冷冻干燥后储藏于密封瓶内,-20℃保存。
日常工作用的少量纸片可保存于4℃冰箱内,1周内使用。
培养基水解酪蛋白(M-H)培养基是CLSI推荐采用的需氧菌和兼性厌氧菌药敏试验标准培养基,pH7.2~7.4,溶化后倾注平板(琼脂厚度为4 mm)。
使用前应将琼脂平板放入35℃孵育至表面干燥。
药敏试验菌液:浓度应为0.5麦氏比浊标准。
①生长法:挑取已分离纯化的菌落4~5个,接种于3~5mLM-H肉汤中,35℃孵育4h,用生理盐水或肉汤校正菌液浓度至0.5麦氏比浊标准。
②直接调制法:用接种环挑取纯菌落数个,混悬于生理盐水或肉汤中,充分混匀并调整浓度为0.5麦氏比浊标准[1]。
2 实验方法2.1接种以无菌棉拭子蘸取试验菌液,在管内壁旋转挤压除去多余的菌液后,涂布于整个M-H琼脂平板表面,涂布3次,每次旋转平板60°,最后沿平板边缘涂抹1圈。
盖上表面皿盖,置室温放置3~5min,使平皿表面稍干。
2.2 贴放药物纸片:用无菌镊子或纸片分配器将含药纸片平整地贴于平板表面,稍加按压使纸片贴紧。
注意纸片分布均匀,各纸片中心相距24mm以上,纸片距平板内缘应大于15mm。
纸片贴牢后切勿移动,否则会影响抑菌圈的形状。
2.3培养:贴好纸片后,须于15min内将平板置于35℃培养箱中,孵育至规定时间(一般为18~24h)。
纸片扩散法药敏试验纸片扩散法(K-B法)药物敏感试验是在涂有细菌的琼脂平板培养基上按照一定要求贴浸有抗菌药的纸片,培养一段时间后测量抑菌圈大小,并根据相关解释标准进行结果分析,从而得出受试菌株药物敏感性的结论。
中文名纸片扩散法药敏试验临床意义得出受试菌株药物敏感性的结论目录.1试验原理.2试验步骤.3结果分析.4注意事项基本信息中文名纸片扩散法药敏试验临床意义得出受试菌株药物敏感性的结论试验原理纸片扩散药敏试验的原理:将含有定量的抗菌药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上,通过抗菌药物在培养基上的扩散,观察是否出现抑菌环,推断是否抑制细菌的生长。
药物扩散的距离越远,药物浓度越低抑菌能力越强,因此可根据抑菌环的大小,判定药物对细菌的抑制作用强弱。
试验步骤1. 待测菌株接种物制备(1)通用情况:从过夜孵育的平板,优先选择哥伦比亚血琼脂平板上的菌落上挑取数个单个菌落,直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液,使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位,使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌(1-2)*1012CFU/mL浓度。
(2)特殊情况:嗜血杆菌属(本程序中所指的嗜血杆菌仅包括流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌):从过夜孵育的HTM平板,直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液,使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位,使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌(1-2)*1012CFU/mL浓度。
2.接种平板(1)调整好悬液的浊度后,用无菌棉签浸入悬液内,紧贴试管内壁在液体上方旋转拭子数次,除去棉签上多余的液体,但也应适度。
(2)用拭子划线整个琼脂表面,从平板顶部到底部,均匀涂布,重复两次此过程(一共三次)每次旋转平板约60度,确保每次接种菌液均匀分布,最后在琼脂平板的边缘涂抹一圈,防止有流动的菌悬液,并使菌液涂布于整块平板的每个角落。
(3)涂布菌液完成的平板,可在室温放置一会(3-5分钟),以便在放置含有药物的纸片前使琼脂吸收表面多余的水分,但放置时间不应超过15分钟。