琼脂免疫扩散试验

一、实验目的1. 了解琼脂凝集扩散实验的原理和方法。

2. 掌握实验操作技巧。

3. 分析实验结果，并探讨琼脂凝集扩散实验在实际应用中的作用和意义。

二、实验原理琼脂凝集扩散实验是一种利用抗原与抗体在琼脂凝胶中相互反应形成可见沉淀线的免疫学检测方法。

该实验基于抗原与抗体特异性结合的原理，当抗原与抗体在琼脂凝胶中相遇时，若两者浓度适宜，则在反应点形成白色沉淀线。

沉淀线的直径与抗原或抗体的浓度成正比，通过测定沉淀线的直径，可以定量分析抗原或抗体的含量。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：琼脂粉、生理盐水、抗原、抗体、载玻片、打孔器、微量移液器、湿盒、37℃恒温箱等。

2. 实验试剂：1%琼脂凝胶、抗原溶液、抗体溶液、pH7.4 0.01M PBS缓冲液。

四、实验步骤1. 制备琼脂凝胶：称取适量琼脂粉，加入适量生理盐水，搅拌均匀，煮沸至溶解，冷却至约60℃。

2. 倒制琼脂板：将琼脂凝胶倒入载玻片上，使其均匀分布，厚度约为2-3mm，待其凝固。

3. 打孔：使用打孔器在琼脂板上打孔，孔间距约为5mm。

4. 加样：用微量移液器将抗原溶液和抗体溶液分别加入孔中，注意不要溢出。

5. 扩散：将加好样品的琼脂板放入湿盒中，置于37℃恒温箱中扩散24-48小时。

6. 观察结果：观察琼脂凝胶中是否出现白色沉淀线，并记录沉淀线的直径。

五、实验结果与分析实验结果显示，琼脂凝胶中出现了白色沉淀线，且沉淀线的直径与抗原或抗体的浓度成正比。

通过测定沉淀线的直径，可以定量分析抗原或抗体的含量。

六、实验讨论1. 琼脂凝集扩散实验是一种简单、快速、灵敏的免疫学检测方法，适用于检测各种抗原和抗体。

2. 该实验具有操作简便、成本低廉、结果直观等优点，在实际应用中具有广泛的应用前景。

3. 实验过程中，应注意以下几点：（1）琼脂凝胶的制备要严格控制温度，避免过度加热导致琼脂凝固。

（2）加样时要确保样品不溢出，以免影响实验结果。

（3）扩散过程中要保持湿盒环境，避免琼脂凝胶干燥。

琼脂扩散试验利用可溶性抗原与抗体在半固体琼脂内进行扩散，若抗原与抗体对应,并且比例适当，就会出现白色沉淀线，此为阳性反应。

琼脂扩散试验可在试管内、平皿中以及玻片上的琼脂中进行。

又可分为单向琼脂扩散试验和双向琼脂扩散试验两类.单向琼脂扩散试验是一种常用的定量检测抗原的方法。

将适量抗体与琼脂混匀，浇注成板，凝固后,在板上打孔，孔中加入抗原，抗原就会向孔的四周扩散,边扩散边与琼脂中的抗体结合。

一定时间后，在两者比例适当处形成白色沉淀环.沉淀环的直径与抗原的浓度成正比。

如事先用不同浓度的标准抗原制成标准曲线，则从曲线中可求出标本中抗原的含量。

本试验主要用于检测标本中各种免疫球蛋白和血清中各种补体成分的含量，敏感性很高。

双向琼脂扩散试验是将半固体琼脂倾注于平皿内或玻片上，待其凝固后,在琼脂板上打孔,将抗原、抗体分别注入小孔内，使两者相互扩散.如果抗原、抗体相互对应，浓度、比例适当，则一定时间后，在抗原、抗体孔之间出现清晰可见的沉淀线。

双向琼脂扩散法可用来分析溶液中的多种抗原。

一对抗原、抗体系统只能形成一条沉淀线,不同的抗原抗体系统在琼脂中扩散的速度不同，可在琼脂中形成不同的沉淀线。

本法主要是用于检测血清中各种免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙肝表面抗原等。

缺点是需要时间过长，灵敏度不高.琼脂免疫扩散试验材料与试剂1．琼脂粉2．平皿3．打孔器4．生理盐水或其他缓冲液，可加1/万的硫柳汞或叠氮钠防腐。

操作方法1．称取一定量的琼脂粉，按1％左右（0。

8％～1。

5%）的比例加入生理盐水或缓冲液，水浴煮沸融化20min。

2．将融化的琼脂倒入平皿内，使厚度2mm～3mm。

自然冷却.3．根据要求（孔径即孔的直径，孔距即两孔圆心之间的距离，包括两孔的半径)按模板打孔.也可直接用组合打孔器打孔。

现在一般多打成梅花形孔图。

4．挑出孔内琼脂，注意不要挑破孔缘。

5．在火焰上缓缓加热，使孔底边缘的琼脂少许熔化，以封底，以免加样后液体从孔底渗漏。

双向琼脂扩散实验报告一、实验目的双向琼脂扩散实验是一种常用的免疫学检测方法，本实验的目的在于：1、掌握双向琼脂扩散实验的基本原理和操作方法。

2、了解抗原抗体在琼脂介质中的扩散规律。

3、能够通过实验结果判断抗原抗体的特异性结合情况。

二、实验原理双向琼脂扩散实验是将抗原和抗体分别加入琼脂凝胶板相对应的孔中，两者在凝胶中自由扩散，当抗原和抗体的浓度比例合适时，会在两者相遇的部位形成白色沉淀线。

沉淀线的形成是由于抗原抗体特异性结合形成的复合物达到一定浓度时沉淀下来所致。

根据沉淀线的形状、位置以及数量，可以判断抗原和抗体的浓度、分子量、特异性等。

例如，如果两条沉淀线完全融合，说明两种抗原是完全相同的；如果沉淀线部分融合，说明两种抗原存在部分相同的抗原决定簇；如果沉淀线交叉，说明两种抗原完全不同。

三、实验材料与设备1、材料抗原：＿____（具体抗原名称）抗体：＿____（具体抗体名称）生理盐水琼脂粉2、设备水平式电泳仪打孔器移液器培养皿恒温箱四、实验步骤1、制备琼脂凝胶板称取一定量的琼脂粉，加入适量的生理盐水，加热溶解至透明。

将溶解好的琼脂液倒入培养皿中，厚度约 3 5mm，放置在水平台上待其冷却凝固。

2、打孔使用打孔器在琼脂凝胶板上打孔，孔的排列呈梅花形，孔径约3mm，孔间距约 5mm。

3、加样用移液器吸取抗原加入中心孔，周围孔分别加入不同稀释度的抗体。

加样时要避免产生气泡。

4、扩散将加样后的琼脂凝胶板放入恒温箱中，37℃扩散 24 48 小时。

五、实验结果经过 24 48 小时的扩散，观察琼脂凝胶板上的沉淀线情况。

在本次实验中，我们观察到以下结果：1、抗原与抗体 1 反应，在两者相遇的部位形成了清晰的沉淀线，沉淀线呈弧形，表明抗原与抗体 1 发生了特异性结合。

2、抗原与抗体 2 反应，沉淀线不明显，可能是抗体 2 的浓度过低或者抗体 2 与抗原的特异性结合较弱。

3、抗原与抗体 3 反应，出现了交叉的沉淀线，说明抗原与抗体 3完全不同，不存在相同的抗原决定簇。

一、实验目的1. 掌握双向琼脂扩散试验的原理和操作方法。

2. 学习利用双向琼脂扩散试验检测抗原和抗体的特异性结合。

3. 熟悉实验结果的观察和判定。

二、实验原理双向琼脂扩散试验是一种常用的免疫学实验方法，主要用于检测抗原和抗体的特异性结合。

该实验原理如下：将抗原和抗体分别加入琼脂凝胶板上的相邻小孔中，抗原和抗体在琼脂凝胶中各自向四周扩散。

当抗原和抗体浓度比例适宜时，二者相遇并在最适当的位置结合，形成白色沉淀线。

沉淀线的形成说明抗原和抗体之间存在特异性结合。

三、实验材料1. 抗原和抗体：如蛋白质、多糖等。

2. 琼脂凝胶：精制琼脂粉、生理盐水、磷酸盐缓冲液（PBS）等。

3. 载玻片、打孔器、微量进样器、湿盒、37℃恒温箱等。

四、实验步骤1. 配制琼脂凝胶：按照说明书比例称取琼脂粉，加入适量的生理盐水和磷酸盐缓冲液，隔水煮沸使溶化。

2. 倒制琼脂板：将熔化的琼脂凝胶趁热倒入载玻片上，厚度约为2-3mm。

3. 打孔：待琼脂凝固后，用直径3mm的打孔器在琼脂板上打孔，孔间距为5mm。

4. 加样：用微量进样器将抗原和抗体分别加入相邻的孔中，注意加样时勿使样品外溢或形成气泡。

5. 扩散：将加好样品的琼脂板置于湿盒内，放入37℃恒温箱中扩散24-48小时。

6. 观察结果：观察琼脂凝胶中是否出现白色沉淀线，并记录沉淀线的特征。

五、实验结果1. 正常情况下，琼脂凝胶中会出现一条清晰的白色沉淀线，说明抗原和抗体之间存在特异性结合。

2. 若抗原和抗体浓度比例不适宜，可能不会出现沉淀线。

3. 若琼脂凝胶中存在其他抗原抗体系统，可能形成多条沉淀线。

六、实验讨论1. 双向琼脂扩散试验是一种简单、灵敏、特异的免疫学实验方法，广泛应用于抗原和抗体的检测。

2. 实验过程中，加样、扩散等操作需注意细节，以确保实验结果的准确性。

3. 通过观察沉淀线的特征，可以初步判断抗原和抗体的特异性结合情况。

七、实验总结本次实验通过双向琼脂扩散试验，成功检测了抗原和抗体的特异性结合。

第二次实验1：琼脂免疫扩散实验一、实验目的了解并掌握单向琼脂免疫扩散法和双向琼脂免疫扩散法。

二、实验原理1.网格学说可溶性抗原与相应抗体以合适的比例发生特异反应时，在一定温度和电解质存在的条件下，经过一定的时间，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应。

沉淀反应的抗原可以是多糖、蛋白质、脂类等。

当抗原过剩或者抗体过剩时，只能形成微小的沉淀物。

2.单向琼脂免疫扩散法的基本原理在含有特异抗体的琼脂板中打孔，并在孔中加定量的抗原，抗原向周围扩散后与琼脂中抗体相结合，即形成白色沉淀环，其直径或面积与抗原浓度呈正相关。

同时，用标准抗原或国际参考蛋白制成标准曲线，可用以定量检测未知标本的抗原浓度（mg / ml 或IU / ml )。

3.双向琼脂免疫扩散法的基本原理双向扩散法是指可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散而形成一定类型沉淀线的方法。

沉淀线的特征与位置不仅取决于抗原和抗体的特异性及相互间浓度比例，而且与其分子大小及扩散速度有关。

当抗原抗体存在多种系统时，可呈现多条沉淀线以至交叉反应。

三、实验材料1.单向琼脂免疫扩散法实验材料2％离子琼脂，载玻片，标准马抗人IgG 血清（抗体，工作标准参考蛋白，PBS ( pH 7.2,0.01M)，打孔器（孔径3mm）及打孔模板，微量加样器，湿盒（容器内湿纱布或泡沫塑料），单人份待检血清标本（浓度分别为1/30、1/40和1/50)2.双向琼脂免疫扩散法实验材料1％琼脂（生理盐水配制）管，每管约4ml载玻片；打孔器及打孔模板微量加样器及塑料吸头；抗原：0.5ug/ ml 牛血清白蛋白(BSA )、0.5ug/ ml 人血清白蛋白(HSA )；抗体：兔抗人血清白蛋白、兔抗牛血清白蛋白湿盒。

四、实验步骤（1）单向琼脂免疫扩散1按照玻片的大小，准备制作琼脂板所需要的1％离子琼脂，融化后置于56-60℃水浴锅中待用。

（分装其1/2量的2％盐水琼脂）。

稀释抗体，用pH7.2的PBS 稀释标准抗人IgG 抗体，终浓度为抗体效价的一倍。

一、实验目的1. 了解琼脂扩散实验的原理和操作方法。

2. 掌握实验操作技巧，包括琼脂的制备、打孔、加样、培养等。

3. 分析实验结果，观察抗原与抗体在琼脂中的扩散情况。

4. 探讨琼脂扩散实验在临床医学中的应用。

二、实验原理琼脂扩散实验是一种利用抗原与抗体在琼脂凝胶中扩散并形成沉淀线的免疫学实验方法。

当抗原与抗体在琼脂凝胶中相遇时，若比例适宜，则形成白色沉淀线，沉淀线的位置和形状可以反映抗原和抗体的浓度及特异性。

三、实验材料与仪器1. 材料：- 羊抗人IgG血清（抗体）- 人血清（抗原）- 琼脂粉- pH7.4 0.01M PBS缓冲液- 载玻片- 打孔器- 37℃恒温箱- 湿盒- 可调微量加样器2. 仪器：- 研钵- 玻璃棒- 移液器- 精密天平四、实验方法1. 制备琼脂凝胶：- 称取适量琼脂粉，加入适量PBS缓冲液，搅拌均匀。

- 将琼脂溶液煮沸，使其充分溶解。

- 待琼脂溶液冷却至60℃左右，倒入预先准备好的载玻片上，制成琼脂凝胶板。

2. 打孔：- 使用打孔器在琼脂凝胶板上按一定距离打孔，孔间距约为5mm。

3. 加样：- 使用微量加样器将羊抗人IgG血清（抗体）加入中央孔，将人血清（抗原）加入周围孔。

4. 培养与观察：- 将加样后的琼脂凝胶板放入湿盒中，置于37℃恒温箱中培养24小时。

- 观察琼脂凝胶板上的沉淀线，记录其位置和形状。

五、实验结果与分析1. 实验结果：- 在琼脂凝胶板上观察到明显的沉淀线，沉淀线位于中央孔与周围孔之间，呈白色。

2. 结果分析：- 抗原与抗体在琼脂凝胶中扩散，当两者比例适宜时，在相遇处形成白色沉淀线。

- 沉淀线的位置和形状可以反映抗原和抗体的浓度及特异性。

- 本实验结果表明，人血清中含有与羊抗人IgG血清相对应的抗体，两者发生特异性结合，形成白色沉淀线。

六、实验结论1. 琼脂扩散实验是一种简单、灵敏、特异的免疫学实验方法，可用于检测抗原和抗体的浓度及特异性。

2. 本实验成功制备了琼脂凝胶板，并观察到明显的沉淀线，表明人血清中含有与羊抗人IgG血清相对应的抗体。

免疫扩散试验实验报告实验目的：本实验旨在通过免疫扩散试验来检测特定抗原或抗体的存在，以及它们在不同浓度下的扩散情况。

免疫扩散试验是一种常用的免疫学检测方法，可以用于诊断疾病、评估免疫反应或检测疫苗的有效性。

实验原理：免疫扩散试验基于抗原和抗体之间的特异性结合原理。

当含有抗原的样本与含有相应抗体的凝胶混合时，抗原和抗体会结合形成免疫复合物，导致在凝胶中形成可见的沉淀环。

沉淀环的出现和大小可以用来判断抗原或抗体的存在以及它们的相对浓度。

实验材料：1. 标准抗原或抗体溶液2. 待测样本3. 凝胶基质（如琼脂）4. 微量离心管5. 微量移液管6. 恒温水浴7. 显微镜或放大镜实验步骤：1. 准备凝胶基质，按照制造商的说明配制琼脂，并在平板上形成均匀的凝胶层。

2. 在凝胶上打孔，每个孔中将注入不同的样本，包括标准抗原、待测样本和对照组。

3. 使用微量移液管将样本注入相应的孔中。

4. 将平板置于恒温水浴中，让样本在凝胶中扩散一定时间。

5. 取出平板，观察并记录沉淀环的出现和大小。

6. 如果需要，使用显微镜或放大镜来更清晰地观察沉淀环。

实验结果：实验结果显示，标准抗原在凝胶中形成了明显的沉淀环，表明免疫扩散试验是有效的。

待测样本中，部分样本也出现了沉淀环，表明这些样本中存在相应的抗原或抗体。

对照组未出现沉淀环，验证了实验的特异性。

实验结论：通过免疫扩散试验，我们成功地检测了样本中特定抗原或抗体的存在。

沉淀环的大小和清晰度为我们提供了关于抗原或抗体浓度的初步信息。

本实验为进一步的免疫学研究和临床诊断提供了有价值的数据。

注意事项：1. 确保所有样本和试剂在实验前均已正确标记和准备。

2. 实验过程中应严格控制温度和时间条件，以保证实验结果的准确性。

3. 实验后应妥善处理所有生物样本和化学试剂，遵守实验室安全规程。

通过本次免疫扩散试验，我们不仅掌握了一种重要的免疫学检测技术，而且加深了对抗原-抗体反应机制的理解。

在未来的研究中，我们将继续探索和优化免疫扩散试验，以提高其在疾病诊断和免疫学研究中的应用价值。

琼脂扩散试验琼脂扩散试验介绍：琼脂扩散试验为可溶性抗原与相应抗体在含有电解质的半固体凝胶(琼脂或琼脂糖)中进行的一种沉淀试验。

琼脂在实验中只起网架作用，含水量为99%，可溶性抗原与抗体在其间可以自由扩散，若抗原与抗体相对应，比例合适，在相遇处可形成白色沉淀线，是为阳性反应。

沉淀线在凝胶中可长时间保持固定位置并可经染色后干燥保存。

沉淀线(带)对抗原与抗体具有特异的不可透性，而非特异者则否。

所以一个沉淀线(带)即代表一种抗原与抗体的沉淀物，因而本试验可对溶液中不同抗原抗体系统进行分析研究。

琼脂扩散试验正常值：检查结果呈阴性。

琼脂扩散试验临床意义：异常结果：增高：胎儿宫内感染，新生儿TORCH症群，慢性或亚急性感染，疟疾，传染性单核细胞增多症，支原体肺炎，肝病，结缔组织疾病，巨球蛋白血症，无症状性单克隆IgM病等。

降低：遗传性或获得性抗体缺乏症，混合性免疫缺陷综合症，选择性IgM缺乏症，蛋白丢失性肠病，烧伤，抗Ig抗体综合症(混合性冷球蛋白血症)，免疫抑制剂治疗等。

需要检查的人群：新生儿和有相关疾病和症状的患者均要检查。

琼脂扩散试验注意事项：不合宜人群：无特殊要求。

检查时的禁忌：禁忌暴饮暴食，和剧烈运动，适宜在早晨空腹检测。

检查时要求：试验前应做预试验，确定抗体的稀释度。

加样时不要将琼脂划破，以免影响沉淀线的形成。

加样时不同浓度抗体和抗原不要混淆，影响试验结果。

琼脂扩散试验检查过程：双向琼脂扩散试验是在含有电解质的半固体琼脂板上，将可溶性抗原和抗体分别加入具有一定距离和孔径的小孔内，使其在一定条件下相互扩散，两者在比例合适处相遇，形成白色沉淀线(带)。

当存在多种抗原抗体系统时可出现多条沉淀线，然后可根据沉淀线的数目、位置、形状对抗原抗体系统进行分析。

单向琼脂扩散又称单向环状免疫扩散，是一种定量测定抗原的方法。

常用来检测标本中各种免疫球蛋白及血清中各种补体成分的含量。

灵敏度高，可对免疫性疾病作辅助诊断。

琼脂扩散试验（以测定鸡法氏囊琼脂抗体试验为例）1．制板琼脂 1g蒸馏水100m1 充分加热溶化，分装于培养皿中（不需无菌操作），厚度3-4mm。

氯化钠 8g2．打孔在制备好的琼脂板上用打孔器打梅花孔(中间1孔，周围6孔，如下图），将孔内琼脂用针头挑出（针头斜面向上）。

3．封底用酒精灯轻烤打孔部位至底部琼脂板稍微溶化（手背感觉微烫手），封闭孔底，以防侧渗。

4．加样原则：（1）已知的加在中间，未知的加在周围；（2）满而不溢。

用微量移液器吸取法氏囊抗原加入中间孔，卵黄抗体加入1-4孔，生理盐水加入5-6孔。

每种样品对应一个滴头。

今天上午抗原和生理盐水用一个吸头，先吸生理盐水再吸抗原。

卵黄抗体用前要摇匀。

5．反应（扩散）加样完毕后，加盖。

正放静置5～10min，然后将培养皿倒置于湿盒中，37℃温箱中作用，分别在24h、48h、72h观察并记录结果。

琼脂扩散打孔示意图7孔加抗原，1-4孔加卵黄抗体，5-6孔加生理盐水。

6．结果判定(1)判定方法标准阳性血清与抗原孔之间出现一条清晰的白色沉淀线，则试验成立。

(2)判定标准若被检血清孔与中心抗原孔之间出现清晰致密的沉淀线，且该线与抗原和标准阳性血清之间沉淀线的末端相吻合，则被检血清判为阳性。

吻合为阳性。

被检血清孔与中心孔之间不出现沉淀线，但标准阳性血清的沉淀线一端向被检血清孔内侧弯曲，则此孔的被检样品判为弱阳性(凡弱阳性者应重复试验，仍为弱阳性者，判为阳性)。

内弯为阳性。

若被检血清孔与中心孔之间不出现沉淀线，且标准血清沉淀线直向被检血清孔或标准阳性血清的沉淀线一端向被检血清孔外侧弯曲，，则被检血清判为阴性。

直向或外弯为阴性。

被检血清(如图中3号)孔与中心孔之间沉淀线粗而浑浊或标准阳性血清与抗原孔之间的沉淀线交叉并直伸，被检血清孔为非特异反应，应重做，若仍出现非特异反应则判为阴性。

交叉为非特异性，应重做。

一、实验目的1. 理解琼脂扩散法的原理及其在免疫学中的应用。

2. 掌握琼脂扩散实验的操作步骤。

3. 学会分析实验结果，并能够判断样品中抗原或抗体的存在。

二、实验原理琼脂扩散法是一种利用抗原与抗体在琼脂凝胶中扩散并相遇，形成抗原抗体复合物的原理来检测抗原或抗体的方法。

当抗原或抗体在琼脂凝胶中扩散时，若两者相遇并形成复合物，则在凝胶中形成可见的沉淀线或沉淀环。

根据沉淀线或沉淀环的形状、大小和位置，可以判断样品中抗原或抗体的存在及其浓度。

三、实验材料与试剂1. 琼脂粉2. 琼脂平板3. 标准抗原或抗体4. 待测样品5. pH7.4 0.01M PBS缓冲液6. 打孔器7. 微量加样器8. 显微镜四、实验步骤1. 制备琼脂平板：将琼脂粉与PBS缓冲液按比例混合，加热溶解后倒入平板模具，待冷却凝固后取出琼脂平板。

2. 打孔：使用打孔器在琼脂平板上打孔，孔间距约为5mm。

3. 加样：将标准抗原或抗体加入中央孔，待测样品加入周围孔。

4. 孵育：将加样后的琼脂平板放入湿盒中，置于37℃恒温箱中孵育24-48小时。

5. 观察结果：取出琼脂平板，观察沉淀线或沉淀环的形成情况。

五、实验结果与分析1. 结果观察：观察琼脂平板中沉淀线或沉淀环的形成情况。

若形成明显的沉淀线或沉淀环，则说明样品中存在相应的抗原或抗体。

2. 结果分析：a. 沉淀线或沉淀环的形状：沉淀线或沉淀环的形状可以反映抗原与抗体的特异性。

若沉淀线或沉淀环呈直线，则说明抗原与抗体具有特异性；若呈曲线或环状，则说明抗原与抗体可能存在交叉反应。

b. 沉淀线或沉淀环的大小：沉淀线或沉淀环的大小可以反映抗原或抗体的浓度。

若沉淀线或沉淀环较大，则说明抗原或抗体浓度较高；若较小，则说明浓度较低。

c. 沉淀线或沉淀环的位置：沉淀线或沉淀环的位置可以反映抗原或抗体的分布情况。

若沉淀线或沉淀环靠近中央孔，则说明抗原或抗体主要存在于中央孔附近的样品中；若靠近周围孔，则说明抗原或抗体主要存在于周围孔附近的样品中。

1. 理解单向琼脂扩散实验的原理和方法。

2. 掌握实验操作技巧，包括制备琼脂板、打孔、加样、观察结果等。

3. 分析实验数据，如扩散速率、扩散系数等。

4. 探究单向琼脂扩散实验在实际应用中的作用和意义。

二、实验原理单向琼脂扩散实验是一种常用的免疫学检测方法，用于定量检测标本中的抗原。

其原理如下：将适量的抗体加入琼脂内制成免疫琼脂板，然后在板上打孔，孔中加入待测抗原。

抗原会向孔的四周扩散，边扩散边与琼脂中的抗体结合。

当抗原与抗体比例适宜时，形成白色沉淀环。

沉淀环的直径与抗原含量成正比。

通过测定沉淀环的直径，可以计算出标本中抗原的含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 羊抗人IgG血清- 标准参考血清（标准IgG质控物）- 待检人血清（IgG-抗原）- pH7.4 0.01M PBS缓冲液（或NS）- 琼脂粉（制备1%免疫盐水琼脂液）- 载玻片、打孔器、37恒温箱、湿盒、可调微量加样器等2. 实验仪器：- 恒温水浴箱- 移液器- 打孔器- 显微镜1. 制备琼脂板：将1%琼脂粉与0.01M PBS缓冲液混合，加热溶解，倒入载玻片上，待凝固后制成琼脂板。

2. 打孔：在琼脂板上按一定距离（1.2~1.5 cm）打孔。

3. 加样：向孔内滴加羊抗人IgG血清、标准参考血清、待检人血清，每孔10 μl。

4. 扩散：将琼脂板放入湿盒中，37℃恒温箱中扩散24小时。

5. 观察结果：观察琼脂板上是否形成白色沉淀环，并测量沉淀环的直径。

五、实验结果与分析1. 实验结果：- 标准参考血清孔中形成明显的白色沉淀环。

- 待检人血清孔中也形成白色沉淀环，但直径较小。

2. 结果分析：- 标准参考血清孔中的白色沉淀环表明琼脂板制备成功，抗体与抗原发生了特异性结合。

- 待检人血清孔中的白色沉淀环表明待检血清中含有与羊抗人IgG血清特异性结合的抗原。

根据沉淀环的直径，可以计算出待检血清中抗原的含量。

通过制作标准曲线，可以进一步确定待检血清中抗原的具体含量。

双向琼脂扩散实验报告一、实验目的双向琼脂扩散实验是一种常用的免疫学检测技术，本次实验的目的是通过该实验检测两种抗原之间的特异性反应，并确定它们之间的亲缘关系。

二、实验原理双向琼脂扩散实验是基于抗原和抗体在琼脂凝胶中自由扩散，并在适当的条件下形成沉淀线的原理。

当抗原和抗体在琼脂凝胶中相遇时，如果它们具有特异性结合能力，就会在两者的比例适当处形成肉眼可见的沉淀线。

沉淀线的形状、位置和数量可以反映出抗原和抗体的性质和浓度。

三、实验材料1、抗原：本次实验使用了两种抗原，分别为抗原 A 和抗原 B。

2、抗体：相应的抗 A 血清和抗 B 血清。

3、琼脂：优质琼脂粉。

4、生理盐水。

5、打孔器。

6、载玻片。

7、移液器。

四、实验步骤1、制备琼脂板称取适量的琼脂粉，加入生理盐水，加热至完全溶解。

将溶解好的琼脂溶液均匀地倾注在载玻片上，厚度约为 3mm，待其自然冷却凝固。

2、打孔使用打孔器在琼脂板上打孔，孔的直径约为 3mm，孔间距为 3-5mm。

小心地挑出孔内的琼脂。

3、加样在中央孔加入抗原 A，周围孔分别加入抗 A 血清、抗原 B 和抗 B血清，注意加样量要适中，避免溢出。

4、扩散将加样后的琼脂板放入湿盒中，置于 37℃恒温箱中扩散 24-48 小时。

五、实验结果经过 24 小时的扩散，观察到以下结果：1、抗原 A 与抗 A 血清之间形成了明显的沉淀线，沉淀线较粗且清晰，表明抗原 A 与抗 A 血清发生了特异性结合。

2、抗原 B 与抗 B 血清之间也形成了沉淀线，但沉淀线相对较细，说明抗原 B 与抗 B 血清的结合程度相对较弱。

3、抗原 A 与抗 B 血清、抗原 B 与抗 A 血清之间均未观察到沉淀线，说明抗原 A 与抗 B 血清、抗原 B 与抗 A 血清之间不存在特异性反应。

六、结果分析1、抗原 A 与抗 A 血清形成的沉淀线清晰且粗，说明抗原 A 与抗A 血清的亲和力较强，可能是由于抗原 A 的抗原决定簇与抗 A 血清中的抗体结合位点高度匹配，导致结合牢固。