禽流感采样方法

禽流感实验室检测方法一、标本的采集与处理(一)标本的采集1、病毒分离标本的采集病毒分离成功与否很大程度上取决于采集标本的质量，及其保存、运输等环节。

多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物，有时也采用肺活检材料等。

标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存，常用的采样液为：普通肉汤，pH7.4-7.6的Hank's、Eagle's或水解乳蛋白液。

为防止细菌和真菌生长，在采样液中需加入抗菌素，以往抗菌素多用青、链霉素，近来发现不少种类细菌对它们具有耐药性，故近来多用庆大霉素（其终浓度为每ml采样液中加入0.1 ml的10mg/ml）和抗真菌药物（终浓度为每毫升采样液中加入0.008 ml的250ug/ ml）。

主要的采集方法有以下几种：1)鼻拭子：将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。

以同一拭子拭两侧鼻孔。

将棉签浸入4-5 ml采样液中，尾部弃去。

2)咽拭子：用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，同样将棉签头浸入4-5 ml 采样液中，尾部弃去。

注：亦可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以便提高分离率，减少工作量。

3)鼻咽抽取物：用与负压泵相连的收集器（国外有售）从鼻咽部抽取粘液。

先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。

收集抽取的粘液，并用采样液涮洗收集器3次。

由于该收集器国内难买到，也可采用国内一种设计装置（见郭元吉、程小雯著，流行性感冒病毒及其实验技术。

中国三峡出版社P186，1997）。

4)鼻洗液：患者取坐姿，头微后仰，用移液管将1-1.5ml洗液注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。

然后让患者低头使洗液流出，用平皿或烧杯收集洗液。

重复此过程数次。

洗两侧鼻孔最多可用10-15 ml洗液。

5)漱口液：用10 ml洗液漱口。

漱时让患者头部微后仰，发“噢声”，让洗液在咽部转动。

然后，用平皿或烧杯收集洗液。

注：取鼻洗液和漱口液时，需预先了解患者是否对抗菌素有过敏史，如有则洗液和含漱液中不应含有抗菌素。

人禽流感标本的采集、运送、处理及保存操作规程一、目的规范人禽流感标本的采集、运送、处理及保存操作。

二、适用范围本操作规程适用于人禽流感标本的采集、运送、处理及保存。

三、简介人禽流感检测过程中，采集的标本包括鼻咽拭子、漱口液、血液等。

本实验室一般用鼻咽拭子或漱口液进行病毒分离与分子生物学检测，血清用于人禽流感抗体检测，采集血液部位一般位于前臂肘静脉。

四、器材1、用于血液收集的基本耗材包括：医用（5ml和10ml）一次性注射器、一次性乳胶手套、止血带、碘酒、无菌拭子、血清储藏管、标本标签、创可贴、可封口塑料袋、标本采集表格、带有冰袋的冰壶、棉拭子、污物桶、笔、试管架。

2、用于鼻咽拭子、漱口液等收集的基本耗材包括：一次性乳胶手套、防护服、十二层口罩（或N95口罩）、采样无菌棉签、采样液（螺口塑料管装）、可封口塑料袋、带有冰袋的冰壶、污物桶、样品登记表、笔、试管架。

附：血清保存管：2 ml螺口塑料管(外螺旋、带密封垫圈)，可耐深低温（液氮保存）；鼻咽拭子保存管：10 ml螺口塑料管(外螺旋、带密封垫圈)，可耐深低温（液氮保存）；尸检组织冻存管：50ml螺口塑料管(外螺旋、带密封垫圈)；记号笔：油性，防水。

五、人禽流感标本采集操作规程（一）标本采集要求1．采样人员须以无菌操作采集各类标本。

采集标本所使用的容器、采样液等均应无菌。

编制：福建省疾控中心病毒性疾病防治科审核：沈晓娜批准：严延生2. 每份标本必须标明标本编号、标本种类及采集日期。

采集单位应指定专人负责标本的登记、收集和管理，并认真填写“人禽流感标本采集登记表。

”3.所有标本的收集、运输和保藏都应装在有螺旋盖的塑料管中，以防止开、关标本管时产生气溶胶，并用两层清洁塑料袋包裹严实。

4.采集的标本应立即送当地疾病预防控制机构，同时附上标本送检单。

如不能立即送交，可置-20℃以下冰箱短暂保存（24小时之内）。

（二）标本采集种类与方法标本采集的时间、位置及质量对能否分离到病毒或提取到有活性的RNA至关重要，而标本保存与运输不当，也会影响病毒的分离。

二、环境标本采集、处理、保存和运输（一）标本采集和处理1、采样液环境标本采样液可用Hank's或Eagle's等培养液加入以下抗菌素和0.5%BSA：氨苄青霉素(2x106 IU/L)、链霉素(200mg/L)、多粘菌素B(2x106 IU/L)、庆大霉素(250mg/L)、制霉菌素(0.5x106 IU/L)、盐酸氧氟沙星(60mg/L)、磺胺甲基异恶唑(200mg/L)。

2、标本种类、采集方法及处理（1）水标本在禽类活动或笼具旁的水沟或水池不同部位共收集水标本5-10ml置于15ml外螺旋盖的管内。

水样标本到实验室后应在采样管中加入上述抗生素和0.5%BSA，再分装。

如果采集水标本中存在固体等物质，应将采集标本在无菌条件下反复吹打，以打碎固体物质，置4℃待其自然沉淀30min，也可3000rpm离心10min，取上清分装。

（2）笼具表面标本每个笼具采集1份标本放在1个单独采样管中。

用蘸有采样液的带有聚丙烯纤维头的拭子擦拭笼具表面禽类最常接触的3-5个不同部位（包括笼具底部），然后将擦拭过的拭子放入含5ml采样液采样管中，尾部弃去。

也可用多个拭子充分擦拭笼具表面后放到1个采样管中。

环境标本要在无菌条件下反复吹打收集的溶液，以打碎固体，置4℃待其自然沉淀30min，也可3000rpm离心10min，取上清分装。

（3）宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭标本如宰杀或摆放禽肉使用不同案板，可采集擦拭标本放到不同采样管中。

方法与采集笼具表面擦拭标本相同，拭子要擦拭禽肉接触最多部位。

（4）粪便标本从禽舍或环境中采集新鲜禽类粪便样品3-5g左右，放入含5ml采样液的采样管中。

采集的粪便标本要在无菌条件下反复吹打，以打碎粘液和固体物质，置4℃待其自然沉淀30min，也可3000rpm离心10min，取上清分装。

（5）清洗禽类的污水如有清洗禽类的污水盆或桶，可采集清洗禽类的污水标本。

将水槽中水样用无菌的、一次性的玻璃棒或棉签充分混匀后采集5-10ml置于15ml外螺旋盖的管内。

人感染H7N9禽流感病毒鼻咽拭子标本采集方法
采样物品：
•采样液、专用病毒采样拭子由市疾控中心提供，其他物品（如冷藏箱，采样时的生物安全防护用品等）自备。

•二、鼻咽拭子采样方法
•1、鼻拭子：将带有聚丙烯纤维头的鼻咽拭子轻轻插入鼻道内，轻轻转动鼻咽拭子，并向鼻腔内部推进至鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出，将拭子头浸入采样液中，尾部折断弃去。

•2、咽拭子：用带有聚丙烯纤维头的鼻咽拭子用力擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入采样液中，尾部折断弃去。

一、标本的采集(一)标本采集人员医疗机构的医生、护士或当地疾病预防控制中心专业人员负责标本采集并填写标本登记表，标本采集人员按照《与禽流感病禽密切接触者个人防护指导原则（试行）》做好个人防护。

(二) 采集对象禽流感病人，疑似病人，根据需要可采集病禽以及人禽流感密切接触者。

（三）标本采集种类和时限1. 采集标本的种类疑似禽流感患者的咽、鼻拭子或含漱液、血清、粪便以及死亡病例的尸检肺组织、气管分泌物、其它脏器。

2 .采集标本时间1）咽、鼻拭子或含漱液、粪便在发病的头3天采集。

2）急性期血清在发病后7天内采集，恢复期血清在发病后2-4周采集。

3）尸检标本尸检时采集。

3. 标本的运送采集的标本若不能在24小时内送达，则应尽快在－70 ℃以下保存。

无－70 ℃条件的需在－20 ℃冰箱短时间暂存，并尽快联系递送标本。

4. 标本采集的方法4.1病毒分离标本应采集发病后3天内相关标本进行分离病毒。

标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存，常用的采样液为：普通肉汤，pH7.4-7.6的Hanks，Eagles或水解乳蛋白液。

在采样液中需加入抗菌素，抗菌素多用青、链霉素（1000U/ ml），庆大霉素（其终浓度为每ml 采样液中加入0.1 ml的10mg/ ml）和制霉菌素（终浓度为50ug/ ml）。

主要的采集样本的方法有以下几种：1）鼻拭子：将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。

以同一拭子拭两侧鼻孔。

将棉签浸入4-5 ml采样液中，尾部弃去。

2）咽拭子：用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，同样将棉签头浸入4-5 ml采样液中，尾部弃去。

3）鼻咽抽取物：用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。

先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。

收集抽取的粘液，并用采样液涮洗收集器3次。

4）鼻洗液：患者取坐姿，头微后仰，用移液管将1-1.5 ml洗液注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。

然后让患者低头使洗液流出，用平皿或烧杯收集洗液。