Micronuclei微核流式检测实验

实验2 生物微核对环境污染的指示暨细胞有丝分裂相观察2.1 相关基础知识环境的三致性，即指环境中物理或者化学污染物对生物的致畸、致癌、致突变性，是目前环境污染中最主要的问题。

三致的根本在于致突变，致畸、致癌常常是致突变的结果。

微核是无着丝点的染色体断片，在有丝分裂后期由于不能向两极移动而游离于细胞质中，在间期细胞核形成时，即可在它附近看到若干个很小的圆形结构，直径大约是细胞直径的1/20－1/5，这就是微核(micronucleus)。

微核是常用的遗传毒理学指标之一，指示染色体或纺锤体的损伤。

由于这种损伤会因细胞受到的外界诱变因子的作用而加剧，而微核产生的概率又可与诱变因子的剂量呈正比，因此可以用微核出现的频率来评价环境诱变因子对生物遗传物质的损伤程度。

各种类型的骨髓细胞中均能见到微核，但某些只有少量胞浆的有核细胞，其核是分叶而有突起的，这类分叶及突起常常被误认为是微核，容易造成计算误差。

哺乳动物的红细胞，在成熟过程中将细胞核排出，成为无核细胞，而微核却留在细胞质中不被排出。

这样，只要红细胞生成过程中出现过染色体断片，就能在成熟的红细胞内看到微核，一目了然，即使没有多少遗传学知识的人，稍加训练也能从事这方面的计数工作。

染色体断裂实际上就是染色体的缺失。

如果进行染色体畸变分析，首先要做染色核型分析（包括正常和异常的）。

染色体数目多，形状小，则适于做核型分析的中间分裂相不易得到，而且核型分析时需要较好的遗传学知识，还需要较丰富的经验。

与之比较，微核试验法是一种不需特殊试剂及设备，且快速而简便的检测方法。

蚕豆（vicia faba）根尖微核试验在1986年已被中国环保局列为一种环境生物测试的规范方法，它作为一种环境变异的检测手段，在我国不少地区的环保部门和医疗卫生系统中都有广泛的应用。

蚕豆根尖微核实验与染色体畸变试验同样具有准确、快速、操作简便、有明显剂量—效应关系、适合大批量样品检测等特点。

美国国家环保局也肯定了蚕豆根尖微核试验在环境突变性检测中的作用，对许多环境致癌物都作了标准化的试验，建立了庞大的数据库，并建议在全世界范围内推广。

化妆品体外哺乳动物细胞微核试验In Vitro Mammamlian Cells MicronucleusTest1 范围本方法规定了体外哺乳动物细胞微核试验的范围、试验目的、定义、试验基本原则、试验材料与试剂、试验步骤、结果判定标准。

本方法适用于化妆品原料或产品的致突变性的检测。

2 试验目的本试验用于检测体外培养的哺乳动物细胞染色体损伤和非整倍体变异，以评价受试物致突变的可能性。

3 定义3.1 微核micronuclei染色单体或染色体的无着丝粒断片，或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期，无法迁移至两极而遗留在细胞质中。

末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在子细胞的胞质内，因比主核小，故称为微核。

3.2 着丝粒centromere染色体中将两条姐妹染色单体结合起来的DNA区域。

3.3 非整倍体aneuploidy二倍体染色体组中缺少或额外增加一条或若干条完整的染色体的变异类型。

3.4 非整倍体诱变剂aneugen作用于细胞有丝分裂或者减数分裂周期，导致细胞分裂异常，诱发非整倍体的物质。

3.5 染色体断裂chromosome breakage染色体臂出现长度大于染色体臂宽度的裂隙。

3.6 染色体断裂剂clastogen引起染色体发生断裂的物质。

3.7 细胞毒性cytotoxicity对细胞结构或功能的有害效应，最终可导致细胞死亡。

3.8 致突变性mutagenicity导致基因或染色体结构中产生可遗传的DNA碱基对序列变化的能力。

4 试验基本原则体外哺乳动物细胞微核试验是一种用于检测哺乳动物细胞经受试物处理后是否产生微核的致突变性检测方法。

本方法适用于检测有丝分裂细胞暴露于受试物期间或之后致染色体断裂和/或诱发非整倍体的能力。

如果短期（3 h～6 h）处理的试验结果为阴性或不明确时，需要进行无代谢活化系统的长期处理试验（用受试物处理细胞1.5～2.0个正常细胞周期）。

试验分为使用和不使用肌动蛋白聚合抑制剂细胞松弛素B（CytochalasinB，cytoB）两种方法。

线粒体提纯后进行流式鉴定是一种常用的线粒体质量检测方法，其主要目的是评估线粒体的纯度、完整性和功能状态。

下面是一个线粒体提纯后进行流式鉴定的实验流程示例：
1. 线粒体的提纯：使用适当的线粒体分离方法，如差速离心或密度梯度离心，从细胞或组织中提纯线粒体。

2. 荧光染料标记：选择适合线粒体标记的荧光染料，如 MitoTracker 染料或其他线粒体特异性染料。

将提纯的线粒体与荧光染料孵育，使染料结合到线粒体上。

3. 流式细胞仪设置：根据所使用的流式细胞仪型号和荧光染料的激发和发射波长，设置合适的参数，如激光功率、荧光通道等。

4. 流式分析：将标记后的线粒体悬液加载到流式细胞仪中，进行流式分析。

通过流式细胞仪，可以获得线粒体的荧光强度、大小、形态等信息。

5. 数据分析：使用相应的流式分析软件，对获取的流式数据进行分析。

可以根据荧光强度的分布，确定线粒体的纯度和数量；根据线粒体的大小和形态，评估其完整性。

需要注意的是，流式鉴定的结果可能会受到多种因素的影响，如线粒体的提纯方法、染料的选择和孵育条件等。

因此，在进行流式鉴定时，需要进行适当的对照和质量控制，以确保结果的准确性和可靠性。

以上内容仅供参考，具体的实验步骤和分析方法可能因实验需求和设备条件而有所不同。

建议在进行线粒体提纯和流式鉴定实验前，详细阅读相关的实验指南和文献，并根据实际情况进行适当的调整和优化。

利用蚕豆根尖细胞微核技术检测咖啡和茶叶对细胞生长的影响一、实验目的1、学习蚕豆根尖的微核测试技术。

2、探究咖啡对蚕豆根尖生长的影响。

3、探究茶叶对蚕豆微核的影响。

二、实验原理微核（micronuclei）试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。

无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。

用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤仍是一个直观有效可行的方法,在遗传毒理、医学、食品、药物、环境等诸多方面得到了广泛的应用。

微核计数经济,迅速,简便,不需要特殊技能,可以统计更多的细胞并实现计算机自动计数。

若采用核型稳定的细胞,确立统一的操作协议,进行实验室间的合作建立数据库,应用探针技术的微核试验很可能被纳入遗传毒理学试验。

蚕豆(Vicia faba)是一种理想的细胞遗传学研究材料。

蚕豆的染色体大，数量少(2n=12),根尖中含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察，而且蚕豆根尖细胞周期中的大部分时间对诱变剂敏感，便于遗传毒性检测实验。

咖啡问世以来受到世界各地人们的追捧,不论是老人还是年轻人。

众所周知咖啡有提神的功效，有助于防止放射线伤害，而且咖啡会起到预防肝癌的作用但是咖啡还有一些副作用，如：经常喝咖啡会使人上瘾，饮用过多的咖啡人麻痹瘫痪等。

茶叶在中国有着悠久的历史，如今也受到世界各地人们的青睐。

喝茶对人体有很大的益处，如：茶叶中的茶多酚可与重金属结合产生沉淀，使身体中的一些有害物质迅速排出体外，达到解毒的效果。

三、实验仪器、试剂、材料3.1主要实验仪器盖玻片、恒温水浴锅、恒温培养室（25℃）、冰箱、培养皿、棉花、纱布、计数器、光学显微镜、烧杯等。

3.2主要实验试剂卡纳氏固定液：三份纯酒精与一份冰醋酸混合制成、70%乙醇、0.1mol/L盐酸、改良苯酚品红染液。

3.3实验材料褐皮蚕豆种子、速冲咖啡、茶叶。

Micronuclei微核流式检测实验
微核（micronucleus, 简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。

微核往往是各种理化因子，如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的。

在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。

微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。

一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。

有实验证明，整条染色体或几条染色体也能形成微核。

这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。

当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即形成了微核。

已经证实，微核率的大小是和作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点与染色体畸变的情况一样。

体外微核实验以微核作为遗传毒性检测终点，可用于染色体断裂剂及非整倍体诱导剂的检测，在化合物遗传毒性评价的体外实验系统中占据重要地位。

2008年，欧洲替代方法严重中心ECVAM发布了体外微核实验可以替代体外染色体畸变实验用于遗传毒性检测的指导原则。

2010年，体外微核实验被经济合作与发展组织OECD指导原则TG487列入人体外遗传毒性实验的选择之一。

2011年，体外微核实验被国际协调委员会ICH列入指导原则S2R。

体外微核实验检测方法简单、易于自动化。

流式细胞术作为微核自动化检测方法之一，具有高效、准确、客观及操作简单等优势。