微核试验完整ppt课件
- 格式：ppt
- 大小：130.50 KB
- 文档页数：18
下载文档原格式
合集下载
实验五 小鼠骨髓细胞微核试验 PPT课件
上一张 下一张 开始 结束
南京晓庄学院
3
经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
上一张 下一张
2. 实验原理
微核试验是用于染色体损伤和干扰细 胞有丝分裂的化学毒物的快速检测方法。 微核是指存在于细胞中主核之外的一种颗 粒，大小相当于细胞直径的1/20～1/5， 呈圆形或杏仁状，其染色与细胞核一致， 在间期细胞中可以出现一个或多个。一般 认为微核是细胞内染色体断裂或纺锤丝受 影响而在细胞有丝分裂后期滞留在细胞核 外的遗传物质。
南京晓庄学院
3
经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
上一张 下一张
开始 结束
4. 实验步骤
求在接触化学毒物后设立不同的采样时间点。 考虑到以上两方面的原因，建议采用多次染毒 的方法。其中以4次染毒比较方便合理。即每天 染毒一次，连续4天，第5天取样。这样，取样 一次就能覆盖24～72h高峰，如果高峰延迟到 96h也不会漏掉。 4.剂量选择：受试化学毒物的最大剂量除受溶 解度大小所限外，应达到最大耐受量。一般情 况下，应设3～5个或更多剂量组，剂量覆盖的 范围要达到3个数量级以上。同时还应设立阳性 对照组和阴性对照组。阳性对照组可用环磷酰 胺(50-100mg/kg)或丝裂霉素C(10mg/kg)腹腔注 射1次或2次。阴性对照组使用等体积的溶剂。
开始 结束
南京晓庄学院
3
经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
6. 注意事项
1.良好的骨髓涂片及良好的染色，是本实 验的关键步骤。 2.熟悉并正确区分跟中骨髓细胞。
上一张 下一张 开始 结束
微核实验PPT
五：实验步骤
1、浸种催芽：选饱满蚕豆种 子，放于蒸馏水中浸泡24小 时，此间换水两次。待种子 吸胀后，转入铺有脱脂棉的 培养皿中培养，每天换水一
次培养三天，初生根长1~2
厘米待用。
2、处理根尖：取1.25克香烟
丝于烧杯中加入250毫升 蒸馏水加热热煮沸
6、染色：截下1-2mm长的根尖，滴加石炭酸品红染液， 染色10min，加盖玻片，压片，镜检观察。
★注意事项： ★培养蚕豆时需勤换水 ★处理蚕豆时要将根部浸没于处理 液中 ★固定液要现配现用
六，实验成果
对照组
实验组
有丝分裂前期
有丝分裂中期
有丝分裂后期
有丝分裂末期
分裂后的细胞
七，结论分析
MCN‰=18‰左右，浓度太大，导致根尖不生长，在此忽略此结果
微核出现与烟汁浓度变化图
120 100
MCN‰
80 60 40 20 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
1表示对照组蒸馏水 2表示烟汁：蒸馏水=1：5 3表示烟汁：蒸馏水=1：1
经实验观察： ☆对照组未出现微核。 MCN‰=7‰左右
☆烟水：蒸馏水=1：5出现的微核较少。MCN‰=60‰左右，污染指标
（PI）=8.57 ☆烟水：蒸馏水=1：1的处理液微核出现的最明显。MCN‰=100‰左右， 污染指标（PI）=14.29 ☆未稀释的烟水和烟水：蒸馏水：茶水=1：1：1的根尖长势不好。
冷却后过滤待用
• 取6只培养皿，铺上 脱脂棉，将检测液分 别加入培养皿中，并 且编号，另取一组加 蒸馏水的培养皿做对 照组，分别选取4枚 蚕豆放于脱脂棉上， 培养24小时
培养皿编号：
1：未稀释的烟汁
2：烟汁：蒸馏水=1：1 3：烟汁：蒸馏水=1：3 4：烟汁：蒸馏水=1：5 5: 烟汁：茶水：蒸馏水 =1：1：1 6：蒸馏水
2实验二 诱变剂的微核测试PPT课件
It'S An Honor To Walk With You All The Way
演讲人：XXXXXX
时 间：XX年XX月XX日
15
《遗 传 学》校 级 精 品 课 程 4
三、实验材料
大蒜或蚕豆
四、实验仪器设备及药品 显微镜、恒温培养箱、恒温水浴锅、镊 子、载玻片及盖玻片等。 盐酸、甲醇、石炭酸品红、硫酸铜、重 铬酸钾。
《遗 传 学》校 级 精 品 课 程 5
五、实验步骤
1、幼根的培养 （1）大蒜：提前 3—5d进行培养，将大蒜瓣
五、实验步骤
2、处理根尖：阳性检测采用0.1g/L硫酸铜（大 蒜）、0.5g/L重铬酸钾（蚕豆），对照用自来 水处理，处理时间24h，处理液浸没根尖。
3、恢复培养：处理后的根尖用自来水浸洗3次， 每次2-3min，洗净后在水中恢复培养24h。
4、固定：切取1cm左右的根尖，用甲醛：冰醋酸 （3：1）固定液固定24h后弃去固定液，移入 70％酒精中，4℃冰箱保存。
1、微核形成与识别
《遗 传 学》校 级 精 品 课 程 10
1、微核形成识别
微核
微核
《遗 传 学》校 级 精 品 课 程 11
1、微核形成与识别
《遗 传 学》校 级 精 品 课 程 12
六、实验结果 2、微核千分率（ MCN‰ ）
每一处理观察3个根尖，每个根尖计数 100个-300细胞，统计其中含的细胞数， 计算平均数，即为该处理的微核千分率。
剥去外边膜质枯皮，下端可见许多微微凸起 的根原体，将蒜瓣架在烧杯（大小与蒜瓣适 宜）口上，杯中盛满清水，使蒜瓣的下部浸 入水中，置培养箱中，注意每天换水，经 3—5d后，即可长出1-2cm的嫩根。 （2）蚕豆：浸种24h，期间换水2次，25℃ 催芽，36-48h生根1-2cm。
演讲人：XXXXXX
时 间：XX年XX月XX日
15
《遗 传 学》校 级 精 品 课 程 4
三、实验材料
大蒜或蚕豆
四、实验仪器设备及药品 显微镜、恒温培养箱、恒温水浴锅、镊 子、载玻片及盖玻片等。 盐酸、甲醇、石炭酸品红、硫酸铜、重 铬酸钾。
《遗 传 学》校 级 精 品 课 程 5
五、实验步骤
1、幼根的培养 （1）大蒜：提前 3—5d进行培养，将大蒜瓣
五、实验步骤
2、处理根尖：阳性检测采用0.1g/L硫酸铜（大 蒜）、0.5g/L重铬酸钾（蚕豆），对照用自来 水处理，处理时间24h，处理液浸没根尖。
3、恢复培养：处理后的根尖用自来水浸洗3次， 每次2-3min，洗净后在水中恢复培养24h。
4、固定：切取1cm左右的根尖，用甲醛：冰醋酸 （3：1）固定液固定24h后弃去固定液，移入 70％酒精中，4℃冰箱保存。
1、微核形成与识别
《遗 传 学》校 级 精 品 课 程 10
1、微核形成识别
微核
微核
《遗 传 学》校 级 精 品 课 程 11
1、微核形成与识别
《遗 传 学》校 级 精 品 课 程 12
六、实验结果 2、微核千分率（ MCN‰ ）
每一处理观察3个根尖，每个根尖计数 100个-300细胞，统计其中含的细胞数， 计算平均数，即为该处理的微核千分率。
剥去外边膜质枯皮，下端可见许多微微凸起 的根原体，将蒜瓣架在烧杯（大小与蒜瓣适 宜）口上，杯中盛满清水，使蒜瓣的下部浸 入水中，置培养箱中，注意每天换水，经 3—5d后，即可长出1-2cm的嫩根。 （2）蚕豆：浸种24h，期间换水2次，25℃ 催芽，36-48h生根1-2cm。
中山毒理课件微核试验和染色体畸变
03
此外，未来还可以进一步研究化学物 质的联合作用和代谢产物对生物体的 影响。许多化学物质在体内会相互作 用或代谢产生新的化合物，这些化合 物可能具有不同于母体的毒性作用。 因此，需要发展更全面的毒理学研究 方法，以评估化学物质对生物体的综 合影响。
THANKS
感谢观看
微核试验和染色体畸变的研究展望
01
虽然微核试验和染色体畸变是有效的 遗传毒性检测方法，但它们也存在一 些局限性，例如无法检测出非遗传毒 性物质对生物体的影响。因此，需要 进一步发展更全面的毒理学检测方法 。
02
随着基因组学和分子生物学技术的不 断发展，未来可以利用更高级的技术 手段来研究化学物质对生物体的影响 。例如，可以利用基因编辑技术构建 特定基因型的细胞或动物模型，以更 精确地研究化学物质对基因表达和表 型的影响。
案例介绍
简要介绍案例背景、中毒人员情况、 中毒原因及症状等基本信息。
中山毒理课件案例的微核试验结果分析
微核试验原理
介绍微核试验的基本原理，如何 通过微核计数评估细胞损伤程度
。
试验结果
详细分析每个案例的微核试验结果 ，包括微核计数、细胞存活率等数 据。
结果解读
根据试验结果，解读中毒物质对细 胞的损害程度，以及可能的中毒机 制。
染色体畸变可能导致细胞中微核的数量 增加或减少，从而影响微核试验的结果
。
染色体畸变越严重，微核的数量可能越 多，因此微核试验结果可能呈现阳性。
染色体畸变也可能导致细胞分裂异常， 从而影响微核的形态和数量，因此需要
结合其他检测方法进行综合评估。
微核试验与染色体畸变的相互印证
微核试验和染色体畸变检测可以相互印证，以提高检测结果的准确性和 可靠性。
实验八 植物微核检测技术23页PPT文档
现在一般都采用细菌、离体培养的哺乳动物和 人类体细胞、植物为测试对象，主要的方法有： ①以基因突变为指标的检测法 ②以染色体为指标的方法
以染色体为指标的“三致效应”的检测方 法：
1. 经典的染色体畸变分析方法； 2. 姐妹染色单体互换测试法； 3. 微核测试法。
（1）断片 （2）双着丝点 （3）环
微核率与用药剂量或辐射积累效应呈正相关。
实验材料：
毛葱（Allium fistulosum）根尖。
实验器材：
显微镜，冰箱，水浴锅，分析天平，剪刀，镊子， 刀片，载玻片，盖玻片，滤纸，量筒，滴瓶，酒精 灯，指管等。
试剂
1. 环磷酰胺（CP） 2. 卡诺氏（Carnoy‘s）固定液 3. 希夫（Schiff‘s）试剂 4. 45%醋酸 5. 1 mol/L盐酸
微核检测记录表
细胞数
微核数
微核千分率
作业和思考题：
1. 叙述微核形成原理。 2. 统计微核细胞数，计算微核细胞千分率。 3. 画出具有微核的细胞示意图。
注意事项：
1. 处在分裂过程中的细胞对不同理化因素的 敏感时期和敏感剂量是不同的，需要进行 试验摸索。
2. 观察与识别微核要准确，统计细胞数至少 1000个/3张片。
4. 镜检及观察，检查400个细胞/片。
结果及分析：
1. 细胞学观察：
在细胞分裂间期，微核 呈圆形或椭圆形，游离 于主核之外，大小在主 核的1/3以下，折光率 及细胞化学反应性质和 主核一样。
毛葱根尖微核
2. 微核率计算
微核率（MCN%o）=
微核数 细胞数
×1000%o
片号 第1片 第2片 第3片 总计
环境因素造成的遗传毒理效应： “三致效应”
以染色体为指标的“三致效应”的检测方 法：
1. 经典的染色体畸变分析方法； 2. 姐妹染色单体互换测试法； 3. 微核测试法。
（1）断片 （2）双着丝点 （3）环
微核率与用药剂量或辐射积累效应呈正相关。
实验材料：
毛葱（Allium fistulosum）根尖。
实验器材：
显微镜，冰箱，水浴锅，分析天平，剪刀，镊子， 刀片，载玻片，盖玻片，滤纸，量筒，滴瓶，酒精 灯，指管等。
试剂
1. 环磷酰胺（CP） 2. 卡诺氏（Carnoy‘s）固定液 3. 希夫（Schiff‘s）试剂 4. 45%醋酸 5. 1 mol/L盐酸
微核检测记录表
细胞数
微核数
微核千分率
作业和思考题：
1. 叙述微核形成原理。 2. 统计微核细胞数，计算微核细胞千分率。 3. 画出具有微核的细胞示意图。
注意事项：
1. 处在分裂过程中的细胞对不同理化因素的 敏感时期和敏感剂量是不同的，需要进行 试验摸索。
2. 观察与识别微核要准确，统计细胞数至少 1000个/3张片。
4. 镜检及观察，检查400个细胞/片。
结果及分析：
1. 细胞学观察：
在细胞分裂间期，微核 呈圆形或椭圆形，游离 于主核之外，大小在主 核的1/3以下，折光率 及细胞化学反应性质和 主核一样。
毛葱根尖微核
2. 微核率计算
微核率（MCN%o）=
微核数 细胞数
×1000%o
片号 第1片 第2片 第3片 总计
环境因素造成的遗传毒理效应： “三致效应”
骨髓细胞微核实验ppt课件
油镜下观察计数
多染红细胞（PCE）呈灰蓝色，正染红细胞（NCE） 呈橘黄色。典型的微核多为单个、圆形、边缘光滑整 齐，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色 。
计数1000个PCE中含微核的PCE数，并且计数200个 细胞中PCE与NCE的比值。
微核率（‰）=
含微核PCE细胞 数PCE细胞总数
×1000
本NC试E验的中核只❖糖计体数已副P消C失作E中，微被用核染，成明微淡核桔显率红以色，千。分有率表恶示.心、食欲减退、脱发、白细胞减少、 中毒性膀胱炎、肝功能损伤等。 正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.
NCE的核糖体已消失，被染成淡桔红色。 是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有丝分裂时滞留在细胞核外的遗传物质。 本试验中只计数PCE中微核，微核率以千分率表示. 示小鼠骨髓嗜多染红细胞中多个微核
实验原理
机理：
1 有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝点的染色体环 和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞质中 2 断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向移动，从 而遗留在细胞质中
结论：
微核试验能检测化学或其他物质因素诱导产生的染色体 完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点
有核细胞中 微核难与正常核分叶
Logo
实验结果
组别 阴性对照组
模型组
动物数 受检PCE总数 含微核PCE数 微核率
结果分析与评价
❖ 本试验中只计数PCE中微核，微核率以千分率表 示.
❖ PCE/NCE为评价细胞毒性的指标：
正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.6～
1.2)；
如PCE/NCE＜0.1，则表示PCE形成受到严重
抑制；
如PCE/NCE＜0.05，则表示受试化学毒物的
多染红细胞（PCE）呈灰蓝色，正染红细胞（NCE） 呈橘黄色。典型的微核多为单个、圆形、边缘光滑整 齐，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色 。
计数1000个PCE中含微核的PCE数，并且计数200个 细胞中PCE与NCE的比值。
微核率（‰）=
含微核PCE细胞 数PCE细胞总数
×1000
本NC试E验的中核只❖糖计体数已副P消C失作E中，微被用核染，成明微淡核桔显率红以色，千。分有率表恶示.心、食欲减退、脱发、白细胞减少、 中毒性膀胱炎、肝功能损伤等。 正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.
NCE的核糖体已消失，被染成淡桔红色。 是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有丝分裂时滞留在细胞核外的遗传物质。 本试验中只计数PCE中微核，微核率以千分率表示. 示小鼠骨髓嗜多染红细胞中多个微核
实验原理
机理：
1 有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝点的染色体环 和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞质中 2 断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向移动，从 而遗留在细胞质中
结论：
微核试验能检测化学或其他物质因素诱导产生的染色体 完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点
有核细胞中 微核难与正常核分叶
Logo
实验结果
组别 阴性对照组
模型组
动物数 受检PCE总数 含微核PCE数 微核率
结果分析与评价
❖ 本试验中只计数PCE中微核，微核率以千分率表 示.
❖ PCE/NCE为评价细胞毒性的指标：
正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.6～
1.2)；
如PCE/NCE＜0.1，则表示PCE形成受到严重
抑制；
如PCE/NCE＜0.05，则表示受试化学毒物的
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
精选ppt
5
原理：
1 有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝点 的染色体环和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞 质中
2 断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向 移动，从而遗留在细胞质中
精选ppt
6
结论：
微核试验能检测化学或其他物质因素诱导产生 的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗 传学终点
精选细胞中 难以与正常核的分叶及核突出物区分，故常计数 PCE细胞中的微核，因为在此阶段，主核排出，易 于观察微核，这些细胞保持其嗜碱性约24小时， 然后成为正染红细胞（NCE）,并进入外周血。
注：在主核排除时，微核仍保留在细胞中
精选ppt
8
操作步骤：
一 染毒：
小鼠骨髓细胞微核试验
受试物: 环磷酰胺 受试动物: 小鼠
精选ppt
1
实验目的
学习和掌握小鼠骨髓细胞微核试验的原理和方法
精选ppt
2
细胞分裂分为四个期：
1、G1期（DNA合成前期）：细胞生长，为DNA复制做 准备。
2、S期（DNA合成期）：体细胞的DNA含量由2C增加 到4C
3、G2期(DNA合成后期)：该期主要为M期作准备，包 括复制因子的失活和有丝分裂促进因子的分化,有 关细胞骨架系统重新组装的蛋白质合成
２ 计数：1000个PCE中含微核的PCE数，并计算 200个细胞中PCE/NCE的比值
精选ppt
11
结果与分析：
1 结果：试验只计数PCE中的微核，微核率 以千分率表示。每组的雌雄动物分开计数 微核PCE均值。
2 分析：正常的PCE/NCE比值为1（0.6-1.2）， 如果＜0.1，则表示PCE形成受到严重抑制； 如果＜0.05，则表示受试物剂量过大，结果 不可靠。
4、M期(有丝分裂期)：前期，早中期，中期， 后 期（微核形成期），末期
精选ppt
3
图13-1 细胞周期可划分为四个阶段
精选ppt
4
微核（micronucleus）
是染色体或染色单体的无着丝点片断或纺锤体 受损而丢失的整个染色体，于细胞分裂后期留在 细胞质中，末期后，单独形成一个或几个规则的 次核，包含在子细胞的胞质内，比主核小，故叫 微核。
3、滴到玻片上的小牛血清不要太多，涂时 要涂匀，以便推片
4、染色前可以先看一下整体涂片情况，细 胞分散度是否良好
5、关键步骤是制作良好的骨髓涂片以及优 良的染色
精选ppt
16
流程图
处死小鼠，取胸骨
推片
固定（甲醇固定15分钟） 染色（吉姆萨染色15分钟）
观察并记数
精选ppt
17
感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络， 如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！
3 染色：用新鲜配制的Giemsa应用液（Giemsa储
备液一份加pH6.8的磷酸盐缓冲液9份）染色10－
15分钟，细流水冲掉玻片染色液，晾干
精选ppt
10
四 观察和计数：
１ 观察：先用低倍镜观察，选择分布均匀的区域，
再在油镜下观察计数。PCE细胞呈灰蓝色，正染红 细胞（NCE）桔黄色。细胞中的微核大半呈圆形， 边缘光滑，嗜色性与核质一致，一个细胞内可以 出现一个或多个微核。
染毒途径：腹腔注射环磷酰胺，染毒二次， 0、24小时各染毒一次，6h后取样
染毒剂量：50mg/kg
二 处死：
颈椎脱臼法处死小鼠
精选ppt
9
三：骨髓液的制备和涂片
1 处理：方法：取胸骨，去掉血污和肌肉，剪去 每节骨骺，用弯止血钳将骨髓挤于预先滴有小牛 血清的清洁载玻片上，混合均匀后推片
2 固定：将推好凉干的骨髓片放进染色缸，甲醇 固定15分钟，取出晾干
精选ppt
12
图 1 ：正常嗜多染红细胞 PCE （× 400 ） 图 2 带微核嗜多染红细胞 MNPCE （× 400）
精选ppt
13
微核 嗜多染细胞
精选ppt
14
精选ppt
15
注意事项：
1、剪胸骨时通过剪断两边的肋骨来把整块 胸骨取下来，以防不小心把胸骨剪断
2、挤出骨髓处的肌肉要剔除干净