必修一 蛋白质提取与分离

蛋白质提取是一项基础实验，通常用于从组织或细胞中提取纯度较高的蛋白质样品，以便进行各种蛋白质研究。

常规的蛋白质提取步骤包括以下几个主要步骤：
1. 细胞或组织的裂解：将待提取的样品裂解以释放出蛋白质。

裂解方法取决于被裂解的细胞类型，可使用机械法、化学法、超声波或高压等方法进行裂解。

2. 蛋白质的分离：将蛋白质与非蛋白质组分进行分离，常用的方法有沉淀、过滤、离心和柱层析等。

3. 蛋白质的纯化：通过进一步的分离和纯化来获得高纯度的蛋白质。

这些步骤通常需要进行多次，每次都使用不同的方法来分离和纯化蛋白质。

提蛋白质的原理是基于蛋白质的化学和物理特性进行分离和纯化。

蛋白质分子量大小、电荷、亲水性等特性不同，容易与不同化学试剂、柱层析介质或生物酶相互作用。

通过调节这些条件和步骤，就可以使不同的蛋白质与其它组分分离出来，并得到纯度较高的蛋白质样品。

虽然蛋白质提取步骤较多，但因为各种蛋白质的特性不同，所以实验时需要根据需要选择不同的提取和分离方法以获得更理想的效果。

蛋白质的提取和分离【教学目标】1．知道蛋白质分离和提取技术的基本原理。

2．能进行血清蛋白的提取和分离。

3．尝试提取和检测牛奶中的酪蛋白。

4．尝试卵清蛋白的分离。

【教学重难点】1．知道蛋白质分离和提取技术的基本原理。

2．能进行血清蛋白的提取和分离。

【教学过程】一、蛋白质分离提纯技术1．将生物体内的蛋白质提取出来并加以分离，就可以得到高纯度的、甚至是单一种类的蛋白质。

2．蛋白质分离提纯技术包括离心技术、层析技术和电泳技术等。

其中，电泳技术最为快捷灵敏、简便易行。

二、电泳技术及分离蛋白质的原理1．电泳现象：带电粒子在电场中可以向与其自身所带电荷相反的电极方向移动。

电泳常用的支持物是聚丙烯酰胺凝胶，由此而来的技术称为聚丙烯酰胺凝胶电泳。

2．电泳技术分离蛋白质的原理：（1）蛋白质含有游离的氨基和羧基，是两性电解质，在一定pH条件下带有电荷。

（2）蛋白质所带的电荷数越多，移动得越快；电荷数相同时，分子量越小，则移动越快。

（3）不同蛋白质的混合溶液，在经过同一个电场电泳后，会在凝胶上形成不同的带纹。

每一种带纹可能就是一种蛋白质。

将这些带纹一个一个地剪下来，分别予以洗脱，然后对洗脱液中的蛋白质做进一步的分离。

如果待测洗脱液不能再分离，则这个带纹中很可能含有一种单纯蛋白质。

如果待测洗脱液还能再分离，则这个带纹中含有多种蛋白质，需要作进一步分离，直至提纯。

三、血清蛋白的提取和分离1．新鲜血液在体外凝固后，会析出清亮的淡黄色液体——血清。

血清中含有丙种球蛋白、凝集素等多种蛋白质。

2．过程：（1）点样：取新制血清与蔗糖溶液及溴酚蓝指示剂等体积混匀后，小心加到电泳样品槽的胶面上。

（2）电泳。

（3）染色：取出凝胶，放入质量分数为0.05%的考马斯亮蓝R250染色液中。

染色与固定同时进行，使染色液没过胶板，染色30min。

（4）脱色：用体积分数为7%的醋酸溶液浸泡漂洗数次，每隔1~2h更换脱色液，直至底色脱净，背景清晰。

（5）制干胶板：将已脱色的凝胶板放在保存液中浸泡3~4h，然后放在两层透气玻璃纸中间，自然干燥即可获得血清蛋白的电泳谱带。

第一节蛋白质的提取和分离一、蛋白质分离提纯技术常用的蛋白质分离提纯技术包括离心技术、 层析技术和电泳技术等。

其中电泳技术最为快捷灵敏、简便易行。

来…-、电泳技术分离蛋白质的原理1 .蛋白质中含有游离的氨基和羧基，是两性电解质，在一定 pH 条件下带有电荷。

2. 蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相反的电极方向移动。

3. 蛋白质所带的电荷数越多，移动得越快；电荷数相同时，分子量越小，移动越快。

三、结果分析不同蛋白质的混合溶液经过同一电场电泳后， 能就是一种蛋白质。

四、“血清蛋白的提取和分离”活动程序 1. 点样：取新制血清 5微升、质量浓度为 的溴酚蓝指示剂等体积混匀后，用微量加样器吸取2. 电泳。

0.05%的考马斯亮蓝 R 250染色液对凝胶进行染色。

5.制干胶板：将已脱色的凝胶板放在保存液中浸泡 3 h 〜4 h 后，放在两层透气的玻璃纸中间自然干燥。

预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中问题1问题2问题3问题4自主学习・基础知识会在凝胶上形成不同的带纹， 每种带纹可0.4克/毫升的蔗糖溶液和质量分数为0.1%5卩L 样品加到电泳样品槽的胶面上。

3.染色：用质量分数为4.脱色：用体积分数为7%勺醋酸溶液对凝胶板进行浸泡漂洗，至底色脱净。

费步挥究吸收内化阴刃合作探究•重难疑点一、蛋白质分离提纯的方法1 •蛋白质分离的基本过程破碎细胞抽提(粗制品) 纯化蛋白质2.破碎细胞的方法在分离与纯化蛋白质之前，必须采用适当的方法使蛋白质呈溶解状态释放出来：通常先将生物组织进行机械破碎，再根据细胞的特点，选择不同的破碎细胞方法(常用的有研磨法、超声波法、酶解法)。

3 .抽提细胞破碎后，各种蛋白质被释放出来，再根据蛋白质的不同性质，选择不同的溶剂进行抽提。

4.纯化(1)原理：纯化主要是指根据蛋白质之间以及蛋白质与其他物质之间在分子大小、溶解度大小、所带电荷的多少、吸附性质等方面存在的差异进行的。

1、蛋白质提取与分离的原理是什么？答：依据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力，等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。

2、凝胶色谱法：也称做分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。

2、凝胶：（1）化学本质：大多数是由多糖类化合物构成的，如葡聚糖或琼脂糖。

（2）特性：实际上是一些微小的多孔球体，在小球体内部有许多贯穿的通道。

3、凝胶色谱法原理：当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。

相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离4、缓冲溶液通常由1~2种缓冲剂溶解于水中配制而成。

在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变。

如H 2CO3/NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO45、调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。

6、电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。

7、电泳的原理：①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电。

②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。

③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。

3、电泳类型：（1）琼脂糖凝胶电泳（2）聚丙烯酰胺凝胶电泳迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小、形状。

SDS—聚丙稀酰胺凝胶电泳。

迁移率完全取决于分子的大小。

应用：测定蛋白质分子量、进行蛋白质纯度鉴定。

4、琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳是两种常用的电泳方法，在测定蛋白质分子量时通常使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。

5、原理：为了消除净电荷对迁移率的影响，可以在凝胶中加入SDS。