--薄层色谱基础知识及斑点异常[原创]
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薄层色谱法薄层色谱法是将供试品溶液点于薄层板上,在展开容器内用展开剂展开,使供试品所含成分分离,所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比,并可用薄层扫描仪进行扫描,用于鉴别、检查或含量测定。
注意事项⏹样品的预处理。
⏹样品及对照药材和供试品及对照药材溶液制备应量化操作,目的是使样品的色谱与对照药材的色谱更有可比性。
⏹定量点样(除了鉴别有无,还可粗略进行量化评价)⏹在有条件的情况下,设化学对照品的同时设对照药材。
⏹注意环境条件对样品色谱行为的影响。
一、薄层板普通薄层板:硅胶G、H,硅胶GF254,聚酰胺薄膜等市售薄层板(商品预制板)高效薄层板自制薄层板:铺板用的匀浆不宜过稠或过稀:过稠,板容易出现拖动或停顿造成的层纹;过稀,水蒸发后,板表面较粗糙。
匀浆配比一般是硅胶G:水=1:2~3,硅胶G:羧甲基纤维素钠:水=1:2。
研磨匀浆的时间,根据经验来定,与空气湿度有关,一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断,越稠越难下滴。
匀浆的稀稠除影响板的平滑外,也影响板涂层的厚度,进一步影响上样量。
涂层薄,点样易过载;涂层厚,显色不那么明显。
目前实验室使用的薄层板规格:10cm×10cm,10cm×20cm或20cm×20cm注意事项1、薄层板临用前一般应在110℃活化30分钟后,置干燥器中备用。
最好随用随制,放入干燥器中保存仅作为使用前的一种过渡。
2、聚酰胺薄膜不需活化。
3、如在存放期间被空气中杂质污染,使用前可用三氯甲烷、甲醇或二者的混合溶剂在展开缸中上行展开预洗,110℃活化30分钟后,置干燥器中备用。
4、使用前检查其均匀度,在反射光及透射光下检视,表面应均匀、平整、光滑、无麻点、无气泡、无破损及污染。
二、点样1、点样器:专用毛细管、半自动或自动点样器械、薄层用微升注射器等。
2、点样:要求在洁净干燥的环境下点样。
尽量用小的点样管。
如果有足够的耐性,最好只用1微升的点样管。
这样,点的斑点较小,展开的色谱图分离度好,颜色分明。
薄层色谱斑点消失的原因薄层色谱(TLC)是一种广泛应用的色谱技术,用于分离和鉴定化合物。
在TLC分析中,样品溶液被施加在薄层色谱板的一端,然后在溶剂的帮助下,通过毛细作用被吸移的过程中产生不同的斑点,代表着不同的化合物。
然而,有时候在TLC进行分析的过程中,我们可能会遇到斑点消失的情况,即从初始样品施加到色谱板上的斑点消失了。
这可能是由于以下几个原因:1.过度吸收:某些化合物可能会在色谱板上过度吸收,导致它们的斑点消失。
这可能是由于溶剂的选择不当,或者溶剂的浓度太高,超出了化合物的溶解度。
为了避免这种情况,可以尝试不同的溶剂系统,并调整溶剂的浓度。
2.迁移速度过快:有时候化合物的迁移速度可能过快,导致斑点在较低位置合并在一起,或者直接超过了色谱板的上端。
这可能是由于施加的样品量过多,或者溶剂浓度太高,推动力过大。
为了解决这个问题,可以减少样品的施加量,或者使用更低的溶剂浓度。
3.溶剂选择不当:溶剂的选择是TLC分析中非常重要的因素。
某些溶剂可能与色谱板的吸附剂作用强烈,导致化合物无法适当地迁移。
此外,某些溶剂还可能与化合物反应,导致斑点的消失。
因此,正确选择和优化溶剂系统是避免斑点消失的重要步骤。
4.斑点可见性问题:有时候斑点消失是由于斑点不可见引起的。
这可能是由于化合物在色谱板上的颜色很浅或不显眼,或者化合物本身就不是在可见光范围内可见的。
为了增加斑点的可见性,可以使用染色剂进行显色,然后使用紫外灯或其他检测方法进行观察和分析。
5.化学反应:有时候斑点消失是由于化学反应引起的。
某些化合物可能会在TLC分析过程中发生化学反应,导致它们转化成其他物质,或者与色谱板或其他化合物发生反应,从而使斑点消失。
为了避免这种情况,可以选择合适的色谱条件和分析方法。
总之,薄层色谱斑点消失的原因可能是由于过度吸收、迁移速度过快、溶剂选择不当、斑点可见性问题以及化学反应等多种因素所致。
为了解决这些问题,我们需要仔细优化分析条件,充分了解样品的物理和化学性质,并进行适当的控制和调整。
薄层色谱过程中出现斑点异常的原因及克服方法1. 斑点异常的原因:
(1)样品量过多、含杂质、挥发性差或不稳定,结果受到干扰产生错误;
(2)试剂的纯度不够高,或色谱材料存在损伤等引起的污染;
(3)分离结果与溶剂不匹配或溶剂挥发不均,导致斑点分裂或扩散;
(4)操作者的技术不熟练或条件不恰当,导致不同程度的误差。
2. 克服方法:
(1)减少样品量,使其达到适宜的含量范围;
(2)切换试剂,提高纯度,处理杂质或污染物;
(3)调整溶剂,使其与分析物相互匹配,或者调整溶剂的挥发性使得斑点均匀分布;
(4)加强技术培训,加强操作技能的掌握;或者升级设备或者设施,提高分离技术等;
(5)对于无法根治的问题,可以通过对每一个斑点的分析,明确有目的地进行重复试验和调整实验方案。