常见细菌理化性质鉴定试验

常见细菌理化性质鉴定试验淀粉水解：淀粉在酸的催化作用下，能发生水解；淀粉的水解过程：先生成分子量较小的糊精(淀粉不完全水解的产物)，糊精继续水解生成麦芽糖，最终水解产物是葡萄糖。

培养基：将细菌接种在平板上，置37度温箱中培养24h，加革兰氏碘液于菌落上，观察颜色变化，呈蓝色者为阴性，无蓝色为阳性。

甲基红试验：是根据肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红这个原理进行的测验。

产氨实验（乙酰胺肉汤）原理：铜绿假单胞菌产生一种脱酰胺酶，可使乙酰胺经脱酰胺作用释放氨，滴加纳氏试剂（碘化汞钾），氨在碱性条件下与碘化汞钾作用，生成红色络合物。

操作：将纯培养物接种到装有乙酰胺肉汤的试管中，在36℃±1℃下培养20h～24h。

然后向每支试管培养物加入1～2滴钠氏试剂，检查各试管的产氨情况，如表现出从深黄色到砖红色的颜色变化，则为阳性结果，否则为阴性。

吲哚试验：是指有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲哚(靛基质)，经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色，则为吲哚试验阳性。

过氧化氢酶试验（又名：接触酶试验）一、原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。

二、试剂3%过氧化氢溶液：临用时配制。

三、试验方法挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加3%过氧化氢溶液2mL，观察结果。

四、结果于半分钟内发生气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性。

革兰氏阳性球菌中，葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，而链球菌属为阴性，故此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。

脲酶试验原理：存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。

它是一种酰胺酶、能酶促有机物质分子中酶键的水解。

脲酶的作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和碳酸。

腐烂苹果中的细菌分离以及理化性质的检测腐烂苹果中的细菌分离以及理化性质的检测摘要：从腐烂苹果中取样培养细菌，用平板直线划线法分离纯化细菌，经扩大培养后进行镜检和革兰氏染色实验，最后对分离出的纯种细菌进行理化性质检测：细菌水解淀粉实验以及探究pH对细菌生长的影响实验。

实验结果显示，腐烂苹果中的细菌形状小而圆，是革兰氏阳性菌；水解淀粉实验说明该细菌中没有水解淀粉的酶；分光光度法所得的数据显示该细菌的生长环境偏中碱性。

关键词：腐烂苹果、细菌、平板直线划线法、革兰氏染色、水解淀粉、分光光度法Study the Bacteria of Rotten Apples in the Separation andPhysical & Chemical PropertiesLin jia-wan(College of life science,South China Normal University,Guangzhou 510631,China )Abstract: Sample training bacteria from the rotten apples, and purify bacteria with flat linear crossed method; After expanding the bacteria, they are tested by Microscopic examination and Gram staining, and finally, test physical and chemical properties of the isolated pure bacteria withBacteria hydrolysis starch experiment and exploring the pH of the growth of the bacteria influence experiment.The experimental results show that the bacteria in rotten apples are small, round in shape,and are gram-positive;The experiment of the bacteria hydrolysis starch indicated that those bacteria don’t have enzyme that can hydrolyze amylum;Spectrophotometry income datas showed that those bacteria like to grow in the environment of alkaline slant.Key words:rotten apples; bacteria;Flat linear crossed method; Gram faerbung; hydrolyze amylum; Spectrophotometry引言：现今，市场的水果摊位仍会出售腐烂的水果，而有些人不清楚腐烂水果会滋生很多细菌，即使把腐烂的部分挖去，细菌也会蔓延到其它部分。

细菌鉴定中常用的生理生化反应录入时间:2009-8-13 15:12:12 来源：中国生命科技论坛1、实验原理（1）细菌生化试验各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。

用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。

（2）糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。

其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。

酸的产生可利用指示剂来判定。

在配制培养基时预先加入溟甲酚紫［P HS . 2 （黄色）一6 . 8 （紫色）] ，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。

气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。

（3）甲基红（Methylred ）试验（该试验简称MR 试验）很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4 . 2 以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。

因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 （红色）一pH6 . 2 （黄色）。

若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH 仍在6 . 2 以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。

（4）大分子物质代谢实验．靛基质（口引睬）试验某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。

硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。

为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。

明胶液化实验某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。

淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做）细菌对大分子的淀粉不能直接利用，须靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解为葡萄糖（或麦芽糖），再被细菌吸收利用，细菌水解淀粉的过程可通过底物的变化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。

细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告一、引言在微生物学中，鉴定细菌的方法有很多种，其中生理生化反应实验是最常用的一种方法之一。

生理生化反应实验可以通过观察细菌对不同物质的代谢情况来确定其种类和特性。

本报告将介绍细菌鉴定中常用的生理生化反应实验。

二、目的本报告旨在介绍常用的生理生化反应实验，包括试剂、操作步骤、结果解释等内容，以帮助读者更好地了解和掌握这些实验。

三、材料与方法1. 大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）培养基；2. 硝酸盐还原试剂；3. 糖类试剂：葡萄糖、果糖、半乳糖；4. 氨基酸试剂：天冬氨酸、赖氨酸；5. 酶试剂：淀粉酶、蛋白酶；6. 无水硫酸铜溶液。

四、实验步骤及结果解释1. 硝酸盐还原试验步骤：（1）取一支细菌液体培养物，加入硝酸盐还原试剂；（2）观察液体颜色变化。

结果解释：若液体变为红色，则表示细菌能够还原硝酸盐为亚硝酸盐，是亚硝化菌。

若无颜色变化，则表示细菌不能还原硝酸盐。

2. 糖类代谢试验步骤：（1）取三个试管，分别加入葡萄糖、果糖、半乳糖；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。

结果解释：若在葡萄糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用葡萄糖进行发酵代谢；若在果糖或半乳糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用果糖或半乳糖进行发酵代谢。

3. 氨基酸代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入天冬氨酸和赖氨酸；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。

结果解释：若在天冬氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用天冬氨酸进行代谢；若在赖氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用赖氨酸进行代谢。

4. 酶代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入淀粉和蛋白质；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内颜色变化情况。

结果解释：若在淀粉试管内出现了透明带，则表示该细菌能够分泌淀粉酶；若在蛋白质试管内出现了变色，则表示该细菌能够分泌蛋白酶。

竭诚为您提供优质文档/双击可除细菌的生理生化鉴定篇一：细菌生理生化鉴定实验九细菌的生理生化试验[日期：20XX-5-30]来源：作者：孔庆学[字体：大中小]实验九细菌的生理生化试验1目的1.1了解细菌鉴定中常用的生理生化试验反应原理1.2掌握测定细菌生理生化反应的技术和方法2原理各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。

由于细菌特有的单细胞原核生物的特性，这种差异就表现的更加明显。

不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，所以其发酵的类型和产物也不相同，也就是说，不同微生物具有不同的酶系统。

即使在分子生物学技术和手段不断发展的今天，细菌的生理生化反应在菌株的分类鉴定中仍有很大作用。

3材料3.1菌种大肠埃希氏菌（escherichiacoli）、产气肠杆菌（enterobacteraerogenes）、普通变形杆菌（proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（bacillussubtilis）的斜面菌种3.2培养基葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）3.3试剂40％naoh溶液、肌酸、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲基酚紫指示剂。

3.4器具超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液管、杜氏小套管。

4流程糖发酵试验→V-p试验→甲基红试验→吲哚试验5步骤(一)糖类发酵试验1目的了解不同细菌分解利用糖的能力及实验原理，并掌握其操作方法．2原理可根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。

是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即b.c.p指示剂，其ph在5.2以下呈黄色，ph在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。

是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。

3材料3.2菌种大肠埃希氏菌（escherichiacoli）、产气肠杆菌（enterobacteraerogenes）、普通变形杆菌（proteus vulgaris）的斜面菌种3.３培养基葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管４流程发酵液试管→标记→接种→培养→观察→记录5步骤5.1试管标记图9-1糖发酵产气取分别装有葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管各Ａ不产气；Ｂ产气4支，每种糖发酵试管中均分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白对照。

一、实验目的1. 学习细菌分离与培养的基本操作方法。

2. 掌握细菌形态观察、生理生化反应等方法在细菌鉴定中的应用。

3. 提高实验操作技能和微生物学基础知识。

二、实验原理细菌是微生物的一种，具有独特的形态、生理生化特性。

通过观察细菌的形态、生理生化反应等特征，可以鉴定细菌的种类。

本实验主要采用以下方法进行细菌分析鉴定：1. 形态观察：通过显微镜观察细菌的形态、大小、排列等特征。

2. 生理生化反应：通过测定细菌对特定底物的代谢产物、颜色变化等，判断细菌的生理生化特性。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等标准菌株；土壤、水、食品等样品。

2. 仪器：显微镜、细菌培养箱、无菌操作台、酒精灯、接种环、培养皿、试管等。

四、实验方法与步骤1. 细菌分离与培养（1）将样品进行无菌处理，制成悬浊液。

（2）取适量悬浊液，分别接种于不同类型的培养基上，如营养琼脂培养基、伊红美蓝培养基等。

（3）将接种后的培养基放入细菌培养箱中，培养适宜时间。

2. 细菌形态观察（1）取适量培养好的细菌，制成悬浊液。

（2）在显微镜下观察细菌的形态、大小、排列等特征。

（3）记录观察结果。

3. 细菌生理生化反应（1）将培养好的细菌接种于不同类型的生理生化试剂中，如糖发酵试剂、吲哚试剂、甲基红试剂等。

（2）观察试剂颜色变化、沉淀形成等反应现象。

（3）记录观察结果。

五、实验结果与分析1. 细菌分离与培养实验结果显示，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等标准菌株在相应培养基上生长良好，形成典型的菌落。

2. 细菌形态观察显微镜下观察，金黄色葡萄球菌呈球形，单个或成对排列；大肠杆菌呈杆状，单个或成链排列；肺炎克雷伯菌呈球形，单个或成对排列。

3. 细菌生理生化反应金黄色葡萄球菌对葡萄糖发酵呈阳性，吲哚试验、甲基红试验等均呈阴性；大肠杆菌对葡萄糖发酵呈阳性，吲哚试验、甲基红试验等均呈阴性；肺炎克雷伯菌对葡萄糖发酵呈阳性，吲哚试验、甲基红试验等均呈阴性。

细菌生理生化鉴定
细菌生理生化鉴定是通过对细菌在特定生理和生化条件下的反应进行观察和分析，以确定其种类和特性的过程。

这通常包括一系列实验，涉及对细菌代谢途径、酶活性、生长条件等方面的研究。

以下是细菌生理生化鉴定的一些常见方法和实验：
1.形态学观察：
形状：观察细菌的形状，可以是球形（球菌）、杆状（杆菌）、螺旋形等。

结构：使用显微镜检查是否有胞壁、胞膜、纤毛、鞭毛等结构。

2.生理特性：
生长条件：观察细菌在不同温度、pH值和氧气条件下的生长情况。

营养需求：测试细菌对不同营养物质（碳源、氮源、矿物质等）的利用能力。

3.生化反应：
大肠杆菌的IMViC测试：Indole（吲哚）测试、Methyl Red（甲基红）测试、V oges-Proskauer（V-P）测试、Citrate（柠檬酸）测试、
4．氧化还原反应：观察细菌对不同氧化还原指示剂（如甲基红、溴亚甲蓝）的反应，推断其对氧化还原条件的适应性。

5.酶活性测试：
氧化酶：使用氧敏感指示剂观察酶的活性。

淀粉酶：利用淀粉琼脂板，观察菌落周围是否发生淀粉分解带。

蛋白酶：使用明胶板检测细菌对蛋白质的分解能力。

6.抗生素敏感性测试：确定细菌对不同抗生素的敏感性，通过纸片扩散法或肉汤稀释法进行。

7.分子生物学方法：16S rRNA测序：通过测序菌株的16S rRNA基因，进行分子水平的种类鉴定。

8.培养基选择：利用特定培养基，如MacConkey琼脂培养大肠杆菌等，根据细菌在培养基上的生长情况进行初步鉴定。

细菌鉴定及检测方法细菌是一类微生物，其病原性和耐药性等特性对人类健康和环境安全有着重要影响。

因此，准确的细菌鉴定和检测方法对于疾病诊断、食品安全、环境监测以及抗生素治疗等领域至关重要。

本文将详细介绍常用的细菌鉴定和检测方法。

一、细菌鉴定方法1.形态学鉴定：通过观察细菌的形态特征，如细胞形状、大小、颜色等，可以初步判断其属于哪一类菌。

这种方法主要适用于形态特征非常典型的细菌。

2.染色法鉴定：常用的细菌染色方法有革兰氏染色、抗酸染色等。

革兰氏染色可以根据细菌的细胞壁特性将其分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类。

抗酸染色适用于检测酸忍受性细菌，如结核分枝杆菌等。

3.生理生化特性鉴定：这是一种常用的鉴定细菌的方法，通过观察细菌对特定物质的代谢反应，例如对糖、气体等的发酵、氧要求等，可以初步确定细菌的鉴定组。

4.分子生物学鉴定：分子生物学方法可以通过提取细菌基因组DNA或RNA，利用PCR扩增、序列分析、16SrRNA测序等技术，从而精确确定细菌的鉴定种属。

分子生物学方法具有高度的特异性和敏感性，广泛应用于细菌鉴定中。

二、细菌检测方法1.培养法：这是一种常用的细菌检测方法，通过在富含营养物的培养基上培养细菌，并根据菌落形态、色素、气体产生等进行初步鉴定。

培养法可以用于检测食品、水源、空气中的细菌等。

然而，一些特殊的细菌可能无法在常规培养条件下生长，所以培养法在一些情况下可能会有限制。

2.免疫学方法：包括免疫荧光、酶联免疫吸附试验（ELISA）等技术。

这些方法利用细菌表面特异的抗原与特定抗体的结合反应来检测细菌，并通过检测结果的颜色或荧光信号来判断细菌是否存在。

免疫学方法具有高度的特异性和灵敏性，适用于检测特定细菌的存在或细菌相关的抗体等。

3.分子生物学方法：分子生物学方法在细菌检测中也起着重要作用。

PCR和实时荧光PCR是常用的检测细菌DNA的方法，可以通过特定引物和探针分别扩增和检测目标细菌的DNA。

此外，基于DNA测序技术的全基因组测序也可用于快速鉴定和检测细菌。