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细菌常用的几种试验ppt课件

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实验五 细菌的生化试验

实验五 细菌的生化试验
[试验方法]：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水微量发
酵管中，置37℃培养48h后，取出培养液加入甲基 红试剂2-3滴，观察结果。
[结果判定] ：培养液变红色，反应阳性，用+表示；
培养液不变色，反应阴性，用-表示。
4.乙酰甲基甲醇试验（V-P试验）
[基本原理]：某些细菌分解葡萄糖生成丙酮酸，进 一步脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境下被氧 化成二乙酰，后者与蛋白胨中的精氨酸所含的胍 基起作用，生成红色胍缩二乙酰，为VP试验阳性。
标记气室示意图
二 实验内容
（一）病毒的鸡胚分离培养
1.鸡胚：9-10日龄健胚
2.病毒：NDⅣ-Lasota株，100×稀释，加双抗各 5000单位/ml，室温下30min或4℃过夜
3.接种部位：尿囊腔接种
4.接种量：0.1-0.2ml/胚
5.接种步骤：照蛋→标记→打孔→接毒→封孔→37 ℃孵化箱中继续孵化，及时照蛋，24h内死胚丢 弃，以后死亡者随时取出，冷藏，120h不死者， 冻死。
[结果判定]：
溴甲酚紫是一种酸碱指示剂，在中性时为紫色，碱 性时为深红色，而在酸性时呈现黄色。
紫色无气泡，既不产酸也不产气，用-表示； 黄色无气泡，产酸不产气，用+表示； 黄色有气泡，产酸产气，用⊕表示。
2.吲哚（靛基质）试验
[基本原理]：有些细菌有色氨酸酶，能分解蛋白胨 中的色氨酸形成吲哚，吲哚与对位二甲基氨基苯 甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈红色。该试验主要 用于肠道杆菌的鉴定。
[试验方法]：将待检菌液接种到葡萄糖蛋白胨水微 量发酵管中，置于37℃培养48h，取出后加入VP 试剂甲液3滴，乙液各1滴，充分摇动，静置1530分钟后，观察实验结果。
[结果判定]：管内变红色为阳性，用+表示； 管内不变色为阴性，用-表示。

微生物细菌鉴定试验汇总ppt课件

微生物细菌鉴定试验汇总ppt课件

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19
硝酸盐还原试验方法
方法：
取一环待检菌接种到硝酸盐琼脂斜 面上，35℃培养18~24小时，然后依次 加入含α-萘氨和对氨基苯磺酸的试剂 各1mL，30s后观察结果。
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20
应用：
有助于鉴别肠杆菌科、奈瑟菌属、布 兰汉菌属、假单胞菌属等
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21
氧化酶试验
原理：
某些细菌具有细胞色素氧化 酶，能将二甲基对苯二胺或四 甲基对苯二胺试剂氧化成紫红 色醌类化合物
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34
6.克氏双糖铁（KIA）复合试验
【方法】：将待检菌接种于克氏双糖铁培养基（底 层穿刺，上层斜面划线），35ºC，24h，观察。
【结果】：发酵乳糖和葡萄糖产酸产气，则上层和 底层均呈黄色且有气泡产生；只发酵葡萄糖而不 发酵乳糖，则底层变黄，上层仍为红色。如底层 变黑，说明该菌产生硫化氢，生成黑色的硫化铁 沉淀。
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3.甲基红试验
【原理】：某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可进一 步分解为甲酸、乙酸等酸性物质，故培养基pH 在4.5以下， 加入甲基红指示剂后呈红色（阳性）；有些细菌分解葡萄 糖产生的酸进一步化为醇、酮等非酸性物质，使培养基pH 在6.2以上，加入甲基红指示剂后呈黄色（阴性）。
【方法】：大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种葡萄糖蛋白胨 水培养基中，35ºC18-24h，加入甲基红指示剂2-3滴观察 结果。
应用：
用于鉴定B群链球菌。
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11
3）CAMP试验
• 无乳链球菌能产生CAMP因子，它可促进金黄色葡萄 球菌溶血能力，使其产生显著的协同溶血作用。本 法可作为无乳链球菌的初步鉴定试验
标本
涂片：G+C

细菌的常用生化试验

细菌的常用生化试验




本实验主要用于迟缓发酵乳糖菌株

的快速鉴定。
4.七叶苷水解试验

原理 方法：将待检菌接种于七叶苷培养基中，培养后观察结 果。 结果：培养基变为黑色为阳性，不变色者为阴性。 应用：主要用于D群链球菌 与其他链球菌的鉴别，



前者阳性，后者阴性。
5.甲基红试验

原理：肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生 丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥 珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5 以下，使甲基红指示剂变红。 方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，培养2～4d，于培 养基内加入甲基红试剂，立即观察结果。 结果：呈现红色为阳性；橘红色为弱阳性；黄色为阴性。



应用：主要用于鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌，前者为阳性，后者 为阴性。肠杆菌科中沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆 菌属等为阳性，而肠杆菌属、哈夫尼亚菌属则为阴性。
6.V-P试验

原理 方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，于 35℃培养48h后加入甲液（6%α-萘酚酒精溶液）和乙液 （40%KOH溶液），振摇。 结果：在数分钟内出现红色为阳性；如无红色出现且于 35℃4h后仍如故者即为阴性。 应用：本试验常与甲基红试验 一起使用，因为前者阳性的细


产碱型
发酵型（产酸）
氧化型

应用Байду номын сангаас主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别，前者均为发酵型， 而后者通常为氧化型或产碱型。也可用于葡萄球菌与微球菌间的鉴 别，前者是发酵型，后者是氧化型。
3.β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）

细菌常用的几种试验

细菌常用的几种试验

04 细菌耐药性检测
纸片扩散法
原理
纸片扩散法是一种测量细菌对抗菌药物的敏感性的试验方法。在琼脂平板上放置纸片，纸 片中含有一定浓度的抗菌药物，当细菌生长时会形成抑菌圈，通过测量抑菌圈的大小来判 断细菌对抗菌药物的敏感程度。
优点
操作简单、成本低、易于观察结果。
缺点
结果受操作人员技术水平影响较大，且不能准确测量细菌对抗菌药物的最低抑菌浓度 （MIC）。
全基因组测序技术
原理
全基因组测序技术通过对细菌全基因组进行测序，获取其全部遗传信息，从而全 面了解细菌的基因组结构和功能。
应用
全基因组测序技术可用于细菌种属鉴定、基因组变异分析、耐药性机制研究等方 面，为细菌性疾病的诊断和治疗提供有力支持。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
酶联免疫吸附试验
利用酶标记的抗体与细菌抗原结合， 通过酶反应显色，对细菌进行鉴定。
03 细菌计数
直接计数法
定义
操作步骤
直接计数法是通过显微镜直接观察菌液中 的细菌数量，从而计算出细菌总数的方法 。
将待测菌液进行适当稀释，然后取一定量 的稀释液滴在载玻片上，盖上盖玻片，通 过显微镜观察并计数。
优点
缺点
操作较为繁琐，需要一定的培 养时间。
荧光计数法
定义
荧光计数法是通过荧光染色或标记 技术，使细菌发出荧光，然后通过
荧光显微镜观察并计数的方法。
操作步骤
将待测菌液与荧光染料或荧光标记 物混合，使细菌染色或标记，然后 通过荧光显微镜观察并计数。
优点
计数速度快，可以自动化操作 。
缺点
需要特殊的仪器和试剂，成本 较高。
对反应产物进行测量。

常用细菌生化反应试验

常用细菌生化反应试验
• 试剂：酚红、溴甲酚紫等 • 结果:培养基呈酸性变色 • 应用：观察细菌对糖度的 分解情况，常
用于肠道杆菌的鉴定
糖发酵试验结果判断
反应现象 酸性变色、有气泡 酸性变色、无气泡
培养基不变色
结果描述
分解××糖产酸、产气 分解××糖产酸、不产
气 不分解××糖
甲基红试验
• 原理：细菌分解糖，产生丙酮酸，进一步 生成大量混合酸，使培养基pH维持在4.4 以下，加入甲基红后，使甲基红呈现红色 反应。此为甲基红试验阳性。
伤寒沙门菌KIA（K A－＋）MIU（＋－－）
大肠埃希菌KIA（AA＋－）MIU（＋＋－）
苯丙氨酸脱氨实验
• 原理：细菌的具有的苯丙氨酸脱氨酶，可 使培养基中的苯丙氨酸脱氨，形成苯丙酮 酸，后者与三氯化铁作用，形成绿色化合 物。
• 培养基：苯丙氨酸琼脂 • 试剂：10％三氯化铁 • 结果：加入试剂后培养基呈现绿色为阳性 • 应用：多用于肠道杆菌的鉴定
脱酸 乙酰甲基甲醇
V-P试剂 二乙酰
培养基变红
葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径
大肠埃希菌IMViC试验（＋＋－－） 右侧为对照（－－＋＋）
葡萄糖
V－P试验
丙酮酸
脱酸
乙酰甲基甲醇
V-P试剂
二乙酰
培养基变红
大肠埃希菌IMViC试验（＋＋－－） 右侧为对照（－－＋＋）
蛋白质类代谢试验
• 靛基质试验 • 硫化氢试验 • 苯丙氨酸脱氨试验 • 尿素酶试验
• 培养基：葡萄糖蛋白胨水 • 结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+
培养基不变色： －
• 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主 要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌
葡萄糖

《细菌鉴定》PPT课件

《细菌鉴定》PPT课件
特殊气味等
形态学观察
* 营养需求（血琼脂、巧克力、营养琼脂生长 情况）
* 胆盐耐受（麦康凯生长情况） * 万古霉素耐受（含万古霉素巧克力生长情况） * 液体培养基生长现象（菌膜、上半部生长、
均匀浑浊、下半部生长、沉淀） * 半固体动力现象（清晰、毛刷样、倒伞状）
生化反应
* OF试验 * 各种糖发酵试验、糖氧化试验 * 糖衍生物发酵（α/β-甲基葡萄糖、β-葡萄糖胺、
不同种群的细菌根据培养的难易以及实际操作 时的难度而采用不同的鉴定手段
* 目前技术能培养的细菌采用传统手段
* 难培养细菌采用分子生物学手段（如麻风分支杆菌、 肺炎支原体、肺炎衣原体等）
* 而传统手段难以进一步鉴定的细菌则采用抗原抗体 血清学分类（如军团菌、沙门菌、志贺菌等）、细 胞壁脂肪酸结构和组成分类（如棒状杆菌相关属）、 挥发性代谢产物（如厌氧菌挥发性脂肪酸）指纹分 析
血清学试验（不常用）
* 铜绿假单胞菌生物分型血清 * 脑膜炎奈瑟菌分型血清 * 隐球菌可溶血抗原血清 * 脑膜炎5种可溶性抗原复合乳胶
* b型流感嗜血杆菌乳胶 * 肺炎链球菌乳胶（含83个血清型的多价血清） * A群脑膜炎奈瑟菌乳胶 * B群脑膜炎奈瑟菌/大肠埃希菌K1乳胶 * C群脑膜炎奈瑟菌乳胶
然耐药反证法鉴定
形态学试验
G+菌 BA生长、Choc不生长、MecK不生长，——Gram染色： 分G+co（革兰阳性球菌） ,G+ b（革兰阳性杆菌）
G+co—依靠溶血特征，菌落形态、菌落颜色、菌体形 态区分:
▲葡萄球菌：淡黄色/白色，中等大小，较凸，规则 圆形，β/γ溶血，较湿润，除金黄色葡萄球菌外， 一般不具有临床意义；
血清学试验（不常用）

常用细菌生化反应试验


不发酵的V-P试验
总结词
详细描述
不发酵的V-P试验表示细菌不能发酵葡萄糖， 不产生乙酰甲基甲醇，在试验中表现为无色。
有些细菌不能发酵葡萄糖，因此不产生乙酰 甲基甲醇属、不动杆菌 属等。不发酵的V-P试验有助于鉴别非发酵 菌与肠杆菌科细菌。
临床意义
非发酵菌为医院感染的重要病原菌，可引起 呼吸道、泌尿道、伤口等感染。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
检测细菌对酸性环境的 适应能力，用于鉴别肠
道菌属。
试验原理
糖发酵试验
氧化酶试验
不同细菌含有不同的酶系，能够分解糖类 产生酸性或碱性产物，通过指示剂变色反 应判断细菌对糖类的代谢能力。
氧化酶催化过氧化氢分解为水和氧气，过 氧化氢在铁离子存在下形成棕色沉淀，通 过观察沉淀判断氧化酶活性。
触酶试验
甲基红试验
V-P试验阴性
总结词
V-P试验阴性表示细菌不能利用葡萄糖，不产生乙酰甲基甲醇，在试验中表现为无色。
详细描述
当细菌不能利用葡萄糖或不产生乙酰甲基甲醇时，V-P试验呈阴性。这通常表明该细菌 不属于肠杆菌科，因为肠杆菌科细菌通常能够发酵葡萄糖并产生乙酰甲基甲醇。V-P试
验阴性有助于排除某些肠道细菌感染的可能性。
过氧化氢酶能催化过氧化氢分解为水和氧 气，氧气在硫酸中形成白色沉淀，通过观 察沉淀判断过氧化氢酶活性。
肠道菌属能够代谢糖类产生酸性产物，使 培养基pH降低，加入甲基红指示剂后呈红 色，通过观察颜色变化判断肠道菌属。
02 糖发酵试验
葡萄糖发酵试验
总结词
葡萄糖发酵试验是细菌生化反应试验中的一种，用于鉴别细菌对葡萄糖的代谢 能力。
04 Voges-Proskauer试验

微生物学检验细菌的生物化学实验


检测对象：特异性抗原
方法：直接凝集试验（玻片法）、荚膜肿
胀伤寒试杆验菌诊断血清 + 待检测细菌
（含抗伤寒杆菌抗体）
细菌凝集
玻片凝集试验：阳性
报告：检出伤寒杆菌
血清学诊断
试剂：含已知抗原 应用：检测待检者血清中有无相应的抗 体以及抗体的效价
球菌
种类: 革兰阳性 葡萄球菌属、链球菌属（链球菌、肺炎 链球菌）、肠球菌属、微球菌属等 革兰阴性 奈瑟菌属、布兰汉菌属
四种革兰阳性菌的比较
葡萄球菌属 微球属 链球菌属 气球菌属
排列方式 葡萄串状、 四联或成对 链状 成双或四联
触酶试验
+
+
-
弱+
氧化/发 酵
厌氧生长
发酵 +氧化 源自生长发酵 +发酵 弱
葡萄球菌属
最常见的化脓性球菌 医务人员的葡萄球菌带菌率高 革兰阳性、葡萄串状排列 产生不同的脂溶性色素 触酶试验阳性 发酵葡萄糖 金黄色葡萄球菌是主要致病菌
培养基不变色： － 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验， 主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌
伏－普试验（V-P试验）
原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮 酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中乙 酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白 胨中的精氨酸所含的胍基结合，生成红色化 合物。
培养基：葡萄糖蛋白胨水
结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+ 培养基不变色： －
应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主 要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌
葡萄糖
甲基红试验
丙酮酸 大量混合酸
pH降至4.4以下
甲基红试剂
培养基变红
葡萄糖
V－P试验

细菌常用的几种试验


4
氢氧化钾拉丝试验
“氢氧化钾拉丝试验”快速鉴定革兰氏阳性菌 1、原理：由于革兰阴性细菌的细胞壁肽聚糖层数少于稀 碱溶液内易于破裂，而释放出未断裂的DNA螺旋，使 KOH菌悬液呈现粘性，可有搅拌后拉出丝来，而革兰阳性 菌在稀碱溶液中仍保持不变。 2、试剂：4%KOH水溶液。应新鲜配制。 3、方法：取1滴4%KOH水溶液于洁净玻片上，用接种环 于固体培养基上取新鲜配制菌落少许，于KOH溶液中搅拌 混匀，并每隔几秒钟上提接种环，观察能否拉出丝来。 4、结果：能用接种环拉出丝来为阳性，仍为混悬液则为 阴性。大多数革兰阴性菌于5到10秒内出现阳性，有的需 30到45秒。革兰阳性菌于60秒以后仍阴性。
7
氧化酶试验
原理：具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧 化，再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化，生 成有色的醌类化合物。
方法：取一洁净的滤纸一小块，涂抹菌苔少许， 加一滴氧化酶试剂（对苯二胺溶液）于菌上，观 察颜色变化。
判断：立即呈粉红色并迅速转变为紫红色为阳性， 不变色为阴性。
意义：肠杆菌科细菌与气单胞、假单胞菌的鉴别
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2.方法： （1）玻片法：取血浆和生理盐水各一滴分别滴到清
洁玻片上，挑去待检菌落分别与血浆及盐水混合，如血浆 中出现明显凝集颗粒而盐水中无自凝现象者为阳性。
（2）试管法：取试管两支，分别加入0.5ml的血浆 （经生理盐水1：4稀释）挑去菌落数个加入测定管充分研 磨混匀，用一只阳性菌株加入对照管，37℃3-4小时。血 浆凝固者为阳性。
精选ppt课件
2
革兰氏染色
快速染色法：
1、初染：结晶紫染色10秒，水洗，甩干；

微生物限度检验PPT课件

- 表面活性剂、中和剂或灭活剂：应证明其有效性及 对微生物的生长和存活无影响。
- 供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小 时。
- 供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。 - 供试液的体积：100ml。
13
稀释剂（ 中国药典2005版）
（1） 氯化钠-蛋白胨缓冲溶液 （2） 无菌磷酸盐缓冲液 （3） 无菌磷酸盐缓冲液
中国药典2005版
菌株名称
CMCC编号
大肠埃希氏菌(E. coli)
CMCC(B)44102
金黄色葡萄球菌(Sta. aureus) CMCC(B)26003
枯草芽孢杆菌（Bac. subtilis）
CMCC(B)63501
白色念珠菌(Can. albicans) 黑曲霉菌(Asp. niger)
CMCC(F)98001 CMCC(F)98003
一次检出为准
第一次结果超过规定标准，复 试两次，三次结果平均报告
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
一次检出为准
测定结果在规定的限度标准5 倍以内均为合格
6
验证目的
- 在于确认（寻找）一种有效的检验方法，如果样 品（药品）中有一定数量的微生物存在，那么采 用此法可以使得样品（药品）中的微生物得以检 出。
过滤
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
菌种组：
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
过滤
空白样品组：
过滤
计数A 计数B （阴性对照） 计数C （阳性对照） 计数D
- 充分验证样品（药品）本身对微生物生长的影响。
7
验证目的
确认一种检验方法。 验证实验 检验条件
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2.方法：将待检菌接种硝酸盐培养基中，35℃24小时， 加入硝酸盐还原试剂甲液（对氨基苯磺酸和醋酸）和乙液 （ a-萘胺和醋酸）各一滴后观察结果。
临床细菌检验 常用的几种试验
菏泽市立医院
精选
常做的实验方法
革兰氏染色法 拉丝试验 抗酸染色法 氧化酶试验 触酶试验 凝固酶试验 奥普妥辛实验 卫星实验 CAMP 杆菌肽敏感实验 硝酸盐还原试验 DNA酶试验 生化反应 血清学分型(志贺,沙门，霍乱、链球菌)
精选
革兰氏染色
快速染色法： 1、初染：结晶紫染色10秒，水洗，甩干； 2、媒染：革兰氏碘液染色10秒，水洗，甩
干； 3、脱色：95%酒精脱色10~20秒，水洗，
甩干； 4、复染：沙黄或复红染色10秒，水洗，干
后镜检。 5、结果判定：G +呈紫色，G-菌呈红色
精选
G+菌
G-菌
精选
氢氧化钾拉丝试验
“氢氧化钾拉丝试验”快速鉴定革兰氏阳性菌 1、原理：由于革兰阴性细菌的细胞壁肽聚糖层数少于稀 碱溶液内易于破裂，而释放出未断裂的DNA螺旋，使 KOH菌悬液呈现粘性，可有搅拌后拉出丝来，而革兰阳性 菌在稀碱溶液中仍保持不变。 2、试剂：4%KOH水溶液。应新鲜配制。 3、方法：取1滴4%KOH水溶液于洁净玻片上，用接种环 于固体培养基上取新鲜配制菌落少许，于KOH溶液中搅拌 混匀，并每隔几秒钟上提接种环，观察能否拉出丝来。 4、结果：能用接种环拉出丝来为阳性，仍为混悬液则为 阴性。大多数革兰阴性菌于5到10秒内出现阳性，有的需 30到45秒。革兰阳性菌于60秒以后仍阴性。
3.在杆菌肽周围出现明显抑菌环 〉10mm 为阳性，则被推断为A群链球菌,〈10mm 为阴性，为其他群的链球菌。
精选
精选
硝酸盐还原试验
1.原理：某些细菌能还原培养基中的硝酸盐生成亚硝酸盐、 氨和氮等。亚硝酸盐与醋酸作用生成亚硝酸，亚硝酸再与 对氨基苯磺酸作用形成重氮苯磺酸，它可与a-萘胺结合成 红色的N-a-奈氨苯磺酸。
精选
精选
精选
CAMP试验
1.原理：B群链球菌在血平板上能产生CAMP因子， 可促使金黄色葡萄球菌β 溶血素的活性，故在血 平板上两种细菌交界处溶血能力增强，形成箭头 状透明状溶血区。其他链球菌一般不产生CAMP 因子，故此试验可作为B群链球菌的鉴定指标之 一。
2.方法：在血平板上，用金黄色葡萄球菌划一条 横线，再于该直线相距5mm左右用被检菌接种一 或两条垂直短线，35℃24小时观察结果。
2.方法：用取菌环挑去可疑菌落分别接种在血平板、MH 平板上，再用取菌针挑取金葡菌与原划线垂直划一直线接 种在平板上。35℃24小时观察结果。
3.结果判断：金葡菌周围的细菌菌落较大，卫星试验阳性 4.意义：仅血平板上出现卫星现象--流感嗜血杆菌；
血平板与MH均呈卫星现象--副流感嗜血杆菌。 借此用于鉴别流感与副流感嗜血杆菌。
3.结果判断：抑菌圈〉14mm为肺炎链球菌，无 或见很窄的抑菌圈为草绿色链球菌。
精选
精选
卫星试验
1.原理：流感嗜血杆菌生长时需要X、V两种因子，在血 平板上形成极小、圆形透明的菌落，若与金葡菌同时培养， 由于金葡菌产生V因子，促进流感嗜血杆菌的生长，在金 葡菌周围的细菌菌落较大，形成卫星生长现象。在普通培 养基上不生长。
2.方法：用接种环挑取固体培养基上的菌落置于 洁净的玻片上，然后滴加3%过氧化氢溶液一滴， 观察结果。
3.结果判断：在5秒内释放大量的气泡为阳性。 4.意义：大多数球菌触酶试验阳性，但链球菌为
阴性，主要用于鉴别葡萄球菌与链球菌。
精选
精选
血浆凝固酶试验
1.原理：金黄色葡萄球菌可产生两种凝固酶。一种是结合 凝固酶，结合在细胞壁上，使血浆中纤维蛋白原变成纤维 蛋白附着于细菌表面上，发生凝集，用玻片法测出。另一 种是菌体生成后释放与培养基中的游离凝固酶，能使凝固 酶原变成凝血酶类物质，从而使血浆凝固，可用试管法测 出。精选 Nhomakorabea精选
精选
奥普妥辛实验 （OP试验）
1.原理：肺炎链球菌对Optochin（乙基氢化去甲 奎宁）十分敏感，作用机理是干扰肺炎链球菌叶 酸的合成，可抑制其生长，其他链球菌如草绿色 链球菌对其不敏感。借此可对肺炎链球菌与草绿 色链球菌加以鉴别。
2.方法：将待检的a溶血的链球菌均匀的涂布于血 平板上，贴放Optochin纸片（含药5mg)35℃孵 育18-24小时，观察抑菌圈的大小。
2.方法： （1）玻片法：取血浆和生理盐水各一滴分别滴到清
洁玻片上，挑去待检菌落分别与血浆及盐水混合，如血浆 中出现明显凝集颗粒而盐水中无自凝现象者为阳性。
（2）试管法：取试管两支，分别加入0.5ml的血浆 （经生理盐水1：4稀释）挑去菌落数个加入测定管充分研 磨混匀，用一只阳性菌株加入对照管，37℃3-4小时。血 浆凝固者为阳性。
精选
抗酸染色
1、初染：石炭酸复红加热染色3-5分钟，水 洗，甩干；
2、脱色：3%盐酸酒精脱色30~60秒，水 洗，甩干；
3、复染：碱性美兰60秒，水洗，干后镜检。 4、结果判定：抗酸菌呈红色 ，非抗酸菌呈
兰色 5、意义：用于鉴别抗酸菌与非抗酸菌
精选
抗酸染色---抗酸菌
精选
氧化酶试验
原理：具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧 化，再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化，生 成有色的醌类化合物。
方法：取一洁净的滤纸一小块，涂抹菌苔少许， 加一滴氧化酶试剂（对苯二胺溶液）于菌上，观 察颜色变化。
判断：立即呈粉红色并迅速转变为紫红色为阳性， 不变色为阴性。
意义：肠杆菌科细菌与气单胞、假单胞菌的鉴别
精选
精选
触酶试验
1.原理：具有触酶（过氧化氢酶）的细菌，能催 化过氧化氢，放出新生态氧，继而形成分子氧， 出现气泡。
3.结果观察：在被检菌接种线与金葡菌接种线之 间有一个箭头形或半月形透明溶血区为阳性，可 推断为B群链球菌。无溶血区为阴性。
精选
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杆菌肽敏感试验
1.原理：A群链球菌对杆菌肽非常敏感，而 其他链球菌对杆菌肽通常耐药，故此试验 可鉴别链球菌。
2.方法：将被检链球菌，密涂于血平板上， 将杆菌肽纸片贴于血平板表面，35℃24小 时观察结果。