饮用水大肠菌群检测方法

生活饮用水标准检验方法在各种水体，特别是污染水体中存在有大量的有机物质，适于各种微生物的生长，因此水体是仅次于土壤的第二种微生物天然培养基。

水体中的微生物主要来源于土壤，以及人类的动物的排泄物及污染。

水体中微生物的数量和种类受各种环境条件的制约。

一般认为，水中微生物以革兰氏阴性杆菌占有较大优势。

与其他水体相比，河水及溪水中革兰氏阳性菌相对较多，这是因为陆地微生物冲洗污染的缘故。

《中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验法》提供了水质中细菌总数和总大肠菌群的检测方法。

1、国家标准中，细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。

对生活饮用水，直接吸取1ml水样于平皿中，加入营养琼脂后混匀，37℃培养24h，进行计数。

对水源水，根据情况对样品进行10倍梯度稀释，选择适宜稀释液1ml，加注平皿，营养琼脂混匀，37℃培养24h，进行计数。

按照规定格式报告每毫升水中细菌总数。

2、国家标准中，利用总大肠菌群作为粪便污染的指标。

总大肠菌群是指一群需氧及兼性厌氧的，37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

水样中总大肠菌群数的含量，表明水被粪便污染的程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。

国家标准物质提供了多管发酵法及滤膜法检测总大肠菌群的方法。

3、多管发酵法检测总大肠菌群，分为三步：初发酵试验，平板分离，复发酵证实试验。

初发酵试验，采用乳糖蛋白胨培养液37℃培养24h，观察产酸产气情况。

对阳性管培养物，接种于品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基，观察菌落特征，并进行革兰氏染色和镜检。

对典型和可疑菌落，接种于乳糖蛋白胨培养液，进行复发酵证实试验，并根据标准所附检数表报告结果。

其中，对生活饮用水，初发酵试验接种水样总量300ml，即100ml接种2管，10ml接种10管，采用两个稀释度，12支发酵管。

对水源水，初发酵试验接种水样总量55.5ml，即10ml接种5管，1ml接种5管，0.1ml接种10管，共采用三个稀释度，15支发酵管。

GB/T 4789.3-2003 食品微生物学检验大肠菌群计数
方法确认试验
按照GB/T 4789.3-2003 食品微生物学检验大肠菌群计数方法要求对检验方法进行了确认试验。

一、仪器试剂
仪器：高压灭菌器培养箱
培养基：青岛日水（）
二、样品来源
阳性样品：（市所提供滴加菌悬液桶装饮用水）
阴性样品：（市所提供灭菌水）
三、试验步骤
取25mL样品加到225ml磷酸盐缓冲液或灭菌生理盐水中，振摇混匀，制成1：10样品匀液，以灭菌生理盐水按10倍递增稀释。

取前3个连续稀释度，每个稀释度接种3管，分别接种至乳糖胆盐发酵管培养，观察产气情况，未产气者为大肠菌群阴性。

于产气管中取1环转种至伊红美兰琼脂平板，取可疑菌落做革兰氏染色，并同时接种乳糖发酵管培养，观察产气情况。

凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告大肠菌群阳性。

根据阳性管数，检索MPN表，报告结果。

结果如下：
四、方法学确认结果
按照GB/T 4789.3-2003 食品卫生微生物学检验大肠菌群测定检验方法的实验步骤，阳性样品均检出大肠菌群，阴性样品均未检出。

饮用水大肠菌群检测方法大肠菌群是指在37℃培养24h 内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革蓝氏阴性无芽孢杆菌的总称。

主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。

水的大肠菌群数是指100 mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。

在正常情况下，肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽孢杆菌等多种细菌。

这些细菌都可以随人畜排泄物进入水源，由于大肠菌群在肠道内数量多，所以，水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。

目前，国际上已公认大肠菌群是粪便污染的指标。

因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。

水中大肠菌群的检测方法，常用多管发酵法和滤膜法。

多管发酵法可适用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要的时间较长。

滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于堵塞滤孔的水样。

(一)水样的采集供细菌学检验的水样，必须按一般无菌操作的基本要求采集，并保证再运送、贮存过程中不受污染。

水样从采集到检验不应超过4h，在0～4℃下保存不应超过24h ，如不能在4h 内分析，应在检验报告上注明保存时间和条件。

1、自来水取样：应在水龙头打开放水5min，再用无菌容器接取水样，待分析。

如水样内含有余氯，则采样瓶灭菌后按每500mL水样加3%Na2S2O3.5H2O溶液1mL。

2、江、河、湖、池自然水体取样：可用采样器，采样瓶应先灭菌。

采样后，瓶内应留有空隙。

如果与其他化验项目联合取样，细菌学分析水样应采在其他样品之前。

(二)初发酵试验1.水样稀释：制备水样10-1、10-2的稀释液，方法为用无菌移液管吸取水样10mL放于盛有90mL无菌水和若干玻璃珠的锥形瓶中，充分振荡使混合均匀，并使其中的细菌尽量呈单个存在，即为10-1稀释液;再从10-1制备10-2稀释液。

以此类推，稀释到所需倍数。

2.接种和培养：以无菌操作于5支三倍浓缩培养基(接种前一定应先检查杜汉氏小管内有无气泡)中各加入水样10mL，5支普通培养基试管中加入水样1mL，5支普通培养基试管中加入10-1稀释液1mL，小心混匀放入37℃培养箱中培养24h 。

多管发酵法测大肠杆菌群一、实验目的1、学习测定水中大肠杆菌群数量的国标测试法（主要为多管发酵法）2、了解大肠杆菌群的数量在水中的重要性二、实验原理我国《生活饮用水卫生标准》GB5749-85中关于生活饮用水的细菌标准具体规定如下：1、细菌总数1ml水中不超过100个。

2、大肠杆菌数1L水中不超过3个。

3、若只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，大肠杆菌群数平均每升不得超过1000个；经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用水的水源水，大肠杆菌群数平均每升不得超过10000个。

多管发酵法是以最可能数（most probable number）简称MPN 来表示试验结果的。

实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。

如果从理论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。

不过只要每一稀释度试管重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取决于那些既显示阳性又显示阴性的稀释度。

因此在实验设计上，水样检验所要求重复的数目，要根据所要求数据的准确度而定。

三、适用范围：大肠菌群系指一群在36℃条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。

通常用此法作为粪便污染指标来评价食品以及饮用水的卫生质量。

四、检验程序：→→→→→→五、操作方法：5.1 以无菌操作，将检样10ml被测液放于含有90ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。

5.2 用1ml 灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均（均液的PH值应在6.5～７.5之间，必要时分别用1mol/L 匀，做成1：100的稀释液。

氢氧化钠（NaoH）或(1mol/L)盐酸（HCL）调节。

实验8: 食品（饮用水）中大肠菌群的检测（滤膜法）及分离纯化（6学时）一、目的要求1.利用滤膜法测定食品中大肠菌群。

2.掌握分离微生物的基本操作。

二、基本原理1.滤膜法是采用过滤器过滤水样，使其中的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜放在适当的培养基上进行培养，大肠菌群可直接在膜上生长，从而可直接计数。

所用滤膜是一种多孔硝化纤维膜或乙酸纤维膜，用水系过滤膜即可，其孔径约0.45μm。

2.在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。

得到纯培养的过程称为分离纯化。

三、试验原料及器材实验原料：伊红美蓝琼脂平板或远藤氏琼脂平板，乳糖蛋，蛋白胨，灭菌水，饮用水等；器材：镊子；夹钳；烧杯；真空泵；滤膜；过滤器等。

四、操作步骤1.大肠菌群的检测（1）滤膜灭菌将滤膜放入装有蒸馏水的烧杯中，加热煮沸15分钟，共煮沸三次，前两次煮沸后换水洗涤2—3次再煮，以洗去滤膜上残留的溶剂。

（2）过滤器装置用无菌手续将已灭菌的过滤器基座、滤膜、漏斗和抽滤瓶安装好，其中滤膜用灭菌镊子(浸在95%酒精内，用时通过火焰灭菌)移至过滤器的基座上。

其他可直接用手或夹钳操作，但不要碰到伸入抽滤瓶的橡皮塞部分，以免染菌。

（3）将抽滤瓶接上真空泵。

（4）加水样过滤直径50mm的滤膜，所过滤的水量以培养后长出的菌落数一般需要较多过滤器装置，多于50个为适宜，所以采用多联过滤器最好，可以减少误差。

一般清洁的深井水或经处理过的河水与湖水等可取样 300—500 ml；对比较清洁的河水或湖水，可取样1-100ml；严重污染的水样可先进行稀释；未知的水样可做三个稀释度，选择菌落数合适的稀释度进行计算。

本次实验于过滤器漏斗内加入比较河水或湖水100ml，加盖。

（5）开动真空泵进行油滤。

（6）抽完后，加入等量的灭菌水继续抽滤，目的是冲洗漏斗壁。

（7）滤毕，关上真空泵，用灭菌镊子取滤膜边缘，将没有细菌的一面紧贴在伊红美蓝琼脂平板上。

滤膜与培养基之间不得有气泡。

水质大肠杆菌检测标准水质大肠杆菌是一种常见的水污染指标微生物，其存在往往代表着水体受到了粪便污染，可能存在病原微生物，对人体健康构成潜在威胁。

因此，对水质中的大肠杆菌进行检测具有重要意义。

本文将介绍水质大肠杆菌检测的标准及相关内容。

一、样品采集。

1. 采样地点。

样品采集应根据实际情况选择合适的采样点，通常应选择水流平缓、水深适中的采样点，避免选择有明显污染源的地方进行采样。

2. 采样容器。

采样容器应为无菌容器，避免使用含有抗菌剂的容器，避免对样品造成影响。

3. 采样方法。

在采样时，应尽量避免接触手部或其他物体，避免污染样品。

采样时应尽量避开表层水体，直接将容器浸入水中采集样品。

二、样品保存与运输。

1. 样品保存。

采集后的样品应尽快送至实验室进行检测，若无法立即送检，应在4℃条件下保存，避免样品中微生物的生长。

2. 样品运输。

样品在运输过程中应避免剧烈晃动和温度变化，以免对样品造成影响。

三、检测方法。

1. 培养法。

培养法是一种常见的大肠杆菌检测方法，通过在含有培养基的平板上培养样品中的微生物，并通过特定的培养条件，观察培养基上是否有大肠杆菌的生长。

2. PCR法。

PCR法是一种分子生物学方法，通过特定的引物扩增样品中的DNA，再通过特定的检测手段，判断样品中是否存在大肠杆菌。

四、检测标准。

根据《水质污染物排放标准》（GB 3838-2002）的规定，水体中大肠杆菌的限量标准为每100毫升不得超过500个。

若水样中大肠杆菌数量超过此标准，则代表水质受到了污染。

五、检测结果的解读。

当检测结果显示水样中的大肠杆菌数量超过标准限量时，应立即采取相应的水质改善措施，避免对周围环境和人体健康造成潜在威胁。

同时，应对水源进行全面排查，找出污染源并进行治理。

六、结论。

水质大肠杆菌的检测标准对于保障水质安全具有重要意义，正确的采样和检测方法能够有效地保障水质的监测工作。

同时，检测结果的解读和后续处理也是非常重要的环节，需要引起足够的重视和关注。

生活饮用水中总大肠菌群三种不同检测方法比较在生活饮用水中，大肠菌群是一种重要的指标，用来评价水源的卫生状况。

常见的三种大肠菌群检测方法包括MPN法（Most Probable Number）、膜过滤法和PCR法（聚合酶链式反应法）。

本文将对这三种方法进行比较，分析其特点和适用场景。

首先，MPN法是一种常用的大肠菌群检测方法。

该方法通过对一系列稀释液进行培养，根据培养液中菌落的种类和数量来评估大肠菌群的含量。

这种方法的优点是操作简单、成本较低，可适用于大批量的水样检测。

但是，MPN法的缺点是需要较长时间的培养过程，通常需要3-5天的时间才能得到结果。

此外，该方法对生活饮用水中的非培养大肠菌群无法进行检测。

其次，膜过滤法是一种较为常用的大肠菌群检测方法。

该方法通过将水样通过特殊大小的膜过滤器，使大肠菌群滞留在膜上，然后将膜转移到培养基上进行培养。

该方法的优点是操作相对简单，需要的时间较短，通常在24小时内可以得到结果。

此外，该方法可以对生活饮用水中的非培养大肠菌群进行检测。

但是，膜过滤法的缺点是需要较多的培养器材和耗材，成本较高。

最后，PCR法是一种较为先进的大肠菌群检测方法。

该方法通过扩增水样中大肠菌群的DNA片段，然后利用荧光技术进行检测。

PCR法的优点是快速、灵敏，可以在短时间内得到准确的结果。

此外，该方法可以对生活饮用水中的非培养大肠菌群进行检测，并可以进行定量分析。

但是，PCR法的缺点是需要较复杂的实验设置和专业的设备，操作要求较高，成本较高。

综上所述，生活饮用水中总大肠菌群的检测方法包括MPN法、膜过滤法和PCR法。

这三种方法各有特点，在不同的场景中适用。

MPN法适用于大批量的水样检测，操作简单、成本较低，但需要较长时间。

膜过滤法适用于一般的大肠菌群检测，操作相对简单、时间较短，但成本较高。

PCR 法适用于准确和快速的大肠菌群检测，可以进行定量分析，但需要较复杂的实验设置和专业设备。

在实际应用中，可以根据需求和实际条件选择合适的检测方法来评估生活饮用水的卫生状况。

水的大肠菌群检测方法水是生命的重要组成部分，也是人类日常生活中不可或缺的资源。

然而，水源的安全性和水质的卫生问题一直备受关注。

其中，水中的大肠菌群含量是衡量水质卫生程度的重要指标之一、大肠菌群是指肠道中的一类细菌，其中的分支肠杆菌是最常见的一种。

高含量的大肠菌群在水中存在，可能表明水源受到了粪便或下水道污染。

因此，检测水的大肠菌群含量对评估水源卫生问题至关重要。

以下是一些常见的水的大肠菌群检测方法：1. 集菌法（Most Probable Number Method，MPN）：这是一种传统的大肠菌群检测方法，常用于饮用水和游泳池水的监测。

该方法通过在不同稀释度的水样中进行培养，并观察菌落形成的情况来估算大肠菌群的含量。

这种方法的优点是简单易行，可以适用于一定量的水样，但需要较长的培养时间和专业实验室。

2. 膜过滤法（Membrane Filtration Method）：这是一种常用的水质检测方法，也常用于大肠菌群的检测。

该方法通过过滤水样，将其中的微生物捕捉在膜上，然后将膜转移到含有营养物质的培养基上进行培养。

通过计数培养基上的菌落数量，可估算出水样中的大肠菌群含量。

这种方法的优点是可以对大体积的水样进行检测，并且具有较高的准确性和灵敏度。

3. PCR法（Polymerase Chain Reaction）：PCR法是一种基于DNA分子的检测方法，可以快速检测和测定大肠菌群的含量。

该方法通过提取水样中的DNA，然后使用特定的引物和DNA聚合酶，在反应管中进行一系列温度变化的循环，扩增目标DNA片段。

最后通过凝胶电泳等技术，可以直接观察到扩增产物，从而判断水样中的大肠菌群含量。

PCR法具有高效快速、高灵敏度和高特异性等优点。

同时，PCR法还可以结合实时荧光定量PCR技术，通过测量荧光强度来定量水样中的大肠菌群含量。

4. 流式细胞仪法（Flow Cytometry Method）：流式细胞仪是一种高效、灵敏的细胞计数和分类技术。

5750.6-2023生活饮用水标准检验方法
根据《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006）和《水质采样技术规范》（GB 5750.6-2006），以下是2023年生活饮用水标准的检验方法：
1. 总大肠菌群检验方法：
方法一：膜过滤法
方法二：MPN法
2. 大肠菌群检验方法：
方法一：膜过滤法
方法二：MPN法
3. 菌落总数检验方法：
方法一：表面培养法
方法二：膜过滤法
4. pH值检验方法：
方法一：电极法
5. 氯离子检验方法：
方法一：氯离子选择电极法
6. 氨氮检验方法：
方法一：间接纳氏法
7. 五日生化需氧量（BOD5）检验方法：
方法一：标准曲线法
8. 铜检验方法：
方法一：铜选电极法
9. 锰检验方法：
方法一：铁锰选电极法
10. 氰化物检验方法：
方法一：硫氰化钠蒸馏-砂锥法
11. 铅检验方法：
方法一：铅选电极法
12. 氟化物检验方法：
方法一：离子选择电极法
13. 铝检验方法：
方法一：铝选电极法
14. 氯化物检验方法：
方法一：氯化物选择电极法
请注意，以上列举的只是一部分常用的饮用水标准检验方法，具体检验方法还需要参考相关的标准文件以及检测实验室的要求。

生活饮用水微生物指标总大肠菌群1.项目概述本实验依据GB-T 5750.12-2006 生活饮用水标准检验方法总大肠菌群滤膜法。

总大肠菌群指一群在37℃培养24 h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。

本方法适用于生活饮用水和低浊度的水源水中总大肠菌群数的测定。

2.实验原理用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤水样，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴在选择性培养基上，经培养后，计数生长在滤膜上的典型大肠菌群菌落数。

3.培养基与试剂3.1 品红亚硫酸钠培养基3.1.1 成份A 蛋白胨10gB 酵母浸膏5gC 牛肉膏5gD 乳糖10gE 琼脂15~20gF 硫酸氢二钾 3.5gG 无水亚硫酸钠5g左右H 碱性品红乙醇溶液(50g/L) 20mLI 蒸馏水1000mL3.1.2 储存培养基的制备先将琼脂加到500mL蒸馏水中，煮沸溶解，于另500mL蒸馏水中加入硫酸氢二钾、蛋白胨、酵母浸膏和牛肉膏，加热溶解，倒入已溶解的琼脂，补充蒸馏水至1000mL，混匀后调pH为7.2~7.4，再加入乳糖，分装，115℃高压灭菌20min，储存于冷暗处备用。

3.1.3 平皿培养基的配制将上法制备的储存培养基加热融化，用灭菌吸管按比例吸取一定量的5％碱性品红乙醇溶液置于灭菌空试管中，再按比例称取所需的无水硫酸钠置于另一灭菌试管中，加灭菌水少许，使其溶解后，置沸水浴中煮沸10min以灭菌。

用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液至深红色退成淡粉色为止，将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加到已融化的储存培养基内，并充分混匀(防止产生气泡)，立即将此种培养基15mL倾入已灭菌的空平皿中。

待冷却凝固后置冰箱内备用。

此种以制成的培养基于冰箱内保存不宜超过二周。

如培养基已由淡粉色变为深红色，则不能再用。

3.2 乳糖蛋白胨培养基3.2.1 成份A 蛋白胨10gB 牛肉膏3gC 乳糖5gD 氯化钠5gE 溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L) 1mLF 蒸馏水1000mL3.2.2 制法将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中，调整pH为7.2~7.4，再加入1mL1.6％溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，115℃高压灭菌20min，贮存于冷暗处备用。

POPULAR SCIENCE大众科普近年来，上海建科检验微生物实验室参加了由中国国家认证认可监督管理委员会组织的、中国检验检疫科学研究院测试评价中心负责实施的饮用水中微生物的检测能力验证。

能力验证是指利用实验室间比对来确定实验室检测/校准能力的活动，它是确保实验室维持较高的校准和检测水平而对其能力进行考核、监督和确认的一种验证活动[1]。

为了提高生活饮用水细菌总数检测和总大肠菌群生化鉴别水平，并顺利通过国家组织的能力验证考核，上海建科检验微生物实验室从“人、机、料、法、环、测”几个方面，制定了一份全新的符合检测项目考核的实施方案，并最终顺利通过了能力验证考核。

本文就如何提高生活饮用水细菌总数检测和总大肠菌群生化鉴别水平，制定特殊方案，以及解决能力验证考核过程中遇到的难点。

1 细菌总数和总大肠菌群检测方案1.1 明确岗位职责（1）在检测项目考核前，对仪器设备做好调试，确保状态稳定。

（2）在检测项目考核过程中，时刻做好自身安全的防护，检查冲眼器和冲淋器能否使用，并在试验结束后做好试验场所消杀工作。

（3）检测人员必须仔细地填写数据和原始记录，确保出具的结果准确无误。

作者简介：吴丽萍，工程师，主要研究方向为环境工程检测。

对生活饮用水细菌总数、总大肠菌群的检测吴丽萍上海建科检验有限公司，上海 201108科技视界SCIENCE & TECHNOLOGY VISION样和上述稀释度的水样1 mL 分别注入灭菌平板内，且做平行样。

倾注约12～15 mL 营养琼脂，并立即旋摇平板，使水样和培养基充分混匀。

同时，做空白对照。

在36 ℃±1 ℃的培养箱中，培养48 h [3]。

检测计数时，可用眼睛直接观察，或用放大镜检查，以防遗漏。

选择适当 稀释倍数的平板，读取菌落数量，求出同稀释度的平均菌落数[4]。

表2 生活饮用水样品中细菌总数检测实验操作（3）总大肠菌群检测实验操作（多管发酵法）[5]在做总大肠菌群检测实验操作（表3）时，先用10 mL 无菌移液管吸取待测样品到双料乳糖蛋白胨，再用1 mL 无菌移液管吸取待测液到10 mL 单料乳糖蛋白胨。

1适用范围及标准1.1适用于生活饮用水、水源水、游泳池水中大肠菌群的测定。

1.2技术标准GB/T 5749-2006 《生活饮用水卫生标准》GB/T 5750.12-2006 《生活饮用水标准检验方法微生物指标》DB 31/890-2015《公共游泳场所卫生管理规范》2检测原理2.1 总大肠菌群指一群在37 ℃、24 h培养能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

2.2 耐热大肠菌群指一群在44.5 ℃仍能生长且发酵乳糖产酸、产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

2.3大肠埃希氏菌是指一群能生长发酵乳糖产酸、产气且在含有荧光底物的培养基上44.5 ℃培养24 h产生β-葡萄糖醛酸酶，分解荧光底物释放出荧光产物，使培养基在紫外光下产生特征性荧光的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

3仪器和设备3.1 高压蒸汽灭菌器3.2 冰箱：2 ℃—8 ℃3.3 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃3.4 天平3.5PH试纸3.6恒温水槽：44.5 ℃3.7生物安全柜3.8紫外光灯：6W、波长366nm3.9平皿：直径为9cm3.10试管3.11刻度吸管3.12小倒管3.13 金属接种环4培养基和试剂4.1乳糖蛋白胨培养基：称取乳糖蛋白胨于蒸馏水中加热溶解，充分混匀，分装到带有倒管的试管中(每管10 mL)，115 ℃高压灭菌20min。

（注：双料乳糖蛋白胨即蒸馏水不变，乳糖蛋白胨的成分量加双份。

）4.2伊红美兰琼脂平板：称取伊红美兰琼脂，加热溶解，倾注灭菌平皿，每皿约15ml。

冷凝后，倒置4℃冰箱保存，待用。

4.3革兰氏染色液（染色方法见试剂使用说明书）4.4EC培养基：称取EC培养基干粉，加热溶解，调PH为6.9±0.2，分装到带有倒管的试管中(每管10ml)，121 ℃高压灭菌20 min，备用。

4.510 %（m/m）硫代硫酸钠溶液：121 ℃高压灭菌20 min。

包装饮用水大肠菌群的测定方法操作规程一、目的为了确保包装饮用水的卫生质量，保障消费者的健康，本操作规程旨在规范包装饮用水大肠菌群的测定方法。

二、设备及试剂1.设备-常规实验室设备，如无菌台、培养箱、离心机等-显微镜2.试剂-营养琼脂培养基-取样容器三、样品采集1.样品选择：选择市场上销售的包装饮用水作为样品。

2.样品采集：使用无菌容器采集不同批次、不同品牌的包装饮用水样品，每个样品容量应在100mL以上。

3.样品保存：将采集的样品置于4℃的冰箱中，保存时间不应超过48小时。

四、操作步骤1.样品处理-取出保存的样品，用无菌操作的方法将样品瓶口酒精灯燃烧，再盖上无菌栓。

-抖匀样品，并将100mL样品倒入一个无菌容器中。

2.分液-取出一部分样品，用吸管吸取10mL样品转移到另一个无菌容器中。

3.稀释-在第二个容器中加入90mL无菌蒸馏水，充分混合。

4.传代-取出第二个容器中的10mL样品，转移到第三个容器中。

5.培养-准备好营养琼脂培养基，加热至50-60℃。

-将第三个容器中的样品倒入培养皿，倒入培养基，轻轻旋转培养皿以使样品均匀分布。

-培养皿倒置在无菌台上，将培养皿放入培养箱中，在37℃下培养24-48小时。

6.统计与计数-取出培养箱中的培养皿，使用显微镜在视野范围内计数。

-记录大肠菌群的数量，并计算出单位体积中大肠菌群的数量。

五、结果分析根据计算得出的大肠菌群的数量，比较各个样品的结果，如果有任何一个样品的大肠菌群数量超出国家标准，应判定该样品不符合卫生要求。

六、操作注意事项1.操作过程中必须严格遵循无菌操作的要求，以防止环境污染样品。

2.样品采集后应尽快进行处理，避免样品的质量变化。

3.在操作过程中应避免暴露在空气中，以防感染。

4.培养过程中要控制好温度和时间，避免过度培养或不足培养。

5.操作完成后，要及时清洗和消毒实验器材和台面，避免交叉污染。

七、结论通过以上方法对包装饮用水中的大肠菌群进行测定，可以得出该样品是否符合卫生质量要求的结论，为保护消费者的健康提供参考依据。

饮用水检测报告一、引言饮用水是人类生活中不可缺少的重要资源，对人体健康至关重要。

然而，由于环境污染和生产工艺等原因，水源中可能存在各种污染物。

为了确保饮用水的安全性和卫生质量，进行定期的饮用水检测是必要的。

本报告旨在对饮用水样品进行全面的检测和分析，以评估水质的卫生状况，为用户提供有关饮用水质量的科学依据。

二、检测项目及方法1. 总大肠菌群检测：采用膜过滤法，按照国家标准GB/T 5749-2006《饮用水卫生标准》进行检测。

结果以MPN/100mL表示。

2. 水质PH值检测：使用PH仪，测定水样的酸碱度。

结果以数字形式表示。

3. 重金属检测：采用电感耦合等离子体质谱仪（ICP-MS），检测水样中铅、镉、汞等重金属元素的含量。

结果以微克/升表示。

4. 有机物检测：采用气相色谱-质谱联用仪（GC-MS），检测水样中苯、甲醛等有机物的含量。

结果以毫克/升表示。

5. 阴离子检测：采用离子色谱仪，检测水样中硝酸盐、硫酸盐等阴离子的含量。

结果以毫克/升表示。

三、实验结果及分析1. 总大肠菌群检测结果显示，样品中总大肠菌群的MPN/100mL 为X（数据），符合国家饮用水卫生标准的要求。

2. 水质PH值检测结果显示，样品的PH值为X（数据），介于中性和碱性之间，符合饮用水的正常范围。

3. 重金属检测结果表明，样品中铅、镉、汞等重金属元素的含量均符合国家标准要求，处于安全范围内。

4. 有机物检测结果显示，样品中苯、甲醛等有机物的含量均低于国家标准规定的限量要求，饮用水质量良好。

5. 阴离子检测结果显示，样品中硝酸盐、硫酸盐等阴离子的含量均符合饮用水卫生标准，无安全隐患。

四、结论通过全面的饮用水检测分析，我们得出以下结论：1. 检测样品中总大肠菌群的数量符合国家卫生标准要求，水质卫生状况良好。

2. 样品的PH值表明饮用水的酸碱度适中，适合人体的正常消化。

3. 样品中重金属元素和有机物的含量均符合国家标准要求，无安全风险。

多管发酵法检测生活饮用水中总大肠菌群摘要：总大肠菌群是指一群需氧及兼性厌氧的在37℃生长时能使乳糖发酵、在24小时内产酸产气的革兰阴性无芽胞杆菌。

总大肠菌群既包括存在于人及动物粪便的大肠菌群，也包括存在于其他环境中的大肠菌群。

在日常的检测过程中，特别是在饮用水的检测中，总大肠菌群的检测对检测环境、检测人员的操作水平和经验要求都很高，且检测时间长达三天，因此其检测结果的准确率都和那提高。

笔者在长期检测中对一些检测过程中出现的问题着重进行了归纳，通过反复的试验，和仔细观察后，摸索出了一些规律和方法，在此加以总结，有助于以提高总大肠菌群检测的高效性和准确性。

关键词：饮用水、总大肠菌群、多管发酵根据总大肠菌群应具有的生物特性，如革兰氏阴性无芽胞杆菌，在37℃24h内能发酵乳糖并产酸产气，能在选择性培养基上产生典型菌落。

在检测时可用多管发酵法，以100mL水样中污染的总大肠菌群最可能数（MPN）表示的。

不同的方法标准略有差异，但检测步骤大体相同，即：乳糖发酵实验、分离培养和证实试验。

按《生活饮用水标准检验方法》微生物指标GB5750.12-2006的规定，总大肠菌群检测的步骤为：2.1.5.1乳糖发酵实验（初发酵）；2.1.5.2分离培养；2.1.5.3证实实验（复发酵）。

而检测的难点主要在于步骤2.1.5.1、2.1.5.3中“产酸产气”的确认及步骤2.1.5.2中的菌落形态及染色的确认。

初发酵阳性管，不能肯定就是总大肠菌群，经过证实试验后，有时可能成为阴性。

经过多次观察发现在复发酵成阳性的样品，在初发酵时都有着一些共同的现象。

在此，我们从曾经受过微生物污染水样中选出两个最具代表性的样品（污染1＃污染2＃）为例，加以说明。

1、乳糖发酵实验中产酸与产气的判断：分别取10ml水样接种到5只10ml双料乳糖蛋白胨培养液中，置于36℃±1℃的培养箱内培养24h±2h，如所有乳糖蛋白胨培养管都不产酸产气，则报告总大肠菌群阴性，如产酸产气则进行下一步实验。

水质大肠菌群检测标准和检测方法一、水质大肠菌群检测标准。

1.1 首先啊，咱得知道，在不同的用水场景下，大肠菌群的检测标准是不一样的。

比如说，咱们日常生活里的饮用水，那对大肠菌群的要求就非常严格。

按照国家标准啊，饮用水里的大肠菌群数那得是每100毫升不得检出。

这就好比是在一个干干净净的房间里，连一粒灰尘都不允许有，就是这么严格。

为啥呢？因为大肠菌群要是出现在饮用水里，那可就意味着这水可能被粪便污染了，这喝到肚子里，那还了得，简直就是“病从口入”的典型啊。

1.2 再看一些用于灌溉农作物的水，虽然要求没有饮用水那么严苛，但也有明确的标准。

一般来说，允许有一定数量的大肠菌群存在，但这个数量也是被严格限制的。

就像是在农田里，虽然不是像饮用水那样要求一尘不染，但也不能太“乌烟瘴气”，毕竟这水要是大肠菌群太多，也可能影响农作物的生长，甚至会让农作物带上病菌，这可就是“城门失火，殃及池鱼”了。

二、水质大肠菌群检测方法。

2.1 多管发酵法是一种很常用的方法。

这就像是一场细菌的“大排查”。

首先呢，把水样接种到含有乳糖的培养基里。

这乳糖啊，就像是给大肠菌群准备的“美食”。

然后呢，把接种后的培养基放在合适的温度下培养，一般是37摄氏度左右，这个温度就像是大肠菌群最爱的“安乐窝”温度。

如果水样里有大肠菌群，它们就会在这个培养基里大量繁殖，分解乳糖，产生气体和酸。

这个过程就像是大肠菌群在培养基里“开派对”一样，它们产生的气体就会让小导管里出现气泡，这时候我们就可以初步判断有大肠菌群存在了。

2.2 还有滤膜法。

这个方法有点像“筛沙子”。

把水样通过特制的滤膜，大肠菌群就会被截留在滤膜上。

然后把滤膜放到含有营养成分的培养基上培养。

经过一段时间的培养，大肠菌群就会在滤膜上形成一个个的小菌落。

这就好比是在一片空旷的土地上，大肠菌群建立起了自己的一个个“小部落”。

我们通过观察这些小菌落的数量和特征，就能知道水样里大肠菌群的情况了。

2.3 酶底物法也是一种比较新颖的检测方法。

5750.1-2023生活饮用水标准检验方法
根据5750.1-2023生活饮用水标准，以下是常见的饮用水检验
方法：
1. 总大肠菌群检验：采用MPN法检验，即多管摇底法或多管
浑浊法。

2. 大肠菌群（致病性大肠杆菌）检验：采用培养法或PCR法。

3. 残留氯检验：采用溴酸苯胺法、二氯苯胺法或DPD法。

4. pH值检验：采用玻璃电极法、电极法或试纸法。

5. 悬浮物和沉淀物检验：采用过滤法和称量法。

6. 溶解氧检验：采用溶解氧电极法或青蛙法。

7. 氨氮检验：采用Nessler法、萘酚法或蒸馏-滴定法。

8. 总硬度测定：采用EDTA滴定法。

9. 重金属检验：采用原子吸收光谱法、电感耦合等离子体发射光谱法或电感耦合等离子体质谱法。

10. 有机污染物检验：采用气相色谱法、高效液相色谱法或质
谱法。

注意：以上仅是常见的饮用水检验方法，具体的检验项目和方
法也会根据需要和要求而有所不同。

因此，在具体的实验室操作中应根据标准的要求和方法操作。

水质微生物生活饮用水中总大肠菌群分离培养的操作要点
1. 前期准备：准备所需培养基、试剂、器材,消毒培养器和玻璃仪器。

2. 样品采集：从水龙头或管道的出水口取用小塑料瓶或洗涤过的玻璃瓶,要注意采集过程要避免污染,同时应采用无菌技术。

3. 涂布法分离培养：将所采集样品取出适量,通过涂布法进行分离培养。

可用MacConkey琼脂或Endo琼脂培养基进行涂布,培养基需提前熔化、冷却、均匀涂布。

4. 培养条件：将涂有样品的琼脂培养皿放在37℃条件下孵育24小时,观察是否有生长菌落。

5. 菌落鉴定：对于生长的菌落进行观察、摄影、触摸和质点或形态特征的分析,常用生理生化、药敏试验、酶学等方法对鉴定分离出的总大肠菌群是否符合相关标准进行检测。

6. 记录和报告：记录菌落数、样品代码、操作日期等信息,并根据检测结论输出检测报告。