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文章编号:1000-5404(2010)21-2281-05论著H I V 跨膜蛋白g p 41和g p 36原核表达及抗原性研究袁作为1,帅光泽2,张 君1,胡接力1,郑 建1 (400016重庆,重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室1;610106成都,成都大学校医院内科2) [摘要] 目的 构建H I V 跨膜蛋白g p 41和g p 36原核表达载体,诱导表达H I V 抗原,为H I V 快速诊断和蛋白疫苗研究提供材料基础。
方法 用P C R 方法对H I V -1包膜蛋白g p 41和H I V -2包膜蛋白g p 36基因序列进行全长、截短扩增,分别或以融合表达方式克隆入原核表达载体p Q E 30、p E T 32a (+)及p G S T -M O L U C ,重组质粒经异丙基硫代半乳糖苷(i s o p r o -p y l -β-D -t h i o g a l a c t o p y r a n o s i d e ,I P T G )诱导表达,并经N i -N A T 或谷胱甘肽-S e p h a r o s e -4B 层析柱亲和纯化H I V 跨膜糖蛋白抗原,对获得的纯化抗原进行We s t e r nb l o t 检测,利用H I V 抗原制备E L I S A 检测试剂盒,并分析H I V 临床样本。
结果 成功构建了H I V 包膜蛋白的原核表达载体,利用亲和层析纯化得到了纯度较高的H I V 包膜蛋白;We s t e r n b l o t 分析结果证实表达纯化的H I V 跨膜蛋白g p 41(a a .538～718)、g p 36(a a .533～764)以及g p 41-g p 36均能和H I V 阳性血清反应;E L I S A 试剂盒检测临床样本显示,特异性达95%以上,灵敏度达100%。
结论 获得了有生物学活性的H I V 截短包膜蛋白,并可用于H I V 快速检测试剂盒的研发。
我国HIV-1流行株gp41抗原表位筛选与串联表达冯福民;李敬云;鲍作义;刘思扬;李林;庄道民【期刊名称】《中华微生物学和免疫学杂志》【年(卷),期】2005(025)002【摘要】目的探讨HIV-1 gp41抗原表位串联表达蛋白用于HIV抗体检测的可行性. 方法用HIV-1 gp41蛋白亲和层析柱制备HIV-1感染者血清中的多克隆抗体,用噬菌体展示随机十二肽库进行生物淘洗,反向吸附非特异性噬菌体.经ELISA鉴定阳性克隆,DNA测序,确定优势表位.将优势表位与文献报道的另一个优势表位串联,克隆入pQE30载体进行蛋白表达. 结果成功筛选到位于HIV-1 gp41蛋白上的优势抗原表位(YGPKDAETTAIW),串联表位(YGPKDAETTAIW-GGGS-SCSAKFTCTTQI)在pQE30载体中实现可溶性表达.重组蛋白具有良好的抗原性,能与不同的HIV-1抗体阳性血清呈特异反应. 结论 HIV-1 gp41抗原表位串联表达设计是可行的,串联表位重组蛋白可用于HIV-1抗体检测,但检测灵敏性低于常规方法.【总页数】4页(P124-127)【作者】冯福民;李敬云;鲍作义;刘思扬;李林;庄道民【作者单位】063000,唐山,华北煤炭医学院预防医学系;100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心;100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心;100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心;100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心;100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.HIV-1跨膜蛋白gp41重组抗原的表达及其免疫反应性2.HIV-1包膜蛋白gp41优势抗原的构建及可溶性表达3.模拟HIV-1 gp41 CHR表位短肽的筛选及研究4.HIV-1 GP41第二优势表位簇在大肠杆菌中的高效表达5.用M13噬菌体PⅢ蛋白Ⅰ-Ⅱ结构域表达HIV-1 gp41抗原表位因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
艾滋病的病检测技术有哪些艾滋病的检测技术有哪些艾滋病，一个令人闻之色变的名词。
它是一种严重威胁人类健康的传染病，由人类免疫缺陷病毒（HIV）引起。
及时准确的检测对于艾滋病的诊断、治疗和预防至关重要。
那么，目前都有哪些艾滋病的检测技术呢？首先，我们来了解一下酶联免疫吸附试验（ELISA）。
这是一种常见的血清学检测方法。
它的原理是利用酶标记的抗体与待检测样品中的 HIV 抗原或抗体发生特异性结合，然后通过检测酶的活性来判断结果。
ELISA 检测方法具有较高的敏感性和特异性，能够大规模筛查艾滋病病毒感染。
接着是免疫印迹试验（Western Blot，WB）。
它被认为是艾滋病检测的“金标准”。
在这个检测中，通过电泳将 HIV 蛋白分离，然后将其转移到膜上，再与患者的血清进行反应。
如果血清中存在 HIV 抗体，就会在膜上形成特定的条带。
WB 检测能够准确地确认 HIV 抗体的存在，但操作相对复杂，成本也较高。
快速检测试剂也是常用的检测手段之一。
这种检测方法操作简便、快捷，通常在 15 到 30 分钟内就能得出结果。
常见的有胶体金法和免疫层析法。
快速检测试剂适用于现场检测和初步筛查，比如在一些不具备复杂检测条件的基层医疗机构或紧急情况下使用。
核酸检测技术在艾滋病的诊断中也发挥着重要作用。
核酸检测主要是检测 HIV 的 RNA 或 DNA。
这种检测方法能够在感染后的早期就检测出病毒，大大缩短了检测的“窗口期”。
对于急性期感染、晚期艾滋病患者、婴儿感染诊断以及监测治疗效果等方面具有重要意义。
病毒培养法是一种直接检测病毒的方法，但由于其操作难度大、成本高、对实验条件要求苛刻，一般不作为常规的检测手段。
不过，在一些特殊的研究和疑难病例的诊断中，病毒培养法仍有其不可替代的作用。
除了以上这些实验室检测技术，还有一些基于唾液、尿液等样本的检测方法正在不断发展和完善。
唾液检测相对方便，患者的接受度较高。
尿液检测则具有无创、易于采集的优点。
蛋白表达鉴定
蛋白表达鉴定是生物学研究中的重要环节，主要用于检测蛋白质在细胞或组织中的表达水平。
常用的蛋白表达鉴定方法包括免疫组化法（IHC）、免疫印迹法（WB）以及质谱分析等。
1.免疫组化法（IHC）：这是一种在组织或细胞水平上检测蛋白表达的方法。
它利
用已知的特异性抗体或抗原能特异性结合的特点，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色，从而对组织细胞内的抗原（主要为蛋白质）进行定性、定位及相对定量研究。
2.免疫印迹法（WB）：又称蛋白质印迹，主要利用SDS-PAGE技术将蛋白质按
分子量的大小进行分离，然后用电转移的方法将蛋白转移到固相膜上，再利用特定的抗体进行检测。
这种方法可以确定蛋白质的分子量、组成和纯度。
3.质谱分析：质谱技术可用于蛋白质组学的定量研究，是实现蛋白表达水平检测
的重要手段。
除了以上方法，近年来兴起的CITE-seq技术也可以用于蛋白表达鉴定。
这种技术可以一次性获得单个细胞的mRNA和蛋白的表达量，从而提高了细胞亚群分类的精度，并有助于识别罕见的细胞亚群。
总的来说，蛋白表达鉴定是一个复杂而精细的过程，需要多种方法的结合使用，以确保结果的准确性和可靠性。
在实际研究中，应根据具体的实验需求和条件选择合适的方法进行蛋白表达鉴定。
几种HIV抗体免疫检测技术艾滋病全称：获得性免疫缺陷综合征，英文简写：HIV，是一种危害性极严重的传染病，是因为受到HIV病毒感染所导致的疾病，HIV病毒是一种以攻击人体免疫系统的病毒。
目前我国的艾滋病患病率一直呈现出上升的趋势，面对这种情况就需要采取相应的措施以控制艾滋病患病率上升的趋势，此刻便对我国现目前的几种HIV抗体免疫检测技术方法进行科普，通过几种HIV抗体免疫检测技术使得医院能够尽早的发现HIV病感染者，对其进行相应的治疗和健康教育，避免HIV病毒的传染传播。
一、ELISA和WB检测技术ELISA：此种检测技术，主要是以病毒抗原包被反应板，运用间接法原理检测HIV抗体，其中这种检测技术拥有四代试剂：第一代ELISA试剂：抗原是HIV全病毒裂解物，特点是能够有效地检测出HIV，存在一定的假阳性率。
第二代ELISA试剂：抗原在细菌或者是真菌当中表达的人工重组HIV抗原或化学合成的HIV 抗原多肽，特点是单一性的抗原取代了多样性的混合抗原，其特异性要比第一代ELISA试剂好。
第三代ELISA试剂：合成的HIV抗原多肽（有些用了重组抗原），特点是应用了双抗原夹心法原理来检测HIV抗体，能够同时检测HIV-1 IgG、IgM、IgA 抗体，并且其敏感性与特异性都要比第一代ELISA试剂和第二代ELISA试剂还好。
第四代ELISA试剂：第四代ELISA试剂主要是在第三代的基础上针对P24抗原和HIV-1抗原一起包被固相载体，特点是能够同时检测 HIV-1 IgG、IgM、IgA 抗体和P24 抗原。
WB检测技术：WB检测技术是属于体外检测和鉴定HIV抗体的方法，主要是用于确证ELISA 检测阳性的个体。
其原理是以病毒抗原、重组抗原或合成肽，在SDA-PAGE电泳后转至硝酸纤维素膜上，随后再与血清或血浆中的HIV的抗体结合，最后通过显色反应来确定条带的存在。
二、HIV抗体快速检测技术关于HIV抗体快速检测技术是建立在ELISA和WB的检测基础上发展的，其主要的特点是能够在较短的时间内通过相对简单的操作就能够及时并且较准确地得到检测结果。
b细胞识别的抗原表位引言b细胞是免疫系统中的一类重要细胞，它们具有在身体抗病毒和细菌等外源性抗原入侵时起到关键作用的能力。
b细胞通过识别抗原表位来激活并产生抗体，从而对抗疾病的发生和发展起到重要的保护作用。
本文将探讨b细胞识别的抗原表位的相关概念、机制以及其在免疫应答中的作用。
抗原表位的概念抗原表位是指能被免疫系统中的抗体、t细胞受体等识别并与之结合的抗原分子上的特定区域。
它们通常是由抗原分子上的氨基酸残基组成的，可以是线性的或者是三维空间结构上的特定区域。
b细胞主要通过识别抗原分子上的线性表位进行抗原识别。
b细胞识别抗原表位的机制b细胞通过其表面上的b细胞受体（bcr）来识别抗原表位。
bcr是由可变区和恒定区组成的跨膜受体，其可变区可以与抗原表位结合。
b细胞的bcr通过其可变区的抗原结合位点识别抗原表位上的特定氨基酸序列，从而激活b细胞并导致抗体的产生。
b细胞受体的可变区由多个基因片段的重组形成，这种基因重组的机制称为vdj重组。
在发育过程中，b细胞通过vdj重组产生多样的bcr，每个b细胞都具有不同的抗原识别特性。
当病原体入侵机体时，具有与抗原表位匹配的b细胞可以与其结合，并启动相应的免疫应答。
b细胞识别抗原表位的影响因素b细胞的抗原识别能力受到多个因素的影响，包括抗原表位的结构、抗原的浓度、代表识别能力的b细胞受体的亲和力等。
抗原表位的结构抗原表位的结构决定了它与b细胞受体的结合能力。
一般来说，线性表位更容易被b细胞识别，而三维空间结构上的表位则需要b细胞受体的可变区进行更精确的结合。
抗原的浓度抗原的浓度也会影响b细胞的抗原识别。
高浓度的抗原可以更容易地与b细胞受体结合，从而激活b细胞。
而低浓度的抗原则需要更高亲和力的b细胞受体进行识别。
b细胞受体的亲和力b细胞受体的亲和力是指其与抗原表位结合的力度。
亲和力较高的b细胞受体对抗原的识别更为敏感，可以较快地被激活并产生抗体。
而亲和力较低的b细胞受体则需要更高浓度的抗原来实现识别。
第３１卷 第６期２ ０ １ ５年１１月 病 毒 学 报ＣＨＩＮＥＳＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＶＩＲＯＬＯＧＹ Ｖｏｌ．３１ Ｎｏ．６Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１５Ｉ～ＩＶ型登革病毒包膜蛋白Ｂ细胞中和表位的鉴定林亚英１，温坤１，郭勇晖１，丘立文１，潘玉先１，余楠１，狄飚２，陈月１，３＊（１．南方医科大学珠江医院检验医学部，广州５１０２８２；２．广州市疾病预防控制中心，广州５１０４４０；３．广州军区疾病预防控制中心，广州５１０５０７）摘要：登革病毒包膜蛋白（Ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓ ｅｎｖｅｌｏｐｅ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＤＥＮＶ Ｅ）是诱导中和抗体主要的蛋白，登革病毒包膜蛋白ＩＩＩ区（Ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓ ｅｎｖｅｌｏｐｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｏｍａｉｎⅢ，ＤＥＮＶ ＥＤⅢ）是构建ＤＥＮＶ亚单位疫苗的主要靶标，但是其Ｂ细胞中和表位目前了解不多。
我们采用两组覆盖ＤＥＮＶ－１ＥＤⅢ的重叠多肽（１２肽和１６肽）同２７株针对ＤＥＮＶ－１ＥＤＩＩＩ中和单抗反应，筛选ＤＥＮＶ ＥＤⅢ上Ｂ细胞表位。
采用该方法，我们发现了一高度保守的Ｉ～ＩＶ型ＤＥＮＶ共同交叉中和Ｂ细胞表位和一高度保守的ＤＥＮＶ－１血清型特异性Ｂ细胞中和表位，分别位于ＤＥＮＶ－１Ｅ蛋白氨基酸残基序列第３０９～３２０位和第３８１～３９２位（Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ３０９～３２０，ａｎｄ ３８１～３９２；ａａ ３０９～３２０和３８１～３９２）。
Ｉ～ＩＶ型ＤＥＮＶ共同交叉中和Ｂ细胞表位在Ｉ～ＩＶ型ＤＥＮＶ分离株中存在高度保守共同序列３１０ ＫＥ－ＶＡＥＴＱＨＧＴ３１９，ＤＥＮＶ－１Ｅ蛋白中Ｅ３０９、Ｖ３１２、Ａ３１３和Ｖ３２０不影响蛋白抗原性。
ＤＥＮＶ－１血清型特异性Ｂ细胞中和表位（ＤＥＮＶ－１Ｅ蛋白氨ａａ ３８１～３９２）在ＤＥＮＶ－１分离株中高度保守，在黄病毒属其它病毒中不保守。
我们也发现一具有ＤＥＮＶ－１分离株特异性的Ｂ细胞中和表位位于ＤＥＮＶ－１Ｅ蛋白氨基酸残基序列第３２９～３４８位。
B细胞表面标志的检测B细胞具有多种特异性抗原和受体，据此建立了相应的检测方法，一般用以研究B细胞各分化发育阶段的特性，也可藉以鉴定和计数各阶段B细胞在人外周血和淋巴样组织的分布以及疾病时的变化动态，为临床提供诊治相关疾病的有用信息。
一、B细胞表面抗原的检测B细胞表面有CD19、CD20、CD21、CD22和CD29等分化抗原，其中有些系全部B细胞所共有，而有些仅活化B细胞所特有，据此可用相应的CD系列单克隆抗体，通过间接荧光免疫法、酶免疫组化或ABC法加以检测。
健康成年人外周血CD20阳性细胞约占淋巴细胞总数的8％～12％。
二、B细胞受体的检测B细胞表面有膜免疫球蛋白（SmIg）、Fc受体、补体受体、EB病毒受体和小鼠红细胞受体，其中以SmIg为B细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指标。
（一）SmIg的检测大多采用间接荧光免疫法或包括ABC法在内的酶免疫组化法，关键是选用高效价、高特异性和高和力的荧光或酶标记的多价抗人Ig抗体，也可分别用各种类型的Ig，即IgM、IgG、IgA、IgE等抗血清，检测带有各种类型Ig的B细胞，在人外周血中以带有SmIgM的细胞数为最多。
B细胞经荧光标记的抗Ig抗体染色，细胞膜表面呈现的荧光着色可有不同的形式，开始均匀分布呈环状，其后集中在某些部位呈斑点状，然后又可集在一个部位呈帽状，最后可被吞饮入胞浆直至荧光消失。
这一现象是由于淋巴细胞膜由双层类脂组成，上嵌有蛋白分子，在体温条件下，膜呈半液体状，而镶嵌物能在其中移动。
当SmIg抗体发生结合时，由于抗血清为双价，使SmIg出现交联现象，这种抗原与抗体结合物可连成斑点和帽状，时间过长，帽状结合物可脱落或被吞饮而消失，因此染色后，观察时间不能超过30min，或在染色时加叠氮钠防止帽状物形成或被吞饮。
（二）Fc受体和补体受体的检测B细胞表面具有与IgGFc段结合的受体，极易与抗原抗体复合物中抗体Fc段牢固结合，故用相应抗体致敏的红细胞(EA)作批示物，在一定条件下，它能与带Fc受体的B细胞形成EA花环，故称EA花环试验。
