酪蛋白磷酸肽酶解工艺条件的优化研究
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对不同温度酶解液制备酪蛋白磷酸肽的探讨
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Ｃ Ｐ 产 品和标 准 品配置 成 ３％的溶 液 １０ｍ ，并 调 Ｐｓ ０ Ｌ
舢
ｐ Ｈ至 ８ ， ． 微孔 过滤后 上 Ｓ ｐａ ｅ 一 ５柱 ， ０ ｅｈ ｄｘＧ ２ 检测 波长
为 ２０ｎ ２ ｍ和 ２ ０ ｍ。 ８ ｎ
１ ． 酪蛋 白磷酸肽 的检测 ．３ ３ 总氮 含量用微 量凯 氏定 氮法测定 ， 算氮 与磷 的 计
ｂ ｓｉ ｃｓＭｌ— ｉ ｅ 超 纯 水 仪 ： ｉｉｏ ｉｃ ｎｅ； ｉｉＱ Ｂｏ ｌ ｏ ｅ ｌ ｃ Ｍｌｐｒ 司 ； ｌ ｅ公
Ｕｎ ｒｅｅ３ １ ｌａ ｅｚ ４ ０超低 温 冰箱 ： ｅ — ｏｅ Ｆ Ｈ ｔ Ｈ ｈ ｎ公 司 ； ｅ ｏ Ｈｔ ｏ Ｌｏ ａ ０ ０冷冻 干燥 机 ： ｅ — ｏ ｅ 司 ； Ｑ ０ Ｄ ｙＬｂ３ ０ Ｈ ｔ Ｈ ｌｎ公 ｏ ｔ Ｋ １０ Ｅ
关键词 ： 酪蛋 白磷 酸肽 ； 葡聚糖凝胶 ； 离纯化 ； ／（ 尔比） 分 ＮＰ 摩
Ｄｉｃ ｓｏ ｆＰｒ ｐａ ａ ｉ ｎ ｏ ｓ ｉ Ｐｈｏ ｐｈ ｐｅ ｉ ｓｏ ｚ ｓ ｕｓｉ ｎ ｏ ｅ ｒ ｔｏ ｆＣａ ｅｎ ｓ ｏ ｔｄｅ ｆＥｎ ｙｍｅ Ｓ ｌ ｔｏ ｔＶａ ｉ ｕ ｍｐｅ ａ ｕｒ ｓ ｏ ｕ ｉ ｎ ａ ｒｏ ｓＴｅ ｒ ｔ ｅ
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为 ２０ｎ ２ ｍ和 ２ ０ ｍ。 ８ ｎ
１ ． 酪蛋 白磷酸肽 的检测 ．３ ３ 总氮 含量用微 量凯 氏定 氮法测定 ， 算氮 与磷 的 计
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关键词 ： 酪蛋 白磷 酸肽 ； 葡聚糖凝胶 ； 离纯化 ； ／（ 尔比） 分 ＮＰ 摩
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生物实验：酪蛋白磷酸肽制备
动物对矿物质离子的吸收利用。在低钙日粮中CPPs可提 高蛋鸡的蛋壳强度，增强机体的体质，减少腿病的发生。 在种猪日粮中添加CPPs能显著提高卵细胞的受精率，提 高种蓄繁殖性能。对怀孕母蓄及种用家蓄，防止营养性 缺铁贫血，显著提高仔猪血清中特异性IgA、IgM、IgG 的含量，从而增强仔猪的免疫力。
CPPs①安全性好。制取CPPs的原料是一种天然蛋 白质，且CPPs对畜禽健康毫无损害。②稳定性好。 CPPs在常温下稳定性好，防止钙沉淀，商品CPPs在5℃ 和25℃保存两年后，其功能指标仅下降1%和3%。③成 本低。CPPs在实际添加量非常小的情况下就能起到很有 效的促进作用，且其加工工艺日趋完善，生产成本也将 逐步降低。
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10、阅读一切好书如同和过去最杰出 的人谈 话。12:45:4512:45:4512:457/12/2021 12:45:45 PM
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11、一个好的教师，是一个懂得心理 学和教 育学的 人。21.7.1212:45:4512:45Jul- 2112-J ul-21
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12、要记住，你不仅是教课的教师， 也是学 生的教 育者， 生活的 导师和 道德的 引路人 。12:45:4512:45:4512:45Monday, July 12, 2021
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5、You have to believe in yourself. That's the secret of success. ----Charles Chaplin人必须相信自己，这是成功的秘诀。-Thursday, June 17, 2021June 21Thursday, June 17, 20216/17/2021
酪蛋白磷酸肽的生物活性表现为，在pH呈中性至微 碱性的动物小肠下端,能与Ca+2、Fe+2和Zn+2等金属离子 结合,阻止这些金属离子与磷酸根结合产生沉淀,使小肠内 可溶性的钙、铁和锌的浓度增加,从而促进这些必需金属 离子的吸收和利用。
CPPs①安全性好。制取CPPs的原料是一种天然蛋 白质，且CPPs对畜禽健康毫无损害。②稳定性好。 CPPs在常温下稳定性好，防止钙沉淀，商品CPPs在5℃ 和25℃保存两年后，其功能指标仅下降1%和3%。③成 本低。CPPs在实际添加量非常小的情况下就能起到很有 效的促进作用，且其加工工艺日趋完善，生产成本也将 逐步降低。
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酪蛋白磷酸肽的生物活性表现为，在pH呈中性至微 碱性的动物小肠下端,能与Ca+2、Fe+2和Zn+2等金属离子 结合,阻止这些金属离子与磷酸根结合产生沉淀,使小肠内 可溶性的钙、铁和锌的浓度增加,从而促进这些必需金属 离子的吸收和利用。
酪蛋白磷酸肽及其在食品工业中的应用
Sample
Concentration (mg/ml)
GSH(nmol/mg protein)
CAT (sec-1/mg protein)
SOD (U/ml cell homogenate)
GSH-Rd (% of control)
GSH-Px (% of control)
Control
CPPs
1
钙一乙醇沉淀法生产CPPs的工艺路线：酪蛋白一胰 蛋白酶水解一酪蛋白水解液一钙一乙醇沉淀一分离 一干燥--CPPs产品
膜分离法生产CPPs的工艺路线：酪蛋白一酪蛋白水 解液一过滤一分离一喷雾干燥一CPPs产品
典型的CPPs制备工艺
⑴ 酶解
目前，一般采用专一性蛋白酶如胰蛋白酶、 胃蛋白酶、碱性蛋白酶、Alcalase(DH一16%～20% )、胃蛋白酶一胰蛋白酶、胰蛋白酶一中性蛋白酶 、凝乳酶一胰蛋白酶等，水解酪蛋白制取CPPs。
–液态奶、乳饮料、婴幼儿奶粉、学生配方奶、高钙低 脂奶等
• 儿童营养食品
– 婴儿营养米粉、高钙饼干等
• 豆制品
– 高钙豆奶粉、钙豆腐等
• 防龋齿的牙膏、口香糖等 • 啤酒等含气饮料
– 可使泡沫细腻、持久，并促进其中的矿物质吸收
3.5 CPPs的其他应用
• CPPs在医学上的应用
–佝偻病、牙科病、骨质疏松症等疾病的治疗 –制备促进动物体外受精、细胞融合的生化制剂
在降低水解所用酶成本方面，国内学者采用了 固定化酶体系。吴思方等通过正交试验确定了固定 化酶酶解酪蛋白生产CPPs的最佳工艺条件。
陈庆森等确定了固定化最佳条件,以GM201为载 体的固定化酶活力回收为19%,而以壳聚糖为载体的 固定化酶活力回收达到了66%以上,其最适温度为 45℃,最适pH8.0,最适底物浓度为4.0%,利用固定化 酶水解酪蛋白40min所制备CPPs的产率达7.54%。
天然功能性食品添加剂——酪蛋白磷酸肽研究进展
天然功能性食品添加剂——酪蛋白磷酸肽的研究进展摘要：酪蛋白磷酸肽( CPPs) 是含有成簇的磷酸丝氨酸的生物活性肽，现已证明，CPPs 具有重要生理功能。
本文就CPPs 的结构、理化性质、制备工艺、检测方法、生理功能及应用进行了系统的概述。
关键词：酪蛋白磷酸肽；结构；制备；生理功能；应用引言酪蛋白磷酸肽（Casein Phosphope Ptides，CPPs）是以牛奶酪蛋白为原料，经过单一或复合蛋白酶的水解，再对水解产物分离纯化后得到的含有磷酸丝氨酸簇的天然生理活性肽[1]。
CPPs能促进机体肠粘膜对钙、铁、锌和硒，尤其是钙的吸收和利用，被誉为“矿物质载体”。
CPPs是目前唯一促进钙吸收的活性肽，同时在提高机体免疫力、改善繁殖性能等方面也有重要作用。
日本、德国等国家已把CPPs定为功能性食品，与CPPs相关的研究越来越受到我国科学家和食品工作者的广泛关注。
1 CPPs的结构牛乳酪蛋白的主要成分为αs1、αs2、β和κ-酪蛋白，除κ一酪蛋白外，α和β一酪蛋白都具有成簇存在的磷酸丝氨酸残基(Ser一P)。
酪蛋白经体外酶水解后，产生CPPs，CPPs的核心部位是由3个磷酸丝氨酸残基组成的一个一Ser(P)一残基簇，后面紧接着2个一Glu一残基，即一serP一SerP一SerP一Glu一Glu一，现已证明这个结构是发挥其生物活性必不可少的。
Hiroshil等1974年用动物实验表明，酪蛋白可在动物体内形成CPPs，并确定其结构为serP一serP-SerP一Glu一Ile一Pro一Asn。
1996年Nieholasf 习等用胰蛋白酶水解酪蛋白，得到包含有一SerP一SerP一SerP-Glu一Glu一序列的CPPs，从而得知了CPPs实际上是一类含有磷酸丝氨酸和谷氨酸的短肽，其产品分子量不均一[2]。
2 CPPs的理化性质2.1 溶解性 CPPs 产品具有良好的溶解性，其pH值为2.0～10.0，其溶解性除在pH值4.0 约为90%外，其他均高于90%，且溶解性随 pH 值的增高而增大。
酪蛋白酶解产物的结构特征研究
酪蛋白酶解产物的结构特征研究柳甜甜;王金水;高芸芳;李晓伟;周晓配;贾峰【摘要】用超声波对酪蛋白进行预处理之后,利用胰蛋白酶对其进行酶解,检测酶解后产物的表面特征、粒度分布及二级结构等指标,探讨酪蛋白酶解产物的结构特征变化特征.结果表明:用超声波辅助处理后,酪蛋白酶解液的酶解产物与未采用超声波辅助处理的结果相比,产物的粒度更小且分布均匀,酪蛋白表面的孔洞化和层片化更快,随着酶解时间的延长,酪蛋白酶解产物颗粒的粒度变小,分子量分布更加均匀;酪蛋白酶解产物中β-转角和无规则卷曲减少,而β-转角的含量增加.结果表明超声波辅助处理对酶解酪蛋白有很好的促进的作用.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2016(037)008【总页数】6页(P14-19)【关键词】酪蛋白;酶解产物;二级结构;超声波;傅里叶红外光谱(FTIR)【作者】柳甜甜;王金水;高芸芳;李晓伟;周晓配;贾峰【作者单位】河南工业大学生物工程学院,河南郑州 450001;河南工业大学生物工程学院,河南郑州 450001;河南工业大学生物工程学院,河南郑州 450001;河南工业大学粮油食品学院,河南郑州 450001;河南工业大学生物工程学院,河南郑州450001;河南工业大学生物工程学院,河南郑州 450001【正文语种】中文酪蛋白（casein，CN）是牛乳中的主要蛋白质，分子质量大约为20 kDa～25 kDa，呈酸性，由αs1-酪蛋白、αs2-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白等四类组分组成[1]，是一类含磷的蛋白质[2]，能够协助参与核酸、三磷酸腺苷（ATP）等重要的代谢活动。
但是由于这4种单体通过α-螺旋、β-折叠和β-转角等蛋白质二级结构形成了紧密的酪蛋白空间结构，使其在人体内消化困难，且易过敏，这些因素限制了酪蛋白在食品领域的应用。
然而，近年来在酪蛋白水解物中发现很多具有重要生理功能的多肽，如：阿片肽[3]、降血压肽[4]、抗血栓肽、免疫促进肽[5]、促进矿物离子吸收肽等，而这些多肽大约在1 000 Da左右，容易被肠道吸收[3]。
酪蛋白酶解制活性肽的工艺条件
Ｔ ｃ ｎ ｌｇ ｆ ｂ ｉ ｉｅｓｔ ｆ ｅ ｈ ｏｏ ｙ Ｗｕ ａ ３ ０ ８ Ｈｕ ｅ， ｈｎ ） ｅ ｈ ｏｏ ｙｏ ｅ ｖ ｒｉ ｏ ｃ ｎ ｌｇ ， ｈ ｎ４ ０ ６ ， ｂ ｉＣ ｉａ Ｈｕ Ｕｎ ｙ Ｔ
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食品生物技术
停留时间分布函数实验测定
循环体系先以磷酸缓冲液做补液,待渗透通量稳定后,将补液迅速切换为已制 得的多肽水解液(经6000Da中空纤维膜过滤),并连续检测280nm下渗流液的吸 光度值变化。
Page 6
1.材料与方法 1.材料与方法
Page 7ຫໍສະໝຸດ 2.理论分析 2.理论分析
动力学模型推导如下：对连续酶解反应过程做如下简化 与假设: ①近似认为超滤膜组件对胰蛋白酶及酪蛋白完全截留； ②酶解前经底物循环保护后可忽略膜组件对该酶的活性影 响； ③酶解单元遵循单底物拟均相不可逆酶促反应动力学方程； ④酶解操作达稳态时因体积 V反应器》V中空纤维膜，渗透通量 J循环》J 渗流，故可认为CSTR/UF的动力学行为近似等效于 CSTR； ⑤暂不考虑物质在膜上的传质行为。
Page 16
3.结果与讨论 3.结果与讨论
3.5 CSTR/UF组合酶膜反应 器中胰蛋白酶连续水解酪 蛋白动力学建模
3.5.1停留时间分布函数验证 图7为升阶示踪应答法检测得 到的停留时间分布函数。可 见,CSTR/UF反应器F(t)函数 的实验测定值与理想全混流 反应器CSTR 的理论分布函数 F(t)=1-e -t/(V/J) 相吻合,可认 为二者具有相同的操作方程, 这与模型推导中所做假设(4) 一致。
Page 17
3.结果与讨论 3.结果与讨论
3.5.2 动力学模型拟合验证
代入X与修正空时之间的函数关系 式(1)得到模型拟合曲线,见图8, 理论计算值与实验测定值之间的 平均相对误差为10.63%,这可能是 因为在简化建模时未考虑酶解反 应的膜上行为所致。 此外,忽略反应过程中因剪切或生 热所造成的酶蛋白失活而引入的 正误差是造成τ增大时,拟合值整 体偏高的主要原因。
酶解酪蛋白生产生物活性肽的研究现状及开发前景
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抗高血压肽 DEB=;AF351=5B?;G5 353=;<5H 血管紧张素转化酶 &E)I ’ 是一种多功能 的 酶 !
$
&!’ 基 因 工 程 方 法 $ 采 用 基 因 工 程 技 术 7 让 某 些 功能明确的活性肽在工程细菌或工程动植物中得到 高效表达 7 从 而 达 到 商 业 化 生 产 的 目 的 $ 人 们 在 这 方 面的工作还是初步的! 在转基因鼠的乳汁中得到了 牛 乳 !! 酪 蛋 白 的 表 达 产 物 ! 并 且 进 行 了 纯 化 ! 牛 乳 的"! 乳白蛋白也在转基因鼠的乳汁中得到表达 $8%$ 通 过基因工程的方法生产分子量较大的肽和蛋白质已 被广泛应用! 而许多生物活性肽都是短肽! 所以也 限制了这种方法的使用 $ & "’ 化 学 合 成 方 法 $ 化 学 合 成 法 用 于 生 产 高 价 的药理级肽! 但是此法的成本相当高! 而且副产物 会对人体有害 ! 因此使用受到限制 $ 总之! 目前生物活性肽的研究开发主要采用微 生物蛋白酶的方法! 国内外在植物蛋白和动物蛋白 的开发研究中利用的微生物蛋白酶已建立的良好的 实验依据! 发现微生物蛋白酶大多具有溶解性好(
56.76,89:; )*+,- 水解酪蛋白得到的酪蛋白水解产物中
都分离到了 !#) 酪 蛋 白 & ./0(*12(312 ’ 和 ! ! 酪 蛋 白 &405(*12(*12 ’ 具有降血压作用的肽段 ! 但是此法存 在对菌种依赖性较大! 如果没有优良的发酵菌种! 那么降低生产成本而实现工业化生产必然存在许多 困难* 另外还存在菌种的安全评价和相关产物分析 等问题
$
& ’’ 微 生 物 发 酵 法 $ 此 法 生 产 多 肽 是 近 年 来 逐 步发展起来的很前景的技术! 直接利用微生物发酵 过 程 中 产 生 的 蛋 白 酶 &复 合 ’ 降 解 蛋 白 质 ! 可 达 到 较高的水解度! 从而相对地降低酶法生产活性肽的 成 本 ! 例 如 ! 在 接 种 了 23456.76,89:; 的 牛 乳 和 用 234
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抗高血压肽 DEB=;AF351=5B?;G5 353=;<5H 血管紧张素转化酶 &E)I ’ 是一种多功能 的 酶 !
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都分离到了 !#) 酪 蛋 白 & ./0(*12(312 ’ 和 ! ! 酪 蛋 白 &405(*12(*12 ’ 具有降血压作用的肽段 ! 但是此法存 在对菌种依赖性较大! 如果没有优良的发酵菌种! 那么降低生产成本而实现工业化生产必然存在许多 困难* 另外还存在菌种的安全评价和相关产物分析 等问题
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酪蛋白磷酸肽(CPP)制取、理化特性及其促铁吸收的研究
东北农业大学 硕士学位论文 酪蛋白磷酸肽(CPP)制取、理化特性及其促铁吸收的研究 姓名：牟光庆 申请学位级别：硕士 专业：动物食品科学 指导教师：骆承庠
19991101
牟光庆
摘
要
１９９９年１２月
摘要
酪蛋白磷酸肽（ｃＰｐ）是极具研究开发价值的生物活性肽。本课题对ＣＰＰ制取工艺条 件、产品检测、粗品脱苦方法、产品理化特性、促铁吸收效果等进行了全面深入的研究。
酪蛋白 “ｓｌ一酪蛋白 “靶一酚蛋白 ．』一酪蛋白
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九十年代，ＣＰＰ促进铁吸收的作用逐渐引起重视。Ｓａｉｔｏ（１９９０）“７１研究认为ＣＰＰ通过 增加无机铁的溶解性能促进铁在肠道中的吸收。Ｈｉｒｏｓｈｉ（１９９３）““在研究乳铁蛋白对铁 的吸收影响时对ＣＰＰ促铁吸收进行了研究，发现在碳酸氢钠或磷酸钠缓冲液中（ｐＨ７ ５）， 调节ｐＨ６．５～７ ４，ＣＰＰ能明显增强铁的溶解性和吸收性。１９９７。他经过进一步研究认为 ＣＰＰ促进铁在肠道中吸收的能力依赖于磷酸基团的数量，而与其分子量设有明显关 系…。
一２一
牟光庆
第一章前言
９９９年１２月
５０年代初，Ｍｅ［１ａｎｄｅｒ等”１首次用胃蛋白酶和胰酶作用于酪蛋白得到了ＣＰＰ，他们发现 在生理ｐＨ值下，ＣＰＰ的钙盐具有非常好的溶解性，并且发现，患有佝偻病的小孩服用酪蛋 白的胰酶消化液可以强化骨骼的钙化。１９５８年，Ｒｅｅｖｅｓ等ｏ’利用动物体外试验表明，ＣＰＰ 可以在中性和偏碱性条件下阻止钙的沉淀，从而促进钙在小肠中的吸收。Ｌｅｅ等”…和Ｓａ— ｔｏ（１９８６）“”也先后证明ＣＰＰ具有促进钙质吸收功能。Ｓａｔｏ用含有ＣＰＰ的食物喂养大鼠， 并在食物中加入同位素标记的钙，发现其大腿骨骼中的标记钙明显高于对照。Ｈｅａｎｃ），等 （１９９４）”１也利用放射线标记的钙让停经的妇女服用，以探讨ＣＰＰ是否具有促进钙吸收的 功效，结果显示ＣＰＰ对钙的吸收确实有正面的影响。国内张亚非等（１９９４）“２’也通过动物 试验证明，无论是低钙饲料还是基础饲料，添加一定量的ＣＰＰ后，可显著增加断乳大鼠对 钙的吸收率和储留率，但没能证明钙的利用率有显著变化。
19991101
牟光庆
摘
要
１９９９年１２月
摘要
酪蛋白磷酸肽（ｃＰｐ）是极具研究开发价值的生物活性肽。本课题对ＣＰＰ制取工艺条 件、产品检测、粗品脱苦方法、产品理化特性、促铁吸收效果等进行了全面深入的研究。
酪蛋白 “ｓｌ一酪蛋白 “靶一酚蛋白 ．』一酪蛋白
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九十年代，ＣＰＰ促进铁吸收的作用逐渐引起重视。Ｓａｉｔｏ（１９９０）“７１研究认为ＣＰＰ通过 增加无机铁的溶解性能促进铁在肠道中的吸收。Ｈｉｒｏｓｈｉ（１９９３）““在研究乳铁蛋白对铁 的吸收影响时对ＣＰＰ促铁吸收进行了研究，发现在碳酸氢钠或磷酸钠缓冲液中（ｐＨ７ ５）， 调节ｐＨ６．５～７ ４，ＣＰＰ能明显增强铁的溶解性和吸收性。１９９７。他经过进一步研究认为 ＣＰＰ促进铁在肠道中吸收的能力依赖于磷酸基团的数量，而与其分子量设有明显关 系…。
一２一
牟光庆
第一章前言
９９９年１２月
５０年代初，Ｍｅ［１ａｎｄｅｒ等”１首次用胃蛋白酶和胰酶作用于酪蛋白得到了ＣＰＰ，他们发现 在生理ｐＨ值下，ＣＰＰ的钙盐具有非常好的溶解性，并且发现，患有佝偻病的小孩服用酪蛋 白的胰酶消化液可以强化骨骼的钙化。１９５８年，Ｒｅｅｖｅｓ等ｏ’利用动物体外试验表明，ＣＰＰ 可以在中性和偏碱性条件下阻止钙的沉淀，从而促进钙在小肠中的吸收。Ｌｅｅ等”…和Ｓａ— ｔｏ（１９８６）“”也先后证明ＣＰＰ具有促进钙质吸收功能。Ｓａｔｏ用含有ＣＰＰ的食物喂养大鼠， 并在食物中加入同位素标记的钙，发现其大腿骨骼中的标记钙明显高于对照。Ｈｅａｎｃ），等 （１９９４）”１也利用放射线标记的钙让停经的妇女服用，以探讨ＣＰＰ是否具有促进钙吸收的 功效，结果显示ＣＰＰ对钙的吸收确实有正面的影响。国内张亚非等（１９９４）“２’也通过动物 试验证明，无论是低钙饲料还是基础饲料，添加一定量的ＣＰＰ后，可显著增加断乳大鼠对 钙的吸收率和储留率，但没能证明钙的利用率有显著变化。
响应面法优化酶法制备酪蛋白糖巨肽的工艺条件
ｂ ｔ ｅ ｉ ｌｃ ａ ｉ ｎｄ ｍ ａｎ ｆ ｃ ｏ ｓ ｏ ｚ ｅ ｗｅ ｎ ｓａ ｉ ｃ ｄ ａ ｉ ａ ｔ ｒ ｆｅｎ ｙｍ ｅ ｈ ｒ ｙｓｓ ｃ ｎｄ ｔｏ ．Ｔｈｅ Ｒ— ｑ ｒ ｄ ｉ ｈｅ ｍ ｏｄ ｌｏ ｅ ｅ ｓｏｎ ｅ ｕａｉ ｙｄ ｏｌ ｉ ｏ ｉｉｎｓ ｓ ｕａ ｅ ｎ ｔ ｅ ｆｒ ｇｒ ｓ ｉ ｑ ｔｏｎ
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响应 面 法优 化 酶 法 制 备 酪 蛋 白糖 巨肽 的 工 艺 条 件
王艳 萍 ，赵 运 星 ， 张伊 然 ， 尚 柯
（ 品 营 养 与 安 全 教 育 部 重 点 实 验 室 ，天津 科 技 大 学 食 品 工 程 与 生 物 技 术 学 院 ，天 津 ３ ０ ５ ） 食 ０ ４ ７
ｓｓｃ ｎ ｉ ｏ ｓｗａ ｐ ｉ ｚ ｄ ｂ ｓｇ ｘ ｅ ｓ ｓｅ Ｔｈ ｅ ｒ ｓ ｉ ｎ ｅ ｕ ｔｏ ｓ ｅ ｔｂ ｉ ｅ ｙ ｅ ｐ ｅ ｓｎ ｅ ａｉ ｎ ｈ ｐ ｉ ｏ ｄ ｔ ｎ ｓｏ ｔ ｉ ｍｉｅ ｙ Ｄｅ ｉ ｎ Ｅ ｐ ￣ ｙ ｔ ｍ． ｅ ｒ ｇ ｅ ｓｏ ｑ ａｉ ｎ ｗａ ｓ ｌ ｈ ｄ ｂ ｘ ｒ ｓ ｉ ｇ ｒ ｌｔｏ ｓ ｉ ａ ｓｅ ｈｏ ｌ ｇ ｏ ｙｓｓＵｓｎｇ Ｒｅ ｐｏ ｅ Ｓ ｆ ｃ ｔ ｄｏ ｏ ｙ
Ｗ ＡＮ Ｇ ｎ— ｎｇ， ＺＨ ＡＯ ｎ ｘ ｎ Ｙａ ｐｉ Ｙｕ — ｉ ｇ， ＺＨ ＡＮ Ｇ ｉｒ ｎ， ＳＨＡＮ Ｇ ｅ Ｙ —ａ Ｋ
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响应 面 法优 化 酶 法 制 备 酪 蛋 白糖 巨肽 的 工 艺 条 件
王艳 萍 ，赵 运 星 ， 张伊 然 ， 尚 柯
（ 品 营 养 与 安 全 教 育 部 重 点 实 验 室 ，天津 科 技 大 学 食 品 工 程 与 生 物 技 术 学 院 ，天 津 ３ ０ ５ ） 食 ０ ４ ７
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解所得 的一系列含有磷 酸丝氨酸族 的天然生 这 又 取决 于 酪 蛋 白磷 酸 肽
制备工艺中所使用的酶。尽管早在 ５ ０年前 ，国外 就 开始 了对 Ｃ Ｐ Ｐ的研 究 ，但 工业 化 制备 的研究 工
作 直到近年才真 正开始 ，而我 国在酪蛋 白磷 酸肤 的 研 究方面 尚未完全 实现产业 化生产 ， 现 有 的生产 中 往 往采 用 单一 酶水 解 ，存 在水 解 度 低 、酶 消 耗 量 大 、底物浪 费 、Ｃ Ｐ Ｐ成本 高的问题 。因此 提高 酶 的 转化率 、研 究生 产天 然 的 Ｃ Ｐ Ｐ ，实 现 大规 模 生产 ， 不断满 足人们对 Ｃ Ｐ Ｐ的需要将是其 发展必然趋 势 。
Ｔ ｈ ｅ ｃ ｐ ｐ ｓ ，Ｗ ｉ ｄ ｅ ｌ ｙ ｕ ｓ ｅ ｄ ｉ ｎ ａ ｖ ａ ｉｅ ｒ ｔ ｙ ｏ ｆ ｎ ｕ ｔ ｉｔ ｒ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｈ ｅ ｌｔ ａ ｈ ｆ ｏ ｏ ｄ ，ｃ ａ ｎ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｌ ｙ ｐ ｒ ｏ ｍｏ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ａ ｂ ｓ ｏ ｒ ｐ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｕ ｔ ｉ ｌ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｃ ａ ｌ ｃ ｉ ｕ ｍ． ｉ ｒ ｏ ｎ。ｚ ｉ ｎ ｃ ａ ｎ ｄ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ｄ ｉ ｖ ａ ｌ ｅ ｎ ｔ ｍｉ ｎ ｅ ｒ ａ ｌ ｎ ｕ ｔ ｉ ｒ ｅ ｎ ｔ ．ｄ ｉ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｋ ｉ ｎ ｄ ｓ ｏ ｆ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ ｏ ｆ ｃ ａ ｓ ｅ ｉ ｎ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｗａ ｓ ｓ ｔ ｕ ｄ ｉ ｅ ｄ， ｐ ｒ ｅ ｆ ｅ ｒ ｒ ｅ ｄ ｔ ｈ ｅ ｈ ｉ ｇ ｈ ｅ ｓ ｔ ｅ ｐ ｐ ｓ ｙ ｉ ｅ ｌ ｄ ｏ ｆ Ｌ Ｃ 一１ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ ，Ｏ ｐ ｔ ｉ ｍｕ ｍ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｐ ｒ ｏ ｃ ｅ ｓ ｓ ，ｔ ｈ ｅ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍａ ｌ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｆ ｏ ｒ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｏ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｗａ ｓ ｏ ｂ ｔ ａ ｉ ｎ ｅ ｄ ａ ｓ ｆ ｏ ｌ ｌ ｏ ｗ ｓ ：ｐ Ｈ ８， ｔ ｅ ｍｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ５ ０ ｄ ｅ ｇ ｒ ｅ ｅ ｃ ｅ ｌ ｓ ｉ ｕ ｓ ，ｓ ｕ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｔ ｅ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ １ ０ ％ ，ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｏ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｔ ｉ ｍｅ ２ ｈ ． Ｔ ｈ ｒ ｏ ｕ ｇ ｈ ｔ ｈ ｅ ｔ ｅ ｓ ｔ ｖ ｌｉ ａ ｄ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ．ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｃ Ｐ Ｐ ｗａ ｓ ２ ２ ． ３ ％． Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄ ｓ ： ｍｉ ｌ ｋ ｃ ａ ｓ ｅ ｉ ｎ； ｃ ａ ｓ ｅ ｉ ｎ ｐ ｅ ｐ ｔ ｉ ｄ ｅ ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ａ ｔ ｅ ；ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｏ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ
酪蛋 白磷酸肽酶解工艺条件的优化研究
彭 维 ，刘 丽 ，刘 飞 ，欧 爱 芬
（ １ ． 广州医科大学 ，广州 ５ １ ０ １ ８ ２ ；２ ． 广州绿萃生物科技有限公司， 广州 ５ １ ０ ５ ３ ０ ；３ ．广 州市 药 品检验 所 ，广州 ５ １ ０ １ ６ ０ ）
摘 要 ：酪蛋 白磷酸肽 （ ｃ Ｐ Ｐ ）是以牛乳酪 蛋 白为原料 ，通过生物技 术制 得的具有 生物活性 的多肽 ，能
中 图分 类 号 ：Ｔ Ｓ ２ ０ ２ ． ３ 文 献标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１ ０ ０ ６— ２ ５ １ ３ （ ２ ０ １ ４ ） ０ １ — ０ １ ８ ８一 ｏ ４
Ｅｎ ｚ ｙ ｍｏ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｆ ｏ ｒ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｃ ａ ｓ ｅ ｉ ｎ ｐ ｈ Ｏ Ｓ ｐ ｈ Ｏ ｐ ｅ ｐ ｔ ｉ ｄ ｅ ｓ
我 国民众膳食 组成 以植物性食 物为 主 ，其 中含
有大量 的影 响钙 、铁 、锌吸收 的因子 ，如植 酸 、草
用 Ｊ 。研究 表 明 ，酪 蛋 白磷 酸 肽 的 这些 生 理 活 性 与其分 子 中氨基 酸 组成 和排 列顺 序 （ 或 磷 酸丝 氨
酸 、纤维 素等 。因此 ，中 国人缺钙尤 为严重 。酪蛋 白磷 酸肽 （ Ｃ Ｐ Ｐ ）是 牛乳酪蛋 白经适合 的蛋 白酶酶
Ｐ ＥＮＧ Ｗ ｅ ｉ ，Ｌ Ｉ Ｕ Ｌｉ ， ＬＩ Ｕ Ｆｅ ｉ ， ＯＵ Ａｉ － ｆ ｅ ｎ ｇ 。
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｃ ａ ｓ ｅ ｉ ｎ ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ｏ ｐ ｅ ｐ ｔ ｉ ｄ ｅ ｓ（ Ｃ Ｐ Ｐ ） ，ｃ ｏ ｎ ｔ ａ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ Ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ，ｗ ｅ ｒ ｅ ｄ ｅ ｉ ｒ ｖ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ｃ ａ ｓ ｅ ｉ ｎ ｂ ｙ ｂ ｉ ｏ ｔ ｅ ｅ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ．
有效促进人体对钙 、铁 、锌等二价矿物营养素 的吸 收和利用 ，可用 于各种营养 、保健 食品 。本研究 对不 同种 类 的酶水解牛乳酪蛋 白 ，优选 出 Ｃ Ｐ Ｐ得率 最高 的 Ｌ Ｃ一１酶 ，对其 工艺 条件进 行优 化 ，确定其 最佳 酶解 条件
为：ｐ Ｈ８ ． ０ 、温度 ５ ０ ℃ 、底物浓度 １ ０ ％ 、酶解 时间 ２ ｈ 。通过中试验证 ，Ｃ Ｐ Ｐ含量为 ２ ２ ． ３ ％。 关键 词 ：牛乳 酪蛋 白；酪蛋 白磷酸肽 ；酶解
制备工艺中所使用的酶。尽管早在 ５ ０年前 ，国外 就 开始 了对 Ｃ Ｐ Ｐ的研 究 ，但 工业 化 制备 的研究 工
作 直到近年才真 正开始 ，而我 国在酪蛋 白磷 酸肤 的 研 究方面 尚未完全 实现产业 化生产 ， 现 有 的生产 中 往 往采 用 单一 酶水 解 ，存 在水 解 度 低 、酶 消 耗 量 大 、底物浪 费 、Ｃ Ｐ Ｐ成本 高的问题 。因此 提高 酶 的 转化率 、研 究生 产天 然 的 Ｃ Ｐ Ｐ ，实 现 大规 模 生产 ， 不断满 足人们对 Ｃ Ｐ Ｐ的需要将是其 发展必然趋 势 。
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酪蛋 白磷酸肽酶解工艺条件的优化研究
彭 维 ，刘 丽 ，刘 飞 ，欧 爱 芬
（ １ ． 广州医科大学 ，广州 ５ １ ０ １ ８ ２ ；２ ． 广州绿萃生物科技有限公司， 广州 ５ １ ０ ５ ３ ０ ；３ ．广 州市 药 品检验 所 ，广州 ５ １ ０ １ ６ ０ ）
摘 要 ：酪蛋 白磷酸肽 （ ｃ Ｐ Ｐ ）是以牛乳酪 蛋 白为原料 ，通过生物技 术制 得的具有 生物活性 的多肽 ，能
中 图分 类 号 ：Ｔ Ｓ ２ ０ ２ ． ３ 文 献标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１ ０ ０ ６— ２ ５ １ ３ （ ２ ０ １ ４ ） ０ １ — ０ １ ８ ８一 ｏ ４
Ｅｎ ｚ ｙ ｍｏ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｆ ｏ ｒ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｃ ａ ｓ ｅ ｉ ｎ ｐ ｈ Ｏ Ｓ ｐ ｈ Ｏ ｐ ｅ ｐ ｔ ｉ ｄ ｅ ｓ
我 国民众膳食 组成 以植物性食 物为 主 ，其 中含
有大量 的影 响钙 、铁 、锌吸收 的因子 ，如植 酸 、草
用 Ｊ 。研究 表 明 ，酪 蛋 白磷 酸 肽 的 这些 生 理 活 性 与其分 子 中氨基 酸 组成 和排 列顺 序 （ 或 磷 酸丝 氨
酸 、纤维 素等 。因此 ，中 国人缺钙尤 为严重 。酪蛋 白磷 酸肽 （ Ｃ Ｐ Ｐ ）是 牛乳酪蛋 白经适合 的蛋 白酶酶
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Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｃ ａ ｓ ｅ ｉ ｎ ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ｏ ｐ ｅ ｐ ｔ ｉ ｄ ｅ ｓ（ Ｃ Ｐ Ｐ ） ，ｃ ｏ ｎ ｔ ａ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ Ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ，ｗ ｅ ｒ ｅ ｄ ｅ ｉ ｒ ｖ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ｃ ａ ｓ ｅ ｉ ｎ ｂ ｙ ｂ ｉ ｏ ｔ ｅ ｅ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ．
有效促进人体对钙 、铁 、锌等二价矿物营养素 的吸 收和利用 ，可用 于各种营养 、保健 食品 。本研究 对不 同种 类 的酶水解牛乳酪蛋 白 ，优选 出 Ｃ Ｐ Ｐ得率 最高 的 Ｌ Ｃ一１酶 ，对其 工艺 条件进 行优 化 ，确定其 最佳 酶解 条件
为：ｐ Ｈ８ ． ０ 、温度 ５ ０ ℃ 、底物浓度 １ ０ ％ 、酶解 时间 ２ ｈ 。通过中试验证 ，Ｃ Ｐ Ｐ含量为 ２ ２ ． ３ ％。 关键 词 ：牛乳 酪蛋 白；酪蛋 白磷酸肽 ；酶解