真菌[1-3]-β-D-葡聚糖与革兰氏阴性菌脂多糖检测[专家学习]

血浆(1，3)-β-D-葡聚糖检测对血液病患者侵袭性真菌病的诊断价值近年来，由于抗生素的广泛应用和免疫功能受损等因素，侵袭性真菌病（IFD）的患病率逐年增加，成为造成血液病患者死亡的主要原因之一。

IFD的诊断和治疗一直是临床医生面临的难题之一，因此研究新的诊断方法显得尤为重要。

近年来，人体内存在的某些营养物质在侵袭性真菌病的恶化过程中是否会发生变化成为了关注的焦点之一。

本文将对IFD的诊断方法进行探讨，并讨论血浆（1，3）-β-D-葡聚糖（BG）检测的诊断价值。

1. IFD的诊断方法IFD的诊断一直是临床医生面临的难题之一，传统的诊断方法主要依靠组织或体液样本的真菌培养和特异性染色，然而这些方法多存在着时间长、缺乏准确性等问题，且组织或体液样本的采集也存在操作难度大等问题。

近年来，有许多新的IFD诊断方法被提出，包括：血清（1，3）-β-D-葡聚糖测定方法（BDG）、侵袭性真菌PCR检测、CT及MRI等影像学方法。

其中，BDG作为一种新的IFD诊断方法，近几年受到了越来越多的关注。

2. BG的来源与代谢BG是葡萄糖多聚体的一种，是真菌细胞壁的重要成分，并且往往被认为是生物被攻击时真菌的一种关键源泉。

BG的来源主要包括真菌、植物和细胞。

BG在代谢中具有重要的功能，其中真菌体内的BG主要由酵母菌、念珠菌和曲霉菌产生。

3. 血浆（1，3）-β-D-葡聚糖（BG）检测BG在IFD患者的血液中含量较高，可以作为IFD诊断的一种指标。

研究表明，在IFD患者血液中BG阳性率明显高于健康人群。

BG检测采用碳水化合物的免疫测定原理。

BG检测的阳性判定通常根据本体经验和不同的测试平台。

例如，一个常用的测试平台BG test Miraclon电化学免疫测定法提供了与BG特异性抗原结合的硫酸盐酯酶标记物，将样品在金电极的表面余留。

结合的复合物可以被亚硝酸盐还原生成硫酸盐酯酶还原物。

硫酸盐酯酶还原物的电信号记录和与标准曲线的比较将被用于测量BG水平。

1.1包装规格：12人份/盒1.2主要组成成分：校准曲线：二维码。

质控范围批特异，详见标签。

2.1外观试剂盒完整无破损，试剂盒内各组分齐全、无破损、渗透；盒上印刷的标识以及瓶签、盒签上的字迹清晰完整，易识别。

2.2装量试剂盒的液体试剂净含量应不低于标示量。

2.3溯源性根据GB/T21415规定了校准曲线的溯源过程，溯源至企业工作校准品。

2.4准确度回收率应在80%～120%的范围内。

2.5检出限检出限应不高于40pg/mL。

2.6线性试剂盒在浓度为[50,50000]pg/mL的线性范围内，相关系数（r）应不低于0.9900。

2.7重复性测定高、低两个浓度水平的样本，测定结果的变异系数CV（％）值应不大于10%。

2.8特异性与浓度分别为50ng/mL的曲霉菌半乳甘露聚糖、念珠菌甘露聚糖、革兰阴性菌脂多糖均无交叉反应，检测结果均应不超过检出限。

2.9批间差用3个不同批号的试剂盒分别检测两个浓度水平的样本，3个批次试剂盒之间的批间变异系数CV（％）应不大于15％。

2.10质控品赋值有效性重复测定试剂盒内质控品各3次，每次测定结果均应在质控品测定值允许的范围内。

2.11质控品批内瓶间差取同一批号10支质控冻干品进行检测，所有瓶内重复性检测结果的变异系数CV（%）值应不大于10%。

2.12稳定性2.12.1效期稳定性试剂盒按要求在2℃～8℃放置，有效期12个月，取效期末的试剂盒进行检测，各项指标仍符合2.4～2.8的要求。

2.12.2质控品复溶稳定性质控品溶解后置2℃～8℃保存14天后，取质控品进行检测，结果应符合2.10、2.11的要求。

572014年2月第21卷第3期血清（1-3）-β-D 葡聚糖检测判断肺部侵袭性真菌感染的诊断价值谢 颖肺部侵袭性真菌感染（PIF I ）的诊断目前主要根据患者痰培养或肺组织活检，但操作复杂，尤其是肺组织活检，临床可操作性差，不易开展。

（1-3）-β-D 葡聚糖为一种多糖，普遍存在于真菌的细胞壁中，约占真菌细胞壁干重的50％。

笔者对我院送检痰标本患者的血清进行（1-3）-β-D 葡聚糖检测，评价其在PIFI 中的诊断价值。

1 资料与方法1.1 一般资料与分组 2008年6月至2012年11月，送检我科的支气管镜吸引痰标本及其患者血清各77份。

有广谱抗生素应用史41例（53.2%），糖皮质激素使用史31例（40.3%），体内置留导管22例（28.6%），恶性肿瘤史8例（10.4%）。

痰标本培养真菌阳性28例，设为感染组；阴性49例，设为非感染组。

1.2 血清（1-3）-β-D 葡聚糖检测 检测流程按试剂盒要求逐步进行。

① 将事先准备待检的静脉血2ml 置入离心管中以2900r /min 的转速离心6min ，然后吸取上层血清100μl 置入900μl 处理液中，振荡摇匀。

将其放置在恒温水浴箱中70℃孵育10min ，然后快速放置到冰水中。

② 将制备好的标本200μl 放入含有主反应试剂A 的管中，充分振荡混匀并移植标准玻璃反应管中，放入MB-80微生物快速动态检测系统中进行反应。

③ 反应1h 后进行结果判断。

1.3 统计分析 计量资料以（x-±s ）表示，组间比较用t 检验。

计数资料以百分数表示，组间比较采用χ2检验。

Stata 12.0统计绘制ROC 曲线，并根据敏感性和特异性的最佳组合判断血清（1-3）-β-D 葡聚糖的临界值，并给出相应的该临界值下的诊断PIF I 敏感性和特异性，计算曲线下面积，双侧P ＜0.05认为差异有统计学意义。

2 结果2.1 两组基本情况比较 年龄：感染组（66.8±9.2）岁，非感染组（67.4±11.1）岁，差异无统计学意义（t =0.24，P ＞0.05）。

声明本产品属精密光学仪器，在日常使用中，应严格按照我公司出具的操作流程进行试验操作，并确保工作环境正常。

本试验的操作者必须为经我公司培训合格的微生物实验室检验人员，如需更换操作者，请做好交接工作，确保新的操作者了解仪器特性、熟悉操作流程。

为避免试验结果不准确，请操作者认真阅读操作注意事项及操作流程，并严格遵守。

如有任何疑问，请联系我公司售后服务部。

售后服务部电话：400-811-9958北京金山川科技发展有限公司真菌（1-3）-β-D葡聚糖测定1.目的建立真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测标准操作规范，保证实验结果的准确性。

2.授权操作人经培训合格的微生物实验室检验人员。

3.实验原理（1-3）-β-D葡聚糖检测原理：真菌（1-3）-β-D葡聚糖激活酶反应主剂中的G因子后形成凝固蛋白，根据其所引起的浊度变化对真菌（1-3）-β-D葡聚糖浓度进行定量测定。

（1-3） -D-Glucan活化因子G 因子G凝固酶原凝固酶凝固蛋白原凝固蛋白（凝胶）4．产品性能指标4.1 灵敏度最小检出值5pg/ml5．实验组成5.1实验仪器及器具：MB-80微生物快速动态检测系统、洁净工作台、低速离心机、恒温仪， 20~200ul 加样器、100~1000ul加样器、旋涡混合器、定时器。

5.2实验耗材：200ul无热原吸头、1000ul无热原吸头、无热原平底试管、无热原真空采血管。

5.3试剂盒组成：真菌（1-3）-β-D 葡聚糖检测试剂盒（光度法）：试剂盒包括反应主剂和样品处理液。

6．工作环境相对湿度：20%~80%；温度控制：10~30℃；电源电压：220V±10%，50Hz±2%。

7．标本采集、处理及保存7.1检测样本：血液、肺泡盥洗液、胸腔积液、腹水、脑脊液、尿液（无菌取中段尿或穿刺尿）7.2采集要求：采样过程要求无菌操作，用专用的无热原真空采血管（肝素类抗凝）。

常规病人早上用药治疗前空腹采血/取样（血透患者透析前采血）。

血清1，3—β—D—葡聚糖检测对深部真菌病诊断的研究目的探讨血清（1，3）-β-D-葡聚糖对深部真菌病的诊断价值。

方法将2014年2～6月天津市武警后勤学院附属医院110份数据（标本140份）分为侵袭性真菌病患者组33例和无侵袭性真菌病组77例，分析比较葡聚糖水平，并使用ROC曲线确定最佳临界值。

结果侵袭性真菌病患者组的葡聚糖水平（279.78±83.26）pg/mL，明显高于对照组（34.05±9.35）pg/mL（P＜0.001）；ROC 曲线下面积为0.946（95%的置信区间为0.904～0.988），当以95.20 pg/mL为临界值时，实验的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为84.8%、93.5%、80.0%和93.3%；临床符合率达到89.1%。

Kappa值0.784（P＜0.05）。

结论血清葡聚糖水平可以用于深部真菌感染的诊断，本研究中用北京金山川公司的GKT-1M Set动态真菌检测试剂盒检测血清葡聚糖水平，进行深部真菌感染诊断时的最佳临界值为95.20 pg/mL，当以此临界值对深部真菌感染进行诊断时，临床一致性较好。

[Abstract] Objective To investigate the diagnostic value of serum（1，3）-β-D-glucan for deep fungal disease. Methods 110 copies of data（140 specimens）of affiliated hospital of tianjin Armed Police logistics academy from February to June 2014 were divided into the invasive fungal disease group with 33 copies and the non-invasive fungal disease group with 77 copies. The glucan levels were analyzed and compared. The ROC curve was used to determine the optimal critical value. Results The glucan level of the invasive fungal disease group was （279.78±83.26）pg/mL，which was significantly higher than the（34.05±9.35）pg/mL of the control group（P＜0.001）. The ROC area under curve was 0.946（95% confidence interval was 0.904-0.988）；When 95.20 pg/mL was used as the critical value，the sensitivity，specificity，positive predictive value and negative predictive value of experiment were 84.8%，93.5%，80.0% and 93.3%. The clinical accordance rate reached 89.1%. The Kappa value was 0.784 （P＜0.05）. Conclusion The serum glucan level can be used for the diagnosis of deep fungal infection. This study uses the GKT-1M Set dynamic fungal detection kit of Beijing Jinshan Company to detect the serum glucan level. The optimal critical value for deep fungal infection diagnosis is 95.20 pg/mL and when this critical value is used for the diagnosis of deep fungal infection，the clinical consistency is better.[Key words] Deep fungal disease；Diagnosis；Serum 1，3-β-D-glucan；ROC curve现今，尽管存在有效的治疗方法，但是侵袭性真菌病（invasive fungal disease，IFD）仍然是免疫抑制患者发病和死亡的重要原因[1]。

深部真菌感染患者血清1-3-β-D葡聚糖检测的临床意义发表时间：2016-06-17T10:27:23.853Z 来源：《医师在线》2016年3月第5期作者：姜莉[导读] 深部真菌感染是指致病真菌侵犯皮下组织和内脏等器官，导致器官发生真菌性感染。

姜莉（贵阳市第二人民医院；贵州贵阳550000）【摘要】：目的：讨论血清1-3-β-D葡聚糖检测深部真菌感染的临床意义。

方法：选取我院2015年1月—10月，深部真菌感染患者31例为研究对象，另外在选取20例健康人为对照。

采用MB-80微生物快速动态检测系统测定所有研究对象的血清1-3-β-D葡聚糖的含量。

结果：观察组的患者血清1-3-β-D葡聚糖含量平均值为（5.74±1.35）pg/ml；而观察组的平均值为（268.28±101.07）pg/ml。

观察组的数据明显高于对照组，其差异具有统计学意义（p<0.05）.结论：血清1-3-β-D葡聚糖检测可以在早期为临床提供可靠的感染消息，是一种实用的早期诊断方式。

【关键词】1-3-β-D葡聚糖；深部真菌感染；临床检测深部真菌感染是指致病真菌侵犯皮下组织和内脏等器官，导致器官发生真菌性感染。

具有发病率高、病情快、死亡率高等特点，严重的危害患者的生命安全[1]。

临床中，由于免疫抑制剂、皮质类固醇激素、广谱抗生素和肿瘤化疗药物的大量使用，导致深部真菌感染的发病率不断上升，并且该疾病在发病初期并没有出现什么异常反应，病情容易被隐藏，往往发现时病情已经达到十分严重的地步，因此该疾病在初期时容易出现漏诊或误诊的现象，给患者带来极大的影响[2]。

所以如何在早期快速诊断和治疗深部真菌感染是至关重要的，为了研究检测血清1-3-β-D葡聚糖的临床效果，特选取2015年1月—10月，深部真菌感染患者31例进行研究，现报道如下。

1资料与方法1.1一般资料，选取我院2015年1月—10月，深部真菌感染患者31例为研究对象，男性患者20例，女性患者11例，年龄17至91岁，平均年龄（35.4±5.5）岁，其中泌尿道感染的患者为15例，呼吸道感染的为10例，血液感染的为4例，静脉插管引起感染的为2例。

一种深部真菌早期诊断的方法——测定真菌细胞壁成分（1→3）—β—D—葡聚糖中国医学科学院李岷综述皮肤病研究所中国协和医科大学吴绍熙审校摘要介绍了测定葡聚糖含量的方法及基本原理；讨论（1→3）—β—D—葡聚糖的一些理化性质对测定的影响及它的某些生物活性。

此外，评价了此方法在深部真菌感染模型和临床患者中的实际应用，就其灵敏度和特异度与其他诊断方法进行了比较。

关键词深部真菌病真菌细胞壁（1→3）—β—D—葡聚糖近年来，免疫缺陷患者数量不断增多，使得深部真菌感染率大大升高。

对深部真菌感染治疗成败的关键在于早期诊断。

传统真菌鉴定方法都因周期长、血培养率低而难于快速诊断。

研究者也逐渐将早期诊断的注意力转向建立血清学方法来检测真菌菌体成分或代谢产物，如测定白念珠菌的甘露聚糖、烯醇化酶、D-阿拉伯糖醇等。

鉴于深部真菌感染时，经吞噬细胞处理，菌胞壁降解成分大量入血，90年代初，有学者建立了以检测血浆或血清中真菌胞壁成分（1→3）—β—D—葡聚糖的含量，来早期诊断深部真菌感染，这一方法也已初步应用于动物模型和临床标本上[1-5]。

现对此方法简要综述如下：一．测定（1→3）—β—D—葡聚糖含量的方法及原理真菌胞壁主要成分为多糖，存在方式有两种，一为构成胞壁骨架的微细纤维，二为组成基质的高分子复合物。

前者主要由几丁质和β-葡聚糖组成。

β-葡聚糖在酵母样真菌中含量最高，其形式以β-（1→3）糖苷键连接的葡萄糖残基为骨架作为主链，分枝状β（1→6）葡萄糖残基作为侧链。

有学者偶然发现[1,6] ，真菌胞壁成分（1→3）—β—D—葡聚糖能激活鲎变形细胞溶解物中的G因子，从而旁路活化检测革兰阴性菌内毒素的产色底物法鲎溶解物试验，因激活G因子，故称为G试验。

基本原理如下，鲎变形细胞溶解物中含有B因子、C因子、凝固酶原、G因子等成分。

内毒素能依次激活C因子、B因子，而葡聚糖只活化G因子。

激活的B因子和G因子活化凝固酶原转化为凝固酶。