westernblot原理及步骤
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Western Blot方法(western blot试验)是western blot。它是分子生物学,生物化学和免疫遗传学中的常用实验方法。它的基本原理是为通过凝胶电泳处理过的具有特定抗体的细胞或生物组织样本着色。通过分析着色的位置和深度,可以获得有关特定蛋白质在被分析的细胞或组织中表达的信息。
Western Blot的原理和步骤Western Blot是将蛋白质转移到膜上,然后使用抗体对其进行检测。对于已知的表达蛋白,可以将相应的抗体用作检测的第一抗体,对于新基因的表达产物,可以将融合部分的抗体用于检测。
Western Blot是检测单细胞蛋白表达的最佳方法。conocollal应该是表达蛋白在细胞中定位的首选,并且应考虑免疫沉淀进行蛋白相互作用。首先,Western Blot的原理Western Blot与Southern或Northern杂交相似,但是Western Blot使用聚丙烯酰胺凝胶电泳,检测的对象是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”使用标记的第二抗体。
通过PAGE分离的蛋白质样品被转移到固体载体(例如硝酸纤维素膜)上,该固体载体以非共价键的形式吸附蛋白质,并且可以使通过电泳分离的多肽类型及其生物学活性保持不变。固体载体上的蛋白质或多肽用作抗原,与相应的抗体反应,然后与被酶或同位素标记的第二抗体反应,并通过底物显色法检测通过电泳分离的特定靶基因表达的蛋
白质成分。放射自显影。该技术也广泛用于检测蛋白质表达。