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培养基;1、麸皮培养基:（黄曲霉）100g麸皮，900g水，煮沸20分钟，用四层纱布过滤，得到的清液中加入1g酵母粉，加水定容至1L, 121℃灭菌30 min.2、( 马铃薯琼脂 )培养基（禾谷镰刀菌）马铃薯2 0 0克琼脂1 5~一2 0 克自来水2 0 0 0毫升将去皮切片的 2 0 0克马铃薯,放入1 0 0 0毫升水中煮沸,3 0分钟,以纱布滤取汁液,补足水量,再加琼脂,热溶,经 1 21 ℃,2 0 ~ 3 0分钟高压灭菌3 、察氏培养基 (曲霉）硝酸钠3g磷酸氢二钾1g硫酸镁(MgSO4•7H2O) 0.5g氯化钾0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂20g蒸馏水1000mL制法：加热溶解，分装后121℃灭菌20min。
用途：青霉、曲霉鉴定及保存菌种用。
4、瓦克斯曼培养基（Waksmen培养基）：选用商品培养基或按如下方法配制。
：蛋白胨 5.0gKH2PO4 1.0gMgSO4•7H2O 0.5g琼脂 20.0g蒸馏水 1000ml加热溶解后，用0.5mol/L H2SO4调节pH到3.8～4.0，加入10g葡萄糖，121℃蒸汽灭菌10分钟。
5、在察氏琼脂培养基上菌落生长较快，10d—14d直径3cm—4cm或4cm～7cm,最初带黄色，然后变为黄绿色，老后颜色变暗，平坦或有放射状沟纹，反面无色或带褐色。
在低倍显微镜下观察可见分生孢子头疏松放射状，继变为疏松柱状。
分生孢子梗多从基质生出，长度一般小于1mm。
有些菌丝产生带褐色的菌核。
制片镜检观察可见分生孢子梗极粗糙，直径10um～20um。
顶囊烧瓶形或近球形，直径10um～65um，一般多为25um—45um。
全部顶囊着生小梗，小梗单层、双层或单、双层同时生在一个顶囊上；梗基（6um—10um）*（4um～5.5um)，小梗（6.5um—10um）*（3um—5um）。
分生孢子球形、近球形或稍作洋梨形，3um—6um，粗糙。
1.3镰刀菌属本属的产毒舞茵主要包括禾谷镰刀菌、串珠镰刀菌、雪腐镰刀菌、三线镰刀菌、梨孢镰刀菌、拟枝孢镰刀菌、尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌和木贼镰刀菌等。
马铃薯晚疫病菌培养基葡萄糖：20克苹果酸（用NaOH中和）：2克(NH4)2SO4：2克KH2PO4：0.67克MgSO4·7H2O：0.5克K2HPO4：0.33克CaCL2：1克蒸馏水：1000ml 1%FeCL3：10滴盐酸硫胺素：1mlHV培养基PDA马铃薯200克、蔗糖（葡萄糖）20克、自来水100克、琼脂18克、燕麦片琼脂培养基：燕麦片30克、琼脂17克、水1000克、燕麦片加水煮1小时，过滤。
水生4号培养液硫酸铵0.200克过磷酸钙0.030克硫酸镁0.080克碳酸氢钠0.100克氯化钾0.025克蒸馏水1000毫升氯化铁（1%）0.450毫升soil extract0.500毫升土壤浸出液用园田土，水：土为2:1，搅匀沉清后取上清液，如果培养液使用量较大，上述药品可分别先配制成贮备液，然后按所需量稀释而成，但要注意每加一种贮备液时应摇匀后再加下一个贮备液。
Gause′s Synthetic Agar （高氏合成一号琼脂）KNO3 1g Soluble starch（可溶性淀粉）20gK2HPO4 0.5g MgSO4.7H2O 0.5gNaCl 0.5g FeSO4 0.01gAgar （琼脂）20g water （水）1000mlpH 7.2-7.4适用范围：刺孢小单孢菌绛红变种、紫色小单孢菌（绛红小单孢菌）、白黄链霉菌、白色链霉菌、抗生链霉菌、双重轮丝链霉菌、产色链霉菌、烬灰链霉菌、天蓝色链霉菌、灭蚊链霉菌、红霉素链霉菌、青色链霉菌、球孢链霉菌、浅灰链霉菌、灰色链霉菌、吸水链霉菌、淡紫灰链霉菌、黄色长孢链霉菌、藤黄色链霉菌、细黄链霉菌、黑化链霉菌、玫瑰色链霉菌、华美链霉菌、嗜热链霉菌、委内瑞拉链霉菌、紫色直丝链霉菌、紫色链霉菌、绿色链霉菌疫霉菌常用培养基1、胡萝卜培养基将200g新鲜胡萝卜切成小片，加去离子水500ml，用组织捣碎机捣碎约40秒，用4层纱布过滤去渣，实践水至1000ml，加入琼脂20g，在121℃下高压蒸汽灭菌15－20分钟。
1. LB培养基：10 g/L胰蛋白胨(进口)，5 g/L酵母提取物(进口)，10 g/L NaCl。
若配制固体培养基，加入15 g琼脂粉；
2. YPD培养基：22 g/L的一水合葡萄糖，20 g/L胰蛋白胨(进口)，10 g/L酵母提取物(进口)。
若配制固体培养基，加入20 g琼脂粉；
3. SC-Ura培养基：22 g/L含一水合葡萄糖，6.7 g/L YNB（无氨基酸酵母氮源），1.224g/L 氨基酸粉末（除Leu , Trp , His , Ura, Ade, Lys, Met以外的），配制相应缺陷型则补加其他7种氨基酸。
4. YPX 培养基：蛋白胨，20 g/L；酵母粉，10 g/L；木糖，20 g/L或50 g/L。
5. YPD+G418：G418：1ml/L
Leu（亮氨酸）0.38 g/L，
Ura（尿嘧啶）0.076 g/L，
100xHis（组氨酸）7.6g/L，加入10mL/L
100xTrp（色氨酸）7.6g/L, 加入10mL/L
100xAde（鸟嘌呤）7.6g/L 加入10mL/L
100xLys（赖氨酸）7.6g/L 加入10mL/L
100xMet（甲硫氨酸、蛋氨酸）7.6g/L 加入10mL/L
加入碱液调节pH至6.10左右。
若配制固体培养基，加入20 g琼脂粉；
全部氨基酸：。
[沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂，沙堡弱培养基，（一） 组成 40.0g 10.0g12.0- 15.0g 1000ml（二） 制法 上述混合后加入 200mg 氯霉素， 121 摄氏度 10 分钟灭菌后备用。
（三） 目的 是常用的分离或保存菌种的培养基。
[ 沙氏液基， SDB]（一） 组成 葡萄糖 40.0g 蛋白胨 10.0g 蒸馏水1000ml（二） 制法 上述混合后加入 200mg 氯霉素， 121 摄氏度 10 分钟灭菌后备用。
[ 加抗生素沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，SDA with antibiotic]（一） 组成 葡萄糖 40.0g 蛋白胨 10.0g 琼脂 12.0〜15.0g 蒸馏水 1000ml（二） 制法上述混合后加入 200mg 氯霉素。
250mg 放线菌酮， 121 摄氏度 10 分钟灭菌后备用。
[改良沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，modified SDA]（一） 组成 葡萄糖 20.0g 蛋白胨 10.0g 琼脂 12.0〜15.0g 蒸馏水1000ml（二） 制法 上述混合后 121 摄氏度 10 分钟灭菌后备用。
（三） 目的 保存菌种培养基。
[ 马铃薯葡萄糖琼脂， PDA]（一） 组成 马铃薯 200.0g 葡萄糖 20.0g 琼脂12.0〜15.0gSDA]葡萄糖 蛋白胨 琼脂 蒸馏水蒸馏水1000ml（二）制法先将马铃薯洗净去皮切片，加水180ml ，煮沸30 分钟后过滤，再加葡萄糖、琼脂，将过滤液补足到1000ml ，121 摄氏度灭菌后备用。
（三）用途此培养基是培养真菌较好的培养基，同时也是鉴定真菌较好的培养基之一。
鉴定皮肤癣菌一般不用此培养基。
[玉米吐温80 琼脂，CMA with T w80]（一）组成玉米粉琼脂蒸馏水吐温80（二）制法40.0g15.0g1000ml10ml先将玉米粉混于水中，65 摄氏度水浴一小时，过滤，再补足水量，然后加入琼脂和吐温80，121摄氏度10 分钟灭菌后备用。
常用微生物培养基分离真菌：注：抗生素所有培养基灭菌放置不烫手背时（温度约为40°C左右），同时加入氯霉素和链霉至终浓度为0.5 mg/mL（提前配置好，用0.22 µm微孔滤膜过滤，-20℃存储），混匀后倒平板，用于抑制细菌生长。
1.GPY培养基：葡萄糖20 g，蛋白胨10 g，酵母提取物10 g，海盐15 g，琼脂20 g，蒸馏水1 L，pH 7.5，115℃，30 min灭菌2.PDA培养基：Potato Dextrose Agar干粉39 g/L，海盐15 g，蒸馏水1 L，pH 6.5-7.0，121℃，15 min灭菌3.马丁培养基：葡萄糖10 g，蛋白胨5 g，磷酸二氢钾1 g，七水合硫酸镁0.5 g，孟加拉红0.03 g，海盐15 g，琼脂20 g，蒸馏水1 L，115℃、30 min灭菌4.MEA培养基：麦芽浸粉17g，蛋白胨3g，海盐15g，蒸馏水1L，121℃，20 min 灭菌5.YPD培养基：酵母提取物10 g/L，蛋白胨20 g/L，葡萄糖20 g/L，琼脂20 g/L，115℃，30 min灭菌6.沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA，每升培养基）：蛋白胨（peptone）10.0 g，葡萄糖（glucose）40.0 g，琼脂（agar）15.0 g，pH 4.0 - 6.0；7.酵母汁麦芽提取物琼脂培养基（YM，每升培养基）：麦芽浸粉（malt extract）3.0 g，酪蛋白胨（casein peptone）5.0 g，酵母提取物（yeast extract）3.0 g，葡萄糖（glucose）10.0 g，琼脂（agar）15 g，pH 6.0 - 6.5；8.察氏培养基（CDA，每升培养基）：硝酸钠（NaNO3）3. 0 g，氯化钾（KCl）0.5 g，蔗糖（sucrose）30. 0 g，七水合硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.5 g，七水合硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）0. 01 g，磷酸氢二钾（K2HPO4）1.0 g，琼脂（agar）15.0 g，pH 6.0 - 6.5；分离放线菌：注：抗生素所有培养基灭菌放置不烫手背时（温度约为40℃左右），同时加入制霉菌素（终浓度为100.0 μg/ml）和萘啶酮酸（终浓度为25.0 μg/ml）（提前配置好，用0.22µm 微孔滤膜过滤，于-20℃冻存），混匀后倒平板，分别用于抑制真菌和细菌生长。
微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案微生物限度检查方法(薄膜过滤法) 验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核4.验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。
原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。
2.验证方法步骤验证前的准备：进行微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。
试验菌应包括G—、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。
验证试验的操作计划：用3个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断限度检查方法是否对产品有影响。
试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组回收率也不低于70%。
3.试验实施试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。
3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。
环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。
操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于。
3.1.3试验样品：批号：批号：批号：3.1.4培养基：3.1.5稀释液：无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。
3.1.6验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。
3.1.7器具：无菌薄膜过滤器：（孔径直径50mm）、无菌移液管（5ml）4.验证方法菌液的制备将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种至10ml的无菌营养肉汤中在30～35℃下培养18～24小时，将白色念珠菌接种至改良马丁液体培养基中，在23～28℃下培养24～48小时。
微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案微生物限度检查方法(薄膜过滤法) 验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核4.验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理1.1验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。
1.2原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。
2.验证方法步骤2.1验证前的准备：进行微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。
试验菌应包括G—、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。
2.2验证试验的操作计划：用3个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断限度检查方法是否对产品有影响。
2.3试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组回收率也不低于70%。
3.试验实施3.1试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。
3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。
环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。
操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于4.9pa。
3.1.3试验样品：批号：批号：批号：3.1.4培养基：3.1.5稀释液：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。
3.1.6验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。
1、毕赤酵母表达硒代重组人血清白蛋白：基础盐培养基BSM:硫酸钙0. 93 g/ L ,硫酸钾18.2 g/ L ,七水硫酸镁14.9 g/ L ,柠檬酸三钠1.47 g/ L ,微量元素2m L/ L ,甘油40 g/ L ,硫酸铵10g/ L ,磷酸钾缓冲液(pH 6.0) 0.1 mol/ L 。
微量元素主要成分: 五水硫酸铜6.0 g/ L ,碘化钾0.08 g/ L ,一水硫酸锰3.0 g/ L ,二水钼酸钠0.2 g/ L ,硼酸0.02 g/ L ,硫酸钙0.5 g/ L ,氯化钴0.5 g/ L ,氯化锌20.0 g/ L , 七水硫酸亚铁65.0 g/ L , 硫酸5.0 mL/ L ,生物素0.2 g/ L 。
试剂均为国产生化试剂纯或分析纯。
发酵将50μL种子液接种于5 mL 的YPG培养基中,30 ℃振荡培养18222 h ,转接到装有100mL基础盐培养基的500mL 带挡板的摇瓶中。
转速180r/ min ,温度30 ℃培养,每8 小时用浓氨水调节发酵液pH 值至610。
约48 h 时,取样检测甘油浓度,待甘油耗尽后加入甲醇开始诱导。
诱导期培养温度为28℃,pH 值调节至710[526 ] ,每12 h 补加体积分数015 %的纯甲醇和10 mg/ L 的亚硒酸钠,对照发酵液不添加亚硒酸钠。
诱导96 h 后停止发酵。
2、重组人血清白蛋白在毕赤酵母表达中的降解控制PBM：甘油40g/L，磷酸（85%）26.7 g/L，二水硫酸钙0.6 g/L，硫酸钾9.5 g/L，七水硫酸镁7.8 g/L，氢氧化钾2.6 g/L，PTM1 2ml/L，生物素0.00004g/L，硫胺0.00019g/L，浓氨水调节为所需pH，试剂均为国产生化试剂纯或分析纯。
PTM1：Invitr ogen公司提供的标准配方。
