第四章体内药物分析方法的建立与验证

体内药物分析方法验证主要有哪些内容
一、线性度验证
1.直线回归分析：检查溶出物的定量测定结果是否与应用的参考标准物或其它分析方法的结果服从一定的线性关系；
2.拟合度检查：应用样条拟合法拟合出的曲线的 R平方值，该值的要求为r2值大于0.99；
3.加标重现性：检查加标样品与原始样品的定量测定结果之间的差异是否在一定的统计学水平上；
4.偏差检查：计算偏差用于衡量实验测定值与理论参考值之间的差异，如果偏差落入指定范围，则认为测定结果是可靠的；
二、特异性验证
1.特异性检查：检查所开发的测定方法是否对待测药物具有良好的特异性；
2.干扰物检查：应用检测方法对溶出物中相干物、有机溶剂等其他物质的影响检查，其方法包括加标回收率等。

三、稳定性验证
1.热稳定性检查：将待测物加热处理，检查溶出物在热处理后含量大小以及定量分析方法的稳定性；
2.光稳定性检查：检查溶出物对光及其他辐射能线的稳定性；
3.溶出稳定性检查：检查溶出物在多次溶出条件下的稳定性。

体内药物分析方法验证的主要内容体内药物分析方法验证的主要内容包括：一、药理学研究，主要是在动物身上做各种实验，目的就是找出有效成份；二、临床研究，即在人体进行试验，用以确定对人类安全与否。

三、剂量-反应关系测定，也叫毒性筛选或者安全试验。

通过这些方面的工作，可以使我们知道哪个药对于哪些人群是比较安全和合适的。

只有经过严格检查后，才能放心地给病人服用。

当然这不仅需要医生和护士等专业人员来完成，更需要科学家们从事深入的基础研究工作，以提高新药的质量水平和疗效。

药品开发必须依靠现代化的科技手段，例如现代化的仪器设备和检测方法。

要想制造出优良的新药，必须加强创新意识。

而创新最重要的一条就是人才。

医院药师要具备相应的资格，必须经过专门训练并取得职称。

他们除了要懂本学科外，还要熟悉其它学科的理论知识，既要有很好的理论素养，又要有丰富的实践经验，才能真正胜任临床药学工作。

国际上流行的临床药学是在20世纪60年代兴起的。

随着社会的发展，医学模式由单纯治疗转向预防为主，药师不再被视为“万金油”。

许多国家都把“药学服务是第一重要的”列入医院管理纲要，开始普及推广新药。

美国于1970年颁布了《药学教育改革法》，规定每所医学院校都要开设临床药学课程。

日本、英国、德国、瑞典、法国、澳大利亚等西方发达国家均在高等医学院中设置了临床药学课程，许多发展中国家则在中等卫生学校和大专医学院里开设了临床药学课程。

一、药理学研究，主要是在动物身上做各种实验，目的就是找出有效成份；二、临床研究，即在人体进行试验，用以确定对人类安全与否。

三、剂量-反应关系测定，也叫毒性筛选或者安全试验。

通过这些方面的工作，可以使我们知道哪个药对于哪些人群是比较安全和合适的。

只有经过严格检查后，才能放心地给病人服用。

当然这不仅需要医生和护士等专业人员来完成，更需要科学家们从事深入的基础研究工作，以提高新药的质量水平和疗效。

药品开发必须依靠现代化的科技手段，例如现代化的仪器设备和检测方法。

体内药物分析第二章生物样品与样品制备1.体内药分的对象：人体和动物体液、组织、器官、排泄物2．体内药物分析的特点：样品量少，不易重新获得；样品复杂，干扰杂质多；供临床用药监护的检测分析方法要求简便、快速、准确，以便迅速为临床提供设计合理的用药方案及中毒解救措施；实验室拥有多种仪器设备，可进行多项分析工作；工作量大，测定数据的处理和阐明有时不太容易。

需相关学科参与。

3．体内药物分析样品的种类：最常用且易获得的分析样品有：血样、尿样、唾液和粪便。

特殊情况下：乳汁、泪液、脊髓液、胆汁、羊水、各种组织4．血清：血清是由血液中纤维蛋白原等的影响引起血液凝结而析出的澄清黄色液体，约为全血的30％～50％5．尿液：尿液的主要成分：水、含氮化合物、盐类；体内药物清除主要通过尿液排出，药物以其原型或代谢物及其缀合物等形式排出；尿药测定主要用于药物剂量回收、尿清除率、生物利用度、药物代谢率的研究，并可推断患者是否按医嘱用药。

6．生物样品分析的前处理：是指测定生物样品中的药物及其代谢物时，对样品进行分离、纯化、浓集，必要时对待测组分进行衍生化，为测定创造良好的条件。

7．为何进行前处理？1）药物进入体内除原药外还有多种形式存在2）生物样品的介质组成比较复杂，尤其蛋白质严重影响分离效果，必须进行前处理3）除去介质中含有的大量内源性物质等杂质，提取出低浓度的被测药物，同时浓集药物或代谢物的浓度，使其在所用分析技术的检测范围内。

8．生物样品处理方法选择的一般原则：待测药物的理化性质；待测药物测定的目的与浓度范围。

9．去除蛋白质的方法：加与水相混溶的有机溶剂；加入中性盐；加入强酸；加入含锌盐及铜盐的沉淀剂；酶解法。

10．生物样品的分析由两步组成：样品的前处理（分离、纯化与浓集）和对提取物的仪器分析；提取法是应用最多的分离、纯化方法；提取的目的：从大量共存物中分离出所需要的微量组分药物及其代谢物，并通过溶剂的蒸发使样品得到浓集，以供测定；提取法分为液-液提取法和液-固提取法。

第一部分概述体内药物分析是对体内样本（包括生物体液、器官或组织）中的药物、代谢物或内源性物质的定量分析。

体内药物分析是药代动力学研究和治疗药物监测（TDM）的重要手段。

药物在临床前研究阶段，首先在试验动物体内进行药代动力学和毒代动力学研究；在临床研究阶段，要对药物作用于人体的安全性与有效性作出评价。

这些研究中，建立有效的体内药物分析方法是首要任务。

随着现代医学的不断进步，精准医疗和个体化治疗成为新的理念。

TDM 就是采用灵敏可靠的方法，检测患者体内的药物浓度，指导个体化用药方案的制定，保证用药的有效性与安全性。

另外，监测和研究体内内源性物质的浓度变化，对于某些疾病的诊断及治疗具有重要意义；对于麻醉药品和精神药品滥用的检测和运动员体内违禁药物的监测，也必须依据体内药物分析手段和技术才能完成。

药物产生药理作用的强度与其在体内作用部位（受体组织）的浓度直接相关，而药物在体内主要依靠血液输送至作用部位，因此血药浓度可作为药物在作用部位浓度的表观指标，即血液是体内药物分析的主要样品。

另外，尿液、唾液、头发和脏器组织等也可作为体内样品。

药物在体内的某些代谢产物常具有一定的生理活性，它们在体内的变化规律对母体药物的药理学与毒理学评价极为重要；机体内源性生物活性物质往往参与机体重要的生理过程，其变化规律的异常改变也与某些疾病的发病机制密切相关。

所以，体内特定药物代谢物和机体内源性生物活性物质也是体内药物分析的目标。

在测定体内药物及其特定代谢物或内源性生物活性物质时，除少数情况将体液作简单处理后可直接测定外，通常在测定之前要对体内样品进行分离净化与浓集等样品前处理，从而为体内样品中药物的测定提供良好的环境与条件。

体内样品大都具有以下性质特点：①采样量少，采样量一般为数毫升至数十微升，且在特定条件下采集，不易重新获得。

②待测物浓度低，通常在10-9~10-6g/ml级，甚至低至10-12g/ml。

③干扰物质多，血样中含有蛋白质、脂肪、尿素等有机物和Na+、K+等大量内源性物质通常对测定构成干扰；且体内的内源性物质可与药物结合，也能干扰测定。