第十章 分光光度法

透光度，透射比。用T表示。
注：溶液的透光率T反映了物质对光的吸收程度， T越大表示它对光的吸收越弱；反之，T越小，表 示对光的吸收越强。
T 取值为0.0 % ~ 100.0 %
T
全部吸收
T = 0.0 %
全部透射 T = 100.0 %
2.吸光度： 为透光率的负 A lg I0 lg 1 ＝ lgT
（四）吸光系数 1．定义（物理意义）
一定条件下，吸光物质在单位浓度及单位液层 厚度时的吸光度，叫这个物质的吸光系数。
2．两种表示方法
(1) 摩尔吸光系数( ε )：表示一定波长下，吸光物质的溶液
浓度为1mol/L，液层厚度为1cm时，溶液的吸光度。
(2)百分吸光系数(
E1% 1cm
)：表示一定波长下，吸光物质的溶
黄 橙
红
/nm 颜色 400-450 紫
450-480 蓝 480-490 青蓝 490-500 青 500-560 绿 580-610 黄 610-650 橙 650-760 红
互补光 绿
黄 橙 红 紫 蓝 青蓝 青
物质的颜色与光的关系：
完全吸收
光谱示意 复合光
表观现象示意
完全透过
吸收黄色光
二.物质对光的选择性吸收
A. A~λ曲线
B. A~c曲线
C. A~V曲线
D. E~V曲线
4、紫外分光光度法中，为了使测定结果有较高 的灵敏度和准确度，入射光的波长应（ ）
A．最大吸收波长
B．最小吸收波长
检测器 作用：将光信号转换为电信号，并放大 光电管，光电倍增管
信号输出 表头、记录仪、屏幕、数字显示
第十章
1 光源
在紫外可见分光光度计中，常用的光源 有两类：热辐射光源和气体放电光源 热辐射光源适用350nm-800nm，用于可见 光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电光源适 用150nm-400nm，用于紫外光区，如氢灯 和氘灯。
对数，用A表示。
It
T
A, 1.0
T,
T A
100
T = 0.0 %
C 三 者 0.5 的
A T%
A=∞
50
T = 100.0 %
关
A = 0.0
系
0
0
c
A越大,表明物质对光的吸收程度越强，T越小，浓度高；
A越小,说明物质对光的吸收程度越弱, T越大，浓度低。
（二）吸收光谱曲线 1、定义：通过测定被测物质对不同波长的光
第十章 分光光度法
第一节 基本原理 第二节 紫外-可见分光光度计 第三节 药物分析中含量测定和特
殊杂质的检查
第一节 基本原理
紫外分光光度法
｛ 分光光度法: 可见分光光度法
红外分光光度法
分光光度法: 利用物质对光的选择性吸收进行定性和定量
分析的一种仪器分析方法.
第一节 基本原理
紫外---可见分光光度法： 利用物质在紫外——可见光区（200nm-
即 A= Kc L
式中吸光系数κ与吸光物质的本性，入射光 波长及温度等因素有关。c为吸光物质浓度，L为 透光液层厚度。
（三）朗伯-比尔定律
适用范围： 1.均匀、无散射的稀溶液
2.平行单色光
注：朗伯比尔定律是分光光度法定量分析的依据。 不仅适用于有色溶液，也适用于无色溶液，可 见光区，紫外光区，红外光区。
射、衍射等现象，说明光具有波动性；同时 光还具有热辐射、光电效应等作用，又说明 光具有粒子性，因此可以把光的这种性质叫 作光的波粒二象性。
波动性:光速 波长 频率 粒子性：有能量
波长 ：两个相邻波峰或波谷间的距离（nm）
频率 ：单位时间里通过一固定点处波的数目 （s-1） =c/ 光速c= 3×1010 cm/s
长很短的光
5.用1,10-二氮菲光度法测定铁，已知Fe2+浓度为0.5mol/L， 比求色。皿厚度2厘米，在max=508nm测得配合物吸光度A =0.19，
第二节 紫外-可见分光光度计
基于样品对紫外—可见光区单色光的选择 性吸收的特性，测定物质的吸收度→定性 和定量分析
广泛应用于药物分析，环境监测，食品生 产和质量监测等行业部门。
习题练习 1. 在紫外—可见分光光度中常用的检测器为
（ ）。 A. 光电管 B. 高莱池 C. 硒光电管
D. 光电倍增管
2. 朗伯—比尔定律的数学表达式为（ ）。 A. A=c·L B. A=k·c·L C. A=k·L D. A=c·L
3. 标准曲线法中的标准曲线是指（ ）。
液浓度为1g/100ml(1%)，液层厚度为1cm时，溶液的吸光 M 1%
10
1cm
【例题：10-1】
课堂练习
1. 在紫外—可见分光光度法中，通常采用＿＿作为测定波长。
2. 紫外—可见分光光度法的合适检测波长范围是（ ）。
A. 400~760nm
cx

Ax AR
CR
【例题10-2】
第十章
2．吸光系数法
在没有标准品可供比较测定的条件下，按 文献规定条件测定被测物的吸光度，从样品的 配制浓度、测定的吸光度及文献查出的吸光系 数即可计算样品的浓度，因为
A= κcL
则样品浓度C=A／κL
【例题10-3】
第九章
3 标准曲线法(校正曲线法）
方法：配制一系列不同含量的标准溶液， 选用适宜的参比，在相同的条件下，测定 系列标准溶液的吸光度，作A-c曲线，即标 准曲线，也可用最小二乘数处理，得线性 回归方程。
2.用途：
a. 不同物质吸收光谱曲线的形状和收光谱λmax 及λmin均不同，故可做为物质定性分析的依据。
b. 用光度法做定量分析时，利用吸收光谱确定 最佳测定波长。 在吸收曲线中，通常选用最大吸收波长λmax为测 定波长，进行物质定量分析
第九章
（三）朗伯-比尔定律
1、朗伯定律 布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于
光通过某一液层厚度一定的某一含有吸光物质的 稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度成正比，
即 A= κ2 c 波长及式温中度比等例因常素数有κ关2与。吸c光为物吸质光的物本质性浓，度入。射光
第九章
（三）朗伯-比尔定律
3、朗伯-比尔定律
物理意义：当一束平行单色光通过均匀、 无散射的稀溶液时在单色光波长、强度、溶液温 度等条件不变的情况下，溶液的吸光度A与溶液 浓度c、液层厚度L乘积成正比。
第十章
2 单色器
单色器的主要组成：入射狭缝、出射 狭缝、色散元件和准直镜等部分。单 色器质量的优劣，主要决定于色散元 件的质量。色散元件常用棱镜和光栅。
第十章
3
吸收池（洗涤后要用待装液润洗）
吸收池又称比色皿或比色杯，按材 料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前 者不能用于紫外区。吸收池的种类很多， 其光径可在0.1~10cm之间，其中以1cm 光径吸收池最为常用。
第十章
4 检测器(核心部分） 检测器的作用是检测光信号，
并将光信号转变为电信号。现今使用的 分光光度计大多采用光电管或光电倍增 管作为检测器。
第十章
5
信号显示系统
常用的信号显示装置有直读检
流计，电位调节指零装置，以及自动记
录和数字显示装置等。
第十章
二.仪器的使用方法与注意事项
（一）紫外-可见分光光度计
第三节 药物分析中含量测定和 特殊杂质的检查
一、 药物含量测定方法
其定量方法包括吸光系数法、标准 曲线法和对照品比较法。
第十章
1 对照品比较法
即将待测溶液与某一标样溶液，在相 同的条件下，测定各自的吸光度，建立朗 伯-比尔定律，解方程求出未知样浓度与含 量。
对照品：AR=KcsL 样品：Ax=KcxL
/s-1 3×108 3×1010 3×1012 3×1014 3×1016 3×1018 3×1020 3×1022
(一)光的性质
1. 单色光
单一波长的光叫做单色光。 一般包括很窄的波长范围段。 例：黄色的光是由波长在560nm～590nm的电 磁波构成的。
2. 复合光
由不同波长的单色光混合组成的光叫复合光。 例：日光、教室里日光灯发出的光，
按光学系统分为单波长分光光度计和双波长分 光光度计 单波长分光光度计又可分为单光束和双光束
721型分光光度计
722型分光光度计
分光光度计的使用（课本第120-121页）
1.预热20min。 2.选定波长 3.固定灵敏度档 4.调节T = 0% 5.调节T = 100% （A=0） 6.测定样品的吸光度A 7.浓度的测定 8.关机
3. 可见光
人眼可以看到辨别的光叫可见光。可见光的波 长范围：400nm～760nm。
4.光的色散:—白光透过三棱镜,分解成红、橙、
黄、绿、青、蓝、紫的顺序排列的彩色光带 的现象，称之为光的色散。
5.光的互补
绿 青
青蓝 蓝 紫
若两种不同颜色的单色光按一定的强度比 例混合得到白光，那么就称这两种单色光 为互补色光，这种现象称为光的互补。
第十章
. 比色皿的使用应注意：
a. 拿：为保护透光面， 使用时拿毛玻璃面。 b. 洗：比色皿内、外壁可以用蒸馏水清洗。不能 用洗液洗。因为比色皿是透明材料用胶粘成的，洗液 腐蚀性很强，会使比色皿开胶。附着有色物质：用 1mol/L HCl-乙醇溶液(1:2)清洗，再用蒸馏水洗干净。 附着油污：用5％NaOH溶液清洗，再用蒸馏水洗净。 c. 擦：用镜头纸朝一个方向轻轻的擦。 d. 装：装至容积的2/3～3/4。 e. 放：放置比色皿时，透光面朝向光通过的方向
电磁辐射按波长或频率的顺序排列，称电磁波 谱
γ射线→ X 射线→紫外光→可见光→ 红外光→微波→无线电波