5 分光光度法

分光光度法用于试样色度的测定
试样色度的测定：分光光度法
原理：黄度指数可定量地描述式样的颜色，用分光光度计或比色计测定并计算试样的黄变度，从标准比色液的黄变度-铂钴色度号的标准曲线查得试样的色度号，以铂-钴色号表示结果。

（注：黄变度为标准比色液与水的黄度指数的差值。

）
试剂：铂-钴标准比色液在0到30号范围内配制不少于10个色号的标准比色液。

仪器：分光光度计、比色皿：厚度1cm、比色计
操作步骤：
（1）在1000ml容量瓶中将1.00g六水合氯化钴和1.245g铂酸钾溶于水中，加100ml盐酸溶液，定容至刻度，混匀。

配制成标准比色母液。

（500色度号）
（2）用移液管将标准比色母液2ml，5ml，7ml，10ml，12ml，15ml，17ml，20ml，22ml，25ml，27ml，30ml，分别移于500ml的容量瓶中加水至刻度混匀，配成2，5,7,10,12,15,17,20,22,25,27,30，铂-钴色度号的标准铂-钴对比溶液。

（3）调整分光光度计（空皿放入参比池，水放入样品池）使透光度为100%，测试并计算水、标准比色液及样品的透光度和黄变度：以标准比色液的铂-钴色号为横坐标，对应的黄变度为纵坐标，绘制标准曲线。

根据式样的黄变度，由标准曲线查出样品的色度号。

耀华仪器提供多种型号分光光度计及各种化学试剂，如有需要请来电咨询。

分光光度法测定铁含量的方法汇总1.原理：分光光度法测定铁含量的原理基于铁离子(Fe2+或Fe3+)与结合剂之间的络合反应。

铁离子与结合剂形成络合物时，会发生颜色变化，这种变化可以通过分光光度计测量。

2. 选择合适的结合剂：不同的结合剂适用于不同形态的铁离子。

比较常用的结合剂有邻苯二甲酸(1,10-苯基次甲基")(FERROXINE)、2,2'-联吡啶/Fe2+络合物（Bipyridyl/Fe）、硫巴比妥酸等。

3.样品前处理：对于一些含有浑浊物质的样品，需要进行前处理，如过滤或离心等，以去除干扰物。

4.准备标准曲线：制备一系列已知浓度的标准溶液，并测定它们的吸光度。

利用吸光度与浓度之间的线性关系绘制标准曲线。

标准曲线可以用来计算待测样品中铁离子的浓度。

5.测定样品吸光度：对于待测样品，将其溶液吸入分光光度计的比色皿中，调至适当的波长，并测量其吸光度。

注意要进行对比性测量，即测定样品的同时，还要测定一个空白试液的吸光度，用来做背景噪声的修正。

6.计算待测样品中铁离子的浓度：使用标准曲线，根据待测样品的吸光度值，可以通过插值或外推得到样品中铁离子的浓度。

7.质量控制：为了保证实验结果的准确性和可靠性，可以进行质量控制检查。

这包括对标准溶液进行重复测定、制备空白试液并测定其吸光度、进行样品间和试剂间的复测等。

8. 数据处理：根据测定得到的吸光度值和标准曲线，计算样品中铁元素的含量。

可以使用Excel等数据处理软件进行计算。

需要注意的是，实际操作中，具体的方法会根据不同的实验条件和目的进行调整，但是上述几点是分光光度法测定铁含量的基本步骤。

同时，对于一些特殊的样品，可能需要通过前处理或选择不同的结合剂来提高测定的准确性和灵敏度。

实验五水中铬的测定——分光光度法废水中铬的测定常用分光光度法，其原理基于：在酸性溶液中，六价铬离子与二苯碳酰二肼反应，生成紫红色化合物，其最大吸收波长为540nm，吸光度与浓度的关系符合比尔定律。

如果测定总铬，需先用高锰酸钾将水样中的三价铬氧化为六价，再用本法测定。

一、实验目的和要求（1）掌握用分光光度法测定六价铬和总铬的原理和方法；熟练应用分光光度计。

（2）预习第二章第六节中测定铬的各种方法，比较其优、缺点。

二、六价铬的测定（一）仪器（1）分光光度计、比色皿（1cm、3cm）。

（2）50ml具塞比色管、移液管、容量瓶等。

（二）试剂（1）丙酮。

（2）（1+1）硫酸。

（3）（1+1）磷酸。

（4）0.2%（m/V）氢氧化钠溶液。

（5）氢氧化锌共沉淀剂;称取硫酸锌（ZnSO4·7H2O）8g，溶于100ml水中；称取氢氧化钠2.4g，溶于新煮沸冷却的120ml水中。

将以上两种溶液混合。

（6）4%（m/V）高锰酸钾溶液。

（7）铬标准贮备液：称取于120℃干燥2h的重铬酸钾（优级纯）0.2829g，用水溶解，移入1000ml容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀。

每毫升贮备液含0.100mg六价铬。

（8）铬标准使用液：吸取5.00ml铬标准贮备液于500ml容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀。

每毫升标准使用液含1.00ug六价铬。

使用当天配制。

（9）20%（m/V）尿素溶液。

（10）2%（m/V）亚硝酸钠溶液。

（11）二苯碳酰二肼溶液：称取二苯碳酰二肼（简称DPC,C13H14N4O）0.2g，溶于50ml丙酮中，加水稀释至100ml，摇匀，贮于棕色瓶内，置于冰箱中保存。

颜色变深后不能再用。

（三）测定步骤（1）水样预处理：①对不含悬浮物、低色度的清洁地面水，可直接进行测定。

②如果水样有色但不深，可进行色度校正。

即另取一份水样，加入除显色剂以外的各种试剂，以2ml丙酮代替显色剂，用此溶液为测定样溶液吸光度的参比溶液。

(五)氨氮(非离子氨)、凯氏氮、总氮分类号：W6-4在60℃以上的水溶液中过硫酸钾按如下反应式分解，生成氢离子和氧。

K2S2O8+H2O→2KHSO4+1/2O2KHSO4→K-1+HSO4- HSO4-→H++SO42-加入氢氧化钠用以中和氢离子，使过硫酸钾分解完全。

在120~124℃的碱性介质条件下，压过硫酸钾作氧化剂，不仅可将水样中的氨氮和亚硝酸盐氮氧化为硝酸盐，同时将水样中大部分有机氮化合物氧化为硝酸盐。

而后，用紫外分光光度法分别于波长220nm与275nm处测定其吸光度，按A=A220-2A275计算硝酸盐氮的吸光度值，从而计算总氮的含量。

其摩尔吸光系数为1.47×103L/(mol*cm).一、填空题1．纳氏试剂比色法测定水中氨氮时，为除去水样色度和浊度，可采用法和法。

①答案：絮凝沉淀蒸馏2．纳氏试剂比色法测定水中氨氮时，水样中如含余氯可加入适量去除，金属离子干扰可加入去除。

①答案：Na2S2O3掩蔽剂3．纳氏试剂比色法测定水中氨氮时，纳氏试剂是用、和KOH试剂配制而成，且两者的比例对显色反应的灵敏度影响较大。

①答案：KI HgCl2(或HgI2)4．纳氏试剂比色法测定水中氨氮的方法原理是：氨与纳氏试剂反应，生成色胶态化合物，此颜色在较宽的波长内具强烈吸收，通常在410～425nm下进行测定。

①答案：淡红棕5．水杨酸分光光度法测定水中铵时，在亚硝基铁氰化钠存在下，铵与水杨酸盐和次氯酸离子反应生成色化合物，在697nm具有最大吸收。

②答案：蓝6．测定水中铵的水杨酸分光光度法的最低检出浓度为mg／L：测定上限为mg/L。

②答案：0.01 17．水杨酸分光光度法测定水中铵，采用蒸馏法预处理水样时，应以溶液为吸收液，显色前加溶液调节到中性。

②答案：硫酸氢氧化钠8．水杨酸分光光度法测定水中铵时，显色剂的配制方法为：分别配制水杨酸和酒石酸钾钠溶液，将两溶液合并后定容。

如果水杨酸未能全部溶解，可再加入数毫升溶液，直至完全溶解为止，最后溶液的pH为②答案：氢氧化钠 6.0～6.59．总氮测定方法通常采用过硫酸钾氧化，使水中和转变为硝酸盐，然后再以紫外分光光度法、偶氮比色法、离子色谱法或气相分子吸收法进行测定。

收稿日期:2003 10 15修订日期:2003 11 20薯蓣皂苷元测定方法的研究概况彭晓英1,周朴华1,裴 刚2,蒋道松1(1.湖南农业大学,湖南长沙 410128; 2.湖南中医学院,湖南长沙 410007)摘 要:薯蓣皂苷元是薯蓣皂苷的水解产物,它是许多重要甾体激素的重要前体物质。

本文主要介绍近年来薯蓣皂苷元的分析测定方法。

薯蓣皂苷水解为薯蓣皂苷元的方法有常规酸水解法和两相溶剂法等,当前含量测定常用的方法有重量法、分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱法、薄层色谱法等方法。

关键词:薯蓣皂苷元;甾体激素;高效液相色谱法;气相色谱法;薄层色谱法中图分类号:Q 949.71+8.27 文献标识码:A 文章编号:1003 5710(2004)01 0027 03 薯蓣皂苷元(Diosgenin)是多种薯蓣科薯蓣属植物根状茎中所含主要皂苷成分的水解产物,化学名为 5 20 E ,22 E ,25 F 螺甾烯 3 醇,简称为 5 异螺甾烯 3 醇,是异螺甾烷的衍生物。

由于薯蓣皂苷元A/B 环处5-烯3-醇结构很易转变成为4 烯 3 酮结构,故常用来作为甾体抗炎药(如地塞米松等)、性激素类药物(如黄体酮、睾酮等)、避孕药(如炔诺酮、炔雌醇等)的重要前体物质。

由于薯蓣属植物的根状茎中除含少量的薯蓣皂苷元外,还含有大量的淀粉、纤维素及其它成分,所以如何将它们进行有效分离并快速、准确的进行薯蓣皂苷元的含量测定,已成为薯蓣皂苷元生产加工单位和相关研究院所关注的焦点。

本文将就近年来薯蓣皂苷元测定方法研究进展作一概述,以便为更好的开发利用薯蓣属资源和加速甾体激素工业的发展提供技术理论参考。

1 薯蓣皂苷元的提取薯蓣属植物根状茎中的薯蓣皂苷是以皂苷元与糖基相结合的形式存在,所以需要将皂苷进行水解才能得到薯蓣皂苷元。

已报道的常用提取方法有:常规酸水解法、自然发酵法、酶酵解法及两相溶剂水解法。

1.1 常规酸水解法常规酸水解法通常是将含有薯蓣皂苷元的根状茎鲜样适量置于烘箱(60 )鼓风干燥至恒重后研磨成粉末,称取适量置圆底烧瓶内,加稀硫酸或盐酸于电热套中加热(80~90 )回流数小时,倾出、抽滤,并将滤渣洗至中性,在索氏抽提器中用石油醚回流进行提取数小时,浓缩回收,60 下真空干燥,可得薯蓣皂苷元粗提物。

分光光度法测钒
分光光度法是一种常见的分析方法，用于测定物质的浓度。

在分光光度法中，通过将样品溶液与某种试剂反应，形成有色物质，并测量其在特定波长下的吸光度来计算样品中物质的浓度。

钒是一种重要的金属元素，广泛应用于钢铁制造、电子工业和化学工业等领域。

因此，分析钒的浓度是很有必要的。

分光光度法测定钒的方法主要是通过与5-Br-PADAP反应，生成紫色的有机络合物，测量其在510nm处的吸光度来计算钒的浓度。

在实验中，首先需要将待测样品处理成适当的浓度。

然后加入5-Br-PADAP试剂，使其与样品中的钒形成络合物。

在反应过程中，可以通过pH值的调节来控制络合反应的速率和效果。

最后，通过分光光度计测量样品在510nm处的吸光度，并根据标准曲线计算出样品中钒的浓度。

分光光度法测定钒的方法具有操作简单、灵敏度高、准确性好等优点，在实际分析中被广泛应用。

- 1 -。

分光光度法测定水质中铁的研究水是生命之源，人类生活离不开水，但由于经济发展和人口增加等原因，水资源的污染问题也越来越严重。

其中，重金属污染对水环境的破坏极大，而铁作为一种重要的金属元素，其污染问题也备受关注。

因此，对水中铁的检测就显得至关重要。

目前，分光光度法被广泛应用于测定水质中铁的含量。

本文就为大家介绍分光光度法测定水质中铁的原理、优势、操作步骤及误差分析等方面的内容。

一、测定原理分光光度法是一种以物质吸收光的特性进行分析的方法。

通过测量样品在特定波长处的吸光度，从而确定样品中目标元素的含量。

对于水质中铁的测定，通常采用四氢溴酸酸性条件下的邻二氢吡啶纳米粒子-Fe（Ⅲ）络合物的分光光度法。

首先将样品加入适量的邻二氢吡啶吸附剂中，使铁与邻二氢吡啶作用，形成Fe（Ⅲ）络合物。

然后，用NaBH4还原剂还原Fe（Ⅲ）为Fe（Ⅱ），Fe（Ⅱ）与邻二氢吡啶形成纳米粒子，生成了邻二氢吡啶纳米粒子-Fe（Ⅲ）络合物。

最后，通过分光光度法测量该络合物在720nm处的吸光度，从而测定水质中铁的含量。

二、测定优势与其他测定方法相比，分光光度法具有以下优势：1. 分析过程简单，操作方便，可实现快速测定。

2. 准确度高，灵敏度高，测定结果精准可靠。

3. 仪器设备较为简单，设备成本低，易于使用。

4. 对于水质中铁离子的测定，在低量级样品中也具有良好的测定特性。

三、操作步骤下面是一个分光光度法测定水质中铁的操作步骤：1. 准备样品。

将待测水样均匀搅拌后，取适量样品加入邻二氢吡啶吸附剂中。

2. 溶解。

加入适量氢氧化钠和四氢溴酸，将样品溶解。

3. 还原。

加入定量NaBH4还原剂2次，即可将Fe（Ⅲ）还原为Fe（Ⅱ）。

4. 稳定。

样品加入MOPS缓冲液稳定铁离子和纳米粒子的形成。

5. 吸光度。

在720nm处使用分光光度计测量样品吸光度。

6. 计算结果。

利用标准曲线计算样品中铁的含量。

四、误差分析分光光度法在测定水质中铁的含量时，误差来源主要有以下几种：1. 样品准备。

实验五：空气中甲醛的测定（酚试剂分光光度法）实验目的：掌握甲醛测定方法；熟练掌握大气采样器和分光光度计的使用；实验原理：甲醛的测定方法：分光光度法、气相色谱法、酚试剂分光光度法、乙酰丙酮分光光度法；空气中的甲醛与3-甲基2-苯并噻唑酮腙酚试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化形成蓝绿色化合物，颜色深浅与甲醛含量成正比，物质的最大吸收波长为630nm，通过比色定量。

当采样体积为10L时最低检出质量浓度为0.01mg／m3。

实验仪器：分光光度计（在630nm测定）；大气采样器；具塞比色管（10ml）；分析天平；滴定管；容量瓶；量筒；移液管等1、吸收液原液:称量0.10g酚试剂[C6H4SN(CH3)C:NNH2·HCl,简称NBTH]，加水溶解，倾于100ml具塞量筒中，加水到刻度。

放冰箱中保存，可稳定三天。

吸收液：量取吸收原液5ml，加95ml水，即为吸收液。

采样时，临用现配。

2、1%硫酸铁铵溶液3、碘溶液[C（1/2I2）=0.1000mol/L]4、1mol/L氢氧化钠溶液5、0.5mol/L硫酸溶液：取28ml浓硫酸缓慢加入水中，冷却后，稀释至1000ml。

6、硫代硫酸钠标准溶液[C（Na2S2O3）=0.1000mol/L]0.5%淀粉溶液：将0.5g可溶性淀粉，用少量水调成糊状后，再加入100ml沸水，并煎沸2～3min至溶液透明确。

7、甲醛标准贮备溶液：取2.8ml含量为36～38%甲醛溶液，放入1L容量瓶中，加水稀释至刻度。

此溶液1ml约相当于1mg甲醛。

其准确浓度用下述碘量法标定。

实验步骤：1、样品采集：用一个内装5ml吸收液的大型气泡吸收管，以0.5L/min流量，采气10L。

并记录采样点的温度和大气压力。

采样后样品在室温下应在24h内分析。

2、甲醛标准贮备溶液的标定：精确量取20.00ml待标定的甲醛标准贮备溶液，置于250ml碘量瓶中。

加入20.00ml[C（1/2I2）=0.1000mol/L]碘溶液和15ml 1mol/L氢氧化钠溶液，放置15min，加入0.5mol/L硫酸溶液，再放置15min，用[C（Na2S2O3）=0.1000mol/L]硫代硫酸钠溶液滴定，至溶液呈现淡黄色时，加入1ml 5%淀粉溶液继续滴定至恰使兰色褪去为止，记录所用硫代硫酸钠溶液体积（V2），ml。

实验5 分光光度法测定水中总铁一、实验目的（1）掌握选择分光光度分析的条件及分光光度测定铁的方法。

（2）掌握分光光度计的性能、结构及其使用方法。

二、实验原理1,10-二氮菲是测定铁的一种很好的显色剂，在PH=2～9（一般维持pH=5～6）时，与二价铁生成稳定的红色配合物：Fe2+ + 3phen → Fe(phen)32+1,10-二氮菲其中lgK稳=21.3，在510nm下摩尔吸光系数ε=1.1x104L/(mol·cm)。

用盐酸羟胺将Fe（Ⅲ）还原为Fe（Ⅱ），用1,10-二氮菲作显色剂，可测定试样中总铁。

本法选择性高，相当于铁量40倍的锡（Ⅱ）、铝（Ⅲ）、钙（Ⅱ）、镁（Ⅱ）、锌（Ⅱ）、硅（Ⅱ）、20倍的铬（Ⅵ）、钒（Ⅴ）、磷（Ⅴ），5倍的钴（Ⅱ）、镍（Ⅱ）、铜（Ⅱ）不干扰测定。

为了使测定结果有较高的灵敏度和准确度，必须选择适宜的测量条件，主要包括入射光波波长、显色剂用量、有色溶液的稳定性、溶液酸度等。

1.入射光波长为了测定结果有较高的灵敏度，应选择被测物质的最大吸收波长的光作为入射光。

这样，不仅灵敏度高，准确度也好。

当有干扰物质存在时，不能选择最大吸收波长，可根据“吸收最大，干扰最小”的原则来选择测定波长。

2.显色剂用量加入过量显色剂，能保证显色反应进行完全，但过量太多，也会带来副反应，如增加空白溶液的颜色、改变组成等。

显色剂的合适用量可通过实验来确定。

由一系列被测元素浓度相同、不同显色剂用量的溶液分别测其吸光度，作吸光度-显色剂用量曲线，找出曲线平坦部分，选择一个合适用量即可。

3.有色配合物的稳定性有色配合物的颜色应当稳定足够的时间，至少应保证在测定过程中吸收度基本不变，以保证测定结果的准确度。

4.溶液酸度许多有色物质的颜色随溶液的PH而改变，如酸碱指示剂的颜色与PH有关。

某些金属离子在酸度较低时会水解，影响测定；另一些显色剂阴离子在较高H+浓度下，会与H+结合而降低显色剂浓度等。