miR—218抑制卵巢癌细胞A2780对顺铂耐药性的实验研究

GRP78在卵巢癌顺铂耐药中的作用及其调控机制的
体外研究的开题报告
题目：GRP78在卵巢癌顺铂耐药中的作用及其调控机制的体外研究
背景与目的：
卵巢癌是女性常见的恶性肿瘤之一，顺铂是其首选的化疗药物。

然而，顺铂耐药往往导致化疗效果不佳，影响患者的生存率和生活质量。

近年来的研究表明，在肿瘤细胞中，内质网应激和相关信号通路参与卵巢癌顺铂耐药的形成。

其中，GRP78作为内质网应激中的重要分子，参与了多种癌症的发生、发展和治疗。

因此，本研究旨在探究GRP78在卵巢癌顺铂耐药中的作用，并研究其调控机制，为新的治疗策略提供理论基础。

研究内容与方法：
本研究将以人卵巢癌细胞株A2780和顺铂耐药细胞株A2780/DDP 为研究对象，采用RNA干扰和Western blotting技术，通过GRP78的干扰和过表达，研究其在卵巢癌顺铂耐药中的作用及其调控机制。

同时，通过对内质网应激相关蛋白的检测，进一步探究GRP78在内质网应激通路中的作用，并分析其与顺铂耐药的关系。

预期结果与意义：
本研究预计将揭示GRP78在卵巢癌顺铂耐药中的作用机制，并探讨其与其他内质网应激信号通路的关系。

同时，本研究的结果将为开发新的治疗策略提供理论基础，并有助于提高顺铂耐药卵巢癌患者的治疗效果和生存率。

卵巢癌耐药细胞株A2780-CP的建立及CD44+肿瘤干细胞功能验证目录第一章前言 (1)第二章材料与方法 (3)2.1实验材料 (3)2.2培养基及主要试剂 (3)2.3实验所用设备 (4)2.4主要试剂的配制 (4)2.5实验方法 (5)第三章结果与分析 (11)3.1 A2780-CP耐药细胞株和A2780普通细胞株生物学特性差别 (11)3.2 A2780-CP与A2780肿瘤干细胞生物学特性验证 (13)第四章讨论 (19)第五章结论 (22)参考文献 (23)综述 (26)卵巢癌干细胞与多药耐药之间的关系 (26)参考文献 (35)中英文缩略词表 (41)致谢 (42)卵巢癌耐药细胞株A2780-CP的建立及CD44+肿瘤干细胞功能验证第一章前言第一章前言卵巢癌是妇科常见三大肿瘤之一，其发病率低于子宫内膜癌，然而死亡率却位居妇科肿瘤之首[1]，对妇女生命健康有的极大的威胁。

卵巢的胚胎发育，组织解剖及内分泌功能相对较复杂，从而导致卵巢癌在早期表现出不明显的症状，并缺乏行之有效的早期诊断方法。

而很多患者发现时已经处于中晚期，无法进行手术治疗，需要借助抗肿瘤药物进行治疗。

虽然近年来各种小分子药物、抗体药物、免疫疗法等层出不穷，但顺铂和紫杉醇依然是卵巢癌的一线用药方式，可是80%-85%的卵巢癌患者会产生药物耐性，导致治疗失败[2]。

现有多数研究认为细胞耐药的根源是肿瘤干细胞，一种肿瘤组织中存在的一小群自我更新并多向分化的细胞[3]。

这部分细胞高表达耐药相关基因，可以将药物泵出体外减少对自身的伤害；另一方面，化疗药物可明显杀伤快速分裂的细胞，而处于静止状态的肿瘤干细胞具有的这一独有特性使之有利于避免被肿瘤药物杀伤[4]。

关于肿瘤干细胞的起源有多种学说，国内外学说现普遍接受的是：肿瘤干细胞很有可能来自突变了的成体干细胞。

肿瘤的产生是由于突变长期累积的结果，因而这一过程相当漫长。

而已经失去继续分裂能力的分化的体细胞，其生命周期短，无法完成多个基因突变的累积。

·论著·APE1siRNA增强卵巢癌细胞铂类敏感性的实验研究*张颖1，2，辛晓燕1＊＊，王建1，杨红1，陈必良1，王东3（1．第四军医大学西京医院妇产科，西安710032；2．解放军第三二三医院妇产科，西安710054；3．第三军医大学大坪医院肿瘤中心，重庆400042）【摘要】目的：本研究通过观察脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶（APE1/Ref-1）小分子干扰核糖核酸（siRNA）对卵巢癌细胞中APE1表达水平及顺铂敏感性的影响，探讨以APE1为靶点的基因治疗在卵巢癌化疗增敏中的临床应用前景。

方法：应用RNAi技术抑制卵巢癌顺铂敏感株A2780和顺铂耐药株A2780/CP70中APE1的表达，并用MTT法及TUNEL等技术检测APE1siRNA对卵巢癌细胞铂类敏感性的影响。

结果：MTT药物敏感试验表明，20MOI和40MOI APE1siRNA处理后，A2780细胞顺铂IC50值由对照组的31．62μmol/L分别降低为13．38μmol/L和3．48μmol/L，有统计学差异（P＜0．01）。

20MOI和40MOI APE1siRNA处理后，A2780/CP70细胞的顺铂IC50值分别为39．73μmol/L和12．43μmol/L，较对照组（64．20μmol/L）分别下降了38．12%和80．64%，有统计学差异（P＜0．01）。

TUNEL凋亡原位检测表明，40MOI APE1siRNA处理后，A2780和A2780/CP70细胞的凋亡指数分别为（42．16ʃ3．61）%和（46．11ʃ3．81）%，分别是DDP组的3．57倍、4．94倍，有统计学差异（P＜0．01）。

结论：抑制APE1表达能显著增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性，APE1可能是逆转卵巢癌铂类耐药的有效靶点。

【关键词】顺铂；卵巢肿瘤；RNA，小分子干扰；DNA-（无嘌呤或无嘧啶位点）裂合酶中图分类号：R737．31文献标志码：A文章编号：1004－7379（2012）08－0590－06APE1siRNA enhances platinum-sensitivity of human ovarian cancer cells．Zhang Ying1，2，Xin Xiaoyan1，Wang Jian1，et al．1．Department of Gynecology and Obstetrics，Xijing Hospital，Fourth Military Medical University，Xi＇an710032；2．Department of Gynaecology and Obstet-rics，PLA323Hospital，Xi＇an710054【Abstract】Objective：To investigate the effect of apurinic/apyrimidinic endonuclease（APE1/Ref-1）small interfering RNA（siRNA）on the expression of APE1and the sensitivityto cisplatin in human ovarian cancer A2780and A2780/CP70cells．Methods：The expressionof human APE1protein was detected by Western blot analysis and indirect immunofluorescenceafter APE1siRNA was transfered into ovarian cancer cells．A2780and A2780/CP70cells weretreated with cisplatin at various concentrations48hours after APE1siRNA transfection into o-varian cancer cells．The cellular proliferation capacity was observed with3-（4，5-dimethylthia-zol-2-yl）-2，5-diphenyltetrazolium bromide（MTT）assay．Cell apoptosis was determined by TUNEL．Results：APE1siRNA could effectively suppress the APE1expression．The data ofMTT showed that APE1siRNA enhanced platinum sensitivity of A2780and A2780/CP70cell lines．Pretreatment with20MOI and40MOI APE1siRNA respectively，the50%inhibitory con-centration（IC50）value of cisplatin in A2780cells was13．38μmol/L and3．48μmol/L，while＊＊＊陕西省科技攻关计划（No：2011K13-03-06）；国家自然科学基金（No：81172460，81172458，81072144）通讯作者Email：gynobs@fmmu．edu．cnthe IC50value of cisplatin in the control group was31．62μmol/L（P＜0．01）．The A2780/CP70cells pretreated with20MOI and40MOI APE1-siRNA had IC50values of cisplatin ran-ging from64．20μmol/L to39．73μmol/L and12．43μmol/L respectively，dereased by38．12% and80．64%compared with the control group（P＜0．01）．The apoptosis assays using TUNEL analysis showed that APE1siRNA also increased apoptosis induced by cisplatin in A2780and A2780/CP70cells．Pretreated with20MOI and40MOI APE1-siRNA，the apoptotic indexs of A2780and A2780/CP70cell lines were（42．16ʃ3．61）%and（46．11ʃ3．81）%，increased by3．57-fold and4．97-fold respectively（P＜0．01）．Conclusions：Our data suggest that inhib-iting APE1expression can improve cisplatin chemotherapy sensitivity remarkably and increase apoptosis in ovarian cancer cells．Targeting inhibition of APE1maybe a new promising approach to reversel platinum resistance agent in ovarian cancer．【Key words】Cisplatin；Ovarian neoplasms；RNA，small interfering；DNA-（apurinic or apyrimidinic site）lyase卵巢癌是严重威胁妇女健康的常见恶性肿瘤，死亡率在女性生殖器恶性肿瘤中居第一位。

肺癌顺铂耐药的分子机制垦匪壁堕塑查！！塑呈璺！！堂星！塑！！！』墨！！Ｐ！！，！！坠；塑！，！！！：堑：堕！：！张梅春胡成平【擒要ｌ顺铂耐药是肺癌多学科综合治疗中的棘手同题。

肺癌顺销耐药的分子机制复杂，除主要与耐药相关基因的改变、细胞解毒和ＤＮＡ损伤修复基因的改变外，还与染色体改变、凋亡相关基因的改变、细胞骨架、血管形成及细胞外基质密度异常有关。

明确顺铂耐药的分子机制，对肺癌临床治疗方案的选择，避免和克服多药耐药具有重要意义。

【关键词】肺癌；顺铂；耐药；基因；分子生物学顺铂（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ，ＣＤＤＰ）是一作用较强的抗肿瘤药物，对各种实体瘤均具有显著的临床疗效。

对肺癌实施的以顺铂为主的联合化疗方案的多学科综合治疗，已经取得了显著的疗效。

已经明确，肺癌化疗可以延长患者的生存期。

然而，由于耐药的发生，常常导致肺癌化疗的失败，并限制了铂类药物的广泛应用。

肺癌顺铂耐药的分子机制复杂，涉及染色体和基因表达的异常，也和细胞骨架和血管形成及细胞外基质密度异常有关。

现就肺癌顺铂耐药的上述分子机制进行综述。

１分子机制１．１染色体异常和顺铂耐药研究表明”］，某些染色体局部区域的功能异常可能与肿瘤顺铂耐药有关。

对顺铂耐药肿瘤细胞系中的异常染色体区分析发现，染色体６ｑ２ｌ一２５区复制水平升高，两７ｑ２１—３６区和１０ｑ１２—１５区复制水平则降低。

卵巢癌耐顺铂的患者中同样也广泛存在１ｑ２１—２２和１３ｑ１２—１４区的功能增强。

对顺铂耐药可能是一些肿瘤细胞的显性特征。

１．２细胞内药物蓄积减少１．２．１ＭＤＲｌＭＤＲｌ基因在多种恶性肿瘤中呈过度表达，并参与肿瘤经典多药耐药（ｍｕｌｔ｜ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＭＤＲ）的发生。

ＭＤＲｌ在肺癌中也呈高表达，并与肺癌对阿霉素和依托泊苷（ｅｔｏｐｓｉｄｅ，ｖＰ１６）的耐药形成有关。

Ｉｎｏｕｅ等０３发现，Ｐ一糖蛋白（Ｐ＿ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，Ｐ—ｇｐ）阳性可作为肺腺癌对顺铂耐药性增高的一个预示因子。

顺铂耐药的分子机制及中药干预的研究进展顺铂是临床上广泛应用的一线抗癌药物，但顺铂耐药性的产生降低了顺铂的疗效。

顺铂是一种细胞周期非特异性药物，其主要作用靶点是细胞内具有亲核性的蛋白质、DNA和RNA。

顺铂耐药机制是多因素的，其中转运蛋白的异常表达、细胞内解毒作用的增强、DNA修复能力的增加以及细胞凋亡受阻是顺铂耐药的主要机制。

中药在肿瘤治疗中具有独特的优势，中药与顺铂联用能够提高疗效。

该文对顺铂耐药的机制和近年来中药与顺铂联合应用的研究进展进行综述。

标签：顺铂；耐药；联合用药；中药顺铂（cisplatin，DDP）是临床治疗肿瘤的广谱抗癌药，自1978年首次被FDA批准用于治疗膀胱癌和睾丸癌以来，多用于肺癌、卵巢癌、头颈癌等其他实体瘤的治疗[1]。

继第一代铂类药物顺铂之后，相继研发出第二代卡铂和第三代铂类药物奥沙利铂，但顺铂在卵巢癌三期等临床治疗中仍是最主要的药物[2]。

由于顺铂在治疗肿瘤的过程中会出现原发性耐药和获得性耐药，其中获得性耐药的迅速出现是顺铂化疗失败的主要原因[3]。

迄今为止，顺铂进入细胞内的机制仍旧没有完全明确，顺铂在血浆及细胞外结构稳定，由于细胞内的氯离子浓度相对于血浆以及细胞外液偏低，顺铂的氯离子解离后被水分子取代而具有亲电子特性，易与细胞内亲核物质如谷胱甘肽、金属硫蛋白、蛋氨酸、DNA等结合而形成加合物[4]。

顺铂耐药是一个多因素、多基因的复杂过程，有研究发现：中药与顺铂联用能够提高顺铂对肿瘤细胞的增殖毒性作用，诱导细胞凋亡从而提高肿瘤细胞对顺铂的敏感性。

1 顺铂耐药机制1.1 顺铂的转运和代谢改变顺铂的理化性质决定了顺铂进入细胞和发挥细胞毒性的方式。

药物代谢的改变能够引起原发耐药和获得性耐药，与顺铂代谢有关的耐药研究较多，包括顺铂的摄取、流出和解毒过程。

很长一段时间内，人们认为顺铂是通过被动扩散进入细胞内，然而研究发现参与细胞铜代谢平衡过程的膜蛋白铜转运蛋白1（copper transporter 1，CTR1）参与顺铂的转运过程。

细胞自噬与人卵巢癌细胞对顺铂耐药的关系目的探讨细胞自噬与人卵巢癌细胞对顺铂耐药的关系。

方法以不同浓度的顺铂（0、1、2、4、8、16 μg/mL）分别作用人卵巢癌细胞A2780及其顺铂耐药株A2780/DDP 48 h，采用MTT法检测卵巢癌细胞的增殖率，透射电镜检测顺铂诱导细胞自噬体的形成，Western blot法测定自噬和凋亡相关蛋白。

结果与A2780对照比较，A2780/DDP增殖率明显升高（P < 0.01）；顺铂可以诱导A2780及A2780/DDP中自噬體的形成，且A2780和A2780/DDP中LC3-Ⅱ水平均升高，这种作用可以被自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）阻断；顺铂可以诱导A2780中凋亡相关蛋白Cleaved-PARP水平升高，但作用A2780/DDP时影响不大，当3-MA与顺铂同时作用人卵巢癌细胞时，A2780/DDP中的Cleaved-PARP表达水平显著升高（P < 0.01）。

结论卵巢癌细胞的耐药可能与顺铂诱导卵巢癌细胞自噬有关，自噬抑制剂3-MA可以抑制顺铂诱导的细胞自噬，同时促进顺铂诱导人卵巢癌细胞凋亡，且增加顺铂耐药株对顺铂的敏感性。

[Abstract] Objective To study the relationship between cell autophagy and Cisplatin resistance in the ovarian cancer cells. Methods Cell proliferation was determined by an MTT assay after A2780 and A2780/DDP cells were treated by Cisplatin at different concentrations （0，1，2，4，8，16 μg/mL）for 48 h，the formation of autophagosomes were detected by transmission electron microscopy，both autophagy and apoptosis related protein expression were determined by Western blot. Results Compared with the control of A2780，A2780/DDP proliferation rate was significantly increased （P < 0.01）；Autophagy，characterized by an increase in the number of autophagosomes and LC3-II protein level，was observed in Cisplatin-treated A2780 and Cisplatin-treated A2780/DDP cells，which could be blocked by autophagy inhibitor 3-methyl adenine （3-MA）；Cleaved-PARP protein level was increased in Cisplatin-treated A2780 cells while almost no effect in Cisplatin-treated A2780/DDP cells，however，Cleaved-PARP protein level was significantly increased in Cisplatin and 3-MA-treated A2780/DDP cells （P < 0.01）. Conclusion Resistance of ovarian cancer cells may be associated with autophagy induced by Cisplatin，autophagy inhibitor 3-MA can inhibite autophagy，but promote apoptosis induced by Cisplatin in ovarian cancer cells，and increase the Cisplatin sensitivity to Cisplatin resistant strains.[Key words] Cisplatin；Resistance；Ovarian Cancer；Proliferation；Autophagy；Apoptosis卵巢癌是一种常见的妇科恶性肿瘤，严重威胁着妇女生命[1]。

卵巢癌顺铂耐药转录组学分析和拮抗剂筛选的研究王晓晓;杜佳慧;李莉蓉;郭伟强;刘松柏【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2024(53)4【摘要】目的探讨卵巢癌细胞顺铂(DDP)耐药后的转录组差异,并基于此筛选找寻潜在的拮抗剂。

方法以A2780细胞为研究对象,构建DDP耐药细胞A2780-DDP;通过转录组学测序分析,找寻DDP耐药的关键因素,并以实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot实验进行验证;通过小分子抑制剂筛选,采用CCK-8细胞活力检测的方法找寻潜在拮抗剂。

结果成功构建了A2780-DDP细胞株,发现耐药后细胞增殖无差异,但细胞侵袭和迁移能力增强;通过转录组学测序分析,发现ITGB7、Akt等可能是DDP耐药的关键基因,且qPCR和Western blot验证发现两者在A2780-DDP细胞株中存在高表达。

CCK-8结果显示,雷公藤内酯醇(TPL)、奥拉帕尼等在A2780-DDP细胞株中具有较好的抑制效果。

结论ITGB7/Akt通路在DDP耐药中发挥重要作用,TPL、奥拉帕尼等潜在的DDP耐药拮抗剂可为卵巢癌治疗提供新思路。

【总页数】6页(P481-486)【作者】王晓晓;杜佳慧;李莉蓉;郭伟强;刘松柏【作者单位】苏州卫生职业技术学院苏州检验医学生物技术重点实验室;苏州科技大学【正文语种】中文【中图分类】R737.31【相关文献】1.卵巢癌细胞顺铂耐药相关的转录因子表达分析2.蛋白质组学技术筛选新的卵巢癌多药耐药靶向蛋白的研究进展3.基于转录组学探讨右旋龙脑对顺铂耐药非小细胞肺癌的增敏作用及机制4.基于代谢组学和转录组学筛选丙泊酚致神经毒性关键基因的研究5.基于转录组测序的卵巢癌铁死亡差异基因筛选及生物信息学分析因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

卵巢癌顺铂耐药机制的研究进展李海燕综述王常玉审校・２９７・【关键词】顺铂；卵巢癌；耐药机制【中图分类号］Ｒ７３７．３１【文献标识ｔｉｂｉＡ【文章编号】１１３０４－５５１１（２００９）０５－０２９７４）５卵巢癌是严重威胁妇女健康的恶性肿瘤之一，近几年卵巢癌的发病率有增高的趋势，据报道，美国２００７年有２２４３０例卵巢癌新发病例…。

由于卵巢癌发病隐匿和缺乏完善的早期诊断方法，约７０％患者确诊时已为晚期（ＦＩＧＯ分期，Ⅲ期和Ⅳ期），其死亡率居妇科恶性肿瘤的首位。

在细胞减灭术的基础上施以以顺铂为主的联合化疗方案已成为卵巢癌的常规治疗方案。

但由于卵巢癌患者对顺铂的原发性（ｐｒｉｍａｒｙｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）和（或）获得性（ａｃｑｕｉｒｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）多药耐药（ｍｕｌｔｉｐｌｅｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＭＤＲ）的存在，导致晚期患者的５年生存率仅为２０％一３０％。

ＤＤＰ－ＤＮＡ加合物的形成而阻断ＤＮＡ的转录和复制是顺铂杀伤肿瘤细胞的主要机理。

虽然大多数卵巢癌患者最初对顺铂的反应性很高，但在治疗中产生的ＭＤＲ已成为临床治疗的主要障碍。

Ｙａｋｉｒｅｖｉｃｈ等口。

的研究发现约７５％～８０％的卵巢上皮癌开始对化疗有反应，其余则表现为原发耐药，最终所有化疗患者至少８０％出现耐药。

导致卵巢癌对顺铂产生耐药的具体分子机理并不十分清楚，因此研究卵巢癌对顺铂耐药的机制对于防止或逆转耐药产生，改善化疗效果，提高病人生存率有着很重要的意义。

１ＢＲＣＡ２的二次突变ＢＲＣＡ２基因结构较为复杂，编码３４１８个氨基酸残基，定位于人类染色体１３ｑ１２—１３，由２７个外显子组成。

其编码的氨基酸序列与已知的蛋白质无明显的同源性。

ＢＲＣＡ２基因的第３个外显子和转录因子ｃ－ｊｕｎ具有微弱的相似性，ＢＲＣＡ２基因产物与Ｒａｄ５１共同作用，参与ＤＮＡ双链断裂的修复过程ｐＪ，发挥抑癌作用。

Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ【４１与Ｒｕｄｋｉｎ＂ｏ的研究显示：家族性乳腺癌和卵巢癌通常有ＢＲＣＡ２基因突变，其蛋白产物与ＤＮＡ的重组及修复和转录调控有关。

卵巢癌对顺铂类药物耐药性的相关分析张玉琪;邢丽;汪涛【期刊名称】《天津医药》【年(卷),期】2015(000)010【摘要】目的：筛选影响卵巢癌顺铂耐药性的靶点基因。

方法从GEO数据库中下载对顺铂敏感和产生抗药性的人类卵巢癌细胞基因表达谱和甲基化谱数据（GSE15709），利用R的相关工具包筛选A2780和A2780/DDP（顺铂耐药卵巢癌细胞系）两类卵巢癌细胞之间的差异表达和差异甲基化的基因；使用DAVID 数据库对差异表达基因进行功能富集分析；对同时发生了差异甲基化、差异表达且甲基化水平、表达水平的变化趋势相反的基因，进一步利用qRT-PCR技术检测这些基因在两种卵巢癌细胞中的表达值。

结果研究发现在两种卵巢癌细胞之间发生了416个差异表达和281个差异甲基化的基因，这些差异表达基因主要富集于细胞周期、核分裂和蛋白修饰负调控等生物过程。

此外，细胞周期、DNA复制和p53等通路在这些基因中同样富集。

共发现4个发生了差异甲基化、差异表达且甲基化变化水平、表达水平变化趋势相反的基因，qRT-PCR实验验证了这些基因在两种卵巢癌细胞中的表达水平。

结论利用生物信息学和分子生物学相结合的方法，可以筛选出部分影响卵巢癌对顺铂抗药性的基因，为进一步揭示其中的分子机制提供实验参考。

%Objective To screen the target genes that contribute to cisplatin resistance in ovarian cancer treatment. Methods Gene expression and methylation profiles of ovarian cancer cells that were sensitive or resistant to cisplatin with accession number GSE15709 were downloaded from GEO database. Differential expressed and methylated genes wereidenti⁃fied through associating packages in R. DAVID database to screen the enriched GO terms and pathways of the different ex⁃pressed genes between A2780 and A2780/DDP. Gene Set Enrichment Analysis (GSEA) of different gene was performed against DAVID database. Genes that exhibited difference in both expression and methylation profiles between the two types of ovarian cancer cells as well as genes that present contradictory profile between expression and methylation were verified via qRT-PCR. Results We found 416 different expressed genes and 281 methylated genes between the two types of ovari⁃an cancer cells respectively. These differential genes were rich in pathways of cell cycle, DNA replication, nucleus division , p53 signaling , and negative regulation of protein modification process etc. Four genes demonstrated contradictory profile be⁃tween expression and methylation in the two types of ovarian cancer cells and were verified by qRT-PCR. Conclusion Combination of bioinformatics and molecular biology is useful in the identification of target genes that contribute to resis⁃tance of cisplatin in ovarian cancer treatment and further reveal molecular mechanism behind it.【总页数】4页(P1108-1111)【作者】张玉琪;邢丽;汪涛【作者单位】天津市中心妇产科医院药剂科邮编300100;天津市中心妇产科医院药剂科邮编300100;天津市中心妇产科医院药剂科邮编300100【正文语种】中文【中图分类】R737.31【相关文献】1.理冲生髓饮有效组分对卵巢癌干细胞调控相关基因及顺铂耐药性的影响及其作用机制研究 [J], 付杨;夏霁;韩凤娟2.干扰MDM4基因对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响 [J], 张靖; 杨茹; 白惠娟3.LINC00536靶向miR-17-5p对卵巢癌细胞顺铂药物耐药性的影响 [J], 赵营;赵光日;吴蕴瑜;吕晓刚4.肿瘤相关成纤维细胞与上皮性卵巢癌顺铂耐药性的研究 [J], 江玉;孙磊;张英;陈颍;张晓慧;颜士杰;肖兰5.miR-30a对卵巢癌细胞PTEN/PI3K/AKT/mTOR自噬通路及顺铂耐药性的影响[J], 彭志霞;贾佳;于东坡;张桦因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

米非司酮抑制卵巢癌细胞紫杉醇耐药性产生的研究史欣;叶连红;李东红【摘要】目的探讨米非司酮抑制紫杉醇诱导卵巢癌细胞株A2780、skov3耐药性的产生.方法紫杉醇诱导A2780、skov3过程中同时应用不同浓度的米非司酮,采用免疫组化法观察诱导后各细胞亚株中P糖蛋白(P-glyco-protein,P-gp)表达情况;检测各组细胞生长曲线;MTT法检测各细胞亚株的IC50;以罗丹明 123(Rohdamin 123,Rh123) 作为荧光探针应用流式细胞仪观察各细胞亚株胞内罗丹明含量;Western Blot法检测各细胞亚株中P-gp含量.结果诱导过程中应用米非司酮,使诱导后的A2780、skov3细胞株中P-gp表达水平下降.结论米非司酮可以抑制卵巢癌紫杉醇耐药性的产生.【期刊名称】《实用癌症杂志》【年(卷),期】2013(028)005【总页数】4页(P465-468)【关键词】卵巢癌多药耐药;米非司酮;P-糖蛋白;紫杉醇【作者】史欣;叶连红;李东红【作者单位】710004,西安市第四医院妇产科;710004,西安市第四医院妇产科;710004,西安市第四医院妇产科【正文语种】中文【中图分类】R737.31本试验模拟卵巢癌细胞产生耐药的过程，以米非司酮作为逆转剂，在化疗的同时同步使用，探讨在冲击法的紫杉醇诱导下，米非司酮能否抑制或减慢卵巢癌耐药性的表达，并探讨其作用机制、机理。

1 材料与方法1.1 材料卵巢癌细胞系A2780、skov3:A2780购买于北京伯乐生命科学发展有限公司(细胞由上海生物化学与细胞生物学研究所保存);skov3购买于青岛医学院附属医院科研中心，分别置于37℃、相对湿度90%、含5%CO2的培养箱中，于含有10%小牛血清的DMEM、RPMI-1640培养基中培养。

1.2 试剂和药品RPMI-1640及 DMEM购于 Gibco公司，紫杉醇Taxol(6 mg/ml)购自美国百时美施贵宝公司，米非司酮系浙江仙琚制药股份公司生产，罗丹明(Rh123)购买于Sigma公司，鼠抗人MDR1单克隆抗体系购买于Boster公司，SP免疫组化试剂盒系购于北京中山金桥生物技术公司。

卵巢癌顺铂敏感与耐药细胞ClC-3蛋白表达及通道功能的差异封洁珠;李恩泽;彭子瀚;裴一飞;朱林燕;高绿芬【摘要】目的:从分子和细胞水平研究卵巢癌顺铂敏感(a2780)及耐药(a2780cp)细胞中ClC-3氯通道蛋白表达及通道功能的差异.方法:MTT法检测人卵巢癌a2780和a2780cp细胞对顺铂敏感性的差异;real-time PCR法检测ClC氯通道家族在a2780和a2780cp细胞中的mRNA表达;Western blot检测ClC-3蛋白的表达;免疫荧光法观察ClC-3蛋白在a2780和a2780cp细胞的分布;全细胞膜片钳技术记录细胞氯电流.结果:(1)a2780和a2780cp细胞对顺铂的敏感性存在差异,其IC50值分别为5μmol/L和20μmol/L(P<0.01);(2)对ClC氯通道家族mRNA表达的检测结果显示,a2780和a2780cp细胞主要表达ClC-3,且在a2780cp细胞中ClC-3 mRNA表达显著减少(P<0.01);(3)在蛋白水平上,与a2780细胞相比,a2780cp细胞的ClC-3蛋白表达量显著降低(P<0.01);(4)免疫荧光显示ClC-3在a2780细胞中主要分布在胞膜上,而在a2780cp细胞中则主要表达在胞质内;(5)顺铂能激活a2780细胞的氯通道,产生ClC-3介导的氯电流,但在a2780cp细胞中则不能;(6)ClC-3 siRNA处理a2780细胞后,顺铂诱导的氯电流则不再出现.结论:ClC-3氯通道在顺铂敏感和耐药的卵巢癌细胞蛋白分布、表达和功能上存在差异,可能是引起顺铂耐药的潜在机制之一.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2019(035)005【总页数】7页(P784-790)【关键词】卵巢癌;ClC-3;顺铂;耐药【作者】封洁珠;李恩泽;彭子瀚;裴一飞;朱林燕;高绿芬【作者单位】暨南大学基础医学院药理学系, 广东广州 510632;暨南大学基础医学院药理学系, 广东广州 510632;暨南大学基础医学院药理学系, 广东广州 510632;暨南大学基础医学院药理学系, 广东广州 510632;暨南大学基础医学院药理学系,广东广州 510632;暨南大学附属第一医院妇产科, 广东广州 510632【正文语种】中文【中图分类】R737.31;R363.2卵巢癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，其中卵巢上皮癌死亡率占各类妇科肿瘤的首位，其5年存活率仅为44%，对女性生命造成严重威胁[1]。

曲古抑菌素A对人卵巢癌细胞系A2780细胞周期的影响马晓欣;赵冬妮;金英楠;苗青【摘要】目的研究曲古抑菌素A（TSA）对人卵巢癌细胞系A2780细胞周期的影响及其相关机制。

方法通过流式细胞仪检测不同浓度和时间的曲古抑菌素A对A2780细胞周期的影响;RT-PCR法检测不同浓度和时间的曲古抑菌素A对p21WAF/CIPI mRNA表达水平的影响。

结果 100nmol/L曲古抑菌素A作用于A2780细胞,随着作用时间的延长,G2/M期细胞增加,S期细胞减少,在36hG2/M 期细胞增加达到顶峰,S期细胞减少到最低;12h后p21WAF/CIPI mRNA表达水平开始增高,于24h达到顶峰,48h后出现下降;不同浓度的TSA作用于A2780细胞,从100nmol/L浓度开始G2/M期细胞增加,S期细胞减少,p21WAF/CIPI mRNA 的表达水平出现升高,并随着浓度的增加而升高（P〈0.05）。

结论曲古抑菌素A 通过增加p21WAF/CIPI mRNA表达,影响细胞周期素依赖的蛋白激酶的活性,使细胞周期阻滞于G2/M期,抑制A2780细胞增殖。

【期刊名称】《中国医科大学学报》【年(卷),期】2010(000)006【总页数】4页(P406-409)【关键词】曲古抑菌素A;A2780细胞;细胞周期;p21WAF/CIPI【作者】马晓欣;赵冬妮;金英楠;苗青【作者单位】中国医科大学附属盛京医院妇产科,沈阳110004;北京市西城区疾病预防控制中心生殖保健科,北京100029【正文语种】中文【中图分类】R711.7表达遗传学在不改变基因序列的情况下，通过DNA甲基化、组蛋白共价修饰使基因表达发生可遗传改变，是肿瘤发生的主要原因之一。

曲古抑菌素A （trichostatin A，TSA）源自链霉菌代谢产物，具有组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitor，HDACI）的特征，能通过 Zn2+螯合作用特异、可逆的抑制哺乳动物组蛋白去乙酰辅酶活性，诱导肿瘤细胞周期阻滞、分化及凋亡。

上皮间质转化与肿瘤治疗抗拒相关机制的研究进展王鹏;赵路军【摘要】化疗、分子靶向治疗以及内分泌治疗是肿瘤内科治疗的重要组成部分，各种抗肿瘤药物的出现虽为肿瘤患者带来生存获益但均未克服耐药性的问题。

放疗为肿瘤常规治疗的三大手段之一，约2/3肿瘤患者在其病程的某一阶段需要接受放疗，放疗抗拒是目前制约放疗疗效的重要原因。

上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition ，EMT）是上皮细胞向间质细胞转化的过程，在胚胎发育、肿瘤的侵袭转移中的作用已被大量研究，与肿瘤的治疗抗拒也存在着密切的联系，EMT与肿瘤治疗抗拒之间关系的研究将有望克服耐药性及放疗抗拒的发生，提高疗效，使更多的患者得以治愈。

本文将就EMT与肿瘤治疗抗拒相关机制的研究进展进行综述。

%Chemotherapy, molecular targeted therapy, and hormonal therapy are essential components of medical oncology. Al-though cancer patients significantly benefit from the emergence of various new anticancer drugs, none of these treatments can directly address drug resistance. Radiation therapy is one of the three conventional cancer treatment methods. Nearly two-thirds of cancer pa-tients accept radiation therapy during treatment. However, radiation resistance is a significant barrier affecting the therapeutic effect of this procedure. Epithelial–mesenchymal transition (EMT) is a biologic process that enables a polarized epithelial cell to undergo multi-ple biochemical changes. These changes enable the cell to assume the functions of a mesenchymal cell phenotype. These functions have been extensively studied and are related to embryogenesis, tumor invasiveness, and metastasis. In recent years,increasing evidence sug-gests that EMT is closely linked with tumor treatment resistance. The study of the relation between EMT and tumor treatment resistance is expected to contribute to the prevention of drug resistance and radiation resistance and thus improve treatment efficacy to provide benefit to cancer patients. This article explores this issue.【期刊名称】《中国肿瘤临床》【年(卷),期】2014(000)022【总页数】4页(P1470-1473)【关键词】上皮间质转化;耐药性;放疗抗拒【作者】王鹏;赵路军【作者单位】天津医科大学肿瘤医院放疗科，国家肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤防治重点实验室天津市300060;天津医科大学肿瘤医院放疗科，国家肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤防治重点实验室天津市300060【正文语种】中文EMT是指在多种细胞因子及转录因子（如SNAIL、ZEB、TWIST）的调控作用下上皮细胞失去极性，如上皮表型标志E-cadherin丢失而间质表型特征分子Vimentin、N-cadherin等上调，细胞与细胞间、细胞与基底间黏附作用减弱，其形态也由铺路石样转变为梭形的生物学过程。