危重患者血小板活化标志物CD_(62)P、PAC-1的临床观察

中山大学硕士学位论文：血小扳分子标记物ＰＡＣ－Ｉ，ｃｗ２ｐ与慢性肺源性心脏病关系的研究活化血小板静止血小扳图１．１静止血小板与活化血小板ＧＰＩＩｂ，ＩＩＩａ属于整合素受体家族，是黏附蛋白受体超家族中的一员、Ｃａ２＋依赖性二聚体复合物，作为纤维蛋白原的受体，在血小板聚集过程中起重要作用。

在血小板聚集反应中，需要有Ｃａ２＋、纤维蛋白原和完整的ＧＰＩＩｂ／Ｉｌｉａ复合物存在，在诱导剂致使血小板活化时，ＧＰＩＩｂ／ⅡＩａ分子上的纤维蛋白原受体暴露，从而使血小板能与血浆中的纤维蛋白原结合、聚集ｐ＇６１（见图１．１）。

ＰＡＣ－Ｉ是早期血小板活化的标志物【７－１１Ｉ。

ＣＤ６２ｐ亦称颗粒膜蛋白１４０ｋＤ（ｇｒａｎｕｌｅｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎ１４０，ＧＭＰ－１４０）或依赖血小板激活的颗粒外膜蛋白ｑ（ｐｌａｔｅｌｅｔａｃｔｉｖａｔｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ，ＰＡＤＧＥＭ）或简称Ｐ选ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｇｒａｎｕｌｅｅｘｔｅｒｎａｌｍｅｍｂｒａｎｅ择素，是一种富含半胱氨酸、高度糖化的整合蛋白，分子骨架由一条多肽链构成，分子量为１４０ｋＤ，由７８９个氨基酸残基构成，分为５个区域：氨基端是由１２０个氨基酸组成的ｃａ２＋依赖性凝集素样区，接２第二章结果一、慢性肺心病患者血小板ＰＡＣ一１、ＣＤ６２ｐ、肺动脉收缩压及动脉血氧分压、二氧化碳分压的变化：１．慢性肺心病患者血小板ＰＡＣ一１、ＣＤ６２ｐ表达较健康对照者高图２—１为一名健康对照者和一名慢性肺心病患者全血三色荧光标记血小板散点图，显示慢性肺心病患者血小板ＰＡＣ一１、ＣＤ６２ｐ表达较健康对照者高。

４０名肺心病患者血小板ＰＡＣ—ｌ阳性表达率为（８１．０７±６．５０）％、明显高于健康对照组（４８．７０±８．０８）％（Ｐ＜０．００１）：肺心病患者血小板ＣＤ６２ｐ阳性表达率为（４６．３３±６．９８）％，明显高于健康对照组（３０．６３±６．３０）％（尸＜Ｏ．００１）（见表２－１）。

慢性非缺血性心力衰竭患者血小板PAC-1和CD62p 的表达及其与心功能的关系马丽娜1，曹振华2，杨冰31.天津市天津医院健康管理科，天津300211；2.天津市南开医院心血管内科，天津300100；3.天津医科大学细胞生物学系，天津300070【摘要】目的探讨慢性非缺血性心力衰竭患者血小板膜糖蛋白纤维蛋白原受体(PAC -1)和P 选择素(CD62p)的表达及其与心功能的关系。

方法选取2019年1月至2022年1月天津市南开医院收治的185例慢性非缺血性心力衰竭患者作为观察组，根据纽约心脏病学会(NYHA)心功能分级将观察组患者分为心功能Ⅱ级组58例、心功能Ⅲ级组88例和心功能Ⅳ级组39例，根据左室射血分数(LVEF)将观察组患者分为射血分数保留心衰组(HFpEF)123例、射血分数临界值心衰组(HFmrEF)25例和射血分数下降心衰组(HFrEF)37例，再以B 型钠尿肽(BNP)中位数为界将观察组患者分为高BNP 组109例和低BNP 组76例；另选取同期心功能正常的就诊者55例作为对照组。

比较各组患者的基本临床信息、生化、BNP 指标和PAC -1、CD62p 的表达水平，采用Pearson 相关分析法分析PAC -1、CD62p 水平与BNP 、LVEF 的关系。

结果观察组患者的PAC -1、CD62p 水平分别为(23.67±16.54)%、(10.43±9.19)%，明显高于对照组的(9.33±9.63)%、(4.24±5.49)%，差异均有统计学意义(P <0.05)；不同心功能分级患者对比发现，PAC -1、BNP 水平为Ⅳ级>Ⅲ级>Ⅱ级>对照组，CD62p 水平为Ⅳ级>Ⅲ级、Ⅱ级>对照组，差异均有统计学意义(P <0.05)；不同LVEF 分级患者对比发现，PAC -1水平为HFrEF 组>HFmrEF 组、HFpEF 组>对照组，BNP 水平为HFrEF 组>HFmrEF 组>HFpEF 组>对照组，HFpEF 组、HFmrEF 组、HFrEF 组CD62p 水平分别为(10.72±9.17)%、(9.87±11.19)%、(9.84±7.88)%，明显高于对照组的(4.24±5.49)%，差异均有统计学意义(P <0.05)；高BNP 组患者的PAC -1、CD62p 分别为(26.97±16.94)%、(11.05±9.62)%，明显高于低BNP 组的(13.80±12.82)%、(6.97±7.54)%，差异均有统计学意义(P <0.05)；经Pearson 相关分析结果显示，PAC -1、CD62p 与BNP 呈正相关(r =0.363、0.182，P <0.05)，PAC -1与LVEF 呈负相关(r =-0.297，P <0.05)。

血小板膜表面CD62P检测
操作步骤
1. 标本采集：
(1)采血管顺序编号。

(2)抽取静脉血，采血管中注入2ml。

(3)于10分钟之内完成血小板激活和染色步骤，操作时应注意
减少人工激活。

注意事项：1、至少要采集10ml全血
2、而且必须用粗针采血
3、如果是用注射器，则将采的血先放入才血管，最后将
剩余的几毫升弃掉或做它用。

4、如果是用采血针采血，先弃掉2ml,然后再往采血管中采
集。

2. 荧光抗体染色：
(1)取2支试管，加入待测外周血标本，两管各加5ul
(2)在对照管中加入CD62P的同型对照抗体、CD61 各20μl
(3)在试验管中加入CD62p抗体和CD61抗体各20μl。

(4)轻轻混匀，室温暗处孵育15-20分钟。

(5)孵育后，加入500ul的PBS（若血小板数目过多，可以多加一
些PBS），混匀后上机检测；若不能立即上机，加入500ul 1%的多聚甲醛溶液固定，24小时内上机分析。

注意事项：
1、在所有操作中动作应轻柔，不可力度过大，因为血小板容易活化
2、方案的建立：
两张图：（1）散点图CD61/SS，圈CD61阳性的血小板（2）直方图CD62P，分析血小板的表达情况
FS，SS均应选择Log方式检测，阈值设在FL1（CD61的荧光通道）上，值可能会比较大，可能在200、300左右。