鹿结核分枝杆菌流行株Rv3874_Rv3875融合基因的克隆及原核表达

结核分枝杆菌4种抗原的基因克隆、表达、纯化和抗原性初步检测冯晓燕;Albert W.Tam;陈坤;王国华;宋晓国;朱翠侠;张贺秋【期刊名称】《生物技术通讯》【年(卷),期】2006(17)6【摘要】目的:克隆38kD、ESAT-6、CFPl0和MPT64等4种结核分枝杆菌抗原基因,利用大肠杆菌表达系统分别表达重组蛋白,纯化并初步评价其抗原性.方法:通过PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv株基因组中扩增38kD、ESAT-6、CFP10和MPT64抗原的基因,连接入pBVIL1表达载体,在大肠杆菌HB101株中进行表达,以间接ELISA方法初步评价其抗原性.结果:获得了结核分枝杆菌抗原38kD、ESAT-6、CFP10和MPT64的基因,并在大肠杆菌中进行了高效表达,初步验证所纯化获得的抗原具有良好的抗原性.结论:pBVIL1表达载体可以高效表达多种结核分枝杆菌抗原,38kD、ESAT-6和CFP10抗原均可作为结核病血清学诊断的候选抗原.【总页数】3页(P865-867)【作者】冯晓燕;Albert W.Tam;陈坤;王国华;宋晓国;朱翠侠;张贺秋【作者单位】军事医学科学院,基础医学研究所,北京,100850;Fastgen Corporation,Fosterv City,CA 94404,USA;军事医学科学院,基础医学研究所,北京,100850;军事医学科学院,基础医学研究所,北京,100850;军事医学科学院,基础医学研究所,北京,100850;军事医学科学院,基础医学研究所,北京,100850;军事医学科学院,基础医学研究所,北京,100850【正文语种】中文【中图分类】Q786;R392.11【相关文献】1.Tamm-Horsfall蛋白片段的基因克隆、表达、纯化及抗原性鉴定 [J], 朱美财;马红雨;王红;陈涛2.结核分枝杆菌抗原优势肽段融合抗原38 kD-ESAT6-CFP10的构建与抗原性初步检测 [J], 冯晓燕;陈坤;宋晓国;王国华;朱翠侠;李惠文;韦攀健;张贺秋3.结核分枝杆菌14 000抗原基因的克隆、表达纯化及抗原性分析 [J], 杨柳;苏明权;岳乔红;程晓东;马越云;郝晓柯4.人成熟型TGF-β1基因克隆、表达纯化及抗原性的检测 [J], 龚环宇;胡国龄;谭德明;汪玲;侯珏;刘映霞5.结核分枝杆菌融合抗原Rv3914-6His的原核表达、纯化与抗原性检测 [J], 蔡家麟;潘欣;王颖;陈敏;廖万清因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

结核分枝杆菌Rv1446c、Rv2145c、Rv2971、Rv0491基因的克隆表达研究姜昕;高峰;路蝉伊;王洪海【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2009(25)2【摘要】目的在大肠杆菌中高效表达结核分枝杆菌Rv1446c、Rv2145c、Rv2971、Rv0491的蛋白.方法通过聚合酶链反应(Polymerase chain reaction, PCR) 扩增Rv1446c、Rv2145c、Rv2971、Rv0491基因,以质粒pET28a为表达载体,构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3).以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,通过SDS-PAGE鉴定rRv1446c、rRv2145c、rRv2971、rRv0491在大肠杆菌中的表达.经质谱仪测定重组蛋白的分子量.结果与结论 4个重组蛋白成功在大肠杆菌中表达,分子量实测值与理论相近.【总页数】3页(P146-148)【作者】姜昕;高峰;路蝉伊;王洪海【作者单位】上海中医药大学病原生物教研室,上海,201203;上海交通大学,上海第一人民医院病理科,上海,200080;复旦大学生命科学学院,上海,200433;复旦大学生命科学学院,上海,200433【正文语种】中文【中图分类】R378【相关文献】1.结核分枝杆菌Rv2352c基因的克隆表达及其抗原活性鉴定 [J], 曹廷明;贾红彦;古淑香;郑晓静;李自慧;杜凤娇;刘洋;刘忠泉;邢爱英;杜博平;马玛;张宗德2.结核分枝杆菌体内特异表达基因mshA的克隆表达及免疫组织化学分析 [J], 李自慧;张宗德;杜博平;贾红彦;张海青;周丽娟;邢爱英;曹廷明;郑晓静;陈曦3.结核分枝杆菌 ligC 基因的克隆表达及酶学性质研究 [J], 林雅宁;徐忠玉4.结核分枝杆菌Rv3671c基因的克隆表达及免疫印迹检测 [J], 蒯守刚;崔振玲;黄利华;刘忠华;麦广良;裴豪;刘君;何琳静5.结核分枝杆菌Ag85B、TB10.4及Ag85B-TB10.4融合基因的克隆表达及生物信息学分析 [J], 王博;丁晓;颜贝;高玉婧;蒲静;裴秀英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

结核分枝杆菌Rv3872与Rv3873基因的克隆及重组真核表达载体的构建李双双;李木楠;关松磊;张文慧;张林波【期刊名称】《安徽农学通报》【年(卷),期】2017(023)008【摘要】目的:克隆结核分枝杆菌Rv3872与Rv3873基因,并构建Rv3872与Rv3873基因的重组真核表达载体,为研究这2个基因的功能奠定实验基础.方法:利用PCR技术克隆Rv3872与Rv3873基因序列,将其连接至pMD-18T载体,鉴定成功后将Rv3872与Rv3873序列插入真核表达载体pEGFP-C1,构建重组pEGFP-C1-Rv3872和pEGFP-C1-Rv3873真核表达载体,并进行质粒PCR、双酶切以及测序验证.结果:经测序比对后,Rv3872与Rv3873序列与GeneBank中公布的基因序列一致,重组载体构建成功.结论:成功构建重组pEG?FP-C1-Rv3872和pEGFP-C1-Rv3873真核表达载体.【总页数】4页(P12-15)【作者】李双双;李木楠;关松磊;张文慧;张林波【作者单位】吉林农业大学生命科学学院,吉林长春 130118;吉林农业大学生命科学学院,吉林长春 130118;吉林农业大学生命科学学院,吉林长春 130118;吉林农业大学生命科学学院,吉林长春 130118;吉林农业大学生命科学学院,吉林长春130118【正文语种】中文【中图分类】R446【相关文献】1.结核分枝杆菌rv3873基因原核表达载体的构建、表达和纯化 [J], 陈曦;张宗德;古淑香;贾红彦;刘忠泉;邢爱英;李自慧;杜博平;黄海荣;马玙2.小鼠α1,3-半乳糖基转移酶基因的克隆及其重组真核表达载体的构建 [J], 郭军;丁杰;喻召才;李韧;郭长存;樊代明3.结核分枝杆菌新抗原Mtb8.4基因的克隆及真核表达载体的构建 [J], 李晖;钟森;任红;史小玲4.人自噬基因hAPG12的克隆及其重组真核表达载体的构建 [J], 何才姑;郑文岭;朴英杰;胡莲美5.结核分枝杆菌RD1区Rv3873基因真核表达载体的构建及鉴定 [J], 曾林子;陈建平;刘成君;李红霞;姚卫;杨志荣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

结核分枝杆菌Rv3425-16kD融合蛋白原核表达及其刺激ATB患者IFN-γ释放水平研究史阅韩;张雪莲;解宝江;贾晓炜【期刊名称】《临床肺科杂志》【年(卷),期】2024(29)6【摘要】目的原核系统表达与纯化结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis, MTB)融合蛋白抗原Rv3425-16kD,检测其能否被活动性结核病(active tuberculosis, ATB)中肺结核患者和结核潜伏性感染(latent TB infection, LTBI)者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)识别,探讨作为诊断抗原鉴别活动性结核感染的可行性。

方法利用原核表达系统表达融合蛋白Rv3425-16kD并进行亲和纯化,以Western Blot法鉴定;收集结核病医学部收治的的ATB患者、LTBI者和健康人外周血,分离PBMCs,分别用Rv3425-16kD融合蛋白、早期分泌靶抗原6/培养液蛋白10(ESAT-6/CFP10)和MTB全菌裂解液刺激后,提取细胞总RNA,荧光定量PCR方法检测γ-干扰素(Interferon-γ,INF-γ) mRNA 的表达,通过t检验分析刺激前后PBMCs IFN-γ mRNA的表达差异。

结果原核系统表达及纯化的Rv3425-16kD融合蛋白相对分子质量均为37kD。

健康人PBMCs刺激前,IFN-γ mRNA表达量为4.2±1.6,MTB全菌裂解液刺激后为14.7±3.5,差异具有统计学意义(P<0.001),另外两组刺激没有明显变化;ATB患者PBMCs刺激前,IFN-γ mRNA表达量为3.7±1.2,经Rv3425-16kD融合蛋白、ESAT-6/CFP10抗原多肽和H37Rv全菌裂解液分别刺激后IFN-γ mRNA表达量为:166.0±29.7、13.7±5.8和213.0±33.5,三组抗原在刺激前后IFN-γ mRNA表达量差异均具有统计学意义(P<0.001)。

结核分枝杆菌毒力分泌系统Rv3871基因的分子克隆及蛋白表达研究秦紫芳;邱云青;黄毕;高蕾;鲍朗【期刊名称】《中国病原生物学杂志》【年(卷),期】2008(3)11【摘要】目的为探索参与结核分枝杆菌(MTB)毒力分泌系统相关基因的分子功能,对MTB H37Rv株编码Rv3871蛋白基因进行克隆、表达及鉴定分析。

方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,用PCR扩增Rv3871基因片段,并重组到原核表达载体pET32a(+)中,转化E.coliBL21(DE3)菌株,用IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western blot对目的蛋白进行检测分析。

结果阳性重组质粒经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切得到1 776和5 900 bp两条片段,与预期大小一致。

重组质粒测序,与NCBI上Rv3871编码序列比对完全一致,且输入片段读码框与表达载体读码框相吻合。

SDS-PAGE检测表达蛋白分子质量单位为84 ku;Western blot检测出特异性阳性信号。

结论本研究成功构建了结核杆菌毒力分泌系统重要相关基因Rv3871的原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达Rv3871蛋白,为进一步探讨该基因在MTB毒力分泌中的功能奠定了基础。

【总页数】4页(P801-804)【关键词】分枝杆菌,结核;毒力分泌系统;Rv3871;蛋白表达【作者】秦紫芳;邱云青;黄毕;高蕾;鲍朗【作者单位】四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室,四川成都610041;北京市结核病胸部肿瘤研究所,北京101100【正文语种】中文【中图分类】R378.911【相关文献】1.布氏杆菌Ⅳ型分泌系统相关蛋白基因RicA的克隆、原核表达及免疫原性分析[J], 韩玉霞;孙志华;刘娟;关团;张辉;陈创夫2.结核分枝杆菌差异蛋白ESAT-6基因克隆及表达产物刺激人淋巴细胞产生干扰素的研究 [J], 段艳;李元;李别虎;柏银兰;薛莹;范雄林;徐志凯3.新预测的Ⅲ型分泌系统毒力蛋白Z3672的基因克隆、表达及纯化 [J], 高原;马延;毛赟赟;李玉霞;凌焱;张京生;周围;梁龙4.结核杆菌基因组RD1区毒力蛋白分泌相关基因Rv3871的克隆、表达及生物信息学分析 [J], 鲍一歌;秦紫芳;鲍朗5.溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统分子伴侣护航蛋白VscO的基因克隆及其生物信息学分析[J], 庞欢瑛;周泽军;丁燏;黄郁葱;吴灶和;简纪常因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

结核分枝杆菌Ag85A蛋白的原核表达、纯化和免疫反应性邓毛子;石春薇;王芳;付瑞玲;王春;方正明;范雄林【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2010(030)002【摘要】目的通过原核表达获得结核分枝杆菌Ag85A蛋白.方法用PCR从结核分枝杆菌1137Rv菌株中扩增出编码Ag85A的fbpA基因,克隆入原核表达载体pProEXHTb,产生重组质粒pPro85A后,转化至大肠杆菌感受态细胞BL21并诱导大量表达.用镍纯化系统纯化重组Ag85A蛋白,用不同分枝杆菌感染的小鼠血清通过ELISA确定其免疫反应性.利用PCR技术鉴定fopA基因在不同分枝杆菌的分布.结果 32 ku的Ag85A蛋白获得高效表达和纯化.表达Ag85A蛋白的fopA基因在结核分枝杆菌1137Rv、1-137Ra、BCG、草分枝杆菌、土地分枝杆菌、耻垢分枝杆菌和次要分枝杆菌中均有表达,但在牝牛分枝杆菌中未表达.结核病患者和结核分枝杆菌毒株H37Rv感染小鼠血清所产生的抗Ag85A抗体滴度最高.结论重组Ag85A蛋白已成功表达纯化,并保留了免疫反应性.【总页数】5页(P117-121)【作者】邓毛子;石春薇;王芳;付瑞玲;王春;方正明;范雄林【作者单位】华中科技大学同济医学院病原生物学系,湖北武汉 430030;咸宁学院基础医学院,湖北咸宁 437100;华中科技大学同济医学院病原生物学系,湖北武汉430030;华中科技大学同济医学院病原生物学系,湖北武汉 430030;华中科技大学同济医学院病原生物学系,湖北武汉 430030;华中科技大学同济医学院病原生物学系,湖北武汉 430030;华中科技大学同济医学院病原生物学系,湖北武汉 430030;华中科技大学同济医学院病原生物学系,湖北武汉 430030【正文语种】中文【中图分类】R378.91【相关文献】1.牛型结核分枝杆菌ESAT-6原核表达载体的制备和蛋白纯化 [J], 谷晨晨;李海涛;朱言柱;常彤;苗利光;刘艳环;董昕瑜;刘爱萍2.牛结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的原核表达和纯化 [J], 徐志光;许礼义;呼西旦;宋振忠;徐敏3.结核分枝杆菌CFP10、ESAT6蛋白的原核表达、纯化及ELISPOT检测方法的建立与应用 [J], 王晓玮;程筱雯;张焰;徐东芳;王东萍;韦薇;王庆;徐元宏4.结核分枝杆菌Rv3425蛋白的原核表达纯化及其血清学诊断价值 [J], 孙卫国;李邦印;刘艳华;张灵霞;熊志红;程小星5.结核分枝杆菌16-kDa α晶体蛋白的原核表达及纯化 [J], 王晓娜;童贻刚;刘大斌;安小平;李存;李建彬;范华昊;张文慧;张博;米志强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

结核分枝杆菌Rv2352c基因的克隆表达及其抗原活性鉴定曹廷明;杜博平;马玙;张宗德;贾红彦;古淑香;郑晓静;李自慧;杜凤娇;刘洋;刘忠泉;邢爱英【期刊名称】《中国防痨杂志》【年(卷),期】2010(032)010【摘要】目的构建含结核分枝杆菌(M.tb)rv2352c基因原核表达载体,经转化E.coli以表达Rv2352c融合蛋白,并研究其抗原性.方法用PCR扩增M.tb rv2352c 基因,克隆入pET30a(+)质粒,构建pET30a(+):rv2352c重组质粒,阳性克隆测序验证正确后转化入表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导Rv2352c蛋白表达.经Ni+-NTA层析柱纯化融合蛋白,通过SDS-PAGE和结核患者血清Western blot进行鉴定.将纯化的重组蛋白分别免疫家兔,制备抗Rv2352c抗血清,抗血清的效价测定采用酶联免疫吸附试验法(ELISA),取兔抗血清与纯化蛋白Rv2352c通过Western blot方法,检测抗体特异性.结果经酶切鉴定和测序分析证实rv2352c原核表达质粒构建正确,SDS-PAGE和Western blot结果显示,在45 kD处呈现单一蛋白条带.用重组蛋白Rv2352c免疫接种后可诱导出高滴度的特异性抗体.纯化蛋白通过Western blot鉴定证实为目的蛋白,有较强的免疫原性.结论成功构建原核表达重组质粒pET30a(+):rv2352c,制备和纯化的Rv2352c融合蛋白具有较好的纯度和生物学功能,为进一步研究结核病的潜在分子标志物奠定基础.【总页数】6页(P627-632)【作者】曹廷明;杜博平;马玙;张宗德;贾红彦;古淑香;郑晓静;李自慧;杜凤娇;刘洋;刘忠泉;邢爱英【作者单位】北京市结核病胸部肿瘤研究所,北京,101149;北京市结核病胸部肿瘤研究所,北京,101149;北京市结核病胸部肿瘤研究所,北京,101149;北京市结核病胸部肿瘤研究所,北京,101149;北京市结核病胸部肿瘤研究所,北京,101149;北京市结核病胸部肿瘤研究所,北京,101149;北京市结核病胸部肿瘤研究所,北京,101149;北京市结核病胸部肿瘤研究所,北京,101149;北京市结核病胸部肿瘤研究所,北京,101149;北京市结核病胸部肿瘤研究所,北京,101149;北京市结核病胸部肿瘤研究所,北京,101149;北京市结核病胸部肿瘤研究所,北京,101149【正文语种】中文【相关文献】1.禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H基因的克隆表达及抗原性鉴定 [J], 陈翠腾;程龙飞;刘荣昌;万春和;傅光华;陈珍;朱春华;黄瑜2.结核分枝杆菌Rv0577基因在毕赤酵母的表达及重组抗原活性鉴定 [J], 邓艳琴;王加熊;肖方震;何似;王灵岚;严延生3.结核分枝杆菌Rv2352c基因的克隆表达及其抗原活性鉴定 [J], 曹廷明;贾红彦;古淑香;郑晓静;李自慧;杜凤娇;刘洋;刘忠泉;邢爱英;杜博平;马玛;张宗德4.结核分枝杆菌H37Rv异柠檬酸裂解酶基因的克隆表达及活性 [J], 牛雪;吴丛梅;高冷;赵韫慧;殷玉和5.结核分枝杆菌Rv3871抗原优势肽段的克隆表达及抗原性鉴定 [J], 郄霜;戴振华;杨锡琴;修冰水;陈堃;郭兰芹;冯晓燕;张庆波;张贺秋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

结核分枝杆菌RD1区rv3873基因的原核表达及其产物的细胞免疫特性初步分析周海霞;陈祥;郑佳玉;牛中伟;潘志明;焦新安【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2010(026)007【摘要】目的克隆表达结核分枝杆菌RD1区Rv3873蛋白并初步分析其细胞免疫特性.方法应用PCR技术扩增rv3873基因,插入表达载体pET30a(+),构建原核表达重组质粒pET-Rv3873,重组质粒在宿主菌BL21(DE3)诱导表达,利用表达的蛋白腹腔注射免疫小鼠,以细胞增殖和ELISPOT试验测定融合蛋白的细胞免疫应答.结果克隆的rv3873测序与已发表序列100%同源,融合蛋白大小43ku,淋巴细胞增殖实验显示该蛋白能引起小鼠T细胞免疫反应,ELISPOT实验结果表明多肽pep3873刺激特异性IFN-γ分泌细胞多于IL-4分泌细胞.结论成功地克隆表达了Rv3873蛋白,并发现该蛋白具有良好的细胞免疫特性.【总页数】4页(P668-671)【作者】周海霞;陈祥;郑佳玉;牛中伟;潘志明;焦新安【作者单位】扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室,扬州,225009;扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室,扬州,225009;扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室,扬州,225009;扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室,扬州,225009;扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室,扬州,225009;扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室,扬州,225009【正文语种】中文【中图分类】R378.91【相关文献】1.结核分枝杆菌Rv2460 c基因的克隆,表达及编码产物的免疫特性分析 [J], 康月茜;张春燕;穆柳青;卢楠;杨春;李岱容2.结核分枝杆菌rv3873基因原核表达载体的构建、表达和纯化 [J], 陈曦;马玙;张宗德;古淑香;贾红彦;刘忠泉;邢爱英;李自慧;杜博平;黄海荣3.结核分枝杆菌rv3873基因原核表达载体的构建、表达和纯化 [J], 陈曦;张宗德;古淑香;贾红彦;刘忠泉;邢爱英;李自慧;杜博平;黄海荣;马玙4.新的结核分枝杆菌RD1基因编码产物介导的T细胞反应在结核感染诊断中的应用 [J], 刘晓清5.结核分枝杆菌RD1区Rv3873基因真核表达载体的构建及鉴定 [J], 曾林子;陈建平;刘成君;李红霞;姚卫;杨志荣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

结核杆菌基因组RD1区毒力蛋白分泌相关基因Rv3871的克隆、表达及生物信息学分析鲍一歌;秦紫芳;鲍朗【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2009(29)12【摘要】目的对结核分枝杆菌H37Rv毒株RD1毒力分泌系统Rv3871基因进行克隆和蛋白表达,运用生物信息学分析该基因在结核杆菌毒力蛋白分泌过程中的作用.方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,以PCR扩增出完整的Rv3871基因,将其插入原核表达载体pET32a(+),对其核苷酸序列进行测定.利用生物信息学软件对结核杆菌Rv3871进行结构功能分析并与多种分枝杆菌进行同源性比对.结果经分子克隆的Rv3871酶切片段与预期大小符合,基因序列与Genbank报道一致,SDS-PAGE检测到相对分子质量为84 000的特异性表达蛋白,生物信息学分析发现两个FtsK/SpoEⅢ样结构域,同源性比对则发现在致病性分枝杆菌与卡介苗等非致病菌Rv3971基因对应区域的结构完整程度有较为显著的差别.结论本研究通过对结核分枝杆菌RV3871基因进行分子克隆,特异蛋白表达和基因序列测定,提供了该基因的结构功能特征,并通过生物信息学与同源性对比分析,发现Rv3871基因在致病和非致病分枝杆菌毒力分泌作用中的结构和功能差异,为结核病发病机制阐明及其治疗药靶的筛选提供理论和实验依据.【总页数】4页(P2371-2374)【作者】鲍一歌;秦紫芳;鲍朗【作者单位】四川大学,华西临床医学院,四川,成都,610041;四川大学,华西基础医学与法医学院感染免疫研究室,四川,成都,610041;四川大学,华西基础医学与法医学院感染免疫研究室,四川,成都,610041【正文语种】中文【中图分类】R378.911【相关文献】1.结核杆菌分泌蛋白katG基因的克隆、表达及其诊断价值 [J], 吴雪琼;张俊仙;张翠英;张妍;王安全;金关甫2.结核杆菌分泌蛋白Ag85A基因的克隆、表达及其诊断价值 [J], 吴雪琼;张俊仙;王安生;张妍;周文强;郑冬燕;何菊芳;张涛3.版纳微型猪近交系免疫排斥相关基因B4 GALNT2的克隆、表达及功能生物信息学分析 [J], 宋雪; 王淑燕; 陈园园; 王配; 霍海龙; 张霞; 霍金龙4.结核分枝杆菌RD1区重组11 kD蛋白的克隆表达及效力 [J], 陈保文;徐苗;徐敬华;沈小兵;苏城;王国治5.结核分枝杆菌毒力分泌系统Rv3871基因的分子克隆及蛋白表达研究 [J], 秦紫芳;邱云青;黄毕;高蕾;鲍朗因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。