MTT法测细胞毒性

基于MTT的细胞毒性试验细胞存活率=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%抑制率=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100%As: 实验孔吸光度(含细胞、培养基、MTT溶液和药物溶液) ；Ac: 对照孔吸光度(含细胞、培养基、MTT溶液，不含药物) ；Ab: 空白孔吸光度(含培养基、MTT溶液，不含细胞、药物) 。

接种细胞：1.用胰蛋白酶消化细胞，将细胞收集到含血清的培养基中。

2.离心细胞悬液（1000rpm 5min），收集沉淀，用培养基重悬，计数。

3.将细胞稀至2.5 x 10^3-5 x 10^3个/ml，这依赖于细胞的生长速度。

4.将细胞移到9ml培养皿中，用排枪在96孔板中间的10列各孔中加入200μl细胞悬液（80孔/板），从第二列开始到第十一列位置，每孔加入0.5 x 10^3-10 x 10^3个cell。

5.将200μl培养基加第1列与第12列的8个孔中。

第1列用读板仪的空白对照，第12列有助于维持第11列的湿度，并将“边缘效应”(edgeeflect)减至最小。

6.将培养板放至塑料饭盒中，于37℃湿润环境中温育1~3d，等细胞进入指数生长期时可加人药物（以上可以增加初始细胞浓度，减小培养时间）7.对于非黏附细胞，用新鲜培养基制备细胞悬液将细胞稀释至每毫升5x10^3~100x10^3个/ml，仅取100细胞悬液接种于圆底96孔板，之后立即加入药物。

添加药物8.用培养基将细胞毒性药物5被系列稀释，共制备8个浓度。

选择浓度时应以最高浓度下多数细胞被杀死，而最低浓度时不会杀死细胞为标准。

只要对药物的毒性有所了解，便可采用较小的浓度范围。

一般情况下，每种药物使用3块培养板，这样一次试验中可以有三个平行测定结果。

9.对于贴壁生长的细胞，去除第2~11列各孔中的培养基，这可以通过将皮下注射器针连在吸引管上完成。

10.在第2列和第11列的8个孔中加入200μl新鲜配制的培养基，这些细胞作为对照。

MTT比色法评价医用一次性输血器的细胞毒性摘要】目的:为研究医用一次性输血器的细胞毒性。

方法:参照中华人民共和国关于输血器具生物学试验的标准，采用能快速评定细胞增殖率和细胞毒性的比色分析方法-MTT比色法，检测医用一次性输血器对小鼠成纤维细胞L929细胞相对增殖率的影响，评价其细胞毒性。

结果:根据细胞毒性反应的评价标准，该次检测的医用一次性输血器呈现高的细胞相对增殖率，其细胞毒性为1级，即无细胞毒性。

结论一次性输血器采用MTT法检测表明，其无细胞毒性，具有良好的安全性。

【关键词】MTT；比色法；一次性输血器；细胞毒性Evaluation on the Cytotoxicity of Disposable blood transfusion device for Medical Useby MTT assayZHOU YixinPU Xiangke【Abstract】Objective To explore the cell toxicity of a kind of medical disposableblood transfusion apparatus. Methods MTT colorimetric analysis, a method which can quickly assess the cell proliferation rate and the cell toxicity, was used to detect the impact on the cell proliferation rate of L929(a mouse fibroblast cell line) caused by the medical disposable transfusion device. The experiment was carried out to evaluate the cell toxicity of the transfusion set according to the biological tests standard of the People's Republic of China(RPC). Results According to cell toxicity evaluation criteria, cells cocultured with the disposable transfusion apparatus still showed high relative growth rate and the cytotoxicity is grade 1 with the reference to the national stands. Conclusion There is no obvious toxicity to cells by using the disposable transfusion device and it will be safe to patients.【Key words】MTT; colorimetric analysis; disposable blood transfusion device;cells toxicity【中图分类号】R385【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)07-0023-02 医用一次性输血器是医疗行业中常用的一类医疗器械，使用量极大，由于一次性输血器直接应用于人体，其材料的安全性直接关系到患者的生命安全。

用0.25%胰蛋白酶消化单层培养的细胞（293T细胞、MDCK细胞、Vero 细胞、CEF细胞），用DMEM培养基或MEM培养基（10%胎牛血清，1%双抗）制成单细胞悬液，以每孔104个细胞接种于96孔板，每孔加入200ul培养基。

将培养板放到CO2培养箱中，在37℃、5%CO2条件下培养24h，在细胞板孔内分别加入polyMAG/DNA复合物（0.5ul/0.25ug, 0.25ul/0.25ug, 0.25ul/0.5ug），Lipofectamine 2000/DNA复合物（0.5ul+0.2ug），质粒DNA（0.5ug），每个处理设三个复孔。

继续培养24h后，每孔加入20ul的MTT(5mg/ml)，37℃培养4h，终止培养，吸去孔内上清液；每孔加入150ul DMSO，摇床上振荡10min，使结晶物充分溶解。

在酶标仪上测定490nm各孔光吸收值，以不加细胞只加培养液的空白对照孔调零（其他实验步骤一致），以未经处理的空白细胞作为对照（三个复孔）。

根据公式计算细胞存活率，细胞存活率(%)=[OD490(样品)/OD490（对照)]x100。

The toxicity of nanoparticles was evaluated by MTT (3-(4,5-dimethylthiazolyl-2)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) test. PK15 cells were planked in a 96 well plate with a concentration of 104 cells/well and cultured in 37℃5%CO2for 24 h. Then PK15 cells were treated with nanoparticlesat different concentrations(1:1, 1:2, 1:4), PEI, superfectand lipofectamine especially.PK15 cells untreated were used as control. After incubationfor 6 h,the medium was removed. PK15 cells were cultured in 37℃5%CO2 for 24 h, and were cultured for another 4 h inMTT(0.5%)containing DMEM, then the medium was carefully removed. 150ul/well dimethyl sulfoxide was added and oscillated gentlyto make crystal dissolved. The absorbance at 490 nm was measuredusing a microplate reader. The cell viability was expressed asa percentage of OD490(sample)/OD490(control).。

产品简介：1. MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的实验方法。

由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此常常用来检测细胞的增殖情况。

MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan。

在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解。

然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度。

细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。

2. 本试剂盒采用了独特的Formazan溶解液配方，无需去除原有的培养液，可以直接加入Formazan溶解液溶解formazan。

从而避免了由于去除培养液时formazan被部分去除而引起的误差。

3. 本试剂盒背景低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便提高了可靠性。

4. 本产品为500 次（5个96孔细胞培养板）操作。

产品内容：MTT染色液5ml Formazan溶解液55ml 说明书1份保存条件：MTT染色液需-20℃避光保存；Formazan溶解液可以室温保存。

注意事项：1. 由于使用96孔板进行检测，如果你的细胞要养48 h或更长，建议不要吝啬96-孔板的四周边孔，这32 个边孔不能使用，建议加入灭菌PBS以饱和中间64个孔的水分。

因为细胞培养过程中，边孔的水分蒸发很快，培养液及里面的药物会出现浓缩现象，细胞的状况就复杂了2. MTT溶剂在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。

3. MTT一般最好4ºC避光保存两周内有效，保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解，尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。

4. Formazan溶解液结冻或产生沉淀时可以37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。

5. 孵育时，须避光6. MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感。

Hotline ：400-6111-883 E -上HB210525本产品仅作科研用途！MTT Cell Proliferation Assay Kit MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒Cat NO.40206产品说明书网址： 第1页，共2页MTT Cell Proliferation Assay Kit MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒产品信息MTT Cell Proliferation Assay Kit MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒40206ES76 500 T 40206ES80 1000 T 40206ES905000 T产品描述噻唑兰（Methylthiazolyldiphenyl -tetrazolium bromide , MTT ），也称作溴化噻唑蓝四氮唑，是一种黄色染料，已经普遍替代传统的台盼蓝染色法或者放射性同位素插入法，用来检测细胞的活力，细胞增殖以及细胞毒性分析。

检测原理在于：MTT 是一种可接受氢离子的化合物染料，带正电荷，具有细胞膜渗透性。

活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将外源进入的MTT 还原成为水不溶性的深蓝色MTT -甲臜结晶，而死细胞不具有此功能。

甲臜结晶是不能穿透细胞膜，因此沉积在处于增殖且未受损伤的细胞内。

甲臜结晶可用DMSO 或者酸化的异丙醇溶解出来，酶标仪下测定570 nm 的吸光度反映甲臜的生成量。

而甲臜的生成量与活细胞数目成正比，用以评估细胞存活状况。

本试剂盒以MTT （高纯度）作为指示剂，在经典操作步骤的基础上，采用独特的甲臜溶解液配方，可以直接溶解甲臜沉淀，无需去除原有的培养液。

从而避免因去除培养液时甲臜被部分去除而引起的操作误差。

具有本底低，灵敏度高，线性范围宽，操作简单等特点。

另外，本试剂盒还提供配套的一次性针头过滤器和注射器，为实验带来更多的便利。

产品组分编号 组分 产品编号/规格40206ES76（500T ） 40206ES80（1000T ） 40206ES90（5000T ） 40206-A MTT 粉末 25 mg 50 mg 250 mg 40206-B MTT 溶剂 5 mL 10 mL 50 mL 40206-C 甲臜溶解液 50 mL 100 mL 100 mL×5 40206-D除菌套装1包1包1包运输和保存方法冰袋运输。

mtt试验原理
MTT试验原理
MTT试验是一种常用的细胞活力检测方法，可以用于评估化合物对细胞的毒性或药效。

MTT试验原理基于细胞色素C的还原作用，通过测量细胞代谢产物的形成来间接评估细胞活力。

MTT试验的原理可以简述如下：首先，将待测物加入培养基中，然后将细胞接种于含有待测物的培养基中。

细胞在培养基中生长一段时间后，将MTT试剂加入培养基中。

MTT试剂可以被细胞吸收并在细胞内还原为紫色的形式。

随着细胞的代谢活性增加，MTT试剂被还原的紫色产物也会增加。

然后，将细胞培养基中的MTT试剂去除，并加入溶剂，使产生的紫色产物溶解。

最后，通过测量溶液的吸光度，可以间接评估细胞的活力。

MTT试验的优点是操作简单、灵敏度高、结果稳定可靠。

这种试验方法被广泛应用于药物筛选、细胞毒性研究等领域。

通过MTT试验，可以快速评估化合物对细胞的影响，为后续的研究提供重要的参考。

除了MTT试验，还有其他常用的细胞活力检测方法，如CCK-8试验、LDH释放试验等。

这些方法各有特点，适用于不同的实验需求。

在选择合适的细胞活力检测方法时，需要考虑到实验的目的、细胞类型、待测物性质等因素。

MTT试验是一种常用的细胞活力检测方法，通过测量细胞代谢产物
的形成来评估细胞活力。

它的原理简单、操作方便，被广泛应用于药物筛选、细胞毒性研究等领域。

通过了解MTT试验的原理和应用，可以更好地理解和使用这一技术，为科研工作提供有力支持。

用于药物筛选的细胞毒性测定方法总结简介药物筛选是新药研发过程中的重要环节之一。

细胞毒性测定方法是评估药物候选的安全性和毒性的常用手段。

本文档总结了常见的用于药物筛选的细胞毒性测定方法，并对其原理和应用进行了简要介绍。

细胞毒性测定方法1. MTT法MTT（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide）法是一种常用的细胞毒性测定方法。

该方法通过测定细胞内还原MTT为紫色形成的甲基蓝晶体的量来评估细胞的生存率。

MTT法简便、快速，适用于评估化学物质对细胞的毒性。

2. SRB法SRB（sulforhodamine B）法也是一种常见的细胞毒性测定方法。

该方法利用SRB染色与细胞蛋白质结合来评估细胞的生存率。

SRB 法具有操作简便、结果稳定的特点，广泛应用于药物筛选领域。

3. LDH法LDH（lactate dehydrogenase）法是衡量细胞膜完整性的常用方法之一。

该方法通过测定培养上清液中乳酸脱氢酶的活性来评估细胞膜的破坏程度。

LDH法对细胞毒性的灵敏度高，适用于评估药物的细胞毒性。

4. ATP酶法ATP酶法是通过测定细胞内ATP酶的活性来评估细胞的生存能力的方法。

该方法适用于高通量筛选，可以同时评估大量化合物对细胞的毒性。

ATP酶法操作简单、快速，是药物筛选中常用的细胞毒性测定方法之一。

结论细胞毒性测定方法在药物筛选中扮演着重要的角色。

本文总结了常见的MTT法、SRB法、LDH法和ATP酶法，这些方法具有操作简便、结果可靠的特点，适用于评估药物候选的细胞毒性。

根据具体需求和实验条件选择合适的细胞毒性测定方法，将有助于提高药物筛选的效率和准确性。