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第12章病毒感染的检查方法与防治原则学习要点

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病毒感染检查方法和防治原则

病毒感染检查方法和防治原则
标本中的细菌或真菌等生长繁殖。尽量及时接种，如不能当时接种， 标本应保存在-70℃低温冰柜或液氮中。
• 供血清学检测的标本采集原则
– 取急性期（发病初期）和恢复期（病后1个月）双份血清，动态观 察双份血清抗体效价
二、病毒的分离
三 大
动物接种-动物模型
培 鸡胚培养
养
方 法
细胞培养
原代细胞培养 二倍体细胞培养
病毒在细胞内增殖的指征：
– 病毒致细胞病变效应（cytopathogenic effect, CPE）
• 病毒在细胞内增殖引起细胞退形性变，表现为细胞皱 缩、变圆、出现空泡、死亡和脱落。
• 普通光学倒置显微镜可观察
正常细胞
CPE
– 红细胞吸附现象
• 带有血凝素的病毒（如流感病毒）感染细胞后， 细胞膜上可出现病毒血凝素，能与加入的脊椎动 物（豚鼠、鸡、猴等）红细胞结合
第25章 病毒感染的检查方法和防治原则
第一节 病毒感染的检查方法
一、标本采集与送检： • 供分离病毒、检出核酸及抗原的标本采集原则
– 采集时间：发病初期（急性期）采集标本 – 标本类型：在感染部位采取，不同感染取不同部位的标本 – 标本运输：尽快冷藏送检，标本在处理、接种前切忌反复冻融 – 标本的处理与储存：采集标本时注意无菌操作。使用抗生素以抑制
减毒活疫苗：
Sabin脊髓灰质炎疫苗、风疹疫苗 麻疹疫苗、水痘疫苗、腮腺炎疫苗 甲型肝炎疫苗、乙型脑炎疫苗
其他疫苗：基因工程疫苗，核酸疫苗 等
• 人工主动免疫
– 灭活疫苗和减毒活疫苗
特点
免疫持续时间 保护力（与自然感染接近程度） 免疫球蛋白产生 粘膜免疫产生 细胞介导免疫产生 毒力回复 疫苗病毒运输和使用中的扩散 受宿主其他病毒干扰 室温稳定性

病毒感染的检查方法与防治原则

病毒感染的检查方法与防治原则

埃可病毒( 埃可病毒(-) CPE(+)—风疹病毒( CPE(+)—风疹病毒(-) 埃可病毒(+) 埃可病毒(+)
(4)细胞代谢改变
细胞代谢变慢 pH变化减慢 pH变化减慢
2.病毒形态学鉴定
电子显微镜：设备、操作复杂， 电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限 光学显微镜：可见大病毒 痘类病毒） 光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒）， 大病毒（ 对一般病毒检测意义不大 对一般病毒检测意义不大
腮腺炎病毒感染细胞
(3)干扰现象（interference） 干扰现象（interference）
风疹病毒＋ 风疹病毒＋胚肾细胞 病毒增殖，CPE(－) 病毒增殖，CPE(
埃可病毒＋ 埃可病毒＋人胚肾细胞
病毒增殖，CPE(＋) 病毒增殖，CPE( CPE(CPE(-)—风疹病毒(+) 风疹病毒(
风疹病毒？ 风疹病毒？ ＋人胚肾细胞 埃可病毒
四、病毒感染的快速诊断
数小时内出结果 病毒颗粒 病毒成分（抗原或核酸） 病毒成分（抗原或核酸） 早期抗体检测（ gM） 早期抗体检测（IgM）
（一）形态学检查
电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查 包涵体
（二）病毒成分检测
1.病毒蛋白抗原检测 免疫标记技术
2.病毒核酸检测 核酸扩增技术 核酸杂交技术 基因芯片技术 基因测序
3.病毒血清学鉴定
(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA） 免疫标记法（FIA、EIA、RIA） ——多种病毒鉴定 ——多种病毒鉴定 (3)凝胶免疫扩散试验(gel immuno凝胶免疫扩散试验( immunodiffusion test) test) ——多种病毒鉴定 ——多种病毒鉴定
4.病毒分子生物学鉴定

医学微生物学：病毒感染的检查方法与防治原则

医学微生物学：病毒感染的检查方法与防治原则
❖ 特点及作用：原代细胞均为正常二倍体细胞，但不能持 续传代培养，对病毒的敏感性高，可用于生产病毒疫苗 。如兔肾细胞生产风疹疫苗，鸡成纤维细胞产生麻疹疫 苗，猴肾细胞生产脊髓灰质炎疫苗。因原代细胞不能持 续传代培养，故不便用于诊断工作。
贴壁生长的单层细胞 细胞培养瓶
❖ 二倍体：
凡是由受精卵发育而来，且体细胞中含有 父本和母本两个染色体组的生物个体。其体 细胞即二倍体细胞。
1. 免疫标记技术检测病毒蛋白抗原
免疫荧光（fluoroimmunoassay,FIA) 酶免疫(enzyme immunoassay,EIA) 蛋白印迹技术(Western blot, WB) …… 特点：早期诊断、操作简单、特异性强敏感性高
2. 分子生物学方法检测病毒核酸
中和试验
血凝抑制试验
主要包括什么？ 临床应用？
（三）中草药防治病毒感染
板蓝根、大青叶、黄芪……
（四）新抗生素类、治疗性疫苗 （五）治疗性抗体、基因治疗剂
反义寡核苷酸、干扰RNA、核酶
研制阶段
思考题
1. 病毒感染的实验室诊断方法有哪些？ 2. 病毒的培养方法有哪些？各有什么优缺点及适用范围？最常用
的是什么？ 3. 病毒在细胞中的增殖指征有哪些？CPE常见的表现形式有几种？ 4. 何为原代细胞、二倍体细胞株、传代细胞系？ 5. 病毒数量的表示单位是什么？何为空斑形成单位？ 6. 病毒感染性的测定方法有哪些？ 7. 病毒感染常用的抗体检测方法有哪些？ 8. 哪些是病毒的形态学检查内容？ 9. 何为灭活疫苗、活疫苗？病毒感染人工被动免疫常用生物制品
❖ 一种病毒感染细胞后可以干扰其后感染的另 一病毒在该细胞的增殖，这种现象叫干扰现 象。
❖ 如：风疹病毒感染Vero细胞时CPE不明显，但 它能干扰随后感染的埃可病毒 (ECHOV) 的增 殖，从而阻抑后者所特有的CPE。

病毒感染的检查方法与防治原则

病毒感染的检查方法与防治原则
真菌产物isochromophilones Ⅰ和Ⅱ及其衍生物能抑制 HIV 包膜表面 gp120 与 T 细胞表 面 CD4 分子结合，阻止病毒吸附和穿入细胞；放线菌产物chloropeptinsⅠ和Ⅱ也能有
效抑制 HIV gp120与 T 细胞 CD4 分子结合；新霉素 B 是一种氨基糖苷类抗生素，可作
3. 蛋白酶抑制剂：沙奎那韦、茚地那韦、利托那韦、替拉瑞韦、波普
瑞韦、西咪匹韦 4. 整合酶抑制剂：拉替拉韦、艾维雷韦
5. 神经氨酸酶抑制剂：奥司他韦、扎那米韦
医学微生物学（第9版）
二、干扰素和干扰素诱生剂
1. 干扰素（IFN）
具有广谱抗病毒作用，毒性小，使用同种IFN无抗原性，主要用于 HBV、HCV 人类疱疹病毒和乳头瘤病毒等感染的治疗。
用病毒复制中的调控因子，阻断 RNA 与蛋白质的结合，从而干扰病毒 RNA 的复制。
医学微生物学（第9版）
五、治疗性疫苗
是一种以治疗疾病为目的的新型疫苗，主要有 DNA 疫苗和抗原抗体复合物
第二节
病毒感染的特异性预防 prevention of viral infection
医学微生物学（第9版）
一、人工主动免疫常用生物制品
1. 灭活疫苗（inactivaed vaccine） 通过理化方法将具有毒力的病毒灭活后制成灭活疫苗，这种疫苗失去了感染
性但仍保留原病毒的抗原性，常用的有肾综合征出血热疫苗、狂犬病疫苗、甲型
炎病毒VP1结构蛋白、HBsAg及狂犬病病毒刺突糖蛋白等。
4. 基因工程疫苗（genetically engineering vaccine） 采用DNA重组技术，提取编码病毒保护性抗原基因，将其插入载体，并导入细
菌、酵母菌或哺乳动物细胞中表达、纯化后制成的疫苗。例如目前已广泛使用的重

医学微生物学：细菌感染的检查方法和防治原则

医学微生物学：细菌感染的检查方法和防治原则

主要用途
预防
人工被动免疫 抗体或细胞因子等 1次 快，立即
短，2~3周
治疗或紧急预防
第三节 细菌感染的治疗
主要采用：抗菌药物抗感染治疗
抗 菌 药 物 作 用 机 制
思考题
1. 试述检测标本中细菌的基本程序 2. 对已经分离出的细菌菌落，怎样从微生物
学角度去进一步鉴定？ 3.血清学鉴定和血清学诊断是一样的么？ 4. 人工主动免疫和被动免疫的区别？
第二节 细菌感染的特异性预防
• 主动免疫 自然主动免疫：患病、隐性感染
人工主动免疫： 疫苗、类毒素
• 被动免疫 自然被动免疫： 胎盘、初乳
人工被动免疫： 抗毒素、丙球
人工免疫：采用人工方法将生物制品接种（或注
射）于人体，以达到防治感染性疾病的目的。
生物制品：人工免疫用的免疫原（疫苗或类毒素
）、免疫血清、细胞制剂及诊断制剂等生物性制 剂。
细菌感染的检查方法与 防治原则
第一节 细菌感染的实验室诊断
• 细菌学诊断(bacteriological diagnosis) ：检测病原 菌及其成分(抗原、代谢产物或核酸)；
• 血清学诊断(serological diagnosis)：检测患者血清 中特异性抗体。
一、临床标本的采集和运送原则
• 标本的采集与送检的质量好坏直接关系到检测结果 的准确性。
活，减毒或无毒株
通过非常规培养获 得减毒株 量较小，1次
不易保存
较高，CI和HI 维持1~5年甚至更 长
其他检查
特异性抗体检查 药物敏感试验
形态学检查
不染色检查
染色法检查 革兰染色
显微镜观察 抗酸染色
革兰染色（＋）
革兰染色（－）

病毒感染的检查方法与防治原则e

病毒感染的检查方法与防治原则e

9

Viral Growth and Cell culture Viral Detection Viral Identification Interpretation of culture results
10


People Animals: cows, chickens, mice,rats, suckling mice Embryonated eggs Organ and tissue culture Organ culture Primary tissue culture Cell lines: diploid Tumor or （immortalized ）cell line
.
1

Blood, Urine, Stool, nasal washing, nasal swab , throat swab, saliva , sputum, rectal swab, vesicle fluid( scraping or swab), tissue ,brain biopsy, cerebrospinal fluid, et al.

Characteristic histological changes:inclusion

bodies in the nucleus or cytoplasm, margination of chromatin Syncytia: multinucleated giant cells caused by virus-induced cell-cell fusion
11



CPE Hemadsorption Interfere Metabolize of cell

(7)病毒的实验室诊断与防治


• 二倍体细胞培养(Diploid cell cultune)
• 原代细胞只能传2-3代细胞就退化，在多数细胞 退化时，少数细胞能继续传下来，且保持染色体 数为二倍体，称为二倍体细胞。二倍体细胞生长 迅速，并可传50代保持二倍体特征，通常是胚胎 组织的成纤维细胞。
• 二倍体细胞一经建立，应尽早将细胞悬 浮于10%二甲基亚砜中，大量分装安瓿 贮存于液氮（-196℃ ）内，做为“种 子”，供以后传代用。目前多用二倍体 细胞系制备病毒疫苗，也用于病毒的实 验室诊断工作。
• （一）尽早采取
• 在发病初期（急性期）采取，较易检出 病毒，越迟阳性率越低。
• （二）部位适宜
• 由感染部位采取，如呼吸道感染采取鼻 咽洗漱液或咯痰；肠道感染采取粪便； 脑内感染采取脑脊液；皮肤感染采取病 灶组织；有病毒血症时采取血液。
• （三）冷藏速送
• 病毒离活体后在室温下很易死亡，故采得 检材应尽快送检。若距离实验室较远，应 将检材放入装有冰块或干冰的容器内送检。 污染检材，如鼻咽分泌液、粪便等应加入 青霉素、链霉素或庆大毒素等，以免杂菌 污染细胞或鸡胚，而影响病毒分离。
• 原代细胞培养(Primary cell culture)
• 用胰蛋白酶将人胚（或动物）组织分散成单细胞， 加一定培养液，37℃孵育1-2天后逐渐在培养瓶 底部长成单层细胞，如人胚肾细胞、兔肾细胞。 原代细胞均为二倍体细胞，可用于产生病毒疫苗， 如兔肾细胞生产风疹疫苗，鸡成纤维细胞产生麻 疹疫苗，猴肾细胞生产脊髓灰质炎疫苗。因原代 细胞不能持续传代培养，故不便用于诊断工作。
• 含轮状病毒的粪便标本经热变性处理，点 到膜上，使用轮状病毒体外转录的放射标 记探针做斑点杂交，敏感性高于ELISA （酶联免疫吸附剂测定enzyme linked immunosorbent assay ）。肠道病毒也可 用互补的DNA探针做斑点杂交。

病原生物学学习复习指导(重点难点)

《病原生物学》课程学习、复习指导（供七年制、五年制临床医学专业使用及其它非临床医学参考）本指导根据五年制临床医学专业教学大纲编写，有利于同学掌握课程学习重点及复习指导。

基础医学院病原生物学教研室编写2013年3月目录（医学寄生虫学部分）总论 (6)第一章医学线虫 (7)第二章医学吸虫 (9)第三章医学绦虫 (11)第四章医学原虫 (13)第五章医学节肢动物 (16)教学时数分配表（共24学时）总论一、目的要求1. 了解全世界与我国寄生虫病流行状况及危害性。

2. 熟悉寄生虫病流行规律与防治原则。

3. 掌握寄生虫，宿主，生活史等基本概念；掌握消除性免疫、非消除性免疫（带虫免疫、伴随免疫）的概念；掌握世界范围内重要的寄生虫病的名称；掌握寄生虫病流行的基本环节、寄生虫病流行的特点。

二、重点、难点教学重点：寄生及宿主的概念，宿主的类别，体现寄生虫免疫的特点的带虫免疫和伴随免疫现象，寄生虫病的流行特点，流行的基本环节及影响流行的因素，寄生虫病的防治原则。

第一章线虫•目的要求1. 了解蛔虫、蛲虫、鞭虫、钩虫、丝虫成虫形态结构，所致疾病的流行病学特征。

2. 掌握蛔虫、蛲虫、鞭虫、钩虫虫卵的形态特征及相关的鉴别要点。

3. 掌握蛔虫、蛲虫、鞭虫、钩虫的生活史（主要是寄生部位，感染阶段、感染途径及感染方式）与致病的关系、实验室诊断方法（主要是病原学诊断方法），防治原则。

4. 掌握两种主要丝虫微丝蚴形态及鉴别要点、生活史中成虫的寄生部位、人体感染过程、微丝蚴夜现周期性及致病作用；掌握丝虫感染诊断方法及防治原则。

掌握旋毛虫幼虫的形态特点、生活史及与致病的关系、感染方式及诊断方法•重点、难点重点：蛔虫、钩虫、蛲虫，鞭虫虫卵的形态特征，旋毛虫囊包形态，上述线虫对人的感染阶段、感染途径及感染方式，重要致病作用，最佳病原学诊断方法及防治原则。

难点：钩虫引起缺铁性贫血的原因；蛲虫的重复感染与异位感染。

第二章医学吸虫一、目的要求1.了解常见人体吸虫（肝吸虫、肺吸虫、姜片虫、血吸虫等）所致疾病的流行因素与流行特点。

病毒感染的检查方法与防治原则介绍ppt演示课件

. 19
二、人工被动免疫常用生物制品
免疫血清
血清丙种球蛋白 细胞因子等
.
20
三、病毒感染的治疗 核苷类药物 碘苷 阿昔洛韦 非核苷类反转录酶抑制剂 抗病毒 化学制剂 蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物 干扰素和干扰素诱生剂 中草药
反义寡核苷酸
基因治疗剂 干扰RNA 治疗性疫苗 核酶（ribozyme）
.
5
第一节
病毒感染的检查
电镜直接观察 病毒颗粒 光镜检查包含体
检
测
查病毒
病毒抗原 分离培养 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶
内
容
查特异性抗体
. 6
一、标本的采集与送检
原则基本与细菌相似，但应注意：
1.标本用“双抗”或两性霉素B处理
2.低温保存，尽快送检
3.血清学诊断采双份血清
. 7
二、病毒的分离与鉴定 （一）病毒分离培养方法类型 细胞培养（cell culture）
病毒学
病毒感染的 检查方法与防治原则
.
1
Hale Waihona Puke 教 学 目 标熟悉： 人工主动免疫和人工被动免疫的常用 生物制品。 了解： 病毒感染的实验室诊断方法。有效抗 病毒药物的抗病毒机制及应用价值。
.
2
思考：
病毒如此之小和活细胞内寄生，我们
如何分离培养及检查？ 血清学诊断和分子生物学检查的理论 基础是什么？ 可通过什么方式预防病毒的感染？
. 12
细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落 如腺病毒等多数病毒
. 13
红细胞吸附（hemadsorption） HA＋红细胞表面HA受体→细胞吸附
腮腺炎病毒感染细胞 (HA) ＋ 红细胞吸附抑制试验 病毒胞膜表面血凝素 .

第22章 病毒感染的检查方法与防治原则

第22章 病毒感染的检查方法与防治原则
一、标本采集原则 二、病毒的分离培养与鉴定
三大培养技术 细胞培养 鸡胚接种 动物接种 细胞病变效应（CPE） cytopathic effect：有些病毒在细胞
内增殖时可引起特有的细胞病变，称 CPE。可出现细胞内颗粒增多、圆缩、 聚集、坏死、溶解、脱落，也可导致细 胞融合，形成多核巨细胞，有的可形成 包涵体。
三、血清学诊断
中和试验、血凝抑制试验、补体结合试验
中和抗体 血凝抑制抗体 非中和抗体
四、病毒感染的快速诊断
病毒感染的Байду номын сангаас治原则

免疫预防 1、人工主动免疫：疫苗 2、人工被动免疫：免疫血清、丙球、胎球、细胞因子等
疫苗名称 脊髓灰质炎疫苗 麻疹疫苗 流行性腮腺炎疫苗 风疹疫苗 甲型肝炎疫苗 人用狂犬病疫苗 乙型脑炎疫苗 森林脑炎疫苗 乙型肝炎疫苗 疫苗种类（培养细胞种类） 减毒活疫苗（人二倍体，Vero细胞） 减毒活疫苗（鸡胚细胞） 减毒活疫苗（鸡胚细胞） 减毒活疫苗（人二倍体细胞） 减毒活疫苗（人二倍体细胞） 灭活疫苗（地鼠肾细胞） 灭活疫苗（地鼠肾细胞） 灭活疫苗（地鼠肾细胞） 基因工程疫苗（酵母菌表达）


药物防治
1、抗病毒化学制剂： 核苷类、非核苷类、蛋白酶抑制剂等 2、新抗生素类： 真菌产物、放线菌产物，新霉素B
3、干扰素和干扰素诱生剂：
poly I：C、细菌脂多糖、灵芝多糖等 4、治疗性疫苗 5、基因治疗剂 6、中草药
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第12章病毒感染的检查方法与防治原则学习要点一、病毒感染的检查方法1.检材的采集与送检病毒分离标本的采集原则是：①早期取材；②注意无菌操作；③正确处理含菌标本；④低温保存与尽快送检。

2.病毒的分离培养与鉴定（1）动物接种（2）鸡胚接种（3）组织培养：原代细胞；二倍体细胞；传代细胞系（4）病毒增殖的指标：①细胞的变化；②红细胞吸附；③干扰现象；④培养基pH改变。

3.病毒感染的血清学诊断(1)中和试验；(2)补体结合试验；(3)血凝抑制试验4.病毒感染的快速诊断(1)形态学检查法：光学显微镜检查法；电镜和免疫电镜检查(2)免疫学检查法：检查病毒抗原；检查病毒特异性IgM(3)检测病毒核酸：核酸杂交技术；PCR技术二、病毒感染的防治原则1.病毒感染的预防(1)人工自动免疫用于人工自动免疫的生物制品有：①灭活疫苗；②减毒活疫苗；③基因工程疫苗；还有亚单位疫苗、多肽疫苗、核酸疫苗等。

(2)人工被动免疫人工被动免疫常用的制剂有：动物免疫血清、人血清丙种球蛋白、转移因子等。

2.抗病毒治疗(1)抑制病毒穿入与脱壳金刚烷胺(2)抑制病毒生物合成核苷类化合物（疱疹净、阿昔洛韦、阿糖腺苷、病毒唑、叠氮脱氧胸苷、拉米呋啶等）；病毒蛋白酶的抑制物（沙喹纳伟、英迪纳伟等）；IFN及其诱生剂等。

(3)免疫制剂特异性免疫球蛋白、治疗性疫苗等。

(4)抗病毒中草药复习题一、名词解释1.二倍体细胞2.细胞病变效应3.红细胞吸附试验4.血凝抑制试验5.减毒活疫苗6.灭活疫苗二、选择题A1型题1.从患者体内分离病毒，采集标本时的错误．．做法是：A.在发病早期采集B.选取正确部位取材C.标本冷藏D.标本尽快送实验室E.疾病恢复期取材2.细胞病变效应不．包括：A.细胞圆缩、脱落B.细胞融合C.形成包涵体D.干扰现象E.细胞裂解3.病毒凝集红细胞(血凝试验)的机制是：A.红细胞表面抗原和血凝素抗体结合B.红细胞表面受体与病毒表面血凝素结合C.红细胞表面病毒抗原与相应抗体结合D.病毒与结合在红细胞表面的抗体结合E.红细胞上的血凝素与病毒结合4.预防病毒病最有效的方法是使用：A.抗毒素B.抗病毒化学疗剂C.中草药D.疫苗E.抗菌药物5.以下描述正确的是A.人工被动免疫接种的物质为抗原B.人工被动免疫不能用于治疗C.人工主动免疫接种的物质为丙种球蛋白D.人工主动免疫主要用于治疗E.人工被动免疫主要用于紧急预防6.无环鸟苷(ACV)有效控制单纯疱疹病毒的作用机理是A.ACV作用于敏感细胞表面受体B.ACV抑制病毒DNA多聚酶和DNA合成C.ACV抑制病毒RNA聚合酶D.ACV抑制敏感细胞DNA复制E.ACV抑制病毒蛋白合成7.下列不．适于培养动物病毒的方法是A.鸡胚培养B.人工合成培养基培养C.器官培养D.二倍体细胞培养E.动物培养8.不．能作为病毒在细胞内生长繁殖指标的一项是A.致细胞病变作用B.红细胞凝集C.干扰现象D.细胞培养液变混浊E.细胞培养液PH改变9.有关病毒标本的采集和运送,不．正确的方法是A.发病早期或急性期采集标本B.发病晚期采集标本C.标本运送应放在带有冰块的保温桶中D.标本采集后应立即送实验室检查E.运输培养基中应含有抗生素10.病毒的中和试验是病毒血清学特异试验,以下描述中不．正确的是A.中和试验是指中和抗体与病毒结合,使病毒失去感染性的一种试验B.中和试验需用活细胞或鸡胚或动物来判断结果C.中和试验是一种特异性较高的试验D.中和抗体在体内维持时间较短E.中和试验是用已知病毒抗原检测中和抗体12.抗病毒药物不．包括A.金刚烷胺B.无环鸟苷C.叠氮脱氧胸苷D.干扰素E.头孢三嗪13.对治疗病毒感染无效的药物是A.干扰素B.抗生素C.聚肌胞D.黄连、黄芩E.三氮唑核苷B1型题（供1～3题备选答案）A.鼻咽漱液B.粪便C.血液D.脑组织E.尿1.分离狂犬病毒应取：2.分离脊髓灰质炎病毒最好取：3.分离流感病毒应采集：（供4～6题备选答案）A.中和试验B.血凝抑制试验C.补体结合试验D.血凝试验E.多聚酶链反应(PCR)4.鉴定流感病毒型别或亚型的试验：5.测定病毒感染力的试验：6.可体外扩增病毒核酸的试验是：三、填空题1.分离病毒最好采集发病天内的标本，采集标本必须严格遵守操作。

2.含病毒标本采集后必须送检，否则应置液中保存送检。

3.分离培养病毒的方法有、和。

4.常用于培养病毒的细胞类型有、和。

5. 病毒血清学试验通常取双份血清检查，期抗体效价比期增高倍或以上时，有诊断意义。

6.用化学方法裂解病毒，提取病毒或上与免疫有关的亚单位成分，除去核酸后制成的疫苗，称为。

四、问答题1.简述目前最常用的培养病毒的方法。

2.病毒检测和细菌检测有何区别?3.比较减毒活疫苗和灭活疫苗的异同。

4.使用减毒活疫苗应注意哪些事项？参考答案一、名词解释1.二倍体细胞：是目前常用培养病毒的细胞类型。

其特点是在体外可连续传40至50代仍保持23对染色体，因此广泛用于病毒的分离和疫苗的生产。

2.细胞病变效应：指病毒在体外细胞培养时引起的细胞损害。

根据病毒种类和细胞种类的不同，细胞病变效应可有不同表现，均可在显微镜下观察到，作为病毒在细胞内增殖的指标。

3.红细胞吸附试验：某些带有血凝素的病毒在细胞内生长不引起明显的细胞病变效应，但病毒在出芽释放时可将其血凝素表达在宿主细胞膜上，使细胞可以吸附人和某些动物的红细胞。

4.血凝抑制试验：是一种特异性的抗体中和反应，其基本原理是病毒的血凝素可凝集红细胞，但若先用特异性抗体与病毒作用，再加入红细胞，则不出现红细胞凝集，称为血凝抑制。

该试验常用于鉴定带有血凝素的病毒的型别，或是检测此类病毒感染者体内特异性抗体。

5.减毒活疫苗：用人工诱导病毒发生毒力变异而获得的毒力降低而抗原性不变的病毒株制备的疫苗，如脊髓灰质炎疫苗。

6.灭活疫苗：用甲醛灭活病毒核酸但抗原性不变而制备的疫苗，如乙型脑炎疫苗和狂犬疫苗等。

二、选择题A1型题1.E2.D3.B4.D5.E6.B7.B8.D9.B 10.D 11.E 12.BB1型题1.D2.B3.A4.B5.D6.E三、填空题1.4；无菌；2.立即；50%甘油缓冲；3.组织培养；动物接种；鸡胚培养；4.原代细胞；二倍体细胞株；传代细胞系；5.恢复；急性；4；6.衣壳；包膜；亚单位疫苗四、问答题1.目前最常用的培养病毒的方法是细胞培养。

根据细胞来源和性状的不同可分为三类：(1)原代细胞：新鲜组织经胰酶消化后形成单细胞，加入培养液后37 培养，数日可贴壁长成单层细胞，即为原代细胞培养； (2)二倍体细胞：是目前最常用的细胞，该细胞可以在体外连续传40至50代仍保持23对染色体的特点，故广泛用于病毒的分离和疫苗的制备；(3)传代细胞：是体外可以无限传代的细胞，来源于肿瘤细胞或细胞株传代过程中发生的变异株。

2.病毒检测和细菌检测的区别主要在于，病毒是非细胞型微生物，必须在活细胞内才能增殖，因此与细菌检测主要在分离培养和形态观察上有较大区别：（1）病毒的观察需电子显微镜。

光学显微镜只能观察病毒在细胞内形成的包涵体；细菌则可以用光学显微镜观察。

（2）病毒的分离培养需用动物接种、鸡胚培养和组织细胞培养，而细菌大多可用人工培养基培养。

（3）培养物的签定：病毒多通过观察动物发病或细胞病变效应等方法；细菌则主要通过生化反应。

3.相同点：两种疫苗都用于人工主动免疫。

不同点：(1)免疫效果：活疫苗免疫效果好，既可产生体液免疫，也可产生细胞免疫，免疫维持时间长。

而灭活疫苗免疫效果较差，仅产生体液免疫而无细胞免疫，免疫维持时间短；(2)给药途径和次数：活疫苗可模拟自然感染方式或注射，免疫一次即可；灭活疫苗只能通过注射且需多次免疫；(3)保存：活疫苗需冷藏，不易保存；灭活疫苗不需冷藏，易保存；(4)缺点：活疫苗极偶然可能发生并发症、持续感染、毒力回复突变等，免疫缺陷者和孕妇不能应用；灭活疫苗的最大缺点是免疫力不强。

4.使用减毒活疫苗应注意：(1)冷藏：活疫苗对温度很敏感，使用之前应一直保持冷藏以保证疫苗活性。

(2)注意给药时间、浓度和途径：接种疫苗应选择适当时间，如不同的疫苗选择不同年龄分别进行计划免疫；两种活疫苗应避免同时接种而发生干扰。

口服肠道病毒疫苗以冬季服用为好，可避免其他肠道病毒的干扰。

疫苗的剂量一定要足。

口服疫苗应注意不要用热水和母乳送服。

(3)注意禁忌证：被免疫者应无急性发热性疾病、腹泻、免疫缺陷或其他慢性疾病，避免发生病毒之间的干扰或疫苗增殖引起不良反应。

接种疫苗时应避免用免疫球蛋白。

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