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酶动力参数K m 、V max 和K cat 值的计算（以日立U3010为例）强玮 2014-3-31一、 K m根据酶促反应方程，即米-曼式氏方程（Michaelis-Menten equation ）：V =(VmaxS)/(Km + S)当v=0.5Vmax 时，Km=[S]，可见Km 等于酶促反应的初速率为最大速率Vmax 一半时的底物浓度。
Km 值一般在10-6~10-2mol/L 之间，单位一般为mM 或者uM 。
Km 只与酶的性质有关，而与酶的浓度无关。
由于Km 值与酶的浓度无关，所以计算时无需对蛋白进行定量，理论上诱导破碎的菌体上清（粗酶液）即可用来测酶活计算。
具体计算方法以前常用双倒数法，但是这种算法现在稍微好一点的SCI 杂志都不认可了，相对来说现在更准确和更常用的计算方法是直接对不同浓度的底物测得的酶活数据用米氏方程（Michaelis-Menten equation V =(VmaxS)/(Km + S)）进行非线性回归（nonlinear regression ），拟合的方程中就给出了计算出的Km 值。
非线性回归方法相对于双倒数法稍微麻烦的地方在于测量酶活时底物浓度的选择要尽量多，并且要覆盖米氏方程曲线的三个区域，以下图为例，酶反应速度遵循米氏方程的规律，先是一级反应，速度随底物浓度上升也直线上升，然后是混合级反应，趋于平缓，最后进入零级反应，反应速度不再随浓度上升而上升，而是趋于一个稳定的值。
根据这个规律，具体梯度测试时，底物浓度的选点很重要，要根据实时测得的斜率或活度值实时调整，尽量要覆盖这三个区域，这样回归拟合出来的米氏方程才是准确的，计算出的酶动力参数才是正确的。
初速度底物浓度 (mM)用于非线性回归分析的软件很多，Origin 8.0我比较喜欢，将酶活数据输入后，全选，“Analysis ”菜单下选择“Fitting ”，进一步选择“Nonlinear curve fit ”进入对话框，在函数归类框“Category ”中选址“Growth/Sigmoidal ”类函数，接着在子函数框“Function ”中选择“Hill ”函数。
检验科常见酶学检测项目解读酶学检测是临床实验室中常用的一种检测方法，通过对体内酶的活性及相关指标的检测，可以提供一系列与机体各个系统功能相关的重要生理信息。
本文将详细介绍检验科常见的酶学检测项目及其解读。
一、丙氨酸氨基转移酶（ALT）ALT是一种存在于细胞质中的酶，主要分布在肝脏、心肌、肾脏及骨骼肌等组织中。
当细胞受到损伤时，ALT会释放到血液中，因此，血清ALT水平的升高常常是肝功能损害的指标。
正常成人血清ALT水平一般较低，男性参考范围为10-40 U/L，女性为7-35 U/L。
超出正常范围的ALT水平可能表示肝脏炎症、肝细胞坏死或药物性肝损伤等。
二、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）AST也是一种存在于多个组织中的酶，与细胞内的氨基酸代谢有关。
AST相对于ALT而言，其升高程度较低，因此AST常作为肝功能损害的辅助指标。
正常成人血清AST水平参考范围为10-34 U/L。
AST升高可见于多种疾病，如急性肝炎、心肌梗死、肝肿瘤或药物性损伤等。
三、乳酸脱氢酶（LDH）LDH是一种参与糖代谢的酶，广泛存在于多个组织和细胞中。
血清LDH主要源于组织损伤，LDH水平的升高常常提示组织坏死、炎症或缺血等情况。
正常成人血清LDH水平参考范围为109-245 U/L。
LDH的特异性较低，因此需要结合其他指标综合分析。
四、γ-谷氨酰转肽酶（GGT）GGT主要存在于肝脏、胆道和肾脏等组织中，具有很高的组织特异性。
血清GGT水平的升高常提示肝功能障碍、酒精性肝病、胆道梗阻或药物性肝损害等情况。
正常成人血清GGT水平参考范围为0-50 U/L，男性稍高于女性。
GGT的升高还可能与肥胖以及某些药物的使用有关。
五、碱性磷酸酶（ALP）ALP主要存在于肝脏、骨骼、胆道和肾脏等组织中，与细胞膜的磷酸化作用有关。
血清ALP水平的升高可提示肝胆道疾病、骨疾病或肿瘤扩散等情况。
正常成人血清ALP水平参考范围为45-125 U/L，男性稍高于女性。
碱性磷酸酶km值测定实验报告碱性磷酸酶（alkaline phosphatase）是一种重要的酶类物质，在生物体内发挥着关键的生物学功能。
为了更好地了解碱性磷酸酶的性质和功能，我们进行了碱性磷酸酶的KM值测定实验。
实验中，我们首先准备了一系列不同底物浓度的反应液，并添加了一定浓度的碱性磷酸酶。
然后，通过测定一定时间内底物浓度的变化，我们可以得到不同底物浓度下反应速率的数据。
在实验中，我们选择了两种常用的底物——对硝基苯磷酸钠（p-NPP）和酚酞磷酸钠（BTP）来进行测定。
p-NPP是一种无色底物，在碱性条件下可以被碱性磷酸酶催化水解生成对硝基苯酚，其产物可以通过测定吸光度来确定反应速率。
而BTP是一种红色底物，在碱性条件下可以被碱性磷酸酶催化水解生成酚酞，其产物可以通过测定吸光度来确定反应速率。
通过实验数据的处理和分析，我们得到了不同底物浓度下的反应速率和底物浓度的关系。
通过拟合实验数据，我们可以得到反应速率与底物浓度之间的动力学关系。
根据麦克斯韦-玛尔蒙方程，我们可以得到碱性磷酸酶的KM值。
KM值是一个重要的酶学参数，它反映了底物与酶结合的亲和力。
KM值越小，表示底物与酶结合的亲和力越强，底物浓度较低时就能够达到较高的反应速率。
而KM值越大，表示底物与酶结合的亲和力较弱，需要较高的底物浓度才能达到较高的反应速率。
通过实验测定，我们可以得到碱性磷酸酶的KM值，进而了解其底物结合特性。
这对于研究碱性磷酸酶的功能和调控机制具有重要意义。
同时，通过比较不同底物的KM值，我们还可以了解底物对于碱性磷酸酶的亲和力差异，进一步揭示酶底物特异性的原理。
除了测定KM值，我们还可以通过其他实验方法来研究碱性磷酸酶的功能和特性。
例如，可以通过测定酶的最适温度和最适pH值来了解酶的适应范围。
此外，还可以通过测定酶的抑制剂对酶活性的影响来研究酶的抑制机制。
这些实验方法的综合应用可以更全面地了解碱性磷酸酶的生物学功能。
综上所述，碱性磷酸酶KM值的测定是研究酶特性和功能的重要手段之一。
酶动力参数Km、Vmax 和K c at 值的计算（以日立U3010 为例）强玮2014-3-31一、Km根据酶促反应方程，即米-曼式氏方程（Michaelis-Menten equation ）：V =(VmaxS)/(Km + S)当v=0.5Vmax 时，Km=[S] ，可见Km 等于酶促反应的初速率为最大速率Vmax 一半时的底-6~10-2mol/L 之间，单位一般为mM 或者uM 。
Km 只与酶的性质有物浓度。
Km 值一般在10关，而与酶的浓度无关。
由于Km 值与酶的浓度无关，所以计算时无需对蛋白进行定量，理论上诱导破碎的菌体上清（粗酶液）即可用来测酶活计算。
具体计算方法以前常用双倒数法，但是这种算法现在稍微好一点的SCI 杂志都不认可了，相对来说现在更准确和更常用的计算方法是直接对不同浓度的底物测得的酶活数据用米氏方程（Michaelis-Menten equation V =(VmaxS)/(Km + S) ）进行非线性回归（nonlinear regression），拟合的方程中就给出了计算出的Km 值。
非线性回归方法相对于双倒数法稍微麻烦的地方在于测量酶活时底物浓度的选择要尽量多，并且要覆盖米氏方程曲线的三个区域，以下图为例，酶反应速度遵循米氏方程的规律，先是一级反应，速度随底物浓度上升也直线上升，然后是混合级反应，趋于平缓，最后进入零级反应，反应速度不再随浓度上升而上升，而是趋于一个稳定的值。
根据这个规律，具体梯度测试时，底物浓度的选点很重要，要根据实时测得的斜率或活度值实时调整，尽量要覆盖这三个区域，这样回归拟合出来的米氏方程才是准确的，计算出的酶动力参数才是正确的。
初速度Hill Fit of 初速度0.30.2度速初0.10.00 20 40底物浓度(mM)用于非线性回归分析的软件很多，Origin 8.0 我比较喜欢，将酶活数据输入后，全选，“Analysis ”菜单下选择“Fitting ”，进一步选择“Nonlinear curve fit ”进入对话框，在函数归类框“Category”中选址“Growth/Sigmoidal ”类函数，接着在子函数框“Function”中选择“Hill ”函数。
alt的名词解释生物化学
ALT是肝功能生化检查中谷丙转氨酶的指标，也是肝功酶学的一个指标。
谷丙转氨酶是机体内参与氨基酸代谢的酶，在肝脏中含量最高，其正常值是0～40U/L，如果肝细胞受损，ALT就会释放到血中，反映肝细胞受损。
因此，ALT是肝细胞损伤的敏感指标。
谷丙转氨酶升高的原因有多种，例如饮酒、肝炎或者各种药物导致肝细胞损害。
如果患者的谷丙转氨酶出现异常，应及时到专业医院就诊、检查，明确病因后积极配合医生进行治疗，以免贻误病情。
以上内容仅供参考，建议咨询专业医生获取更具体准确的信息。
v = Km + [S ]v ：反应初速度（微摩尔浓度变化/min)V ：最大反应速度（微摩尔浓度变化/min)[S]：底物浓度（mol/L)Km：米氏常数（mol/L)此方程表明，当已知Km及V时，酶反应速度与底物浓度之间的定量关系。
3.4 双倒数作图法测定Km值：1 Km 1 1v V [S] V1/v对1/[S]作图可得一条曲线，其斜率为Km/Vmax，截距为1/Vmax 。
若将直线延长与横轴相交，则该交点在数值上等于-1/Vmax。
本实验采用最适pH、最适温度下，测定不同浓度时酶活性。
再根据林贝法作图求出Km值。
3.5 纤维素酶水解纤维素产生的纤维二糖、葡萄糖等还原糖能将碱性条件下的3，5-二硝基水杨酸（DNS）还原，生成棕红色的氨基化合物，在540nm波长处有最大光吸收，在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系，利用比色法测定其3mLDNS反应终止→沸水浴5min →定容至25ml→测定OD540吸光值G 作双倒数图求Km4.3 实验注意事项本实验是一个定量测定方法，为获得准确的实验结果，应尽量减少实验操作中带来的误差。
底物溶液时应用同一母液进行稀释，保证底物浓度的准确性。
严格控制准确的酶促反应时间。
反应温度准确，酶液准确稀释。
不同pH所用酶液用对应pH缓冲液稀释试管上编号：贴上用圆珠笔写上编号的胶布，以防止保温或沸水加热时脱落；移液管使用时量取精准，保证结果可靠准确。
精确记时：每一管加入酶液的时间要做记录，每管之间间隔的时间要合理；避免试管进水：煮沸和用流水冲洗时；由图-1/Km=-7,可得出：Km=0.143 mg/ml(g/L)/(2×104)=0.715×10-5mol/L。
6、分析与讨论：米氏常数（Km）是酶的一个特征性物理量，其大小与酶的性质有关。
Km 值随测定的底物种类、反应的温度、pH 及离子强度而改变。
因此，对某一酶促反应而言，在一定条件下都有特定的Km 值，可用来鉴别酶，例如对于不同来源或相同来源但在不同发育阶段，不同生理状况下催化相同反应的酶是否属于同一种酶[1]。
alt标准值ALT标准值。
ALT（Alanine Aminotransferase）是一种存在于肝脏细胞中的酶，它在肝脏受损时会释放到血液中。
因此，测量血液中的ALT水平可以帮助医生评估肝脏功能和健康状况。
ALT标准值是指正常情况下血液中ALT的参考范围，对于临床诊断和治疗具有重要意义。
一般来说，成人的ALT标准值范围在10-40单位/升之间。
这个范围是根据大规模人群的研究得出的，可以作为正常参考范围。
然而，不同的实验室和医疗机构可能会有略微不同的标准值范围，因此在进行ALT检测时，应该参考具体的实验室报告。
此外，性别、年龄、体重、肝脏疾病等因素都可能对ALT标准值产生影响，医生会根据个体情况进行综合评估。
ALT标准值的测定对于肝炎、脂肪肝、肝硬化、肝癌等肝脏疾病的诊断和监测非常重要。
当患者的ALT水平超出正常范围时，可能意味着肝脏受损。
然而，ALT标准值并不是一个绝对的指标，它需要结合临床症状、其他肝功能指标以及影像学检查等综合判断。
因此，不能仅凭ALT标准值就作出肝脏疾病的诊断，需要医生进行专业的评估和诊断。
此外，ALT标准值的异常也可能与其他因素有关，例如某些药物、酒精、运动、肌肉损伤等都可能导致ALT水平升高。
因此，在进行ALT检测前，应该告知医生有关自己的用药史、生活习惯和体育锻炼情况，以便医生能够更准确地评估检测结果。
在临床实践中，医生会根据患者的具体情况，结合ALT标准值以及其他检查结果，综合判断肝脏功能和疾病状态，制定相应的治疗方案。
对于肝脏疾病的患者来说，定期监测ALT标准值可以帮助医生及时发现疾病的变化，并采取相应的治疗措施，提高治疗效果和预后。
总之，ALT标准值是评估肝脏功能和健康状况的重要指标之一，对于肝脏疾病的诊断、监测和治疗具有重要意义。
然而，ALT标准值并不是一个绝对的指标，需要结合临床症状、其他检查结果和个体情况进行综合评估。
希望通过本文的介绍，能够帮助大家更好地了解ALT标准值的意义和临床应用，提高对肝脏健康的关注和重视。
