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11月13日引物合成的详解4.需要什么级别的引物？答：引物常用的纯化方式C18脱盐，OPC纯化，PAGE纯化，HPLC纯化。
根据实验需要，确定订购引物的纯度级别。
应用引物长度要求纯度级别要求一般PCR扩增<45 base OPC一般PCR扩增>45 base PAGE诊断PCR扩增< 40base OPC, PAGEDNA测序20base左右OPC亚克隆，点突变等根据实验要求定OPC, PAGE，HPLC根据实验要求定PAGE基因构建（全基因合成）反义核酸根据实验要求定PAGEPAGE, HPLC修饰引物根据实验要求定8.如何计算引物的浓度？答：引物保存在高浓度的状况下比较稳定。
引物一般配制成10-50pmol/ul。
一般情况下，建议将引物的浓度配制成50pmol/ul，加水的体积（微升）按下列方式计算：V (微升)= OD数*（乘）33 *（乘）*（乘）20000 / (除) 引物的分子量。
引物的分子量可以从合成报告单上获得。
如果需要配制成其他浓度，按上述公式换算。
注意：1 OD260= 33 ug/ml.9.如何计算引物的Tm值？答：引物设计软件都可以给出Tm，与引物长度、碱基组成、引物使用缓冲的离子强度有关。
长度为25mer以下的引物，Tm计算公式为：Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)对于更长的寡聚核苷酸，Tm计算公式为：Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) – 600/size公式中，Size = 引物长度。
11.如何溶解引物？答：干燥后的引物质地非常疏松，开盖前最好离心一下，或管垂直向上在桌面上敲敲，将引物粉末收集到管底。
根据计算出的体积加入去离子无菌水或10mM Tris pH7.5缓冲液，室温放置几分钟，振荡助溶，离心将溶液收集到管底。
溶解引物用的水一般不要用蒸馏水，因为有些蒸馏水的pH值比较低（pH4-5）,引物在这种条件下不稳定。
订购日期:
客户姓名:负责人姓名:客户单位：订单要求：
发票抬头： 1.此表格仅针对E-mail订单使用，传真订单请勿使用。
开票形式：客户地址：客户手机：137********固定电话：办事处:
总碱基数ID *
Primer 名称
序列(5'to3')
碱基数分装管
数
提拱量(O.D)纯化方式
单价修饰
Oligo(dT)15
TTTTTTTTTTTTTTT
1555HAP
15
北京农学院北京农学院北京市德胜门外朱辛庄北农路7号北京农学院研究生新实验楼B座116 2.因此订单是电脑自动处理，订单发送前请仔细核对信息, 订单接收2小时后将不能再更改。
80797311月结
周双海
上海生工生物技术有限公司引物合成订购表
上海生工生物技术有限公司上海合成部：synth@ 2012-7-4北京合成部：beijing@
王鵬客户服务部服务电话：8008203090。
引物合成合同模板甲方（供应商）：___________________地址：___________________联系人：___________________电话：___________________传真：___________________电子邮件：___________________乙方（需求方）：___________________地址：___________________联系人：___________________电话：___________________传真：___________________电子邮件：___________________为了双方合作，达成协议，达到双方利益，特签订本合同。
经双方友好协商，一致同意如下：第一条合同说明1. 本合同是甲方与乙方就引物合成服务达成的协议，双方同意根据本合同的约定履行各自的义务。
第二条服务内容1. 甲方将根据乙方的需求，提供引物合成服务。
具体服务内容包括但不限于以下服务：（1）根据乙方提供的引物设计方案，进行引物合成实验；（2）进行引物质检，确保引物的质量符合乙方的要求；（3）提供引物合成实验报告，并根据乙方的要求进行修改。
2. 甲方承诺提供的服务应当符合国家有关法律法规的要求，并保证服务的质量符合乙方的需要。
第三条服务费用1. 乙方应当按照双方协商的价格支付引物合成服务的费用。
2. 甲方将向乙方提供详细的服务费用清单，乙方应在收到费用清单后15个工作日内支付全部费用。
3. 如乙方未按时支付服务费用，甲方有权暂停提供服务直至乙方付清全部费用。
第四条保密条款1. 双方对在履行本合同过程中所知悉的对方的商业秘密、技术秘密及其他机密信息负有保密义务，不得向其他单位或个人泄漏。
2. 本条款的保密期限自本合同签署之日起生效，至双方终止合作关系后的五年内有效。
第五条违约责任1. 若甲方未按照本合同的约定提供服务，导致乙方无法按时完成其业务目标的，甲方应承担违约责任，并赔偿乙方因此造成的损失。
中国地鼠微卫星DNA引物的设计及筛选宋国华;耿佳宁;贾若愚;岳文斌;刘田福;胡松年【摘要】本研究旨在筛选中国地鼠微卫星位点,为中国地鼠遗传分析提供遗传标记.根据建立的中国地鼠微卫星富集文库,对筛选的含微卫星DNA序列的克隆应用引物设计软件Primer 3.0设计引物135对,选择合成11对理论上易出现影子带的引物,用20个中国地鼠个体对这些引物进行了评估.结果显示,11对引物均能扩增出谱带,这11条带的平均多态信息含量(PIC)为0.4195,平均观察杂合度(Ho)为0.3895,平均期望杂合度(He)为0.4565,每个位点的平均等位基因数为5.818.筛选出的微卫星位点均可用于中国地鼠种群遗传结构分析,这将为中国地鼠品种选育、种系评估提供更多的微卫星遗传标记信息.%The objectives of the present study were to screen new microsatellite loci in Chinese hamster to develop genetic markers for genetic analysis. A library of partial small size fractionated genomic DNA was constructed with the Chinese hamster. 135 pairs of primers were designed with the software Primer 3. 0 for rnicrosatellites positive clones obtained. 11 pairs primers that the stutter bands easily in theory were synthesized and 20 samples were tested with them. The results showed 10 of the 11 loci were found to be polymorphic,and PIC, the mean observed heterozygosities (Ho) , the mean expected heterozy-gosities( He) were 0. 4195, 0. 3895 and 0. 4565, respectively. The microsatellite markers would be useful for further studying on accessions identification and breeding of Chinese hamster,which would provide some evaluable tools for marker-assisted selection breeding and gene mapping in Chinese hamster.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2012(039)012【总页数】5页(P128-132)【关键词】中国地鼠;微卫星;基因组文库【作者】宋国华;耿佳宁;贾若愚;岳文斌;刘田福;胡松年【作者单位】山西医科大学实验动物中心,山西太原030001;山西农业大学动物科技学院,山西太谷030801;中国科学院北京基因组研究所,北京 100029;中国科学院北京基因组研究所,北京 100029;山西农业大学动物科技学院,山西太谷030801;山西医科大学实验动物中心,山西太原030001;中国科学院北京基因组研究所,北京100029【正文语种】中文【中图分类】S813.3微卫星DNA，又称为简单序列重复(SSR)或短串联重复序列(STR)，广泛存在于真核生物基因组中，每个简单重复DNA片段中一般重复单位仅1～6个碱基，重复次数为10～20次，动物体中最为常见的重复单位是双核苷酸(CA/GT)n。
pClone007 Versatile Simple Vector Kit目录号产品简介本产品利用Vaccinia topoisomerase I 能在瞬间完成连接反应的优良特性，结合本公司最新开发的载体制备工艺，能够兼容T-A 克隆与平末端克隆。
TSV-007VSTSV-007VSm产品应用产品特点产品组成组分007VSm （10次）007VS （60次）5×pClone007 Versatile SimpleVector Mix Control Template （50 ng/µL ）*pUC19（10 pg/µL ）**20 µL 10 µL 10 µL40 µL×310 µL 10 µL* 阳性对照片段，用于检测目的产物的质量，大小为1,000 bp ；** 阳性对照质粒，用于检测感受态细胞的质量，抗性为Amp 。
本品适用于≤3000 bp 目的片段的T-A 克隆与平末端克隆。
· 5×Mix ，只需补加片段与水。
· T-A 克隆与平末端克隆均适用。
· 低背景，阳性率可达95%。
· 无多克隆位点，连接300 bp以下小片段可避免测序中断的情况发生。
使用方法1. 目的片段准备· 引物要求：引物不能磷酸化；· 产物末端：平粘末端均可；· 产物鉴定：PCR 产物需进行凝胶纯化回收，推荐使用擎科DNA 凝胶回收试剂盒（目录号：TSP601）；胶回收产物经电泳检测质量与浓度后再进行连接反应。
2. 反应体系配制：推荐10 µL 体系组分用量目的片段1 µL~8 µL2 µL Up to 10 µL5×pClone007 Versatile Simple Vector MixddH O注：所有溶液直接加入管底后用移液器吹打混匀。
引物合成合同范本《引物合成合同》甲方（委托方）：名称：______________________地址：______________________联系电话：______________________法定代表人：______________________乙方（受托方）：名称：______________________地址：______________________联系电话：______________________法定代表人：______________________一、服务内容1. 乙方按照甲方提供的引物序列及相关要求，进行引物的合成。
2. 乙方应确保合成的引物质量符合行业标准及甲方的使用要求。
二、引物信息引物序列：[具体序列]引物用途：[说明用途，如 PCR 扩增、基因测序等]引物规格：[如长度、浓度等]引物数量：[具体数量]三、价格及付款方式1. 本次引物合成服务的总费用为人民币（大写）______元整（小写：￥______元）。
2. 甲方应在合同签订后的______个工作日内，向乙方支付合同总金额的______%作为预付款，即人民币（大写）______元整（小写：￥______元）；乙方完成引物合成并经甲方验收合格后的______个工作日内，甲方支付剩余款项，即人民币（大写）______元整（小写：￥______元）。
3. 甲方付款方式为：[具体付款方式，如银行转账、支票等]乙方收款账户信息：开户银行：______________________账户名称：______________________账号：______________________四、交货时间及地点1. 乙方应在收到甲方预付款后的______个工作日内完成引物合成，并将合成的引物交付给甲方。
2. 交货地点为甲方指定的地址：______________________五、质量保证及验收纯度：[具体纯度要求]准确性：与甲方提供的引物序列完全一致。
