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多角度激光光散射仪安全操作及保养规程前言多角度激光光散射仪是一种高精度的测试仪器，广泛应用于物理、化学、材料科学、生物科学等领域。
正确操作和保养仪器不仅能够延长其使用寿命，还能避免对人身和设备的损害，确保实验的安全和准确性。
因此，本文将介绍多角度激光光散射仪的安全操作和保养规程，以帮助用户正确使用和维护该仪器。
安全操作规程1. 穿戴个人防护装置使用多角度激光光散射仪时，必须穿戴个人防护装置，包括护目镜、实验服、手套、防尘面罩等。
这些装置能够保护您的眼睛、皮肤和呼吸系统等。
2. 避免直接观察激光光束多角度激光光散射仪使用激光光束进行测试，但直接观察激光光束可能导致眼部损伤。
因此，请勿直接观察激光光束，使用合适的护目镜和观察器具等进行观察。
3. 将仪器放置在平稳的表面上在使用多角度激光光散射仪时，请将仪器放置在平稳的表面上，以避免仪器移动或者倾斜导致激光光束不稳定等问题。
4. 避免操作错误在使用多角度激光光散射仪时，请遵循正确的操作步骤，避免误操作导致仪器故障，同时也要谨慎操作以避免对自身和他人造成伤害。
5. 维护好仪器多角度激光光散射仪是高精度的测试仪器，需要经常保养和维护。
请定期清洁仪器表面和内部，及时更换易损件和滤网等，避免仪器出现故障或者误差。
保养规程1. 定期清洁仪器表面和内部定期清洁多角度激光光散射仪表面和内部，去除灰尘和污渍。
对于仪器表面，可以使用专用的清洁剂和软布进行擦拭；对于内部的激光光源、检测器和光学元件等，应该使用气压吹扫和特定清洗液等进行清洁。
2. 经常检查激光源光路和检测器激光源光路和检测器是多角度激光光散射仪的关键部件，需要经常检查和维护。
检查激光光路是否清洁和无遮挡、检查检测器是否敏感和准确等，并及时更换易损件。
3. 更换易损件和滤网等多角度激光光散射仪中的易损件和滤网等需要经常更换，以确保测试精度和仪器寿命。
这些易损件和滤网包括激光器、探测器、滤波器等，根据使用时间和实验情况不断更换。
多角度光散射检测原理多角度光散射检测是一种非常重要的光学研究技术，广泛应用于化学、物理、生物等领域的研究中。
在材料分析、质量控制、环境检测以及生物学研究等领域，多角度光散射检测都具有重要的应用。
多角度光散射检测是用来研究透明或半透明介质中被散射物的大小、分布、结构及其相对浓度。
在多角度的光散射检测中，光源照射到样品上后，被样品散射的光会沿各个不同的方向散射，被检测器所接收到的光强度与入射光强度之比就是光散射的强度。
通过检测不同方向的光散射量，我们可以了解样品中的物质分布、粒径、浓度等信息。
1. 材料分析多角度光散射检测可用于材料分析，例如通过多角度光散射检测可以评价高分子材料的分布性、晶化度及其相结构。
有机高分子材料中存在许多微观孔隙，这对于材料的可靠性会产生重要影响。
通过多角度光散射技术，可以评价这些孔隙的分布，并研究孔隙大小与位置对性能的影响，以辅助材料的设计和开发。
2. 质量控制在制造相关行业，多角度光散射技术也用于质量控制。
多角度光散射检测可以用来监控烟雾颗粒的大小和数量。
通过这种技术，可以对烟雾颗粒的大小分布、形状、表面形态等作出更准确的描述，进而改进产品质量和生产工艺。
3. 环境检测多角度光散射技术还可以应用于环境检测，例如空气中颗粒物的分析和在水中沉积物的形态研究等。
在环境检测中，多角度光散射技术可以用于监测空气中PM2.5、PM10等细颗粒物的浓度和分布，以便及时采取相应的治理措施。
4. 生物学研究多角度光散射检测技术在生物学研究中也有很大的应用。
通过多角度光散射技术可以研究生物分子的结构以及分子在液体中的聚集和自组装情况。
同时也可用于研究细胞形态、大小及其在不同条件下的变化等。
总结多角度光散射检测技术具有广泛的应用场景，既可应用于材料科学的研究，也可以应用于生物学、环境科学等领域。
多角度光散射检测技术的发展将推动微观科学领域的技术进步，有助于改进国家相关产业的生产工艺和质量控制水平，为人类社会的发展做出应有的贡献。
灵芝菌丝体多糖的分离纯化及其单糖组成分析与分子量测定王海燕;戴军;陈尚卫【摘要】前期杂交优化后赤芝菌种经液体深层发酵后,提取灵芝菌丝体多糖,并过DEAE-Sepharose Fast Flow柱分离纯化,利用高效体积排阻色谱(HPSEC)检测多糖级分的纯度,采用完全酸水解PMP柱前衍生化RP HPLC测定多糖级分的单糖组成,多角度光散射仪联用装置(SEC MALLS)测定其绝对重均分子量(Mw),并且根据分子旋转半径与分子摩尔数的关系曲线斜率初步推断其空间构象.结果显示:分离纯化得到3个多糖级分GLMP1、GLMP2和GLMP3,HPSEC检测其峰面积百分比分别为93.58％,97.64％,99.19％,单糖组成分析结果表明GLMP1、GLMP2和GLMP3均含有甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖,但单糖摩尔比各异.SEC-MALLS测试GLMP1、GLMP2和GLMP3的Mw分别为4.526×105,4.603×104,3.760×103 g/mol,3个多糖级分构象可能均为高度紧缩且具有分支结构的聚合物.【期刊名称】《食品与机械》【年(卷),期】2015(031)005【总页数】5页(P201-205)【关键词】灵芝;菌丝体;多糖;级分;分离纯化;分子量【作者】王海燕;戴军;陈尚卫【作者单位】江南大学食品学院,江苏无锡214022;江南大学食品学院,江苏无锡214022;江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡214022【正文语种】中文灵芝（G.lucidum）属担子菌纲、多孔菌目、灵芝科、灵芝属［1］，按其生长过程可分为菌丝体、子实体和孢子粉3个阶段。
中国灵芝属真菌有75种，常见的有赤芝、紫芝、黑芝、松杉灵芝等。
近年来，研究发现灵芝具有降血糖［2，3］、降血脂［4］、免疫调节［5］、抗肿瘤［6］、抗氧化［7］等保健功能，其主要功效成分为多糖和三萜［8］。
多角度激光光散射仪与凝胶渗透色谱联用技术仪器组成：Wyatt DAWN HELEOS Ⅱ（十八角度激光光散射检测器）Wyatt ViscoStar Ⅱ(粘度检测器)Wyatt Optilab rEX （示差折光检测器）配一套Waters 515单元泵和柱温箱。
检测原理：光散射法是测定高分子物质重均分子量的绝对方法。
高分子溶液可视为不均匀介质，当光通过它时，入射光的电磁波诱导高分子成为振荡偶极子，并产生强迫振动作为二次光源发出散射光。
高分子溶液的散射光强度远远高于其溶剂，并且强烈依赖于高分子的分子量、链形态、溶液浓度、散射光角度和折光指数增量（dn/dc值）等基本参数，从而得到高分子物质的绝对分子量。
凝胶渗透色谱可将溶剂中的高分子物质按照分子量的大小依次洗脱出来。
利用光散射仪与凝胶渗透色谱联用技术，除了可以得到物质的平均分子量，还可以测得不同的高分子物质的分布及其相应分子量大小，并且不需要使用结构相似的标准样品做标准曲线。
在直接测定高分子物质的绝对分子量的同时，由于联用了粘度检测器和示差折光检测器，还可得到特性粘数、均方根旋转半径等重要参数。
应用：光散射强度与分子大小直接相关，凝胶渗透色谱能分离不同分子量大小的高分子物质，结合次两种特性，可得到许多重要信息，已经被广泛应用于高分子化学、生物化学等众多研究领域。
第一，高分子物质的分子量的测定。
不需要标准品、校正曲线以及任何假设，即可直接求得高聚物、多糖、蛋白质等多种高分子物质的绝对分子量。
测定范围广泛，可达103～107，且采用十八角度激光光散射检测器，准确度高。
第二，多组分高分子物质的平均分子量及其相应组分对应的绝对分子量的测定。
不仅可以单机操作测定混合物质的平均分子量，还可结合凝胶渗透色谱分离技术，测定各个分子量不同的各个不同组分的绝对分子量。
第三，高分子物质的折光指数增量（dn/dc值）、均方根旋转半径（Rg）、第二维里系数（A2）等重要参数和重均分子量（Mw）、数均分子量（Mn）等多种不同分子量的测定，可得到分子的分枝程度等形态特征，研究高分子物质与溶剂的相互作用，研究高分子物质的聚合与降解作用等。
第九章凝胶渗透⾊谱讲解凝胶⾊谱分析⼆〇⼀⼀年九⽉九⽇第九章凝胶⾊谱分析凝胶渗透⾊谱（Gel Permeation Chromatography, GPC），⼜称尺⼨排阻⾊谱（Size Exclusion Chromatography, SEC），其以有机溶剂为流动相，流经分离介质多孔填料（如多孔硅胶或多孔树脂）⽽实现物质的分离。
GPC可⽤于⼩分⼦物质和化学性质相同⽽分⼦体积不同的⾼分⼦同系物等的分离和鉴定。
凝胶渗透⾊谱是测定⾼分⼦材料分⼦量及其分布的最常⽤、快速和有效的⽅法[1]。
凝胶渗透⾊谱（GPC）的创⽴历程如下[2,5]：1953年Wheaton和Bauman⽤多孔离⼦交换树脂按分⼦量⼤⼩分离了苷、多元醇和其它⾮离⼦物质，观察到分⼦尺⼨排除现象；1959年Porath和Flodin⽤葡聚糖交联制成凝胶来分离⽔溶液中不同分⼦量的样品；1964年J. C. Moore将⾼交联密度聚苯⼄烯-⼆⼄烯基苯树脂⽤作柱填料，以连续式⾼灵敏度的⽰差折光仪，并以体积计量⽅式作图，制成了快速且⾃动化的⾼聚物分⼦量及分⼦量分布的测定仪，从⽽创⽴了液相⾊谱中的凝胶渗透⾊谱。
近年来，光散射技术（如图9-1所⽰，⼀束光通过⼀间充满烟雾的房间，会产⽣光散射现象。
）⼴泛应⽤于⾼分⼦特征分析领域[3]。
将光散射技术和凝胶渗透⾊谱（GPC）分离技术相结合，可以测定⼤分⼦绝对分⼦量、分⼦旋转半径、第⼆维⾥系数，也可测定分⼦量分布、分⼦形状、分枝率和聚集态等。
⽬前，该技术在⾼分⼦分析领域已成为⼀种⾮常有效的⼯具，在美国，⽇本及欧洲⼴为使⽤，国内近年来亦引进了此项技术。
⼊射光散射光图9-1光散射现象9.1 基本原理9.1.1凝胶渗透⾊谱分离原理让被测量的⾼聚物溶液通过⼀根内装不同孔径的⾊谱柱，柱中可供分⼦通⾏的路径包括粒⼦间的间隙（较⼤）和粒⼦内的通孔（较⼩）。
如图9-2、图9-3所⽰，当待测聚合物溶液流经⾊谱柱时，较⼤的分⼦只能从粒⼦间的间隙通过，被排除在粒⼦的⼩孔之外，速率较快；较⼩的分⼦能够进⼊粒⼦中的⼩孔，通过的速率慢得多。
Wyatt多角度激光光散射凝胶色谱联用系统操作规程（Wyatt GPC/SEC –MALS）一试验前准备1 溶剂准备水相体系：超纯水或其配制它盐溶液）~ 1L，并使用0.22um滤膜过滤。
有机相体系：HPLC级溶剂；并使用0.22um滤膜过滤。
2 样品准备浓度配制（定量环100uL）：分子量~1000kda：0.5 - 1mg/mL；分子量~100kda：1 - 2mg/mL；分子量~10kda：3 - 5mg/mL；分子量~5kda：5 - 10mg/mL。
3 检查仪器电路连接检查仪器电源线是否连接，电源开关、交换机（适用于信号连接通过网线的情形）是否打开。
二仪器系统开机及平衡操作1 分别依次打开泵、柱温箱、进样系统、示差检测器、粘度检测器、多角度激光光散射检测器电源及计算机。
待仪器正常开机后，打开工作站Astra软件。
2 开启泵，使用超纯水purge泵~5min；关闭purge阀。
冲洗系统。
待系统平衡完毕，使用最新配制的流动相冲洗系统。
3 将流速调至0.1mL/min；若系统中未接入GPC/SEC柱，可直接将流速调至0.1 – 0.5mL/min冲洗系统（无粘度检测器），示差检测器purge阀必须处于“On”状态。
若系统中已接入GPC/SEC柱，则必须以0.1mL/min的起始流速，每1－2分钟提高0.1mL的速度，将流速调整至0.4 – 0.5 mL/min，充分平衡系统；三试验操作及数据采集与处理1 待系统充分平衡。
逐步调整流速至试验流速；调节示差检测器的Purge阀处于处于“Purge Off”状态；待信号稳定后，归零（Zero）；粘度计（Visco Star）的操作方法见附件。
待基线稳定。
2 在Astra软件中调用相应的实验方法，点击Run；3 进样。
将已配制样品，通过进样阀进样。
4 数据采集。
一旦进样系统进样，Astra软件开始采集数据；当数据采集完毕；软件根据事先设定时间运行至停止。
尺寸排阻色谱-多角度激光光散射联用仪（SEC-MALLS）基本操作步骤一、尺寸排阻色谱（Agilient1100高压液相色谱，示差检测器RID）1、打开计算机,进入Windows NT （或Windows 2000）画面,并运行Bootp Server 程序。
2、打开1100 LC 各模块电源。
3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online 图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面。
添加进样、高压泵、色谱柱、示差检测器各模块。
4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 调用已建立的方法“YJK”（多糖体系），或从“Method”菜单中选择“Edit entire method”项新建方法。
5、把流动相（如0.1M氯化钠）放入溶剂瓶中。
设置泵的流速0.5 mL/min，“Solvent B”处为100，其他均为0。
6、排完气后扭紧排气阀。
以0.2 mL/min的流速装预柱和色谱柱（Shodex系列，根据分子量不同选择合适的柱子803、805、806）。
7、以0.1 mL/min递增的趋势增加泵的流速到0.5 mL/min，单击示差检测器图标，进入Control选项，打开purge阀，平衡示差检测器600-800 min。
8、选择单进样方式进样，进样体积100 μL，进样位置为2号。
从“Run control ”菜单中选择“Sample info”选项，输入操作者名称，在“Data file ”中选择“Manual”或“Prefix”。
两者区别：Manual--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖。
Prefix—在Prefix 框中输入前缀，在Counter 框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd0001，vwd0002……。
二、多角度激光光散射（DAWN HELEOS II，ASTRA V软件）9、待示差检测器平衡好后，打开DAWN HELEOS II多角度激光光散射检测器，打开软件ASTRA V。
多角度激光光散射仪与凝胶渗透色谱联用技术仪器组成：Wyatt DAWN HELEOS Ⅱ（十八角度激光光散射检测器）Wyatt ViscoStar Ⅱ (粘度检测器)Wyatt Optilab rEX （示差折光检测器）配一套Waters 515单元泵和柱温箱。
检测原理：光散射法是测定高分子物质重均分子量的绝对方法。
高分子溶液可视为不均匀介质，当光通过它时，入射光的电磁波诱导高分子成为振荡偶极子，并产生强迫振动作为二次光源发出散射光。
高分子溶液的散射光强度远远高于其溶剂，并且强烈依赖于高分子的分子量、链形态、溶液浓度、散射光角度和折光指数增量（dn/dc值）等基本参数，从而得到高分子物质的绝对分子量。
凝胶渗透色谱可将溶剂中的高分子物质按照分子量的大小依次洗脱出来。
利用光散射仪与凝胶渗透色谱联用技术，除了可以得到物质的平均分子量，还可以测得不同的高分子物质的分布及其相应分子量大小，并且不需要使用结构相似的标准样品做标准曲线。
在直接测定高分子物质的绝对分子量的同时，由于联用了粘度检测器和示差折光检测器，还可得到特性粘数、均方根旋转半径等重要参数。
应用：光散射强度与分子大小直接相关，凝胶渗透色谱能分离不同分子量大小的高分子物质，结合次两种特性，可得到许多重要信息，已经被广泛应用于高分子化学、生物化学等众多研究领域。
第一，高分子物质的分子量的测定。
不需要标准品、校正曲线以及任何假设，即可直接求得高聚物、多糖、蛋白质等多种高分子物质的绝对分子量。
测定范围广泛，可达103～107，且采用十八角度激光光散射检测器，准确度高。
第二，多组分高分子物质的平均分子量及其相应组分对应的绝对分子量的测定。
不仅可以单机操作测定混合物质的平均分子量，还可结合凝胶渗透色谱分离技术，测定各个分子量不同的各个不同组分的绝对分子量。
第三，高分子物质的折光指数增量（dn/dc值）、均方根旋转半径（Rg）、第二维里系数（A2）等重要参数和重均分子量（Mw）、数均分子量（Mn）等多种不同分子量的测定，可得到分子的分枝程度等形态特征，研究高分子物质与溶剂的相互作用，研究高分子物质的聚合与降解作用等。
多角度激光散射仪设备原理宝子们！今天咱们来唠唠一个超酷的设备——多角度激光散射仪。
这玩意儿听起来就很高级，对不对？但其实呀，它的原理也没有那么神秘莫测啦。
咱先来说说激光这部分。
激光呢，就像是一群超级听话、超级整齐的小光兵。
它们朝着一个方向，排着整整齐齐的队伍就出发了。
这种高度的一致性是激光的一个超级厉害的特性。
在多角度激光散射仪里，激光就像一个超级探照灯，它要去照射那些我们想要研究的小颗粒或者分子啥的。
那这些小颗粒或者分子呢，就像是一群调皮的小不点。
当激光照射到它们身上的时候，就会发生散射现象。
这散射呀，就好比你拿个手电筒去照一堆小玻璃珠子，光打到珠子上就会往四面八方散开去。
这些小颗粒或者分子散射激光的时候，可不是随随便便散射的哦。
从不同的角度去看这个散射的光，就能得到很多有用的信息呢。
想象一下，你站在不同的位置看那些被手电筒照亮的玻璃珠子，每个位置看到的光的样子可能都不太一样。
对于多角度激光散射仪来说，它有好多个“小眼睛”（检测角度）在不同的方向盯着这些散射光。
每个角度看到的散射光的强度呀、偏振情况呀之类的，都能告诉我们关于那些小颗粒或者分子的大小、形状还有它们之间相互作用的秘密。
比如说，如果一个小颗粒比较大，那它散射出来的光在某些角度就会比较强；要是小颗粒比较小呢，散射光的分布又会是另外一种情况。
就好像大胖子和小瘦子站在灯光下，影子的大小和形状肯定不一样嘛。
而且哦，这个设备还能通过分析散射光的偏振情况来知道更多的事儿。
这偏振呀，就像是光的一种小脾气。
不同形状的小颗粒或者分子会让散射光的偏振发生不同的变化。
就好像不同性格的人会对同一件事情有不同的反应一样有趣呢。
再说说这个设备是怎么把这些信息收集起来的。
那些检测角度上的探测器就像是一个个小耳朵，它们可灵敏啦，能准确地捕捉到散射光传来的各种信号。
然后把这些信号转化成电信号，就像把听到的声音转化成可以记录下来的东西一样。
最后通过电脑或者其他设备对这些电信号进行分析处理，就像把一堆杂乱的小秘密整理成一本有意义的故事书一样。
多角度激光光散射仪与凝胶渗透色谱联用技术仪器组成：Wyatt DAWN HELEOS Ⅱ（十八角度激光光散射检测器）Wyatt ViscoStar Ⅱ (粘度检测器)Waters 1515单元泵、示差折光检测器和柱温箱。
检测原理：光散射法是测定高分子物质重均分子量的绝对方法。
高分子溶液可视为不均匀介质，当光通过它时，入射光的电磁波诱导高分子成为振荡偶极子，并产生强迫振动作为二次光源发出散射光。
高分子溶液的散射光强度远远高于其溶剂，并且强烈依赖于高分子的分子量、链形态、溶液浓度、散射光角度和折光指数增量（dn/dc值）等基本参数，从而得到高分子物质的绝对分子量。
凝胶渗透色谱可将溶剂中的高分子物质按照分子量的大小依次洗脱出来。
利用光散射仪与凝胶渗透色谱联用技术，除了可以得到物质的平均分子量，还可以测得不同的高分子物质的分布及其相应分子量大小，并且不需要使用结构相似的标准样品做标准曲线。
在直接测定高分子物质的绝对分子量的同时，由于联用了粘度检测器和示差折光检测器，还可得到特性粘数、均方根旋转半径等重要参数。
应用：光散射强度与分子大小直接相关，凝胶渗透色谱能分离不同分子量大小的高分子物质，结合次两种特性，可得到许多重要信息，已经被广泛应用于高分子化学、生物化学等众多研究领域。
第一，高分子物质的分子量的测定。
不需要标准品、校正曲线以及任何假设，即可直接求得高聚物、多糖、蛋白质等多种高分子物质的绝对分子量。
测定范围广泛，可达103～107，且采用十八角度激光光散射检测器，准确度高。
第二，多组分高分子物质的平均分子量及其相应组分对应的绝对分子量的测定。
不仅可以单机操作测定混合物质的平均分子量，还可结合凝胶渗透色谱分离技术，测定各个分子量不同的各个不同组分的绝对分子量。
第三，高分子物质的折光指数增量（dn/dc值）、均方根旋转半径（Rg）、第二维里系数（A2）等重要参数和重均分子量（Mw）、数均分子量（Mn）等多种不同分子量的测定，可得到分子的分枝程度等形态特征，研究高分子物质与溶剂的相互作用，研究高分子物质的聚合与降解作用等。
钛磷催化剂的制备及其在PET合成中的应用作者：朱海鑫王勇军吕汪洋陈文兴来源：《现代纺织技术》2024年第04期摘要：钛系催化剂兼具绿色、高效等优点，在替代锑系催化剂上拥有广阔的前景。
为探究自制钛磷催化剂在聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）缩聚过程中的催化性能，利用紫外-可见分光光度计（UV-Vis）和傅里叶变换红外光谱（FT-IR）分析催化剂结构。
此外，通过超高效聚合物色谱-多角度激光光散射仪-示差折射仪联用（APC-MALLS-RID）以及差示扫描量热仪（DSC）和热重分析仪（TG）表征所合成PET的分子量和热性能。
结果表明：钛磷催化剂钛质量分数为17.10%；FT-IR谱图中，催化剂1567 cm-1和1438 cm-1位置出现了羧基中CO的对称伸缩振动和反对称伸缩振动，羟基（—OH）的拉伸振动峰出现在3424 cm-1附近，证明催化剂中Ti离子和配体之间发生强烈相互作用，钛离子被成功配位；钛磷催化剂在催化预聚物反应180 min后可获得重均分子量为57240 g/mol的PET。
DSC和TG實验结果表明，钛磷催化剂所制备的PET相比锑系催化剂热稳定性更优。
关键词：钛系催化剂；聚对苯二甲酸乙二醇酯；催化性能；缩聚反应中图分类号：TS15 文献标志码：A 文章编号：1009-265X（2024）04-0029-09聚酯作为应用广泛的一种聚合物，有着成本低和力学性能优异的优点，其中聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）产量占比最大［1］。
截至2021年底中国聚酯总产能已经突破6500万吨，占世界产量比重已经超过70%［2］。
目前，PET合成所采用的催化剂主要为锑系、锗系和钛系，其中应用最广泛的催化剂是锑系催化剂（三氧化二锑或乙二醇锑）。
然而，锑是一种重金属元素，因此日常使用锑系催化剂制备的PET产品会对环境和人体健康产生不利影响［3-4］。
锗系催化剂有活性可控且稳定的优点，但高昂的成本限制了其使用。
钛系催化剂由于其高催化活性、低成本和环境友好性，在代替锑系催化剂上具有广阔的前景。
蛋白质分子量测试方法概述谭和平;王彧婕;邹燕;谭福元;徐文平【摘要】分子量是蛋自质主要的特征参数之一,近年来其测试方法发展十分迅速该文概述了目前蛋白质分子量测试中应用最厂‘泛的凝胶电泳法、高效凝胶过滤色谱-激光光散射法以及生物质谱技术的原理和应用发展现状等.%Molecular weight is one of the most important characteristic parameters of proteins,which leads the methods to determine protein molecular weight to develope rapidly in recent years.In this paper, the mechanism, application and development were briefly overviewed for the most widely used technologies including gel electrophoresis, high performance gel filtration chromatographylaser light scattering and the biological mass spectrometry technology.【期刊名称】《中国测试》【年(卷),期】2011(037)002【总页数】4页(P34-37)【关键词】蛋白质;分子量;凝胶电泳;高效凝胶过滤色谱-激光光散射;生物质谱【作者】谭和平;王彧婕;邹燕;谭福元;徐文平【作者单位】中国测试技术研究院,四川,成都,610021;中国测试技术研究院,四川,成都,610021;中国测试技术研究院,四川,成都,610021;中国测试技术研究院,四川,成都,610021;中国测试技术研究院,四川,成都,610021【正文语种】中文【中图分类】R977.6;TM930.120 引言随着后基因组时代的到来，生命科学进入了蓬勃发展的新阶段，蛋白质及其结构、功能、活性、蛋白质组学等的研究发展非常迅速。
尺寸排阻色谱-多角度激光光散射联用仪（SEC-MALLS）
基本操作步骤
一、尺寸排阻色谱（Agilient1100高压液相色谱，示差检测器RID）
1、打开计算机,进入Windows NT （或Windows 2000）画面,并运行Bootp Server 程序。
2、打开1100 LC 各模块电源。
3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online 图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面。
添加进样、高压泵、色谱柱、示差检测器各模块。
4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 调用已建立的方法“YJK”（多糖体系），或从“Method”菜单中选择“Edit entire method”项新建方法。
5、把流动相（如0.1M氯化钠）放入溶剂瓶中。
设置泵的流速0.5 mL/min，“Solvent B”处为100，其他均为0。
6、排完气后扭紧排气阀。
以0.2 mL/min的流速装预柱和色谱柱（Shodex系列，根据分子量不同选择合适的柱子803、805、806）。
7、以0.1 mL/min递增的趋势增加泵的流速到0.5 mL/min，单击示差检测器图标，进入Control选项，打开purge阀，平衡示差检测器600-800 min。
8、选择单进样方式进样，进样体积100 μL，进样位置为2号。
从“Run control ”菜单中选择“Sample info”选项，输入操作者名称，在“Data file ”中选择“Manual”或“Prefix”。
两者区别：Manual--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖。
Prefix—在Prefix 框中输入前缀，在Counter 框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd0001，vwd0002……。
二、多角度激光光散射（DAWN HELEOS II，ASTRA V软件）
9、待示差检测器平衡好后，打开DAWN HELEOS II多角度激光光散射检测器，打开软件ASTRA V。
10、先在System的ISI和Istrument中确认仪器已经计算机连接上。
11、具体试验步骤File-------New------Experiment from Template--------System Template。
12、System Template，根据不同的试验进入不同的Template，如进入Laser Scattering-------Online (RI Consentration)。
点开所有前面带“+”的选项，由上到下注意设置。
右键单击DWAN HELEOS II-------Replace Configuration-------双击example configuration------双击Light scattering-------双击HELEOS II--------With Generic RI-------LS+RI ONLINE。
13、将Configuration、Procedures和Report中前面带“+”的全部点开。
Generic pump中将Flow rate根据前面设置的情况输入正确的数据；Solvent根据实际流动相选择。
点Name中最右边的按键，出现对话框，在System Solvent中选择合适的流动相，双击调入即可。
如没有给出这一溶剂，在Name中直接输入溶剂即可，Refractive Index Model中将Polynomial改为Fixed，Model Parameters 1中输入此种溶剂的折射率。
14、Injector中将Injector V olume设为正确的数值。
Sample中将Name输入样品名，dn/dc输入合适的数值，如0.1M氯化钠的dn/dc为0.125 mL/mg。
HELEOS II的主要是Physical Instrument和仪器常数：Physical Instrument的后面的按键点开，单击合适的仪器，Select。
15、在Calibration Constant中输入测好的仪器校正常数（3.2041×10-5 1/V.cm），RI的校正常数4.9732×10-4（氯化钠中测得常数），Rayleigh Ratio为3.6443×10-6
（11-15步骤中或者左键单击左侧Experiment，单击Open，调用多糖测定模板“yjk-standard”，修改个别参数后，另存为即可！！）
16、根据所选择的色谱柱设置Procedures中Basic Collection中的Duration 设采集时间（如Shodex SB-806色谱柱，Duration为60 min），点击下面的Apply。
17、Run，等待采集样品。
18、从Aglient液相色谱操作界面Method 菜单中选择“Run method”，进样。
19、设定的采集时间到后，软件自动停止采集或按STOP停止，然后保存数据。
在Aglient液相色谱操作界面中点STOP。
进入下一个样品的采集。
20、进样完毕后，按0.1 mL/min递减趋势调节泵的流速为0，换上0.2%的叠氮钠溶剂，以0.2 mL/min的流速运行3 h，拆掉色谱柱后，换上异丙醇作为流动相，以0.2 mL/min的流速运行3 h。
完毕后，关闭多角度激光光散射检测器，关闭液相色谱各模块电源，关闭电脑。
三、数据处理与分析
21、再按RUN，软件会出现对话框，大意为需要设定有关基线的参数。
然后在LS的11角的信号上设定基线，然后在下面的数据表的最后的Auto Baseline 后点击Auto Baseline，然后在图上检查各个角度和RI的基线设的是否合适，对不合适的进行修改。
然后点OK。
22、在左侧Procedures一栏的Peaks选项中，进行设定有关峰的参数。
在峰的起始位置一点，然后拖到峰的结束位置，这样峰就定好了。
23、Normalize在Experiment-------Configuration中Normalize。
在Peak number 中输入做归一化的样品的合适的峰的峰号，然后在Action中点击Normalize。
注意：Normalize归一化的校正一般使用分子量小于5万的样品来校正，此样品可以与要测的样品不是同一种类的物质，但必须要能溶于同一流动相中。
THE、Toluene等有机体系一般用PS标样，水相一般用BSA、Dextran、PEO等水溶性标样。
24、Alignment在Experiment-------Configuration中的Alignment，按住Ctrl 键用鼠标较所要Alignment的峰框起、放大，可以看出RI的信号在LS信号的后面。
用鼠标点中RI峰的峰尖处，将其拖到LS峰的峰尖处。
点击Take Delay From Graph中的Perform在Delay中就自动给出了延迟时间，并且峰尖也重合了。
（或者直接修改下面表格中的Delay (min)的数值，修改到两峰重合为止。
）
25、在Report中看结果，然后在File中Save as Template，把其存为一个Template。
四、注意事项
1、进行SEC-MALLS之前，一定要保证所测试样品有足够的纯度（>90%），以免影响测试结果。
（请特别注意）
1、仔细阅读仪器说明书或操作手册及其他随机文件，以期对仪器的性能、操作程序、维护保养等有充分的了解。
2、使用的纯水为屈臣氏蒸馏水（大润发、大统华均有售），配置好的流动相试剂必须要过滤膜（0.22μm）过滤，避免杂质进入色谱柱和分析仪器内。
尽量使用新配置的流动相，尤其是水作为流动相时。
（请特别注意）
3、在改变实验条件时，一定注意流动相之间的互溶性。
（请特别注意）
4、测试完毕，必须对仪器进行充分清洗，特别是盐水作为流动相时。
（请特别注意）
5、开机后，不论是单机实验还是联机实验，都要对仪器进行充分清洗平衡，建议平衡过夜。
五、清洁卫生
实验完毕后，打扫仪器室桌面与地面清洁，保持桌面整洁。
记录当天的仪器使用情况于指定记录本上，包括仪器使用起止时间与出现问题的解决方案，并签上操作者的名字。
