脂肪乳实验(汇编)

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脂肪乳注射液(C14~24)

甲氧基苯胺值精密量取本品 10ml，置 250ml 圆底烧瓶中，冻干除去水分（或加无水乙醇 20ml，于 60℃水浴减压蒸馏除去水分。自“加无水乙醇 20ml”起，依法再重复操作三次除尽水分）。取残渣，加异丙醇-异辛烷（2:8）适量使溶解并定量转移至 25ml 量瓶中，用上述溶剂稀释至刻度，摇匀，取 12ml 置离心管，加无水硫酸钠 2.0g，振摇 1 分钟，离心（4000rpm）10 分钟，取上清液作为供试品溶液。精密量取 5ml，置具塞试管中，精密加冰醋酸 1ml，密塞，摇匀，以异丙醇-异辛烷（2:8）为空白，照紫外-可见分光光度法（通则 0401），在 350nm 的波长处测定吸光度（A0）；另精密量取供试品溶液与异丙醇-异辛烷（2:8）各 5ml，分别置甲、乙两支具塞试管中，各精密加 0.25％4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液（临用新制）1ml，密塞，摇匀，立即准确计时，于 23℃±3℃避光放置约 8 分钟，同法分别测定，读取 10 分钟时的吸光度 A1、 A2。按下式计算，本品的甲氧基苯胺值不得过 5.0。
折射率 1.47～1.52，遮光度 5～10％；或其他适宜的仪器），或照动态光散射法检查（见附件 1），
体积平均粒径或光强平均粒径不得过 0.50m；另取本品，照基于单粒子光学传感技术的光阻法
测定（见附件 2），大于 5m 的乳粒加权总体积不得过油相体积的 0.05％。
游离脂肪酸精密量取本品 15ml，加乙醇 60ml、水 30ml 与 0.05mol/L 盐酸溶液 1ml，摇
匀，作为供试品溶液；另精密称取硬脂酸 28.5mg，置 100ml 量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至
刻度，摇匀，精密量取 15ml，加乙醇 45ml、水 30ml 与 0.05mol/L 盐酸溶液 1ml，摇匀，作为

凝胶法测定脂肪乳10％

China Pharmacy 2017V ol.28No.18中国药房2017年第28卷第18期脂肪乳氨基酸-葡萄糖注射液为国家基本药物之一，作为静脉补给能量制剂，应用越来越广泛[1]。

目前，2015年版《中国药典》并未收录脂肪乳/氨基酸/葡萄糖注射液品种，尚无国家标准细菌内毒素法，也尚无行业标准，现企业多采用显色基质法（Kinetic chromogenic assay ，KCA ）进行测定。

凝胶法虽灵敏度不如光度法[2]，但操作简单、经济，适用范围广，受干扰小，是我国法定的仲裁检验方法。

脂肪乳作为脂溶性的药物载体[3]，其离子对凝胶法有很强的干扰作用；氨基酸注射液的凝胶试验亦有干扰作用[4]，十二烷基硫酸钠（Sodium dodecyl sulfate ，SDS ）是助溶的表面活性剂[5]，本试验拟使用SDS 溶液对脂肪乳（10％）/氨基酸（15）/葡萄糖（20％）注射液进行稀释以增强脂肪乳的稳定性，消除干扰作用，并依据2015年版《中国药典》（四部）“细菌内毒素检查法”项下凝胶法测定该制剂中的细菌内毒素，以期为完善该制剂的质量控制提供参考。

1材料1.1仪器TW 12型水浴锅（德国Julabo 公司）；LK 164-03型动态试管检测仪（英国Lab Kinetics Ltd 公司）。

1.2药品与试剂脂肪乳（10％）/氨基酸（15）/葡萄糖（20％）注射液（英国Baxter SA 公司，批号：13K 06N 20、13I 19N 20、13I 18N 40，规格：1500mL ∶10％脂肪乳注射液300mL+5.5％复方氨基酸600mL+20％葡萄糖注射液600mL ）；细菌内毒素工作标准品（中国食品药品检定研究院，批号：150601-201479，规格：60EU/支）；细菌内毒素检查用水（BET 水，湛江安度斯生物有限公司，批号：1502120，规格：50mL/支）；鲎试剂[TAL ，均通过鲎试剂灵敏度复核，凝胶法：湛江安度斯生物有限公司，批号：1503112、1503042、1501212，标示灵敏度（λ）：0.25、0.25、0.03EU/mL ；福州新北生化工业有限公司，批号：14030312、14112212，λ：0.25、0.25、0.03EU/mL ；KCA ：湛江安度斯生物有限公司，批号：1507310，检测范围：50～0.005EU/mL]。

脂肪乳注射液甘油测定标准

脂肪乳注射液甘油测定标准脂肪乳注射液是一种常用的药物，用于为患者提供能量和营养支持。

其中一个重要的成分是甘油，它可以提供额外的能量和改善液体的稳定性。

为了确保脂肪乳注射液的质量和稳定性，需要建立甘油的测定标准。

甘油是一种重要的生化物质，是三羟基醛糖，由于其能够与水形成氢键和与水溶性物质形成氢键的能力，使其广泛应用于多种医药产业。

在脂肪乳注射液中，甘油起到增稠剂、保湿剂、增溶剂和发展剂等多种作用，因此，准确测定甘油的含量非常重要。

测定脂肪乳注射液甘油含量的方法主要有色度测定法和HPLC 测定法。

其中，HPLC测定法被广泛采用，因为它具有高灵敏度、准确性和重铬量等优点。

测定脂肪乳注射液甘油含量的标准方法如下：1. 仪器设备- 高效液相色谱仪(HPLC)：包括波长检测器、流动相控制器和数据处理系统等- 色谱柱：用于分离甘油和其他成分的柱子- 电子天平：用于准确称量样品和试剂- 分液漏斗：用于配制溶剂和样品混合- 离心机：用于离心样品和去除气泡2. 标准溶液的制备- 称取适量的纯甘油溶解于甲醇中，制备1000μg/mL的甘油标准溶液3. 样品的制备- 取适量的脂肪乳注射液，用离心机离心10分钟，去除气泡 - 取一定量的脂肪乳注射液，加入适量的甲醇进行稀释，使得甘油的浓度适合仪器检测- 进行适当的稀释，以使得结果在仪器的线性测定范围内4. 仪器参数的设置- 流动相：甲醇/水 (80/20, v/v)- 流速：1 mL/min- 柱温：室温- 检测波长：230 nm- 注射体积：20 μL5. 样品分析步骤- 将标准溶液和样品溶液注入HPLC系统中进行分析- 通过仪器的测定结果计算甘油的含量- 重复多次测定以确保结果的可靠性6. 结果的计算和报告- 根据HPLC测定结果和标准曲线计算出甘油的含量- 使用适当的单位（例如mg/mL）报告甘油浓度- 记录实验条件和结果，以备将来参考在进行脂肪乳注射液甘油测定时，需要注意以下几点：- 脂肪乳注射液样品制备时应注意样品的稳定性和溶解度- 采用合适的校正方法和质量控制，确保测定结果的准确性 - 定期维护仪器设备，保持其稳定性和准确性总之，建立脂肪乳注射液甘油测定的标准是确保其质量和稳定性的重要步骤。

食品中脂肪测定(索氏提取法)实验报告

食品中脂肪测定(索氏提取法)实验报告报告汇编 Compilation of reports 20__报告文档·借鉴学习 word 可编辑·实用文档1 目的熟练掌握索氏法的原理、操作步骤、注意事项。

2 原理样品用无水乙醚或石油萃取后，蒸去溶剂所得的物质，在食品分析^p 上称为脂肪或粗脂肪。

因为除脂肪外，还含色素及挥发油、蜡、树脂等脂溶性物质。

索氏抽提法所测得的脂肪为游离脂肪。

3 试剂无水乙醚或石油醚海砂：同实验二《食品中水分的测定》4 仪器索氏提取器、干燥箱、干燥器、分析^p 天平5 样品奶粉6 操作 6.1 样品称量 6.1.1 精密称取经恒重处理后的收集瓶，m 瓶（准至0.0001g）6.1.2 固体样品精密称取 2~5g 样品 m 样（可取测定水分后的样品），必要时拌以海砂，全部移入滤纸筒内。

6.1.3 液体或半固体样品精密称取 5~10g，至于蒸发皿中，加入海砂约 20g（准至±0.0001g）于沸水浴上蒸干后，再于95~105℃干燥，研细，全部移入滤纸筒内。

蒸发皿及附有样品的玻棒，均用沾有乙醚的脱脂棉擦净，并将棉花放入滤纸筒内。

6.2 萃取将滤纸筒放入脂肪萃取器的样品室内，连接已干燥至恒重的收集瓶，从萃取器冷凝管上端加入无水乙醚或石油醚至瓶内容积的 2/3 处，于水浴上加热，使乙醚或石油醚不断回流提取 1~1.5h，一般在条件允许的情况下提取6~12h .6.3 称量报告文档·借鉴学习 word 可编辑·实用文档取下收集瓶，回收乙醚或石油醚，待收集瓶内乙醚剩 1~2mL 时在水浴上蒸干，再于95~1℃干燥 20min，放干燥器内冷却 0.5h 后称量 m 总’。

7 数据记录 7.1 原始数据7.2 可疑值弃留实验测得数据均符合一般规律，无可疑值。

7.3 整理数据8 计算 m 总’-m 瓶_ = —————————× 100 m 样式中：_ —样品中脂肪含量，m 瓶—收集瓶的质量，g m 样—样品的质量（如果是测定水分后的样品，应按测定水分前的湿润样品质量计），gm 总’—收集瓶和脂肪的质量，gm 总’-m 瓶114.7979– 114.4616 _ = —————————× 100 = —————————× 100 = 16.81 m 样2.000 m 样（g）m 瓶（g）m 总’（g）2.0000114.4616114.7979报告文档·借鉴学习 word 可编辑·实用文档9 结果样品中脂肪含量为 16.8110 结果可靠性分析^p 经计算得样品中脂肪含量为 16.81。

ICP-MS法测定脂肪乳（10%）氨基酸（15）葡萄糖（11%）注射液中4种元素的含量

ICP-MS法测定脂肪乳（10%）氨基酸（15）葡萄糖（11%）注射液中4种元素的含量何燕莉;周远华【摘要】目的建立测定脂肪乳（10%）氨基酸（15）葡萄糖（11%）注射液中钾、钠、镁、钙4种元素的质量分数的方法。

方法采用电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS法）,利用内标溶液（45Sc）在线校正漂移,供试品经稀释后直接同时测定注射液中的4种金属元素的量。

结果钾、钠、镁、钙标准曲线r值分别为0.998 6、0.999 0、0.998 7、0.999 7;加样回收率为94.5%～107.7%,精密度试验RSD值分别为1.4%、1.8%、2.1%、1.1%。

结论该方法简便、快速、准确,可作为该类注射液中钾、钠、钙、镁质量分数测定的方法。

【期刊名称】《广东药科大学学报》【年(卷),期】2017(033)003【总页数】3页(P346-348)【关键词】ICP-MS 脂肪乳（10%）氨基酸（15）葡萄糖（11%）注射液钾钠钙镁【作者】何燕莉;周远华【作者单位】广州市药品检验所,广东广州510160;广州市药品检验所,广东广州510160【正文语种】中文【中图分类】R927.2脂肪乳(10%)氨基酸(15)葡萄糖(20%)注射液是一种适用于口服或肠内营养供给不能、不足或禁忌者，用于肠外营养，商品名为克林维。

克林维的包装分隔为3个独立的腔室，分别装有脂肪乳、复方氨基酸和葡萄糖溶液，其中复方氨基酸注射液含钾、钠、镁等3种微量元素，葡萄糖注射液含钙微量元素，使用时激活可剥离隔封，多种营养物质即以一定的配比混合，可对患者进行输注。

肠外营养对加快术后患者和机体恢复、促进伤口愈合，增加患者抵抗力有着积极作用[1]。

目前，测定钾、钠、钙、镁元素多应用原子吸收分光光度法(AAS)、电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)、电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)[2-5]。

其中ICP-MS 在无机元素分析中的应用愈来愈广泛，具备干扰少、线性范围宽、多元素同时分析等优势，检测限一般比AAS法、ICP-AES法低2～3个数量级。

不同浓度脂肪乳对血流速度影响的实验研究

·实验研究Experimental research ·对无手术指征胰腺癌的治疗是当今临床医学最棘手的问题之一。

在非手术治疗胰腺癌的方法中，局部动脉灌注化疗是公认的比较有效的措施［1］。

我们的初步动物实验表明以脂肪乳（lipid emulsion ，LE ）为载体进行胰腺区域动脉灌注化疗，能使外周血药浓度下降，胰腺组织浓度增高。

本实验旨在通过观察不同浓度、不同剂量LE 对灌注血管血流速度的影响，探讨LE 作为载体的作用机制。

1材料与方法1．1实验动物与材料作者单位：100091北京解放军总医院第二附属医院放射科（李强、敖国昆）；解放军总医院介入放射科（王茂强、段留新、宋鹏）通信作者：王茂强不同浓度脂肪乳对血流速度影响的实验研究李强，王茂强，段留新，宋鹏，敖国昆【摘要】目的通过观察动脉灌注不同浓度、不同剂量脂肪乳（LE ）对血流速度的影响，探讨LE 作为载体的作用机制。

方法以20％和30％LE 进行动脉灌注，剂量分别为2ml 和20ml ，分为4组：A 组（20％LE ，2ml ）、B 组（20％LE ，20ml ）、C 组（30％LE ，2ml ）、D 组（30％LE ，20ml ）。

用2只健康杂种犬，在DSA 引导下分别置管于肝动脉、脾动脉进行灌注。

统计各组从导管头端对比剂显现至脾动脉、肝动脉选定点血管显影所需的帧数，并记录造影时间。

结果不同浓度和剂量的LE 灌注后均可减缓血流速度，但减缓的持续时间和最大减缓速度（减缓峰值）有所不同（P ＜0．05）。

A 组约5min 血流速度恢复正常，B 组需5～10min ，C 组需20min ，D 组需20～30min ；流速减缓峰值于A 组为18帧（1．44s ），B 组为30帧（2．4s ），C 组为9帧（0．72s ），D 组为14帧（1．12s ）。

结论LE 经动脉灌注后均可造成局部血流速度减缓，30％LE 造成流速减缓程度比20％LE 轻，但其持续时间较长。

牛奶中脂肪的测定实验

注意事项
脂肪球被乳中酪蛋白钙盐包裹，所以不能被乙醚，石油醚直接提取，需先破坏此结构状态。氨水破坏酪蛋白钙盐，乙醇使溶解的蛋白质析出，最后用乙醚，石油醚提取。
石油醚的作用是降低乙醚的极性，使乙醚与水不混溶，只抽提出脂肪，并可使分层清晰。
吸取澄清液是要轻避免吸入下层物质
(七) 特卡托脂肪自动测定仪
醇法）
2干柱发 3超临界流体萃取法 4索氏提取法 5酸水解法 6罗紫-哥特里法（碱性乙醚法） 7特卡托脂肪自动测定仪法 8盖勃法和巴布科克法
罗兹——哥特里(Rose—Gottlieb)法（碱性乙醚提取法、重量法测定乳脂肪）
（一）原理
利用氨一乙醇溶液破坏乳的胶体性状及脂肪球膜使非脂成分溶解于氨一乙醇溶液中，而脂肪游离出来，再用乙醚—石油醚提取出脂肪，蒸馏去除溶剂后，残留物即为乳脂肪。
??书山有路勤为径学海无涯苦作舟书到用时方恨少事非经过不知难三现代脂肪测定的方法?1液液萃取法氯仿甲醇法二氯甲烷甲醇法?2干柱发?3超临界流体萃取法?4索氏提取法?5酸水解法?6罗紫哥特里法碱性乙醚法?7特卡托脂肪自动测定仪法?8盖勃法和巴布科克法??书山有路勤为径学海无涯苦作舟书到用时方恨少事非经过不知难罗兹哥特里rosegottlieb法碱性乙醚提取法重量法测定乳脂肪一原理利用氨一乙醇溶液破坏乳的胶体性状及脂肪球膜使非脂成分溶解于氨一乙醇溶液中而脂肪游离出来再用乙醚石油醚提取出脂肪蒸馏去除溶剂后残留物即为乳脂肪
仪器
① 巴布科克氏乳脂瓶
②盖勃氏乳脂计
谢谢观赏！
彼此携手共建美好未来！！！
牛奶中脂肪的测定
实验研究课题

一、食品中的脂类

物质和脂肪含量

脂肪乳注射液(C14~24)的介绍

02
01
1. 定义：定义是对某一事物、现象或概念的本质属性和特征进行明确、准确的描述，是认识和理解事物的起点。
2. 作用：定义的作用主要体现在为人们提供了对事物的准确理解，有助于消除误解和混淆，促进交流和学习。
03
3. 在学术研究中，定义是建立理论体系的基础，通过对基本概念的定义，可以明确研究的范围和目标，保证研究的科学性和准确性。
3
的指导，帮助患者尽快恢复正常生活。
2 1
2. 术后恢复支持需要医生、护士和家属的共同努力，提供必要的医疗护理和心理疏导。
1. 术后恢复支持是确保患者顺利康复的重要环节，包括身体康复和心理康复两方面。
四、脂肪乳注射液（C14~24）的安全性与注意事项
1. 不良反应及处理
1. 若在使用脂肪乳注射液（C14~24）过程中出现过敏反应，如皮疹、瘙痒等，应立即停止使用，并及时就医。
2. 若在使用脂肪乳注射液（C14~24）后出现恶心、呕吐等消化道不适症状，可考虑减慢输液速度或暂停使用，必要时请咨询医生。
3. 若在使用脂肪乳注射液（C14~24）时出现胸闷、呼吸困难等严重不良反应，应立即停止使用，并寻求紧急医疗救助。
2. 禁忌症与慎用人群
01
1. 对于存在脂肪代谢障碍的患者，如高脂血症、严重脂肪肝等，应慎重使用脂肪乳注射液。
2. 乳化过程
1. 乳化过程是脂肪乳注射液制备的重要步骤，主要通过机械力将水相和油相混合，形成稳定的乳液。
2. 在乳化过程中，通常需要添加表面活性剂，如卵磷脂、普鲁兰等，以降低油水界面张力，促进乳化。
3. 乳化过程的控制对脂肪乳注射液的质量至关重要，包括乳化时间、乳化速度、乳化温度等因素的合理调控。

医学知识之脂肪乳

脂肪乳1概述脂肪乳（Fat emulsion）由大豆油加入一定量的卵磷脂乳化而成的无菌、无热源的脂肪乳剂，并含有一定量的甘油。

为高能量静脉营养补液，能提供机体营养所需的热量和必需的脂肪酸。

含热量高，每500ml 中含热量500kcal（10％）、950kcal（20％）。

本制剂为等渗液，故可经浅表的小血管做长时间的完全静脉滴注营养。

2适应证用于必需脂肪酸缺乏及需补充能量的患者，如胃肠外营养、肾功能损害、限制蛋白质摄入但又需要大量热量、肿瘤患者等。

3临床应用成人1～2g/(kg•d)，可提供60％以上的非蛋白热卡。

4不良反应1.用药初期可见超敏反应（如皮疹、荨麻疹）、呼吸急促、高血压、低血压、阴茎异常勃起、头痛、疲倦、腹痛、溶血、网状红细胞增多等。

还可见恶心、呕吐、畏寒、出血倾向、贫血、抑制淋巴细胞的活性。

2.长期（超过4周）或大剂量使用时，可发生脂肪负荷过重综合征（Fa t overload syndrome），表现为血脂升高（严重可致高脂血症）、脂肪浸润、发热、血小板减少、白细胞减少、肝脏单核-吞噬组织出现棕色沉淀（脂肪色素）以及肝肿大、脾肿大，出现可逆性氨基转移酶、碱性磷酸酶及胆红素升高等。

停药后可自行恢复。

有个案报道，脂肪负荷过重综合征最初表现为神经系统并发症（即局部和全身性的癫痫发作），随后再出现全身性并发症。

3.静脉给药时局部可出现静脉炎、血管疼痛、静脉血栓形成。

4.输注速度过快，超过脂肪吸收的最大速度（成人为每小时2～3g/kg）时可产生急性症状，表现为：恶心、呕吐、胸痛、呼吸困难、发绀、心动过速、低血压（偶尔血压升高）、畏寒、发热、腹泻、水肿、荨麻疹、嗅觉异常、口腔油腻感。

减慢滴注速度，反应可消失。

5注意事项1.代谢性酸中毒、严重肝损害、肺部疾病、脓毒血症、网状内皮系统疾病、贫血或凝血功能障碍、或有脂肪栓塞倾向的病人慎用。

2.用药期间应定期检查血清甘油三酯浓度。

3.对大豆过敏者，用药前需做过敏试验。

肠外营养之脂肪乳篇

肠外营养之脂肪乳篇营养支持已成为临床治疗中一项重要的辅助措施，但目前临床应用肠外营养剂随意性较大，因为很多医生没有认识到不同类别氨基酸、不同类别脂肪乳之间的巨大差别。

之前通过「肠外营养之氨基酸篇」介绍了氨基酸临床应用中的注意点，反响较大，故而又整理和总结了脂肪乳注射液的相关知识，供大家参阅。

什么是脂肪乳？脂肪乳：主要物质是脂肪酸，以各种碳链长度的甘油三脂的形式存在，为机体提供非蛋白质能量。

按碳链长度分类：长链脂肪乳C14～24，中/长链和结构脂肪乳C6～24，短链的 C2～4 静脉使用有一定毒性而不用于肠外营养。

脂肪乳微粒直径0.2～0.5μm，不能使用孔径为0.2μm 的滤过器，因为脂肪乳乳粒不能通过这些滤过器。

通常脂肪乳使用的最大量不应超过成人 2.5 g/kg/d 或者儿童 3 g/kg/d。

脂肪乳有哪些分类？先来看张表：表 1. 脂肪乳的分类友情提醒：点击可以查看大图哦。

1. 第一代长链脂肪乳注射液: 输液耐受性较好，供给人体必需脂肪酸。

本品临床应用最广泛、历史最长，也成为儿科和因妊娠反应而无法经口进食的妇女，给予肠外营养支持的最安全选择。

但大量或长期应用可积蓄在机体网状内皮细胞，肝、脾内可有脂肪色素沉着。

2. 第二代相比长链脂肪乳水溶性更好，在血循环中的清除速度更快，不易在肝脏中蓄积，供能速度快。

中/长链脂肪乳注射液: 等摩尔长链甘油三酯和中链甘油三酯物理混合（物理型）。

结构脂肪乳注射液: 等摩尔长链甘油三酯和中链甘油三酯进行水解和酯化反应后形成的混合物（化学型），均一性更好，水解更快而完全，且不易发生酮症或高脂血症。

结构脂肪乳的清除速率一般快于长链及物理混合的脂肪乳剂。

3. 第三代ω-3 鱼油脂肪乳注射液: 应与其它脂肪乳同时使用，用以补充长链ω-3 脂肪酸（尤其是 EPA 与 DHA）。

ω-3 脂肪酸可作为血浆与组织脂质的组成部分，DHA 为膜磷脂结构的重要组成成分；EPA 是二十烷类（如前列腺素、血栓烷、白细胞介素及其他脂类介质）合成的前体物质，其介质类衍生物合成的增加，能促进抗凝和抗炎，减轻氧化应激反应。

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第2章脂肪乳制备技术一、教学要求1．掌握生物分离科学的进展、相关项单元操作技术的基本原理。

2.掌握实验方案设计的基本原则，学会实验方案设计的基本方法。

3．熟练地实施设计方案，优化实验条件。

4．掌握所学技术、方法在药学研究中的应用。

5. 掌握实验数据的统计与处理，学会实验图表的制作方法以及实验结果分析讨论二、教学学时计划课内64学时，其中讲授8学时、实验研究56学时。

计划课外16学时，其中文献综述10学时、以小组为单位答疑2学时，集中论文交流4学时）三、讲授的内容1．载药脂肪乳的组成以及在药物制剂中的研究进展。

2．脂肪乳制备的基本流程和原则。

3．各实验的基本原理，操作步骤和注意事项。

4. 标准曲线的制作方法和要求，5．在本模块基础上开展蛋白质研究的思路和常用技术、方法。

6. 实验设计和实施的基本的基本要求、注意事项。

四、研究课题1．氯维地平脂肪乳制剂的处方研究2．氯维地平脂肪乳制剂的工艺优化3. 氯维地平脂肪乳制剂的表征及质量评价4. 氯维地平脂肪乳制剂的稳定性研究五、主要单元操作技术与设备1、单元操作技术：剪切乳化、高压均质、微射流2、主要设备：高剪切分散乳化机、高压微射流纳米分散仪、高压纳米均质机、Zetasizer/Nano-ZS90激光粒度仪、全自动不锈钢立式电热蒸汽消毒器、磁力搅拌器、烘箱、真空干燥箱、分析天平、电子台秤、制冰机、、紫外-可见光分光光度计、荧光分光光度计、高效液相色谱等。

六、教学组织方式两人一组，所有实验由学生设计方案，独立完成。

七、教学的重点和难点1、学习的自主性加大，审核学生的实验方案、提供必要的条件。

2、讲授部分的难点是进展、制备思路、原则和常用技术、方法的学习。

3、本模块涉及的仪器特别多，技术方法多，学习难度较大，力求与理论课的对接、举一反三。

八、难点的解决办法：1、认真备课，该讲的讲深、讲透，重点一对一答疑。

2、做好设计报告的审核，提前一个月做好仪器检修和药品的准备。

3、做好必要的单元操作示教和研究过程的现场指导。

九、相关参考书1、孙彦，生物分离工程；2、严希康，生化分离技术；3、谭天伟，生物分离技术4、李建武，生物化学原理和方法；5、生物分离工程实验指导2—1氯维地平脂肪乳的处方研究材料与方法1 实验材料T-18basic高剪切分散乳化机（IKA）；M100 PCE高压微射流纳米分散仪（Microfluidics，USA）；高压纳米均质机（广州聚能生物科技有限公司）YM50全自动不锈钢立式电热蒸汽消毒器（上海三申）；DF-101S磁力搅拌器（郑州长城科工贸有限公司）；Zetasizer/Nano-ZS90激光粒度仪（Malvern，英国）；蛋黄卵磷脂（Lipoid E80，供注射用）甘油（江西益普生药业有限公司，供注射用）EDTA-2Na（阿拉丁）油酸（Lipoid，供注射用）油酸钠（Lipoid，供注射用）；2 实验方法通过单因素实验，以外观、粒径、粒径分布、zeta电位、游离脂肪酸等指标来评价，研究并探讨了油相、稳定剂以及抗氧剂对氯维地平脂肪乳的影响。

2.1处方组分的选择以美国FDA批准上市的氯维地平静脉注射用脂肪乳处方为参考（见下表），在此基础上，选择对制剂影响较大的关键组分进行优化。

美国 FDA 批准上市的氯维地平静脉注射用脂肪乳处方2.1．1油的种类和用量考察大豆油和 MCT 是脂肪乳常用的油相，以基础处方作为基本处方，改变油相，制备氯维地平脂肪乳，考察不同油相比例对乳剂的粒径等稳定性指标的影响。

2.1.2稳定剂的种类和用量考察油酸、油酸钠是乳剂中常用的的稳定剂，以基础处方作为基本处方，改变稳定剂的种类和用量，制备氯维地平脂肪乳，分别考察不同稳定剂及其用量对乳剂的粒径等稳定性指标的影响。

2.1.3抗氧剂的种类和用量考察由于脂肪乳中油和磷脂均易于空气中氧气反应，所以加入抗氧剂保护。

选用注射液中常用的水溶性抗氧剂硫代硫酸钠、脂溶性抗氧剂VE 以及两亲性抗氧剂硫辛酸进行对比，以基础处方作为基本处方，改变抗氧剂的种类和用量，制备氯维地平脂肪乳，然后在 60℃条件下放置 10 天，取样测定粒径、PDI、zeta 电位等各项指标，考察抗氧剂种类对氯维地平脂肪乳稳定性的影响，并进一步研究其最适合的用量。

2.1.4 EDTA-2Na 的用量在脂肪乳的制备过程中，尤其是剪切、匀质等过程，容易引入微量金属离子，金属离子会促进油脂氧化。

金属离子螯合剂 EDTA-2Na 能与微量金属离子络合，具有提高油脂抗氧化及防止变色的作用。

参考相关文献以及美国 FDA 批准上市的处方选择用量 0.005%2.2质量的评价指标及方法2.2.1外观氯维地平脂肪乳制剂的外观应为乳白色，均匀，流动性良好。

2.2.2粒径静脉注射用乳剂属于热力学不稳定体系，根据粒径可以判断是否符合静脉注射的要求，据粒度分布可以对制剂的均一稳定性进行预测。

不同用途的乳剂对粒径大小要求不同。

综合分析多种上市静脉注射用乳剂的质量标准，对于粒径和粒度分布的要求多为用库尔特计数器或激光粒度仪测定，大多数乳粒应在 0.5 μm 以下，在大于 0.5 μm 的乳粒总数中，大于 1 μm 的乳粒数不得超过 3％，并不得检出大于 5 μm 的乳粒。

本实验过程将氯维地平脂肪乳用超纯水稀释一定的倍数，通过激光粒度仪进行粒径的测定。

2.2.3 zeta 电位zeta 电位是连续相与附着在分散粒子上的流体稳定层之间的电势差，它是对颗粒之间排斥力强度的度量，因此 zeta 电位是衡量体系稳定性的一个重要指标。

目前测量zeta 电位的方法主要有电泳法、电渗法、流动电位法以及超声波法，其中以电泳法应用最广。

正负电荷符号都可以形成高 zeta 电位，即＜-30 mV 和＞+30 mV 都将视为高 zeta 电位。

高 zeta 电位意味着较高的稳定性，稳定性较好的分散液具有抗凝聚性。

2.2.4游离脂肪酸磷脂和植物油在制备、灭菌以及贮藏过程中均会水解，产生游离脂肪酸，导致脂肪乳 pH 值降低，pH 的降低显著降低磷脂的离子化程度，引起 zeta 电位的降低，从而导致脂肪乳不稳定，因此其含量反映了乳剂的稳定性。

常用尼罗蓝法来测定游离脂肪酸含量，其浓度不得超过 5 mmol/L。

具体方法：（1）尼罗蓝显色剂的配制：称取尼罗蓝 0.01 g 溶解于 50 ml 水中，加正庚烷 25 ml 振摇，弃去上层正庚烷，反复操作约 4 次，直到正庚烷层无色。

取下层水溶液 10 ml，加无水甲醇 90 ml，混匀。

本液置棕色瓶中，室温下可存放一个月。

（2）对照品溶液配制：取 0.12821 g 棕榈酸置于 25 ml 容量瓶中，加正庚烷溶解，并稀释至刻度线，即得 20 mmol/L 的溶液，再将该溶液稀释至不用的浓度。

分别取 20mmol/L 溶液 5、2.5、1.25 ml 和 2.5 mmol/L 溶液 5、2.5、1.25 ml 至 10 ml 容量瓶中得到10、5、2.5、1.25、0.625、0.3175 mmol/L 的一系列标准溶液。

（3）精密量取不同浓度（x）的对照品溶液各 1 ml，分别置 20 ml 具塞试管中，加异丙醇-正庚烷-0.5mol/L 硫酸溶液(40:10:1)的混合溶液 5.0 ml 振摇 1 分钟，放置 10 分钟（硫酸作用：将乳剂中的脂肪酸钠水解为脂肪酸，以测定全部的游离脂肪酸含量）。

加正庚烷 2 ml和水 4 ml，密塞，上下翻转 10 次，静置 15 分钟，使分层，分别精密量取上层液 3ml，加入 1 ml 尼罗蓝指示剂，用 0.01 mol/LNaOH 滴定液滴定，至溶液低端由蓝色变为淡紫色，读出所用氢氧化钠的体积（y），以 xy 作图，得游离脂肪酸的标准曲线。

（4）量取样品 1 ml（平行共 2 份），置 20 ml 具塞试管中，加异丙醇-正庚烷-0.5mol/L 硫酸溶液(40:10:1)的混合溶液 5.0ml 振摇1分钟，放置10分钟。

加正庚烷3 ml和水3 ml，密塞，上下翻转 10 次，静置 15 分钟，使分层，精密量取上层液 3 ml，加入1 ml 尼罗蓝指示剂，用 0.01 mol/LNaOH 滴定液滴定，至溶液低端由蓝色变为淡紫色，读出所用氢氧化钠的体积，代入标准曲线，计算得游离脂肪酸浓度。

注意：样品溶液若按照步骤 4 操作，上层液 3 ml 浑浊，可能会影响滴定时颜色的判断，这是由于样品杂质过多，这时可采取两步萃取，即量取分层后的上层液 1 ml再按照步骤 3 进行操作！若实验过程中未出现浑浊，可采取一步萃取。

2.2.5过氧值脂肪乳的油和磷脂中脂肪酸不饱和程度较高，容易发生氧化。

脂质氧化后，乳化性能降低，进而影响脂肪乳的物理稳定性，且氧化后生成的过氧化物和氢过氧化物具有一定的毒性，国家标准中要求控制其量。

过氧化值多采用碘量法进行滴定测量，过氧化值一般不超过2.5 mmol/L。

具体方法：（1）碘化钾饱和溶液的配制：碘化钾在20℃的时候溶解度是 144 g，量取 10 ml 水，加入 14.4 g 碘化钾，溶解，即可配置成碘化钾的饱和溶液（保证有晶体存在）。

（2）1%淀粉指示剂的配制：称取 1.0 g 可溶性淀粉，加少量纯化水搅匀，随后一边搅拌，一边加入约 60 ml 热水，再将此溶液煮沸 2~3 min，静置冷却后，加入 NaCl 20 g，溶解后加纯化水补充至 100 ml（可冷藏备用）。

（3）参照国家药品标准，取冰醋酸-氯仿（6:4）混合液 30 ml，置250 ml 碘瓶中，密塞。

精密量取样品 5 ml，迅速加入混合液中，轻轻振摇，加碘化钾饱和溶液 0.5 ml，密塞，振摇 1 min，加新沸过的冷水 30 ml 与 1%淀粉指示剂 2 ml。

用硫代硫酸钠滴定液（0.01 mol/L）滴定至蓝紫色消失，消耗的硫代硫酸钠滴定液不得超过 1.0 ml。

注意用除去空白消耗NaOH 的干扰。

过氧化值（mmol/L）=式中： V 为样品消耗硫代硫酸钠溶液的体积（ml）；Vo 为空白消耗硫代硫酸钠溶液的体积（ml）；W 为供试品的取样量（ml）。

2.2.6甲氧基苯胺值甲氧基苯胺值是反映过氧化物分解成醛酮类物质的一项指标。

油中的不饱和脂肪酸被氧化后会形成过氧化物，进一步分解生成醛类或酮类物质，对人体肝功能有损害。

基于甲氧基苯胺与脂肪酸的氧化产物脂肪醛反应生成醇胺，醇胺脱水生成的醛亚胺可在 350 nm 处用分光光度计测定这一原理，可间接计算出脂肪酸氧化产物醛类或酮类物质的量。

已有厂家标准控制甲氧基苯胺值不超过 2.2。

具体方法：（1）甲氧基苯胺醋酸溶液的配制：称取适量对氨基苯甲醚（0.25 g）置 100 ml 量瓶中，加冰醋酸溶解并稀释至刻度，得0.25%甲氧基苯胺醋酸溶液。