下载文档原格式
2020我国药典1101无菌检查法1.引言2020年版的我国药典1101中的无菌检查法作为药品质量管理中的重要内容，对药品的无菌状态进行了详细规定，是保障药品质量和安全的重要手段。
在本文中，我们将深入探讨2020我国药典1101中的无菌检查法，从简单到复杂，由浅入深地介绍这一内容，帮助读者更深入地理解和应用这一法规。
2.基本概念在开始深入探讨2020我国药典1101中的无菌检查法之前，我们需要了解一些基本概念。
无菌状态指的是物品不含有任何微生物，无菌检查法则是用来确定药品无菌状态的方法和程序。
在我国药典1101中，对无菌检查法进行了全面的规定，包括检查方法、检查设备等内容。
3.无菌检查法的基本原理无菌检查法的基本原理是通过器械和培养基的接触，判断药品是否含有微生物。
这一原理在药典中得到了详细的阐述，包括了各种不同的检查方法，如滤膜法、均板法等。
针对不同的药品和环境条件，药典中也做出了相应的规定，以确保检查结果的准确性和可靠性。
4.2020我国药典1101对无菌检查法的规定在2020年版的我国药典1101中，对无菌检查法进行了全面的规定，包括了检查方法的选择、操作程序的要求、结果的判定等方面。
药典中还对各种检查方法的具体操作步骤和注意事项进行了详细的规定，帮助人们在实际操作中能够准确地进行无菌检查，确保检查结果的准确性和可靠性。
5.个人观点和理解作为文章的作者，对于2020我国药典1101中的无菌检查法，我认为这一法规的出台对于药品质量的保障具有非常重要的意义。
无菌状态是药品质量的基本要求之一，而无菌检查法则是确保药品无菌状态的重要手段。
通过学习和理解药典中对无菌检查法的规定，我们能够更好地保障药品质量和安全，为人们的健康保驾护航。
6.总结通过本文的介绍，我们对2020我国药典1101中的无菌检查法有了更深入的了解。
药典中对无菌检查法进行了全面的规定，包括了基本原理、操作程序、结果判定等各个方面。
中国药典2020无菌检查法
中国药典2020年版中关于无菌药品的检查方法包括以下几个
方面：
1. 外观检查：检查药品外包装是否完整，标签和印刷是否清晰，无异常颜色或异物等。
2. pH值测试：通过使用pH计来测定药品溶液的酸碱度，以
确认药品的稳定性和适用性。
3. 细菌限度检查：采用适当的培养基，通过培养和计数细菌来检测药品中的细菌污染情况。
4. 眼用制剂颗粒度检查：使用粒度分析仪来测定眼用制剂中颗粒的大小分布情况，以确保药品的质量和安全性。
5. 质量控制检测：包括含量测定、稳定性检测、微生物检测等，以确保药品的质量符合规定的标准。
这些检查方法是为了确保无菌药品的质量和安全性，以保护患者的用药安全。
需要根据具体药品的特点和使用要求进行不同的检验分析。
无菌检查法-2021版中国药典无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。
假设供试品符合无菌检查法的规定,仅说明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按?医药工业洁净室〔区〕悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法?的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，假设保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；假设保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
1. 硫乙醇酸盐流体培养基酪胨 (胰酶水解) 15.0g 酵母浸出粉 5.0g葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5gL-胱氨酸 0.5g 新配制的 0.1% 刃天青溶液 1.0ml硫乙醇酸钠 0.5g 琼脂 0.75g(或硫乙醇酸) 〔 0.3 ml) 纯化水 1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH 为弱碱性，煮沸，滤清，参加葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH 值使灭菌后为7.1±0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培2养基氧化层〔粉红色〕不超过培养基深度的1/2。
灭菌。
在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否那么，须经100℃水浴加热至粉红色消失〔不超过20 分钟〕，迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
无菌检查法-2015版中国药典无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
1. 硫乙醇酸盐流体培养基酪胨 (胰酶水解) 15.0g 酵母浸出粉 5.0g葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5gL-胱氨酸 0.5g 新配制的 0.1% 刃天青溶液 1.0ml硫乙醇酸钠 0.5g 琼脂 0.75g(或硫乙醇酸) （ 0.3 ml) 纯化水 1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH 值使灭菌后为7.1±0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培2养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。
灭菌。
在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20 分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
无菌检查法Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】无菌检查法：系指检查药品、无菌器具及适用于药典要求无菌检查的其它品种是否无菌的一种方法。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室温控18℃~26℃，相对湿度45%～65%，操作室或工作台应保持空气正压。
无菌室的清洁与消毒应符合《质保部洁净室清洁消毒规程》（10-G-07404）的规定。
无菌室无菌程度的检查应符合规定：见《洁净区沉降菌监测规程》（10-G-09113）、《洁净区尘埃粒子监测规程》（10-G-09114）。
实验设备及用具：电热干燥箱、电热手提式压力蒸汽灭菌器、电热恒温培养箱、试管、注射器、针头、试管架、刻度吸管、手术剪、手术镊、砂轮、注射器盒、搪瓷托盘、双碟、75%酒精棉球、碘酒棉、无菌工作服（衣、裤、帽、口罩等）。
微孔滤膜：直径50mm、孔径μm～μm，应符合规定。
除菌滤器所有进入无菌室的物品必须经过消毒或灭菌，应严格按照《物品进入质保部洁净室清洁消毒规程》（10-G-07403）进行操作。
稀释剂：灭菌注射用水。
培养基：需气菌、厌气菌培养基（流体硫乙醇酸盐培养基）；真菌培养基。
培养基的使用，配制、管理及灵敏度检查应按照《培养基管理规程》（10-G-07406）、《培养基灵敏度检查规程》（10-G-07408）、《培养基配制规程》（10-G-07407）进行操作。
在使用前，细菌培养基须经30~35℃培养不少于14天，真菌培养基经20~25℃培养不少于14天，证明无菌后方可使用。
本检查可与供试品的无菌检查同时进行。
对照用菌液：金黄色葡萄球菌（Staphyoccus sureus）菌液：取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]的营养琼脂斜面新鲜培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内，在30~35℃培养16~18小时后，用%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10~100个菌。
无菌检查法-2022版中国药典-电子版无菌检查应在环境洁净度B级背景下的局部A级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
1.硫乙醇酸盐流体培养基酪胨(胰酶水解)15.0g酵母浸出粉5.0g葡萄糖5.0g氯化钠2.5gL-胱氨酸0.5g新配制的0.1%刃天青溶液1.0ml硫乙醇酸钠0.5g琼脂0.75g(或硫乙醇酸)（0.3ml)纯化水1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.1±0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培2养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。
灭菌。
在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
除另有规定外，硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃培养。
2.胰酪大豆胨液体培养基胰酪胨17.0g氯化钠5.0g大豆木瓜蛋白酶消化物3.0g磷酸氢二钾2.5g葡萄糖（一水合/无水）2.5g（2.3g）纯化水1000mL除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调节pH值使灭菌后在25℃的pH值为7.3±0.2，加入葡萄糖，分装，灭菌。
无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是 否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污 染。
无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进 行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检 出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的 测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的 洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养， 也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基 适用于真菌和需气菌的培养。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方 生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2〜25°C 、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在 3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一 年内使用。
1. 硫乙醇酸盐流体培养基葡萄糖新配制的%刃天青溶液 硫乙醇酸钠 除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡 萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节 pH 值使灭菌后为土。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比 例应符合培养结束后培2养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的 1/2。
灭菌。
在供试品接种前, 培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的 1/5,否则，须经100C 水浴加热至粉红色消失（不超过 20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
除另有规定外，硫乙醇酸盐流体培养基置30〜 35C 培养。
酪胨（胰酶水解）酵母浸出粉（或硫乙醇酸）（ml ） 纯化水1000ml 氯化钠琼脂2. 胰酪大豆胨液体培养基胰酪胨氯化钠大豆木瓜蛋白酶消化物磷酸氢二钾葡萄糖（一水合/无水）（）纯化水1000mL除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调节pH值使灭菌后在25°C的pH值为土，加入葡萄糖，分装，灭菌。
无菌检查法
1.目的：建立对成品无菌检查的标准操作规程。
2.范围：对成品的无菌检查。
3.责任：质量监督部。
4.内容：
4.1概述：无菌检查是检查药品与敷料是否染有活菌的一种
方法。
无菌检查的操作环境和全部过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，同时也应避免在有抑菌条件下操作。
4.2仪器、设备和用具：
℃及除湿装置。
缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外光灯和照明灯，操作室或工作台应保持空气正压。
℃预培养48小时，证明无菌后将3个平板以无菌方式带入无菌操作间的洁净区域左、中、右各放1个；打开碟盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将盖盖好，置35-37℃培养48小时，取出检查，3个平板上生长的菌落数相加总数不得超过10个。
无菌操作台面或超净工作台应定期请有关部门检测其洁净度，应达到100级（一般用尘埃粒子计数仪），检测尘埃粒径≤5μm的粒数不得超过3.5个／升；空气流量应控
制在0.75-1.0m3/s；细菌菌落数平均<1个，可根据无菌状况定期置换过滤器。
℃的生化培养箱。
4.2.3离心机、显微镜、高压消毒炉、标准pH比色器（0.02
酚红指示剂和溴钾酚蓝指示剂）、恒温烤箱。
℃灭菌30分钟。
4.2.4.1移管、刻度吸管在管口上端内，松松地塞入少许棉
花，然后放于吸管筒内或牛皮纸袋内，盖严，消毒备用。
±0.5）℃蒸气灭菌30分钟，物品取出时切勿立即置冷处，以免急速冷却，使灭菌物品内蒸气冷凝造成负压，易致染菌，应置恒温培养箱中烘干。
适于高温灭菌的器皿也可采用160℃干热灭菌2小时。
4.3试液：
4.3.175％乙醇溶液配制酒精棉球用。
4.3.2碘酊溶液配制碘酒棉球用。
4.3.3灭菌生理盐水0.9％氯化钠溶液，分装于试管或三角
瓶中，瓶口用棉塞或海棉胶专用塞塞紧并用牛皮纸包扎，灭菌备用。
4.3.4新洁尔尔灭（1:1000）溶液。
4.3.53-5％甲酚溶液。
4.3.60.02％酚红指示剂pH6.8-8.4系列比色液管。
4.3.7溴钾酚蓝指示剂pH6.0-7.6系列比色液管。
4.3.82mol／L盐酸溶液。
4.3.92mol／L氢氧化钠溶液。
4.4培养基：
4.4.2.1除葡萄糖和指示剂外，将处方中各成分加水后置有
石棉网的电炉或适宜的加热设备中，使微温溶解。
用2mol/L盐酸溶液或2mol／L氢氧化钠溶液调节pH值，使其比规定的pH值略高0.4-0.6，煮沸，用棉（纸）浆减压抽滤或以脱脂棉、滤纸等滤材过滤，使培养基澄清。
4.4.2.2加入葡萄糖和指示剂溶液，摇匀，补足水量，调节
pH值（比规定的pH值略高0.2-0.4），使灭菌后为7.1±0.2，分装，装量不宜超过容器的2／3，以免灭菌时溢出。
4.4.3培养基灵敏度检查：新购的干燥培养基或采用不同牌
号原材料的新鲜培养基，其质量均应符合灵敏度检查要求。
A需气菌、厌气菌培养基，用藤黄微球菌和生孢梭菌两种菌检查。
取藤黄微球菌[MicrococcuIuteaCMCC（B）28001］的新鲜斜面培养物，加灭菌生理盐水约3ml，制成均匀的菌悬
液，然后以10倍系列稀释后并计数，将该菌稀释成
1:105-1:108的系列浓度管。
取生孢梭菌[ClostridiumsporogonesCMCC（B）64941]的需气、厌气培养基的新鲜培养物，用灭菌毛细管将其吸
至灭菌离心管内，离心，弃去上清液，沉淀菌体用灭
菌生理盐水制成均匀菌悬液，照上述方法进行稀释并
计数，将该菌稀释成1:106一1:109系列浓度管。
B霉菌培养基用白色念珠菌检查
取白色念珠菌[CandidaalbicansCMCC（F）98001］霉菌琼脂培养基斜面的新鲜培养物，接种至霉菌培养基内，
20-25℃培养24小时。
照藤黄微球菌项下方法稀释及
计数。
将该菌稀释成1:105-1:108系列浓度管。
C将上述制备的各菌的系列浓度管各1ml，分别接种于9ml 试验培养基中，每个稀释浓度至少接种3管，以未接
种的培养基管对照，细菌试验管置30-35℃培养3天，
白色念珠菌试验管置20-25℃培养5天，逐日记录结
果。
D结果判断以接种后培养基管数的2／3以上呈现生长的最高稀释度为该培养基的灵敏度（且接种量均应小于10个
菌落），3次试验中，以两次达到的最高灵敏度为判断
标准。
需气菌、厌气菌培养基灵敏度藤黄微球菌1:106,生孢梭菌
1:107，霉菌培养基灵敏度为白色念珠菌1:106。
4.4.4配制的培养基应在凉暗处保存，一般不得超过2周，
临用前细菌和霉菌培养基分别经30-35℃和20-25℃培养不少于48小时和72小时，证明无菌生长后方可使用。
4.5对照用菌液的制备：
“抗生素微生物检定法”标准操作规程项下操作。
aureusCMCC（B）26003]的营养琼脂斜面新鲜培养物少许，接种至相同培养基内，在30-35℃培养16-18小时，用灭菌生理盐水稀释成1:106
sporogonesCMCC（B）64941]的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物少许，接种至相同培养基内，在30-35℃培养18-24小时，用灭菌生理盐水稀释成1:106。
CMCC（F）98001]的霉菌琼脂培养基斜面培养物少许，接种至霉菌培养基内，在20-25℃培养24小时，用灭菌生理盐水稀释成1:105。
4.6检查法的操作：
4.6.1供试品、培养基在移入缓冲间之前应先编号，并用
0.1％新洁尔灭或酒精棉擦拭瓶（管）外壁，然后连同其
它用具（包括无菌衣、帽、口罩等）移入缓冲间，打开无菌间紫外光灯和空气过滤装置开关并使其工作在1小时以上。
粉针剂、油剂等橡皮塞铝盖压封小瓶先用75％酒精棉球擦拭外壁及瓶塞，待干，用消毒镊子剔去铝盖上的铝质小圆片。
用碘酒棉球拭抹瓶盖及橡皮塞，再用75％酒精棉球擦去碘酒，并将酒精棉球盖于橡皮塞上待取样。
供试品溶液的每管接种量与培养基分装量
供试品装量（ml）每管接种量（ml）培养基分装
量（ml）
2ml或2ml以下0.510
接种后轻轻摇动，使匀，需气菌、厌氧菌培养基在30-35℃培养5日，霉菌培养基在20-25℃培养7日，培养期间应逐日检查是否有菌生长（阳性对照在24小时内应有细菌生长），并填写无菌检查记录表。
如在加入供试品溶液后培养基出现浑浊或沉淀，经培养后不能从外观上判断时，可取该培养液种入另1支相同的培养基中或斜面培养基上，培养48-72小时后，观察是否再现浑浊或在斜面上有无菌落生长，并在接种的同时，取培养液少量，涂片制成染色标本，用显微镜观察是否有菌生长。
4.7结果判断：当阳性对照管显浑浊并确有细菌生长时，可
根据观察所得的结果判定，如需气菌、厌气菌及霉菌培养管均为澄清或虽显浑浊但经证明并非有菌生长，均应判为供试品合格；如需气菌、厌气菌及霉菌培养管中任
何管显混浊并确证为有菌生长，应重新取样，分别依法复试2次，除阳性对照管外，其他各管均不得有菌生长，否则应判为供试品不合格。
