IL-18抗体对小鼠微小病变型阿霉素肾病的治疗作用

补中益气汤对阿霉素诱导的大鼠肾病的作用郭继光;张海燕;李朝鹏;高飒;李芸【摘要】以阿霉素肾病大鼠模型为研究对象,采用了血液生化学和组织病理学方法,分析了补中益气汤对阿霉素肾病的作用和可能的机制.Wistar雄性大鼠60只,随机分为对照组(n=10)、模型组(n=10)、激素组(n=10)和补中益气汤低剂量组(n=10)、中剂量组(n=10)和高剂量组(n=10).采用阿霉素二次尾静脉注射法(首次6 mg/kg,二次3 mg/kg)制作阿霉素肾病的大鼠模型.在阿霉素注射后7,21,42 d将大鼠置于代谢笼中分别收集24 h尿液,测定24 h尿蛋白.末次给药后,眼眶取血检测肾功能指标,包括肌肝SCR (se-rum creatine)和尿素氮BUN (blood urea nitrogen);处死大鼠并观察肾组织病理改变.结果表明:补中益气汤可以显著减少尿蛋白的排泄并缓解肾皮质上皮细胞的病理学改变.这提示补中益气汤对阿霉素大鼠能够通过改善尿蛋白的排泄,缓解肾脏病理改变,从而起到对肾脏的保护作用.【期刊名称】《河北大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(035)003【总页数】7页(P298-304)【关键词】阿霉素肾病;补中益气汤;24 h尿蛋白;肌酐;尿素氮【作者】郭继光;张海燕;李朝鹏;高飒;李芸【作者单位】河北大学基础医学院,河北保定071000;保定市安新县医院神经内科,河北保定071600;华北制药金坦生物技术股份有限公司质量保证部,河北石家庄050035;高碑店市医院儿科,河北高碑店074000;保定市第三医院护理部,河北保定071000【正文语种】中文【中图分类】Q491;R285.5第一作者:郭继光(1978-)，男，回族，山东曹县人，河北大学讲师，主要从事衰老相关疾病和神经退行性疾病的分子机制的研究.E-mail:****************Key words: Adriamycin nephopathy;Buzhong Yiqi decoction;24-hour urine protein(24 HUP);serum creatine;blood urea nitrogen补中益气汤出自金元四大家的李杲所著的《脾胃论》，具有调补脾胃、升阳益气的作用.药物组成为黄芪、党参、白术、陈皮、升麻、炙甘草、当归、柴胡.方中的黄芪作为君药健脾补气，而它与党参和白术联合使用则在补气之余兼具养阴之功效，也就是说具有补气固精的效果，实际上按照现代中医理论，这种效果的实际作用就包含对尿蛋白的排泄的抑制作用.已经有许多现代药理研究表明黄芪能够改善肾小球疾病患者的蛋白质、脂质代谢，改善肾功能[1].当归是一味常用的补血和血药，能够改善血液循环[2-3]；陈皮能够理气健脾，加强消化和吸收；炙甘草具有气血双补的功效，能够提高机体的免疫功能，抗炎止痛；升麻具有清热解毒和升阳举陷的功效，其作用和柴胡类似.目前，已经有数个临床实验表明补中益气汤可能对肾病起到一定的治疗作用[4-6],但是之前的工作中，都存在样本数量低、缺乏严格的定量测定的问题.本研究根据Deschenes等[7]尾静脉注射阿霉素的方法建立肾病大鼠模型，并使用此模型检测补中益气汤对阿霉素肾病的作用，从而进一步揭示其作用机理.Sprague Dawley大鼠60 只，雄性，体质量约200 g，购自河北医科大学实验动物中心.给药前，先进行适应性饲养约7 d，使用普通饲料喂养，并保证充足的饮水.盐酸阿霉素(Adriamycin，ADR)，Sigma公司，使用时新鲜配置成5 mg/mL.代谢笼，Tecniplast，意大利；考马斯亮蓝G-250，Sigma公司；Albumin Bovine V，Sigma公司.补中益气汤组方：黄芪15 g，党参10 g，白术9 g，陈皮6 g，升麻6 g，当归10 g，柴胡6 g，炙甘草9 g.水提取液制法：按处方比例加10倍量水浸泡30 min，加热煎煮1 h，滤过，滤液备用.药渣再加8倍量水，煎煮30 min，滤过，滤液合并，浓缩至生药质量浓度1 g /mL，静置沉降24 h，滤取上清夜，加热浓缩至生药质量浓度2 g /mL，即得. 按6 mg/ kg的剂量，初次大鼠尾静脉注射阿霉素溶液，1周后，进行第2次尾静脉阿霉素的注射，剂量为3 mg/kg.如果在30 d左右大鼠尚未死亡，则可认为已经成功建立了阿霉素肾病大鼠模型.将60只大鼠分为6 组，即对照组、模型组、激素组和补中益气汤低剂量、中剂量及高剂量治疗组，每组各10只.补中益气汤治疗组大鼠，在首次尾静脉注射阿霉素溶液后，立即进行补中益气汤灌胃，每日1次，持续6周.对照组和模型组使用同补中益气汤等量的生理盐水进行灌胃，同样每日1次，持续6周.补中益气汤成人1日剂量(生药)约为1 g/kg(以人的体质量为70 kg计算).依据Meeh-Rubner公式，换算200 g大鼠1日的等效剂量(生药)大约是人的6倍，即6 g/kg.为了涵盖汤剂的有效给药剂量范围，本实验以此估算剂量为基础，进行了梯度给药.详细的分组给药方式见表1.以首次尾静脉注射阿霉素溶液后第7 ，21，42 d，按照分组给药方式给药结束后，将大鼠转移至代谢笼内，收集24 h的大鼠尿液.用Bradford法测定尿蛋白浓度，并依此计算24 h 尿蛋白(24-hour urine protein, 24 HUP).在首次尾静脉注射阿霉素后第42 天，大鼠眼眶静脉丛取血.通过自动生化分析仪检测血液生化指标，包括SCR和BUN.给药第42 天末，取出肾脏组织，在体积分数10%的福尔马林溶液中固定，之后进行石蜡包埋和切片，切片的染色采用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining， HE staining)，最后将染好的切片置于光镜下观察并拍摄肾脏组织的病理形态改变.数据按照均数和标准差的方式进行表示，即Mea n±SD.由于实验分组较多(6组)，因此采用了单因数方差分析(One-Way ANOVA)，分析软件使用的是SPSS，P<0.05认为有统计学意义.造模1周后，注射阿霉素的大鼠开始显得精神委靡、食欲减退、体毛凌乱无光，且出现脱毛现象，并随着时间延长而加剧，尾部出现红肿；在3周后个别大鼠尾部甚至产生了糜烂，且身体开始出现水肿，随着时间的延长水肿也逐渐加剧.相对而言，补中益气汤组虽然较对照组的大鼠在体质量、精神和毛发上都出现了不良反应，但是较模型组则显得更为活跃，食量更多，体质量也要偏高，脱毛和水肿也较为轻微；激素组体质量、精神、食量、水肿和毛发状况则与补中益气汤的中剂量组十分接近.在对大鼠状态进行定性观察和记录的基础上，对大鼠的体质量变化进行定量地跟踪测定.结果表明，在各个时间点注射过阿霉素的大鼠，包括了给药组、激素组和模型组，体质量都明显小于对照组(P<0.01)；从造模后第2周开始相对模型组，给药组和激素组大鼠体质量均有显著增加(P<0.01)，见表2和图1.由图1可知，从第2周开始相对模型组，低中高剂量组和激素组均有显著增加( P<0.01)，其中低剂量组的体质量增加最多.在初始随机分组后，各组大鼠的24 HUP并无统计学差异.在给药后1周、3周和6周末，模型组大鼠24 HUP与对照组相比，出现显著增加(P<0.01)，而补中益气汤治疗组与模型组大鼠24 HUP相比，出现显著减少(P<0.05)，见表3和图2.给药6周后，各组大鼠血清SCR和BUN水平较正常对照组无显著性差异，见表4.光镜下模型组大鼠肾小球系膜硬化及玻璃样变、细胞外基质增生、肾小球细胞空泡样变性、毛细血管丛萎陷及闭塞、肾小球纤维化等，均较正常对照组明显.补中益气汤治疗组大鼠肾小球形态结构较完整，细胞空泡样变性及纤维化程度较模型组轻，见图3.本课题组采用了大鼠二次尾静脉注射阿霉素方式，成功制作出了阿霉素肾病的大鼠模型.阿霉素肾病大鼠模型是一种经过深入研究的啮齿动物慢性肾炎模型，并且已经为揭示深藏其中的病理机制提供了诸多便利[8].阿霉素肾病有多种造模方式，而本课题组选择的方法是二次尾静脉注射阿霉素法.与单次给药造模方式相比此法有不少优点.首先，二次给药法造成的肾脏病理改变复合人的微小病变肾病(minimal change nephropathy, MCN)，在第5周肾脏上皮细胞会出现空泡样变性，采用电镜观察还可以进一步看到足细胞的融合和裂隙的消失.其次，与单次给药类似，此方法在用药很短的时间内就可以造成肾脏损伤，并产生持续的尿蛋白分泌，这种损伤十分稳定，在实验中，所有注射阿霉素的大鼠都出现了尿蛋白分泌的增多.此外，二次给药法造模对大鼠的损伤相对和缓，在实验中除了个别大鼠在后期萎靡不振以外并无一例死亡，这一点给实验带来很好的保障.对大鼠在造模过程中的体质量变化进行了跟踪记录(表2和图1)，结果表明：模型组和给药组大鼠体质量的增加速度始终明显低于对照组(P<0.01)，而且模型组大鼠的健康活跃度降低最为显著，并且出现明显的脱毛和食欲不振的现象.这说明阿霉素对大鼠机体的损伤是十分显著的.而给药组和模型组相比，给药组的大鼠体质量在整个6周内都明显高于模型组，这表明补中益气汤的灌胃对大鼠有一定的保护作用，在一定程度上减轻了阿霉素造成的损伤.蛋白尿是肾脏疾病最常见的临床症状之一，也是阿霉素肾病的典型症状，肾小球滤过屏障破坏是临床上最为常见的引发蛋白尿的因素，其发生与肾小球滤过屏障的结构功能异常有关.近年来的研究揭示出，这层滤过屏障，实际上是由肾小球足细胞(podocyte)形成的足突间的裂隙隔膜(slit diaphragm, SD)来控制滤过功能的.肾小球滤过膜能够根据分子的大小进行选择性地过滤的主要根源就是这层裂隙隔膜.换句话说，SD是肾小球滤过功能的主要结构基础，它的结构的任何程度的损伤和破坏都会严重影响肾小球的滤过功能，从而产生蛋白尿[9].有研究通过电镜观察阿霉素肾病模型中病理改变发现，肾脏毛细血管内皮细胞和足细胞出现肿胀和融合，粗面内质网增大，系膜区有轻微的扩张，并且随着时间的延长，肾小球上皮细胞足突部分融合增多，致使隔膜裂隙的消失[10].蛋白尿不仅是肾脏疾病的病理产物，对肾脏也能造成进一步的损害，可引起系膜细胞损伤、增生，甚至肾小球的硬化，并且它对近曲小管细胞也有毒性作用，可导致小管基底侧释放PDGF，FN和MCP-1，诱导纤维化过程[11].目前，已经有多篇文章在临床上初步验证了补中益气汤加味或者结合其他药物对于肾病具有一定的治疗作用，并能够降低蛋白尿，改善临床症状[12-13]，但是这些工作都没有对使用的补中益气汤进行严格的质量控制；此外在这些工作中引入其他的中西药辅助治疗虽然在临床上有不错的疗效，但也模糊了补中益气汤在治疗过程中起到的作用.在本课题组的工作中，首先在药材上使用的都是同一批次大批量制作出来的生药，保证了重复性，而且并未使用补中益气汤以外的任何药材，以此得出的结论能够很好地证明纯粹的补中益气汤对于肾病的疗效.为了检测补中益气汤具体对阿霉素肾病中典型的蛋白尿的症状的作用，采集并记录了造模开始后1周、3周和6周时的24 HUP.结果表明，在二次注射阿霉素后，大鼠开始表现出明显的尿蛋白分泌增多，其24 HUP在2～6周的时间内随着时间的延长而不断地增多.相对于模型组，补中益气汤治疗组的尿蛋白分泌明显低于模型组(P<0.01).这些实验结果表明，补中益气汤能够对阿霉素肾病导致的蛋白尿产生显著的抑制作用，提示此方可能通过抑制蛋白尿起到对肾脏的保护作用.在本研究中，首次观察到了补中益气汤对肾脏组织病变的改善作用.通过对6周末大鼠肾脏病理组织切片的形态学观察表明，模型组与正常组相比，肾小球系膜出现纤维化，系膜基质出现增生；可见空泡样变性的肾小球细胞；毛细血管出现毒性症状，如闭塞或呈结节状；在局部出现了肾小球硬化；在间质内有大量的炎症细胞浸润；肾小管病理改变明显，其结构出现肿胀和坏死，并在其腔内观察到凝聚的大量蛋白管型(图3).在给药后，可以看出补中益气汤，尤其在中剂量下，能够在一定程度上恢复阿霉素造成的肾脏组织病理改变，这也再次表明了补中益气汤对阿霉素肾病的缓解和治疗作用.已有的研究表明，除了补中益气汤外还有其他的药物能改善肾组织病理改变，比如：六味地黄汤合黄连解毒汤[14]和南洋参[15].综上所述，本研究首次发现并证明补中益气汤能够抑制阿霉素肾病中尿蛋白的分泌，明显减轻肾小球及肾小管间质病变，而起作用机制可能是通过减少尿蛋白分泌，从而减轻了尿蛋白对系膜细胞和肾小管上皮细胞的刺激，最终起到了对肾脏的保护作用.[1] 卢晓峰,黄海燕.黄芪治疗肾脏疾病的药理研究进展[J].现代中西医结合杂志,2008,27:4369-4370.[2] 董超,黄威,耿兆辉,等.血府逐瘀汤对动脉粥样硬化大鼠细胞间黏附分子和脂质过氧化物的影响[J]. 河北大学学报：自然科学版,2012,32(6):650-654.DONG Chao,HUANG Wei,GENG Zhaohui,et al.Effects of Xuefu Zhuyu decoc tion on intercellular adhesion molecule and lipid peroxidation of experime ntal atherosclerosis rats[J].Journal of Hebei University:Natural Science Editi on,2012,32(6):650-654.[3] 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白细胞介素18白细胞介素18（Interleukin-18）是一种细胞因子，属于白细胞介素家族的一员。

它被认为在免疫应答中起着重要角色，并且与很多疾病的发展和进展有关。

本文将详细介绍白细胞介素18的功能、调控机制以及其在某些疾病中的作用。

白细胞介素18最初是在1995年被发现的，它由肝脏和肝炎病毒感染的肝细胞产生，并被发现能够刺激白细胞产生干扰素-γ（IFN-γ）。

进一步的研究发现，白细胞介素18的产生受到多个因素的调控，包括细胞因子、信号通路和转录因子。

白细胞介素18在免疫应答中的功能是多样的。

首先，它能够刺激NK细胞的活化和增殖，进而促进它们产生INF-γ和其他促炎因子。

其次，白细胞介素18还能够激活巨噬细胞，并增强它们对细菌等外源性病原体的杀伤能力。

此外，白细胞介素18也参与了免疫细胞的极化和调控，对炎症过程的进展具有重要的影响。

白细胞介素18的调控机制非常复杂，它的产生受到多种信号通路的调控。

一些细胞因子，如肿瘤坏死因子（TNF）和白细胞介素1（IL-1）等，能够刺激白细胞介素18的产生。

另外，TLR（Toll-like receptor）信号通路和NLRP3炎症小体也参与了白细胞介素18的调控。

此外，一些转录因子，如NF-κB和AP-1，也能够直接或间接地影响白细胞介素18的产生。

白细胞介素18在多种疾病的发展和进展中发挥着重要作用。

首先，它在免疫性疾病中的作用已经得到了大量的研究。

例如，炎症性肠病（IBD）和风湿性关节炎等疾病中，白细胞介素18的高表达与炎症的严重程度和病情的进展有关。

其次，白细胞介素18还参与了一些肿瘤的发展。

研究发现，白细胞介素18能够促进肿瘤细胞的侵袭和转移，并且与肿瘤的预后密切相关。

此外，白细胞介素18还被发现参与了心血管疾病、神经退行性疾病和肾脏疾病等疾病的发展。

在药物治疗方面，研究人员已经尝试使用白细胞介素18作为治疗免疫性疾病和肿瘤的靶点。

一些抗体和小分子化合物已经被开发出来，以抑制白细胞介素18的活性。

两种造模方法致大鼠慢性肾病模型的肾功能及病理变化比较李天祎杨扬杨素萍李嘉琦马逸群王家平摘要目的探究两种造模方法对大鼠慢性肾病模型的肾功能影响及病理改变°方法采用单侧肾切除+尾静脉重复注射阿霉素(ADR)法(A组)和二次尾静脉注射ADR法(B组)测定各组大鼠肾功能(血尿素氮、血肌酐)、血清白蛋白°光镜下观察各组大鼠肾脏的病理变化，并分别与正常对照组(N组)进行比较°结果在4、8、12周末，A、B组血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)值均有显著上升(P<0.05),白蛋白降低(P<0.05)，表现为低蛋白血症，部分大鼠合并腹腔积液°光镜下，A、B两组肾小球均有不同程度萎缩、硬化，肾小管受损不均，肾间质均出现炎性改变°单侧肾切除+重复尾静脉注射ADR诱导的肾脏损伤更为严重°结论单侧肾切除+重复尾静脉注射ADR诱导的慢性肾病模型与二次尾静脉注射ADR法,均可使大鼠成模，两种方法比较，单侧肾切除+重复尾静脉注射ADR诱导的病理改变相对较为典型°关键词慢性肾病阿霉素肾功能中图分类号R3文献标识码A DOI10.11969/j.issn.1673-548X.2020.12.014Comparison of Renal Function and Pathological Changes in Rats with Chronic Nephropathy Induced by Two Methods.Li Tianyi,Yang Yang,Yang Suping,et al.The Second Affiliated Hospital of Kunming Medical University,Yunnan650101,China Abstract Objective To explore the renal function and pathological changes of chronic kidney disease model in rats by two meth­ods.Methods The methods of unilateral nephrectomy and repeated injection of adriamycin(ADR)in to caudal vein(Group A)and sec­ond injection of ADR into caudal vein(Group B)were used.Under the light microscope,the renal pathological changes of rats in each group were observed and compared with the normal control group(Group N).Results At the end of4,8,12weeks,the blood urea ni­trogen(BUN)and serum creatinine(CR)of group A and group B were significantly higher than those of group n(P<0.05),and the albumin of group A and group B was lower(P<0.05),showing hypoproteinemia.Some rats were complicated with ascites.Under the light microscope,the glomeruli of group A and group B were atrophic and sclerotic in varying degrees,the renal tubules were damaged un­evenly,and the renal interstitium showed inflammatory changes.The renal injury induced by unilateral nephrectomy and repeated tail vein injection of ADR is more serious and typical.Conclusion The chronic nephropathy model induced by unilateral nephrectomy and repeat­ed tail vein injection of adriamycin can change the renal function of pared with the two methods,the pathological changes in­duced by unilateral nephrectomy and repeated tail vein injection of adriamycin are more typical.Key words Chronic kidney disease；Adriamycin；Renal function慢性肾脏疾病(chronic kidney disease,CKD)是影响全球公共健康的主要疾病之一，全球发生率约为8%~16%[1]°临床多表现为蛋白尿、低蛋白血症、水肿以及高脂血症等°因CKD发生率逐渐增高,病程迁延，很难治愈，末期多发展为慢性肾衰竭，只能依靠透析、换肾等仅有的治疗方式缓解,已经逐渐成为威胁人类健康的一类慢性疾病°随着人们对慢性肾病基金项目：云南省卫生和计划生育委员会医学学科带头人培养计划项目(D-201647)作者单位：650101昆明医科大学第二附属医院放射科通讯作者：王家平，电子信箱：1603642110@ 发病机制和病理变化等研究的深入，建立慢性肾病动物模型对研究CKD的肾组织病理形态学变化以及探究治疗CKD的新方法有着重要的意义°目前，国内外公认的模拟慢性肾病效果较好的为阿霉素(adriamycin,ADR)大鼠模型°ADR在大鼠体内代谢较为缓慢,对心脏、肝脏、骨髓、胃肠等具有较强的不良反应，但经尾静脉注射后,其毒性可主要积累于肾脏[2]°因此，应用ADR造模时，应注意注射的方式、剂量等°近年来,应用较为广泛的方法主要有尾静脉注射法(单次或多次)、单侧肾切除+重复尾静脉注射ADR和肾动脉注射法等°本研究比较单侧肾切除+重复尾静脉注射ADR及二次尾静脉注射-53-ADR 这两种方法，旨在为更好地复制慢性肾病模型提供更加丰富的参考依据。

雷米普利对阿霉素肾病大鼠肾脏TLR4，NF-ΚB，IL-8表达的影响的开题报告一、研究背景肾病是一种常见的疾病，其主要特征是肾脏损伤导致肾功能减退。

其中，阿霉素肾病是一种细胞免疫反应引起的肾脏病，其主要特征是肾小球基底膜增厚、系膜细胞扩增、免疫复合物沉积等。

近年来，研究发现炎症反应在阿霉素肾病的发生过程中起着重要作用，而Toll样受体4（TLR4）是免疫炎症反应的关键调节因子之一。

NF-ΚB是TLR4信号通路的重要下游分子，调控多种细胞激素的合成和分泌，其中IL-8是一种典型的炎症介质，具有重要的生物学意义。

目前，已有研究表明，雷米普利作为一种ACE抑制剂具有一定的抗炎作用，但是其对于阿霉素肾病大鼠肾脏TLR4、NF-ΚB、IL-8表达的影响尚未明确。

二、研究目的本研究旨在探究雷米普利对阿霉素肾病大鼠肾脏TLR4、NF-ΚB、IL-8表达的影响，为阿霉素肾病的治疗提供理论基础。

三、研究方法1.实验动物：选取雄性SD大鼠60只，体重180-200g，随机分为4组（正常组、模型组、雷米普利低剂组、雷米普利高剂组）。

2.建立动物模型：采用阿霉素注射法建立阿霉素肾病大鼠模型。

3.药物干预：雷米普利低剂组和雷米普利高剂组分别给予不同剂量的雷米普利，正常组和模型组给予等体积的生理盐水。

4.采集肾脏组织：实验结束后，取出大鼠肾脏组织，采用免疫组化和RT-PCR方法检测TLR4、NF-ΚB、IL-8表达情况。

5.数据处理：采用SPSS 20.0软件进行统计分析，比较各组数据的差异性。

四、研究意义本研究可以深入探究雷米普利对阿霉素肾病大鼠肾脏TLR4、NF-ΚB、IL-8表达的影响，为阿霉素肾病的治疗提供重要的理论基础和临床参考意见。

血和尿钙卫蛋白、IL-18及血清肌酐对脓毒症小鼠并发急性肾损伤的早期诊断价值研究徐建如;曹丝雨薇;葛志华;黄海静;罗文明;韩刚;刘春;钱骏;顾春燕【摘要】目的:研究血和尿钙卫蛋白和IL-18等指标对脓毒症小鼠并发急性肾损伤的早期诊断价值.方法:将48只ICR雄性小鼠随机分成0h、6h、12h和24h亚组,每亚组12只小鼠.0h组为对照组,注射生理盐水,6只立即取血液样本,6只收集24h 尿液;其余3组小鼠均接受尾静脉注射细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS),5mg/kg,分别于6h、12h和24h时间点收集尿液并取血液样本.所有血清标本检测钙卫蛋白、IL-18及肌酐;尿标本检测钙卫蛋白、IL-18.使用SNK检验.结果:血和尿钙卫蛋白、IL-18及血肌酐等指标在注射LPS后6小时开始上升,除血IL-18 P值为0.02外,其余各组均P<0.001.结论:血钙卫蛋白和IL-18指标不能预测脓毒症小鼠并发AKI;而尿钙卫蛋白和IL-18指标可用于脓毒症合并AKI的早期诊断和预测,且尿钙卫蛋白具有更早的预测价值.【期刊名称】《交通医学》【年(卷),期】2018(032)001【总页数】4页(P14-17)【关键词】急性肾损伤;脓毒症;钙卫蛋白;IL-18;血清肌酸酐;小鼠【作者】徐建如;曹丝雨薇;葛志华;黄海静;罗文明;韩刚;刘春;钱骏;顾春燕【作者单位】南通市第三人民医院急诊科,江苏226006;四川大学华西药学院;南通市第三人民医院急诊科,江苏226006;南通市第三人民医院急诊科,江苏226006;南通市第三人民医院急诊科,江苏226006;南通市第三人民医院急诊科,江苏226006;南通大学实验动物中心;南通市第三人民医院急诊科,江苏226006;南通市第三人民医院急诊科,江苏226006【正文语种】中文【中图分类】R631+.2脓毒症是感染引起的全身炎症反应综合征，是导致急性肾损伤和多器官功能障碍或衰竭的常见原因。

肾病综合征大鼠血清IL-4和IL-12的动态变化及其意义李丽;王长山;康晓明;王显鹤;孟庆云【摘要】目的:本实验通过微小病变型肾病综合征模型(MCNS),观察血清IL-4、IL-12的动态变化,探讨MCNS的免疫学发病机制.方法:将40只大鼠随机分为正常组、肾病组,每组20只.阿霉素5mg/kg制MCNS模型.观察大鼠一般情况,检测24h尿蛋白、血清白蛋白和总胆固醇水平,用ELISA检测血清IL-4、IL-12的水平.结果:与正常组比较,肾病组出现大量的蛋白尿,低白蛋白血症,高胆固醇血症和明显的水肿,血清IL-4升高,IL-12降低.结论:①MCNS存在TH1/TH2功能紊乱,IL-4、IL-12参与了MCNS的免疫机制.【期刊名称】《黑龙江医药科学》【年(卷),期】2015(038)002【总页数】3页(P12-14)【关键词】大鼠;微小病变型肾病综合征;IL-4;IL-12【作者】李丽;王长山;康晓明;王显鹤;孟庆云【作者单位】佳木斯大学附属第一医院,黑龙江佳木斯154003;佳木斯大学基础医学院,黑龙江佳木斯154007;佳木斯大学附属第一医院,黑龙江佳木斯154003;佳木斯大学附属第一医院,黑龙江佳木斯154003;佳木斯大学附属第一医院,黑龙江佳木斯154003【正文语种】中文【中图分类】R692肾病综合征(Nephrotic Syndrome，NS)是小儿时期常见疾病之一，其病因和发病机制虽然大量进行研究，迄今尚未阐明。

研究肾脏疾病中TH1与TH2的平衡，在于更深入理解疾病免疫发病机制。

近年来，细胞因子与肾脏疾病关系的研究一直是令人关注的研究领域，IL-4作为TH2细胞因子，IL-12作为TH1细胞因子，其在肾脏疾病的发病机制也引起了国内外学者的兴趣，尤其在微小病变型肾病综合征中[1，2]。

研究表明，MCNS与T细胞免疫功能紊乱有关[3]，细胞免疫在NS发病机制中发挥着重要的作用[4，5]。

激素敏感型肾病综合征患儿血及尿白细胞介素-18增高及其临床意义卢宏柱;李祥民【期刊名称】《中国当代儿科杂志》【年(卷),期】2003(5)5【摘要】目的探讨白细胞介素-18(IL-18)与小儿激素敏感型肾病综合征(SSNS)发病之间的关系。

方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定SSNS患儿极期及恢复期血、尿中IL-18水平,分析与24 h尿蛋白定量之间的关系,并与正常对照组相比较。

结果 SSNS患儿22例,治疗前血IL-18为(281.2±79.2)ng/L。

恢复期为(50.2±14.1)ng/L两者比较差异有显著性(P<0.01);正常对照组为(43.1±13.9)ng/L,与恢复期差异无显著性(P>0.05)。

尿IL-18治疗前及恢复期分别为(232.6±55.5)ng/mg·Cr和(28.5±12.8)ng/mg·Cr两者比较差异有显著性(P<0.01);正常对照组为(21.5±5.1)ng/mg·Cr,与恢复期比较差异无显著性(P>0.05)。

呼吸道感染组与正常对照组之间差异也无显著性。

血IL-18与24 h尿蛋白定量呈显著正相关(r=0.768,P<0.05)。

尿IL-18与24 h尿蛋白定量也呈显著正相关(r=O.838,P<0.01)。

结论 IL-18与SSNS的发病有关,可能在其发病中起部分作用,血、尿IL-18还可作为SSNS极期的标志之一。

感染对血中IL-18水平无影响。

【总页数】3页(P466-468)【关键词】小儿;激素敏感型肾病综合征;白细胞介素-18;酶联免疫吸附试验【作者】卢宏柱;李祥民【作者单位】荆州市第二人民医院儿科;武汉大学人民医院儿科【正文语种】中文【中图分类】R726.92【相关文献】1.激素敏感型肾病综合征患儿尿β2-MG及α1-MG检测的临床意义 [J], 黄惠梅;包瑛;周南;李志娟2.激素抵抗型肾病综合征患者血清和尿转化生长因子-β1、白细胞介素-18的表达水平检测及其临床意义 [J], 邬晓敏;黄才发;柏晓松3.原发性肾病综合征患儿血及尿白细胞介素18增高及其临床意义 [J], 卢宏柱;李祥民4.激素敏感型肾病综合征患儿血清、外周血单个核细胞白细胞介素-18表达的意义[J], 卢宏柱;伍小红;张万明;袁岳沙;刘丹5.激素敏感型肾病综合征患儿外周血单个核细胞白细胞介素-18的表达 [J], 卢宏柱;李祥民因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

小鼠白介素18(IL-18）ELISA试剂盒操作说明小鼠白介素18(IL-18）ELISA试剂盒操作说明小鼠白介素18(IL-18）ELISA试剂盒实验原理小鼠白介素18(IL-18）ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被小鼠白介素18(IL-18）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。

用底物TMB 显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的小鼠白介素18(IL-18）呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样本处理及要求1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。

将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。

推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。

为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。

最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。