CryIA(a)-pta双价抗虫基因转化粳稻及二化螟抗性评估

二化螟和县种群Cry1Ab抗性基因的起始频率及田间种群对Cry1A的敏感性调查的开题报告一、研究背景转基因作物的广泛应用已经带来了巨大的农业经济效益和环境效益，而其中最重要的是拥有一种特殊的转基因玉米植株，被广泛应用于蛀虫防治，其主要机制是由于它通过杀死多种昆虫来保护作物，而这些昆虫通常是玉米二化螟和玉米螟等。

然而，在转基因玉米的广泛使用中，也产生了一些对玉米二化螟能力的抗性。

在此情况下，研究二化螟能力抗性的起始频率以及区域生态系中栖息二化螟种群对转基因玉米Cry1Ab的敏感性是非常必要的。

二、研究内容本研究旨在调查二化螟和县种群中Cry1Ab抗性基因的起始频率以及区域土地生态系中二化螟种群对转基因玉米Cry1Ab的敏感性。

我们将采用分子生物学技术和田间调查方法来研究二化螟和县种群中抗性遗传基因Cry1Ab的起始频率。

通过采集大量的二化螟样本，我们将使用PCR技术和DNA序列分析方法来检测抗性基因的存在和起始频率，并进一步判断抗性基因的影响和可能的走向。

在田间调查方面，我们将进行大规模的田间实验，田间实验将分为两个部分。

第一部分是将含有Cry1Ab基因的转基因玉米种植于在不同生态系统中的几个区域，以确定Cry1Ab基因的扩散和影响。

第二部分是在田间选择多个不同的生态环境，判断区域中二化螟种群对转基因玉米Cry1Ab的敏感性。

三、预期成果本研究的预期成果包括：1. 二化螟和县种群中Cry1Ab抗性基因的起始频率；2. 区域生态系中二化螟种群对转基因玉米Cry1Ab的敏感性；3. 探讨二化螟能力抗性的遗传机制。

四、研究意义本研究的主要意义在于，研究二化螟能力抗性的机制，并探讨其对转基因玉米的影响，为以下方面提供科学参考：1. 保护转基因玉米和其他农作物，保障中国的粮食生产和国家的农业安全；2. 为农业生产提供更加优质的技术和产品支持；3. 为生态保护和农业生态系统提供科学指导。

转Cry1Ab和Cry1Ac融合基因型抗虫水稻对田间二化螟和大螟种群发生动态的影响李志毅;隋贺;徐艳博;韩兰芝;陈法军【期刊名称】《生态学报》【年(卷),期】2012(032)006【摘要】以Bt水稻华恢1号(Cry1Ac和CryAb融合基因；简称HH1)及其对照亲本明恢63(简称MH63)稻田靶标害虫二化螟Chilo suppressalis和次靶标害虫大螟Sesamia inferens为研究对象,研究了转基因抗虫水稻大田螟虫发生规律及其靶标和次靶标害虫致害力差异.结果表明,Bt水稻及其对照亲本上二化螟或大螟的卵块数量差异不显著,同时,对照亲本上二化螟与大螟的落卵量差异不显著,但Bt水稻上二化螟的落卵量显著大于大螟.与对照亲本相比,Bt水稻上二化螟幼虫发生量显著降低,降幅高达84.9％ -100％,但大螟发生量差异不显著；此外,对照亲本上二化螟幼虫发生量显著高于大螟,但Bt水稻上两者差异不显著.同时,Bt水稻上二化螟导致的枯心/白穗率和受害丛率都显著低于其在对照亲本上的致害程度,降幅分别为30.8％-98.3％和11.4％ -96.6％,而大螟差异不显著.可见,Bt水稻对靶标害虫二化螟具有较高抗性,而对次靶标害虫大螟的抗性不明显.另一方面,Bt水稻和对照亲本上二化螟导致的枯心/白穗率和受害从率都显著高于大螟.可见,二化螟仍是当前非转基因水稻上的主要害虫,而Bt水稻对二化螟幼虫发生的显著抑制作用以及对大螟幼虫发生的不显著影响,使得其大面积商业化种植下靶标害虫二化螟和次靶标害虫大螟间的竞争替代成为可能.【总页数】7页(P1783-1789)【作者】李志毅;隋贺;徐艳博;韩兰芝;陈法军【作者单位】南京农业大学植物保护学院昆虫系,昆虫信息生态研究室,南京210095;南京农业大学植物保护学院昆虫系,昆虫信息生态研究室,南京210095;南京农业大学植物保护学院昆虫系,昆虫信息生态研究室,南京210095;中国农业科学院植物保护研究所,水稻害虫研究组,北京100094;南京农业大学植物保护学院昆虫系,昆虫信息生态研究室,南京210095【正文语种】中文【相关文献】1.转cry1Ac/CpTI双价抗虫水稻CrylAc杀虫蛋白的表达特性及其对二化螟的毒杀效果 [J], 赵红盈;张永军;吴孔明;赵奎军;彭于发;郭予元2.转cry1Ac和CpTI双基因抗虫水稻对二化螟和大螟的致死效应及田间螟虫构成的影响 [J], 高玉林;傅强;王锋;赖凤香;罗举;彭于发;张志涛3.转sck/cry1Ac 双基因抗虫水稻对二化螟和稻纵卷叶螟的抗虫效果 [J], 李冬虎;傅强;王锋;姚青;赖凤香;吴进才;张志涛4.GUS组织化学染色法--一种快速筛选抗二化螟转Bt cry1Ab基因水稻的方法 [J], 吴刚; 崔海瑞; 舒庆尧; 叶恭银; 夏英武5.转cry1Ab/cry1Ac基因玉米Cry1Ab/Cry1Ac融合蛋白表达及对亚洲玉米螟的室内杀虫效果 [J], 刘晓贝;白树雄;王振营;王月琴;王勤英;何康来因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

农杆菌介导法获得大量转双价抗虫基因水稻植株李永春;张宪银;薛庆中【期刊名称】《农业生物技术学报》【年(卷),期】2002(010)001【摘要】构建含Bt杀虫基因cryIA(c)和豇豆胰蛋白酶抑制剂基因CpTI的双价抗虫转基因载体PCAM-Bt-CpTI,并用于农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导法对粳稻品系"浙大19"遗传转化.约2 000块盾片愈伤组织与农杆菌共培养后,得到了约1 300块潮霉素抗性愈伤,从中分化抗性再生苗约1 500株.对不同抗性愈伤来源的70个T0代再生株进行PCR及PCR-Southem检测,62株为转cryIA(c)和CpTI双价抗虫基因植株,阳性植株比例为88.6%.抗虫鉴定表明,3个转基因T1代株系对二化螟有很高的毒性.【总页数】4页(P60-63)【作者】李永春;张宪银;薛庆中【作者单位】浙江大学农学系,浙江杭州310029;山西农业大学,山西,太谷,030801;浙江大学农学系,浙江,杭州,310029;浙江大学农学系,浙江,杭州,310029【正文语种】中文【中图分类】S511【相关文献】1.基因枪法转化水稻(Oryza sativa L.)获得可育的转抗虫基因水稻再生植株 [J], 安韩冰;朱祯;李慧芬;吴茜;周兆澜;徐鸿林;徐军望;安利佳;李向辉2.利用农杆菌介导法获得转cry2A抗虫基因水稻的研究 [J], 吴振映;柳絮;王文英;姚方印;刘开启3.双价抗虫基因陆地棉转化植株的获得 [J], 王伟;朱祯;高越峰;石春林;陈宛新;郭仲琛;李向辉4.油菜转抗草甘膦、抗虫基因获得双抗植株 [J], 王景雪;赵福永;徐培林;田颖川5.转双价抗虫基因Bt-pta玉米植株的获得 [J], 袁英;李启云;孔祥梅;刘德璞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

转基因生产应用安全证书1、中国官方究竟有没有对转基因问题的真正明确答复？12月19日、20日，“求证”栏目报道了美国大规模种植转基因作物、大量消费转基因食品的情况，以及中外专家对转基因作物的看法。

我国政府如何对待和管理转基因作物、转基因食品？记者采访了有关部门负责人和专家学者。

如何监管转基因作物安全【回应】按照危险程度及试验流程分级分阶段评价管理农业部科技发展中心主任段武德说，根据2001年颁布的《农业转基因生物安全管理条例》（以下简称《条例》），国务院建立了由农业、科技、卫生、商务、环境保护、检验检疫等部门组成的部际联席会议，负责研究、协调农业转基因生物安全管理工作中的重大问题。

依照《条例》及配套规章，我国对农业转基因生物实行分级分阶段评价管理。

分级管理，即按照对人类、动植物、微生物和生态环境的危险程度，将农业转基因生物分为四个等级：安全等级I，尚不存在危险；安全等级，具有低度危险；安全等级，具有中度危险；安全等级，具有高度危险。

分阶段管理，即转基因生物研究与试验按照试验研究、中间试验、环境释放、生产性试验和申请安全证书5个阶段依序进行，实行报告制或审批制管理。

对已发放生产应用安全证书的转基因作物，加强品种审定、种子生产经营、商业化生产管理、标识等监督管理，杜绝非法生产经营转基因农作物种子和产品的行为。

即便是产业化多年的产品如抗虫棉，对新品种安全证书发放也严格进行质量把关，生产应用环节也须持续监测田间棉铃虫抗性发生发展状况和次要害虫的发生发展状况，推动采取综合治理措施以延缓害虫产生抗性和控制次要害虫的上升。

对于进口的转基因生物，按照用于研究和试验的、用于生产的、用作加工原料的三种用途实行审批管理。

我国种植转基因大豆吗【回应】未批准种植转基因大豆；转基因大豆油要标注段武德介绍，美国孟山都公司于2002年向我国提出大豆GTS40—3—2进口用作加工原料的安全证书申请，农业部即依据《条例》及配套规章，组织研究并确定了检测方案，分别由中国农科院植物保护研究所、南京农业大学对基因漂流、生存竞争能力和对生物多样性的影响等三项环境安全指标进行检测；由中国疾病预防控制中心食品与营养安全研究所对慢性毒性和抗营养因子等食用安全指标进行检测。

《转Cry1Ab基因抗虫水稻的检测方法研究》一、引言随着现代农业科技的进步，转基因作物因其抗虫、抗病等特性，在农业生产中得到了广泛应用。

其中，转Cry1Ab基因抗虫水稻因其显著的抗虫效果，成为了研究的热点。

然而，对于这种转基因水稻的检测方法仍需深入研究，以确保其安全性和有效性。

本文旨在研究转Cry1Ab基因抗虫水稻的检测方法，为农业生产提供科学依据。

二、材料与方法1. 材料本研究所用材料为转Cry1Ab基因抗虫水稻及其对照组非转基因水稻。

2. 方法（1）DNA提取：采用CTAB法提取转基因水稻和对照组水稻的基因组DNA。

（2）PCR扩增：利用特异性引物，对提取的DNA进行PCR 扩增，扩增Cry1Ab基因片段。

（3）电泳检测：将PCR产物进行电泳，观察条带，初步判断Cry1Ab基因是否成功转入水稻中。

（4）荧光定量PCR：利用荧光定量PCR技术，对转基因水稻中Cry1Ab基因的拷贝数进行精确检测。

（5）免疫学检测：采用Western Blot技术，对转基因水稻中Cry1Ab蛋白进行检测。

三、实验结果1. PCR扩增结果电泳结果显示，转基因水稻组在Cry1Ab基因特异位置出现条带，而非转基因水稻组则无此条带，初步判断Cry1Ab基因已成功转入水稻中。

2. 荧光定量PCR结果荧光定量PCR结果显示，转基因水稻中Cry1Ab基因的拷贝数显著高于非转基因水稻，证明了转Cry1Ab基因的成功导入。

3. Western Blot结果Western Blot结果显示，转基因水稻中成功表达了Cry1Ab蛋白，而非转基因水稻组则无此表达。

四、讨论本研究采用多种方法对转Cry1Ab基因抗虫水稻进行检测，包括PCR扩增、电泳检测、荧光定量PCR和Western Blot等。

实验结果表明，这些方法可以有效地检测出转基因水稻中Cry1Ab 基因的成功导入及其表达情况。

其中，PCR扩增和电泳检测为初步判断方法，可快速筛选出转基因水稻；荧光定量PCR和Western Blot则为精确检测方法，可对转基因水稻中Cry1Ab基因的拷贝数和表达情况进行精确测定。

抗虫转基因水稻检测技术研究综述作者：向阳来源：《安徽农学通报》2019年第10期摘 ;要：近年来，随着抗虫转基因水稻研究的进一步发展，世界各地实验室在抗虫转基因水稻研究方面均有收获，抗虫转基因水稻检测随之成为众多科学家的关注点。

该文综述了抗虫转基因水稻检测技术的研究进展，为进一步开展转基因水稻检测的研究工作提供参考。

关键词：抗虫 Tail-PCR;转基因水稻;基因芯片;检测技术中图分类号 ;S511 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2019）10-0015-04稻米是全世界近一半人口消费的主要粮食作物，对于人类的生存和发展起着极其重要的作用，是我国食用人口比重最大的粮食作物。

研究表明，当前制约水稻稳产、高产以及稻米品质的主要是各类害虫，所以防治虫害成为了重中之重。

在防治害虫时，使用生物防治手段，不仅制约因素多、还不易控制，而使用化学农药不仅破坏生态平衡、还可以使螟虫产生抗性;培育抗虫水稻新品种，增强水稻的抗虫性，是一种更经济环保的方法。

然而，传统的抗虫水稻育种周期长，有限的遗传资源，不明确的抗虫机制，还会产生新的生物型害虫，导致抗虫性不稳定，极大地制约了水稻抗虫育种的进程。

因此，利用基因工程技术获得转基因抗虫水稻，是水稻防虫侵害的最有希望和前途的方法。

1 抗虫转基因水稻简介抗虫转基因水稻就是利用转基因技术将抗虫基因导入水稻的受体细胞中，使寄主在水稻细胞内抗虫基因得到表达并遗传，使水稻自身产生抗虫蛋白，进而形成抗虫的新型水稻品种。

在水稻转基因抗虫研究中，被广泛应用的水稻抗虫基因是从苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis，Bt）中发现的Bt基因。

1989年，人类第一次培育转基因水稻植株，此植株是由中国农業科学院杨虹等将Bt基因利用原生质体电融合技术导入粳稻台北309的基因组DNA中培育出的新型水稻[1]。

现至今已有多个实验室成功培育出转基因水稻新品种。

金永梅等[2]将Cry1C*、 Cry2A*这2个不同的Bt抗虫基因利用农杆菌介导法同时导入到水稻品种吉粳88中去，获得了二价抗虫转基因水稻。

《转Cry1Ab基因抗虫水稻的检测方法研究》一、引言随着现代农业科技的进步，转基因作物因其抗虫、抗病等特性，在农业生产中得到了广泛应用。

其中，转Cry1Ab基因抗虫水稻因其对害虫的抗性而备受关注。

然而，为了确保转基因作物的安全性和有效性，对其的检测方法研究显得尤为重要。

本文旨在研究转Cry1Ab基因抗虫水稻的检测方法，为转基因作物的检测提供可靠的技术支持。

二、材料与方法1. 材料本研究所使用的材料包括转Cry1Ab基因抗虫水稻样品、PCR引物、DNA提取试剂等。

2. 方法（1）DNA提取：采用CTAB法提取转Cry1Ab基因抗虫水稻样品的DNA。

（2）PCR扩增：利用特异性引物对Cry1Ab基因进行PCR 扩增。

（3）产物检测：通过凝胶电泳检测PCR产物的质量及纯度，并进行荧光定量分析。

三、实验结果与分析1. DNA提取结果通过CTAB法提取的转Cry1Ab基因抗虫水稻样品的DNA，其纯度和浓度均达到PCR扩增的要求。

2. PCR扩增结果利用特异性引物对Cry1Ab基因进行PCR扩增，得到了清晰的条带，表明Cry1Ab基因成功扩增。

3. 产物检测结果（1）凝胶电泳检测：PCR产物经凝胶电泳检测，结果显示条带清晰，无杂带，表明PCR产物质量良好。

（2）荧光定量分析：通过荧光定量分析，可准确测定Cry1Ab基因的拷贝数，为后续的定量分析提供依据。

四、讨论本研究采用CTAB法提取转Cry1Ab基因抗虫水稻样品的DNA，并利用特异性引物进行PCR扩增和产物检测。

该方法具有操作简便、成本低廉、准确性高等优点，适用于大规模的转基因作物检测。

此外，荧光定量分析可准确测定Cry1Ab基因的拷贝数，为定量分析提供了可靠的数据支持。

然而，转基因作物的检测方法仍需不断改进和完善，以提高检测的准确性和可靠性。

五、结论本研究成功研究了转Cry1Ab基因抗虫水稻的检测方法，包括DNA提取、PCR扩增和产物检测等步骤。

该方法具有操作简便、成本低廉、准确性高等优点，可为转基因作物的检测提供可靠的技术支持。

不同药剂防治水稻二化螟药效评估试验摘要不同药剂防治水稻二化螟药效评估试验结果表明,试验药剂对水稻生长安全,对稻飞虱、稻纵卷叶螟有一定防治效果,对天敌等非靶标生物影响不大;40%氯虫苯甲酰胺·噻虫嗪水分散粒剂120 g/hm2和150 g/hm2、20%氯虫苯甲酰胺悬浮剂150 mL/hm2、10%氟虫双酰胺·阿维菌素悬浮剂600 mL/hm2、20%氟虫双酰胺水分散粒剂150 g/hm2 5个处理防效在90.30%~100.00%,防效较好;2.15%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐乳油750 mL/hm2、20%甲维盐·毒死蜱可湿性粉剂900 g/hm2、24%氰氟虫腙乳油450 mL/hm2、5%丁烯氟虫腈乳油900 mL/hm2 4个处理防效在80.33%~85.86%,防效中等;其他药剂防效较差。

关键词不同药剂;水稻二化螟;防效;影响二化螟是江西省上饶县稻区主要病虫,特开展不同药剂防治二化螟药效评估试验[1-2],以了解各药剂防效及特点,为水稻二化螟防治工作提供科学依据。

现将试验结果报告如下。

1材料与方法1.1试验材料及对象供试作物为水稻(一季晚稻),品种为川香8号。

试验药剂为:40%三唑磷乳油,浙江新农化工公司生产;40%氯虫苯甲酰胺·噻虫嗪水分散粒剂,瑞士先正达作物公司生产;72%丙溴磷乳油,江苏宝灵公司生产;20%氯虫苯甲酰胺悬浮剂,美国杜邦公司生产;5%丁烯氟虫腈乳油,大连瑞泽农药股份有限公司生产;10%氟虫双酰胺·阿维菌素悬浮剂,德国拜耳公司生产;20%氟虫双酰胺水分散粒剂,日本农药株式会社生产;8 000 IU/mg苏云金杆菌,武汉天惠生物工程有限公司生产;24%氰氟虫腙乳油,德国巴斯夫公司生产;1.8%阿维菌素乳油、2.15%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐乳油,河北威远公司生产;40.7%毒死蜱乳油,江苏红太阳公司生产;20%甲维盐·毒死蜱可湿性粉剂,江苏溧阳中南公司生产。

《转Cry1Ab基因抗虫水稻的检测方法研究》一、引言随着现代农业科技的进步，转基因作物因其抗虫、抗病等优良特性在农业生产中得到了广泛应用。

其中，转Cry1Ab基因抗虫水稻作为新型农业科技成果，对农业生产起到了重要作用。

然而，为了保证转基因水稻的质量与安全，建立一种快速、准确、可靠的检测方法显得尤为重要。

本文旨在研究转Cry1Ab基因抗虫水稻的检测方法，以提升对转基因产品的认识及鉴别水平。

二、研究背景及意义转Cry1Ab基因抗虫水稻作为一种重要的农业科技成果，其应用对农业生产具有深远的影响。

然而，随着其应用的普及，转基因水稻的安全性和质量检测问题也日益凸显。

因此，建立一种有效的检测方法对于保障食品安全、维护生态环境具有重要意义。

三、研究内容（一）材料与方法本研究采用PCR技术、实时荧光定量PCR技术和DNA测序技术等多种分子生物学技术手段，对转Cry1Ab基因抗虫水稻进行检测。

（二）实验步骤1. 样品采集与预处理：从田间收集不同生长阶段的转Cry1Ab 基因抗虫水稻样品，并进行预处理。

2. DNA提取：采用适当的DNA提取方法从样品中提取基因组DNA。

3. PCR扩增：利用特异性引物对提取的DNA进行PCR扩增。

4. 实时荧光定量PCR检测：采用实时荧光定量PCR技术对PCR产物进行检测，分析目的基因的转录水平。

5. DNA测序：对PCR产物进行测序，验证目的基因的存在与否。

（三）结果与分析通过上述实验步骤，我们得到了以下结果：1. PCR扩增结果：在适当的引物和反应条件下，成功扩增出了目的基因片段。

2. 实时荧光定量PCR结果：目的基因的转录水平与预期相符，说明转基因水稻中目的基因的表达情况良好。

3. DNA测序结果：通过测序验证了目的基因的存在，并证实了其序列的正确性。

通过数据分析，我们发现所采用的检测方法具有较高的准确性和可靠性，能够有效地检测转Cry1Ab基因抗虫水稻。

同时，我们还发现不同生长阶段的转基因水稻样品在检测过程中表现出一定的差异，这为后续的优化提供了依据。

转sck/cry1Ac双基因抗虫水稻对二化螟和稻纵卷叶螟的抗虫效果李冬虎1,2　傅　强1,3　王　锋3　姚　青1　赖凤香1　吴进才2　张志涛1(1中国水稻研究所水稻生物学国家重点实验室,浙江杭州310006;2扬州大学植物保护系,江苏扬州225009;3福建省农业科学院,福建福州350003;3通讯联系人)Resistance of Transgenic Rice Containing Both sck and cry1Ac G enes Against Chilo suppressalis and Cnaphalocrocis medi nalisL I Dong2hu1,2,F U Qiang1,3,W AN G Feng3,Y AO Qing1,L A I Feng2xiang1,W U Jin2cai2,Z HAN G Zhi2tao1(1State Key L aboratory of Rice Biology,China N ational Rice Research Instit ute,Hangz hou310006,China;2Depart ment of Plant Protection, Yangz hou U niversity,Yangz hou225009,China;3Fujian Academy of A gricult ural Sciences,Fuz hou350003,China;3Corresponding author)Abstract:The resistance of two transgenic rices,MSB and MSA containing sck and cry1Ac genes against Chilo suppressalis and Cnaphalocrocis medinalis,two destructive lepidopteran pests of rice in China,was evaluated under both laborator y and field condi2 tions.The results in vit ro laboratory bioassay showed that MSB and MSA exhibited hi gh resistance against the two pests,which was influenced by the age of rice plants.The corrected mortalit y of the two pests were98.9%-100%on65-71days old transgenic rices,and declined in some extent on105-109da ys old ones.However,except the corrected mortalit y of C.suppressalis on MSB (as high as79.3%)decreased markedly(P<0.05),those of C.suppressalis on MSA and C.medinalis on both MSB and MSA(92.8%-98.1%)did not decrease significantly.MSB tested in field also showed hi gh resistance to the two pests.There was nosignificant difference between MSB and the resistant control“K emingdao1”(containing a cry1A b gene).MSB showed a little better controlled effect on the two pests in comparison with its parent control Minghui86with insecticides pared with Minghui86without insecticides treatment,control effects of MSB on the two pests were92.6%and97.3%,respectively,while those of insecticides treated Minghui86were87.7%and89.8%.K ey w ords:gene transfer;rice;Chilo suppressalis;Cnaphalocrocis medi nalis;resistance to pests摘　要:通过室内测定和田间观察,就转sck/cry1Ac双基因抗虫水稻MSB和MSA对我国主要水稻害虫二化螟和稻纵卷叶螟的抗虫效果进行了研究。