小吞噬实验报告
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小吞噬体外实验报告一、实验目的本实验旨在通过体外实验研究小吞噬细胞在吞噬过程中的细胞活性及相关机制,为深入理解小吞噬细胞功能和应用提供实验依据。
二、实验方法1. 实验材料和仪器- 小吞噬细胞(来源于实验室培养的小鼠巨噬细胞系)- 靶细胞(选择人类白血病细胞K562)- 组织培养基(DMEM/F12)- 10% 体积比FBS- 0.25% 体积比Trypsin-EDTA- 96孔板- 显微镜2. 实验步骤1. 将小吞噬细胞接种于96孔板上,密度为10^6 cells/mL,并继续培养过夜。
2. 调制靶细胞悬液,浓度为10^6 cells/mL。
3. 向含有小吞噬细胞的孔板中加入相应数量的靶细胞悬液,使靶细胞与小吞噬细胞之间的比例为1:5。
4. 将孔板置于37C的恒温培养箱中,孵育4小时。
5. 检测小吞噬细胞对靶细胞的吞噬率:- 用PBS洗涤孔板2次,去除未被吞噬的靶细胞。
- 加入0.1 mL的0.1% Trypan Blue染色液,孵育5分钟。
- 在显微镜下观察和计数靶细胞的存活率和吞噬率。
6. 分离小吞噬细胞和靶细胞,用RT-PCR和Western blotting分析前后吞噬过程中的相关信号通路蛋白表达的变化。
三、实验结果1. 小吞噬细胞吞噬率在显微镜下观察和计数,发现小吞噬细胞对靶细胞的吞噬率为65%。
2. 吞噬过程中信号通路蛋白表达的变化通过RT-PCR和Western blotting分析,发现在吞噬过程中,小吞噬细胞中相关信号通路蛋白的表达发生了变化。
- mTOR信号通路:mTORC1激活,p70S6K磷酸化增加。
- PtdIns3K信号通路:PtdIns3K/Akt激活,Vps34磷酸化增加。
- NADPH氧化酶(NOX)信号通路:p22phox、Nox2和p47phox蛋白的表达增加。
四、实验讨论本实验结果表明,小吞噬细胞具有较高的吞噬率,并且吞噬过程中的信号通路蛋白表达发生了变化。
小吞噬实验报告小吞噬实验报告篇一:中性粒细胞吞噬功能试验(小吞噬试验)中性粒细胞吞噬功能试验(小吞噬试验)实验目的1.熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方法。
实验原理血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞,通过趋化、调理、吞入和杀菌等几个步骤,能吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物,是机体非特异性免疫的重要组成部分。
实验材料实验方法片。
瑞氏染色法:取瑞氏染液数滴滴于上述血片上先染1分钟。
然后加等量蒸馏水,轻轻晃动混匀,继续染5分钟,水洗,用吸水纸吸干后镜检。
结果观察油镜检查:寻找中性粒细胞,如果染色结果正确,可见细胞核及被吞噬的细菌染成紫色,而粒细胞的细胞浆则为淡红色。
中性粒细胞吞噬试验计数:1.吞噬百分率:观察100个中性粒细胞,计算其中吞噬有细菌的中性粒细胞数,计算出吞噬细胞百分率。
2.吞噬指数:观察100个中性粒细胞,计算其中被吞噬的细菌总篇二:吞噬细胞吞噬功能检测实验-----吞噬细胞吞噬功能检测实验实验概要本文介绍了吞噬细胞吞噬功能检测(Assay of the Phagocytic Function of Phagocyte)实验的基本原理、操作步骤及注意事项等。
实验原理吞噬细胞具有对异物(细菌、绵羊红细胞、鸡红细胞等)吞噬和消化的功能,在机体非特异性免疫中发挥重要作用。
小鼠腹腔内注射硫代乙醇酸钠,可刺激巨噬细胞的聚集。
四日后小鼠腹腔内注入羊红细胞悬液,一小时后解剖收集腹腔吞嗜细胞,染色、镜检可观察对羊红细胞的吞嗜现象。
通过计算吞嗜百分比或吞噬指数可测定吞噬细胞的吞嗜功能。
主要试剂1. PBS 缓冲液2. 3%硫代乙醇酸钠3. 1%羊红细胞悬液4. 瑞氏染液5. 甲醇主要设备1. 解剖器材2. 注射器3. 尖吸管4. 橡皮吸头。
一、实验目的1. 了解中性粒细胞吞噬功能的实验原理和方法。
2. 观察中性粒细胞对细菌、红细胞等颗粒的吞噬现象。
3. 评估中性粒细胞的吞噬能力。
二、实验原理中性粒细胞是人体免疫系统中重要的吞噬细胞,具有吞噬和杀灭病原体的功能。
吞噬过程包括趋化、调理、吞入和杀菌等步骤。
在本实验中,通过观察中性粒细胞对细菌、红细胞的吞噬现象,评估其吞噬能力。
三、实验材料1. 实验动物:小鼠2. 实验试剂:中性粒细胞分离试剂盒、细菌、红细胞、细胞培养液、抗生素等3. 实验仪器:显微镜、离心机、培养箱等四、实验方法1. 中性粒细胞分离:取小鼠血液,按照中性粒细胞分离试剂盒说明书进行分离。
2. 细菌培养:将细菌接种于细胞培养液,在培养箱中培养至对数生长期。
3. 红细胞制备:将红细胞洗涤、染色,制成红细胞悬液。
4. 吞噬实验:a. 将分离出的中性粒细胞用细胞培养液洗涤后,调整细胞浓度为1×10^6个/mL。
b. 将中性粒细胞与细菌、红细胞悬液混合,在培养箱中培养一段时间。
c. 收集细胞,用抗生素处理,去除未被吞噬的细菌。
d. 将细胞涂片,进行染色和显微镜观察。
五、实验结果1. 在显微镜下观察,可见中性粒细胞对细菌、红细胞具有明显的吞噬现象。
2. 吞噬细菌的中性粒细胞数量较多,吞噬红细胞的数量较少。
3. 部分中性粒细胞吞噬细菌后,细胞内出现细菌残体。
六、实验分析1. 本实验结果表明,中性粒细胞具有吞噬细菌、红细胞的能力,表明其在免疫防御中发挥重要作用。
2. 吞噬细菌的中性粒细胞数量较多,说明中性粒细胞对细菌的吞噬能力较强。
3. 吞噬红细胞的数量较少,可能与红细胞的结构和表面特性有关。
七、实验结论1. 中性粒细胞具有吞噬细菌、红细胞的能力,在免疫防御中发挥重要作用。
2. 中性粒细胞对细菌的吞噬能力较强,对红细胞的吞噬能力较弱。
八、实验讨论1. 吞噬实验是评估中性粒细胞吞噬能力的重要方法,但实验结果受多种因素影响,如实验动物、试剂、操作等。
1. 熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方法。
2. 观察中性粒细胞在小吞噬实验中的吞噬现象。
3. 分析实验结果,了解中性粒细胞吞噬功能的变化。
二、实验原理中性粒细胞(又称小吞噬细胞)是血液中的主要吞噬细胞,具有吞噬和消化细菌、病毒、细胞碎片等异物的作用。
小吞噬实验通过观察中性粒细胞吞噬异物的过程,了解其吞噬功能的强弱。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:新鲜血液、生理盐水、2%中性红溶液、2%亚甲蓝溶液、载玻片、盖玻片、显微镜等。
2. 实验仪器:离心机、移液器、恒温箱、显微镜等。
四、实验步骤1. 取新鲜血液1ml,加入等量生理盐水,混匀后离心,取上清液作为实验用血液。
2. 将2%中性红溶液和2%亚甲蓝溶液按1:1的比例混合,作为吞噬剂。
3. 取2ml混合液加入实验用血液中,混匀后置于37℃恒温箱中培养30分钟。
4. 取1滴混合液滴于载玻片上,盖上盖玻片。
5. 在显微镜下观察中性粒细胞的吞噬现象,记录吞噬百分率和吞噬指数。
五、实验结果与分析1. 实验结果实验结果显示,中性粒细胞在小吞噬实验中能够有效吞噬中性红和亚甲蓝颗粒,吞噬百分率和吞噬指数分别为80%和1.5。
2. 结果分析实验结果表明,中性粒细胞具有较强的吞噬功能。
吞噬百分率和吞噬指数的升高,说明中性粒细胞在小吞噬实验中能够有效地吞噬吞噬剂,具有一定的免疫防御能力。
通过小吞噬实验,我们了解到中性粒细胞在小吞噬实验中具有较强的吞噬功能,能够有效吞噬中性红和亚甲蓝颗粒。
这一实验结果有助于我们更好地了解中性粒细胞在人体免疫系统中的作用,为临床诊断和治疗提供理论依据。
七、实验反思与体会1. 实验过程中,需要注意无菌操作,防止污染。
2. 实验结果受多种因素影响,如实验材料、实验条件等,需要严格控制实验条件,提高实验结果的可靠性。
3. 通过本次实验,加深了对中性粒细胞吞噬功能原理的理解,提高了实验操作技能。
八、实验总结小吞噬实验是一种常用的细胞生物学实验,通过观察中性粒细胞在小吞噬实验中的吞噬现象,了解其吞噬功能的强弱。
一、实验背景中性粒细胞是人体免疫系统的重要组成部分,具有吞噬、杀菌和清除病原体的功能。
中性粒细胞吞噬功能试验(小吞噬试验)是评估中性粒细胞功能的重要方法之一。
本次实验旨在通过小吞噬试验,观察中性粒细胞对细菌的吞噬和杀伤能力,并探讨影响中性粒细胞吞噬功能的相关因素。
二、实验目的1. 了解中性粒细胞吞噬功能试验的原理和操作方法。
2. 评估中性粒细胞对细菌的吞噬和杀伤能力。
3. 探讨影响中性粒细胞吞噬功能的相关因素。
三、实验结果1. 中性粒细胞对细菌的吞噬和杀伤能力较强,在一定时间内,中性粒细胞吞噬细菌的数量和杀伤率均较高。
2. 随着细菌浓度的增加,中性粒细胞吞噬细菌的数量逐渐增加,但杀伤率逐渐降低。
3. 不同浓度的中性粒细胞吞噬细菌的能力存在差异,高浓度中性粒细胞吞噬细菌的能力较强。
4. 中性粒细胞吞噬功能受到温度、pH值、补体等因素的影响。
四、讨论1. 中性粒细胞吞噬功能的重要性中性粒细胞是人体免疫系统的重要组成部分,具有吞噬、杀菌和清除病原体的功能。
中性粒细胞吞噬功能试验是评估中性粒细胞功能的重要方法之一。
本次实验结果表明,中性粒细胞对细菌的吞噬和杀伤能力较强,说明中性粒细胞在抵御细菌感染方面具有重要作用。
2. 影响中性粒细胞吞噬功能的相关因素(1)细菌浓度:随着细菌浓度的增加,中性粒细胞吞噬细菌的数量逐渐增加,但杀伤率逐渐降低。
这可能是由于细菌浓度过高,导致中性粒细胞吞噬功能饱和,无法有效杀伤细菌。
(2)中性粒细胞浓度:不同浓度的中性粒细胞吞噬细菌的能力存在差异,高浓度中性粒细胞吞噬细菌的能力较强。
这可能是因为高浓度中性粒细胞具有更高的吞噬和杀伤能力。
(3)温度:中性粒细胞吞噬功能受到温度的影响。
过高或过低的温度都会影响中性粒细胞的吞噬和杀伤能力。
实验结果表明,在适宜的温度下,中性粒细胞的吞噬和杀伤能力最强。
(4)pH值:中性粒细胞吞噬功能受到pH值的影响。
pH值过高或过低都会影响中性粒细胞的吞噬和杀伤能力。
小吞噬实验报告
本次实验旨在研究小吞噬在不同环境条件下的生长和代谢特性。
通过对小吞噬
的培养和观察,我们希望能够深入了解其生物学特性,并为其在生物工程和医学领域的应用提供理论支持。
首先,我们选取了不同的培养基和培养条件,分别对小吞噬进行培养。
在常规
培养条件下,我们观察到小吞噬的生长速度较快,菌落呈现出规则的圆形和光滑的表面。
而在低温和高温条件下,小吞噬的生长速度明显减缓,甚至出现了生长受阻的情况。
这表明小吞噬对温度的敏感性较高,适宜的温度范围有利于其生长和繁殖。
其次,我们对小吞噬的代谢特性进行了研究。
通过对其在不同培养基中的代谢
产物进行分析,我们发现小吞噬在葡萄糖和乳糖培养基中的代谢产物有所差异。
在葡萄糖培养基中,小吞噬产生了大量的乳酸和乙醇,而在乳糖培养基中,产生了较少的代谢产物。
这表明小吞噬对不同碳源的利用能力存在差异,这对于其在工业生产中的应用具有重要意义。
最后,我们对小吞噬的耐受性进行了测试。
在高盐、酸碱度和抗生素等条件下,我们观察到小吞噬表现出不同程度的耐受性。
在高盐条件下,小吞噬的生长速度减缓,但并未受到致命影响。
而在酸碱度和抗生素条件下,小吞噬表现出了较强的耐受性,这为其在特殊环境中的生存和应用提供了可能性。
综上所述,通过本次实验,我们深入了解了小吞噬在不同环境条件下的生长和
代谢特性,为其在生物工程和医学领域的应用提供了理论支持。
我们相信,随着对小吞噬的进一步研究,其潜在的应用价值将会得到更多的挖掘和发展。
小吞噬实验报告本次实验旨在探究小吞噬在细胞内的作用机制及其对细胞功能的影响。
小吞噬是一种重要的细胞内吞噬过程,通过这一过程,细胞可以摄取外源性物质并进行降解、循环利用,对于维持细胞内稳态具有重要作用。
在本次实验中,我们将通过一系列的实验操作,深入探讨小吞噬的生物学功能及其潜在的临床应用价值。
首先,我们利用显微镜观察了小吞噬的过程。
在实验中,我们使用了荧光标记的小吞噬体,通过实时观察细胞内小吞噬的过程,我们发现小吞噬体在细胞质内迅速移动,并与内吞的囊泡相融合,形成小吞噬体内的物质得以释放到走向溶酶体。
这一过程表明小吞噬在细胞内的高效运作,为后续的实验奠定了基础。
接下来,我们进行了小吞噬对细胞功能的影响实验。
通过干扰小吞噬过程,我们观察到细胞内外源性物质的积累,以及细胞内部的代谢活性的下降。
这说明小吞噬对于细胞内废物的降解和细胞功能的维持具有重要作用。
此外,我们还发现,在小吞噬受阻的情况下,细胞内出现了大量的异常蛋白质聚集体,这可能会引发细胞内应激反应,对细胞的生存和功能造成不利影响。
最后,我们探讨了小吞噬的潜在临床应用价值。
小吞噬在细胞内的降解作用使其成为治疗某些遗传代谢性疾病的潜在靶点。
通过调控小吞噬的活性,可以促进细胞内废物的清除,从而改善相关疾病的症状。
此外,小吞噬还在肿瘤治疗领域具有潜在应用价值,通过调控肿瘤细胞内的小吞噬活性,可以提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,从而提高治疗效果。
综上所述,小吞噬在细胞内起着重要的功能作用,对细胞内废物的降解和细胞功能的维持具有重要意义。
通过深入研究小吞噬的生物学功能及其潜在的临床应用价值,将有助于揭示其在细胞生物学和临床医学中的重要意义,为相关疾病的治疗提供新的思路和方法。
希望本次实验能够为小吞噬的研究和应用提供有益的参考和启发。
一、实验目的1. 理解吞噬作用的基本原理和过程;2. 掌握吞噬实验的操作方法;3. 通过实验观察吞噬现象,加深对吞噬作用的理解。
二、实验原理吞噬作用是指细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的较大固体物质的过程。
吞噬作用在生物体内具有重要的生理意义,如摄取营养物质、清除病原体、维持细胞内环境稳定等。
本实验采用小鼠腹腔巨噬细胞作为实验材料,通过观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象,了解吞噬作用的基本过程。
三、实验材料与试剂1. 实验动物:小鼠;2. 实验材料:鸡红细胞、无菌淀粉液;3. 试剂:0.9%氯化钠溶液、0.03%冷亚甲蓝溶液、显微镜、载玻片、盖玻片、离心机、计数板等。
四、实验方法1. 诱导巨噬细胞产生:实验前3小时,将无菌淀粉液1ml注入小鼠腹腔,诱导巨噬细胞渗出至腹腔中;2. 巨噬细胞吞噬鸡红细胞:将鸡红细胞1ml注入小鼠腹腔,轻柔腹部,使其在腹腔中分布均匀,利于吞噬;3. 收集腹腔液:30分钟后,将小鼠处死,打开腹腔,收集腹腔液;4. 制备细胞悬液:将腹腔液离心(1000r/min,5分钟),弃去上清液,加入0.9%氯化钠溶液制成细胞悬液;5. 染色:将细胞悬液滴加于载玻片上,滴加0.03%冷亚甲蓝溶液,盖上盖玻片;6. 显微镜观察:在显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象。
五、实验结果与分析1. 观察到巨噬细胞呈圆形或椭圆形,细胞核位于细胞中央,细胞质中可见吞噬的鸡红细胞;2. 部分巨噬细胞内吞噬的鸡红细胞数量较多,表明巨噬细胞具有吞噬能力;3. 通过计数板计数,计算出吞噬百分率和吞噬指数。
六、实验结论通过本实验,我们观察到小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象,验证了吞噬作用的基本原理。
巨噬细胞在生物体内具有重要的生理功能,如清除病原体、维持细胞内环境稳定等。
本实验加深了我们对吞噬作用的理解,为后续研究提供了实验基础。
七、实验注意事项1. 实验过程中应严格无菌操作,防止污染;2. 实验操作要轻柔,避免损伤细胞;3. 显微镜观察时,应调整好焦距,确保观察效果;4. 实验数据要准确记录,便于后续分析。
1. 了解中性粒细胞吞噬功能试验(小吞噬试验)的原理和方法。
2. 掌握中性粒细胞吞噬功能试验的操作步骤。
3. 观察中性粒细胞吞噬功能的变化,分析实验结果。
二、实验原理中性粒细胞吞噬功能试验(小吞噬试验)是一种检测中性粒细胞吞噬功能的方法。
中性粒细胞在人体免疫系统中起着重要作用,具有吞噬、消化病原体的功能。
通过观察中性粒细胞对特定物质的吞噬情况,可以了解中性粒细胞的吞噬功能。
三、实验材料1. 实验动物:健康小鼠2. 实验试剂:中性粒细胞吞噬功能试剂、生理盐水、染色液、显微镜等3. 实验仪器:离心机、显微镜、培养箱等四、实验步骤1. 选取健康小鼠,随机分为实验组和对照组。
2. 实验组:腹腔注射中性粒细胞吞噬功能试剂,对照组:腹腔注射等体积的生理盐水。
3. 注射后24小时,取小鼠血液,分离中性粒细胞。
4. 将中性粒细胞与特定物质(如细菌、酵母等)混合,置于培养箱中培养。
5. 观察中性粒细胞对特定物质的吞噬情况,记录吞噬百分率和吞噬指数。
6. 对实验结果进行统计分析。
五、实验结果1. 实验组中性粒细胞的吞噬百分率和吞噬指数均高于对照组,说明中性粒细胞吞噬功能试验结果显著。
2. 随着培养时间的延长,中性粒细胞的吞噬百分率和吞噬指数逐渐增加,说明中性粒细胞吞噬功能随时间延长而增强。
1. 实验结果表明,中性粒细胞吞噬功能试验可以有效地检测中性粒细胞的吞噬功能。
2. 中性粒细胞吞噬功能试验具有操作简便、结果直观等优点,适用于临床和科研工作。
七、实验结论通过本次实验,我们掌握了中性粒细胞吞噬功能试验的原理和方法,了解了中性粒细胞吞噬功能的变化规律。
实验结果表明,中性粒细胞吞噬功能试验可以有效地检测中性粒细胞的吞噬功能,为临床和科研工作提供了有力支持。
八、实验反思体会1. 实验过程中,应严格按照操作步骤进行,避免人为误差。
2. 实验结果的分析应客观、准确,避免主观臆断。
3. 中性粒细胞吞噬功能试验具有实际应用价值,为临床和科研工作提供了有力支持。
篇一:巨噬细胞吞噬实验&沉淀实验实验报告
实验二
一巨噬细胞吞噬功能实验
【原理】巨噬细胞是单核吞噬细胞系统的主要细胞,局域活跃的吞噬功能。
吞噬细胞受抗原刺激后活化,可使吞噬功能明显增强。
在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后,再给小鼠腹腔注射鸡血红细胞,30min后处死小鼠,取出腹腔液,以冷亚甲蓝染色,显微镜下计数吞噬红细胞的百分数,及观察吞噬细胞内鸡红细胞的数目,以判断吞噬细胞的杀伤能力,由此间接地测定机体的非特异性免疫水平。
【方法】体内法:
(1)实验前3小时,小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml,诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。
(2)实验时,每只小鼠注射鸡红细胞1ml,轻柔腹部,使其在腹腔中分布均匀,利于吞噬。
(3)30min后,将小鼠拉颈处死,固定,打开腹腔暴露肠管,用载玻片轻擦腹腔,使腹腔液均匀涂于载玻片过,再滴一滴%冷亚甲蓝溶液,盖上盖玻片。
(4)高倍镜下进行观察,计数。
【结果】
【分析】
在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后,再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液,可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象,并且可看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。
二沉淀反应双向琼脂扩散实验【原理】将可溶性抗原与相应抗体分别加入琼脂板上的孔内,二者均可发生扩散,并且随扩散距离的增大浓度降低,在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。
本实验是定性实验,常用于分析抗原抗体的纯度关系以及相互关系。
【方法】
(1)制板:将熔化的1%琼脂加在载玻片上约5ml
(2)打孔:待琼脂凝固后,将载玻片置于打孔样板上,用打孔器打孔
(3)加样:在中央孔内加抗体,上下两孔加抗原1,左右加抗原二,每孔加10μl
(4)结果观察:将琼脂板置于湿盒,37℃一天后观察结果。
【结果】
在中央孔与添加抗原1的孔之间出现沉淀线,有抗原抗体反应,为阳性反应,说明抗原1与抗体相对应。
中央孔与添加抗原2的孔之间没有沉淀线,说明抗原2与抗体之间不相对应。
【分析】抗体与抗原发生扩散时,随扩散距离的增大浓度降低,在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。
当有沉淀线出现时,说明有抗原抗体反应。
琼脂铺板时要一次铺成,并且铺设均匀。
打孔时要注意垂直打孔,注意不要有裂隙产生。
篇二:中性粒细胞吞噬功能试验(小吞噬试验)中性粒细胞吞噬功能试验(小吞噬试验)
实验目的
1.熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方法。
实验原理血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞,通过趋化、调理、吞入和杀菌等几个步骤,能吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物,是机体非特异性免疫的重要组成部分。
实验材料
实验方法
片。
瑞氏染色法:取瑞氏染液数滴滴于上述血片上先染1分钟。
然后加等量蒸馏水,轻轻晃动混匀,继续染5分钟,水洗,用吸水纸吸干后镜检。
结果观察油镜检查:寻找中性粒细胞,如果染色结果正确,可见细胞核及被吞噬的细菌染成紫色,而粒细胞的细胞浆则为淡红色。
中性粒细胞吞噬试验
计数:1.吞噬百分率:观察100个中性粒细胞,计算其中吞噬有细菌的中性粒细胞数,计算出吞噬细胞百分率。
2.吞噬指数:观察100个中性粒细胞,计算其中被吞噬的细菌总
篇三:吞噬细胞吞噬功能检测实验
-----吞噬细胞吞噬功能检测实验实验概要
本文介绍了吞噬细胞吞噬功能检测(assay of the phagocytic function of phagocyte)实验的基本原理、操作步骤及注意事项等。
实验原理
吞噬细胞具有对异物(细菌、绵羊红细胞、鸡红细胞等)吞噬和消化的功能,在机体非特异性免疫中发挥重要作用。
小鼠腹腔内注射硫代乙醇酸钠,可刺激巨噬细胞的聚集。
四日后小鼠腹腔内注入羊红细胞悬液,一小时后解剖收集腹腔吞嗜细胞,染色、镜检可观察对羊红细胞的吞嗜现象。
通过计算吞嗜百分比或吞噬指数可测定吞噬细胞的吞嗜功能。
主要试剂
1.pbs 缓冲液
2.3%硫代乙醇酸钠
3.1%羊红细胞悬液
4.瑞氏染液
5.甲醇
主要设备
1.解剖器材
2.注射器
3.尖吸管
4.橡皮吸头
5.小试管
6.载玻片
实验材料icr 小鼠实验步骤
1.实验准备:用无菌注射器吸取3%硫代乙醇酸钠3ml,注射于小鼠腹腔内。
2.四日后,注射1%羊红细胞悬液1ml 于小鼠腹腔内。
3.注射1 小时后,将小鼠用颈椎脱臼法处死,解剖暴露腹腔,于腹腔靠上部位,用镊子轻
轻夹起腹膜,将腹膜剪一小口,用尖吸管注入5ml 预温的pbs,同时用手反复揉搓腹腔约1—2 分钟,以便尽可能多地冲洗出小鼠腹腔的吞噬细胞。
4.用尖吸管吸取腹腔液,置一洁净试管内。
5.用尖吸管将腹腔液吹打均匀(尽量避免产生气泡),吸取一滴滴于载玻片上,加盖玻片镜
检。
6.观察结果,也可以将腹腔液涂片,平放于湿盘内,37℃,孵育30 分钟。
取出涂片,用预
温的pbs 冲洗3 次,然后用甲醇固定1 分钟,以瑞氏染液1 份加的pbs 2 份混匀后,滴于涂片上染色5-10 分钟,以蒸馏水冲洗(切勿先将染液倾去)后,待干,镜检。
7.实验结果
观察小鼠腹腔巨噬细胞和中性粒细胞对羊红细胞的吞噬现象,计算吞噬百分比,即每100 个吞噬细胞中吞噬有羊红细胞的细胞数。
也可用吞噬指数表示,即将100 个吞噬细胞中所吞噬羊红细胞的总数除以100,即为吞噬指数。
吞噬百分比和吞噬指数一般是平行的。
注意事项1. 充分揉搓腹腔,尽可能将吞噬细胞冲洗下来。
8.用尖吸管吸取腹腔液时,尽量避开腹腔脏器,避免损伤血管引起出血,影响实验结果。