离体蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备

一、实验目的1. 掌握蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。

2. 观察并分析坐骨神经刺激对腓肠肌收缩反应的影响。

3. 探究不同刺激强度和频率对腓肠肌收缩的影响。

二、实验原理坐骨神经是人体最大的混合神经，由腰骶神经根合并而成，主要负责下肢的感觉和运动功能。

腓肠肌是人体下肢的主要肌肉之一，负责小腿的屈曲和踝关节的屈伸。

本实验通过刺激坐骨神经，观察腓肠肌的收缩反应，探讨神经肌肉的兴奋性和收缩机制。

三、实验材料与仪器1. 实验动物：蟾蜍2. 实验仪器：刺激器、放大器、示波器、张力传感器、计算机、剪刀、镊子、电极、玻璃皿、任氏液等四、实验方法1. 制备坐骨神经-腓肠肌标本：将蟾蜍处死后，剥去皮肤，暴露腰骶丛神经，游离大腿肌肉之间的坐骨神经及小腿的腓肠肌。

将神经和肌肉两端结扎，剪去无关分支，保留膝关节，剪去腿骨，将标本离体。

将标本置于任氏液中，保持湿润。

2. 连接实验装置：将坐骨神经连接刺激器输出端，腓肠肌连接张力传感器，张力传感器连接放大器，放大器连接示波器和计算机。

3. 设置刺激参数：根据实验需求设置刺激强度、频率和持续时间。

4. 进行实验：刺激坐骨神经，观察腓肠肌的收缩反应，记录张力变化。

5. 数据分析：分析不同刺激强度和频率下腓肠肌的收缩反应，探讨神经肌肉的兴奋性和收缩机制。

五、实验结果1. 在不同刺激强度下，腓肠肌的收缩反应随着刺激强度的增加而增强，直至达到最大收缩。

2. 在不同刺激频率下，腓肠肌的收缩反应随着刺激频率的增加而增强，直至出现不完全强直收缩。

3. 当刺激强度和频率同时增加时，腓肠肌的收缩反应更为明显。

六、实验结论1. 坐骨神经刺激可以引起腓肠肌的收缩反应，说明神经肌肉之间存在兴奋传递。

2. 不同刺激强度和频率对腓肠肌的收缩反应有显著影响，说明神经肌肉的兴奋性和收缩机制与刺激参数密切相关。

3. 本实验结果为研究神经肌肉的兴奋性和收缩机制提供了实验依据。

七、实验讨论1. 本实验中，刺激坐骨神经可以引起腓肠肌的收缩反应，说明神经肌肉之间存在兴奋传递。

实验二-坐骨神经标本—腓肠肌标本的制备一、实验目的：1.学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法。

2.学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本及腓肠肌的制备方法。

3.了解电刺激的极性法则。

二、实验原理：1、牛蛙作为实验动物的优势：离体实验是动物生理学主要的实验方法之一。

两栖动物是冷血动物，其基本生理机能与温血动物近似，而其离体组织器官维持活性所需要的条件比较简单，因此它常被选为生理学实验提供离体组织或器官的实验动物。

蟾蜍或青蛙坐骨神经—腓肠肌在任氏液中可维持生理活性数小时，在其基础上还可进一步制作神经干标本、腓肠肌标本，可用于研究肌肉收缩的特性，神经和肌肉的兴奋性、传导性，刺激与反应的关系，神经肌肉接头活动等生理活动及相关机制，甚至还可以用于药物筛选如抗疲劳药物的模型。

其中牛蛙人工养殖成本低产出率高，相对蟾蜍要更安全。

因此，本次实验选择牛蛙作为实验对象。

2、锌铜弓刺激检测标本活性的原理：锌铜弓在溶液中沾湿以后，锌的表面电离出正离子，里面形成负离子；而铜的表面电离出负离子,里面形成正离子。

当用锌铜弓接触活组织时，电流便沿着锌一活组织→铜的方向流动而产生刺激效应。

所以锌相当于正极,面铜相当于负极发挥刺激作用；当断开时，则发生相反的效应。

锌的金属电势比铜低，形成一定的电势差（就相当于有电压），锌铜弓是把一根锌棒和一根铜棒一端焊在一起，另一段分开，则接触样本（例如神经干）时，会引起样本局部去极化，引发动作电位。

三、实验器材：牛蛙，常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、毁髓针、玻璃分针)，蜡盘，蛙板（木质或硬泡沫塑料），玻璃板，固定针，锌铜弓，培养皿或不锈钢盘，污物缸，滴管，纱布，粗棉线，任氏液。

四、实验流程和步骤：1.牛蛙的双毁髓一手握住牛蛙，背部向上。

用拇指压住牛蛙的背部，食指按压其头部前端，使头端向下低垂；另一手持毁髓针，由两眼之间沿中线向后触划，当触及两耳中间的凹陷处（此处与两眼的连线成等边三角形）时，持针手即感觉针尖下陷，此处即是枕骨大孔的位置。

实验六蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备坐骨神经干标本的制备、缝匠肌神经标本制备一、实验目的1、急性动物实验（与慢性动物实验的区别）2、离体标本实验（与在体标本实验的区别）3、掌握锌铜弓导致生物电产生的原理4、掌握离体标本的制备及手术训练5、掌握剪刀的技用和双毁髓的意义二、实验原理1、急性动物实验与慢性动物实验，在体实验与离体实验急性动物实验可分为离体和在体实验两种方法。

离体实验：是从活着的或刚处死的动物身上取出所需要的器官、组织、细胞或细胞中的某些成分。

置于一个能保持其正常功能活动的人工环境中，观察某些人为的干预因素对其功能活动的影响。

例如，对离体蛙心或动物血管条进行灌流，可用于研究某些生物活性物质或药物对心肌或血管平滑肌收缩力的影响；应用膜片钳技术可研究细胞小片膜上单个离子通道的电流特性。

在体实验：是在动物麻醉条件下，手术暴露某些所需研究的部位，观察和记录某些生理功能在人为干预条件下的变化。

例如，以动脉插管记录动物血压，可用于观察某些神经或体液因素对血压的影响；将玻璃微电极插入脑内某些部位进行细胞外或细胞内记录，观察神经元在接受某些刺激时放电活动的变化，以了解这些神经元的生理功能。

急性动物实验的优点是实验条件比较简单，条件较易控制，便于进行直接的观察和细致的分析；离体实验则更能深入到细胞和分子水平，有助于揭示生命现象中最为本质的基本规律。

但急性动物实验的结果可能与生理条件下完整机体的功能活动有所不同，尤其是离体实验的结果，此时被研究的对象，如器官、组织、细胞或细胞中的某些成分已经脱离整体，它们所处的环境已发生很大的改变，实验结果与在整体中的真实情况相比，可能会有很大的差异。

慢性动物实验：慢性动物实验以完整、清醒的动物为研究对象，且尽可能保持外界环境接近于自然，以便能在较长时间内观察和记录某些生理功能的改变。

实验前一般需对动物作某些预处理，待动物康复后再进行观察。

例如，研究唾液的分泌调节时，可预先将唾液腺导管开口移至颊部体表，观察时就能方便地从体表收集到唾液腺分泌的纯净唾液；研究某种内分泌功能时，常先摘除动物某个内分泌腺，以便观察这种内分泌激素缺乏时以及人为替代后的生理功能改变，用以了解这种内分泌激素的生理作用。

蟾蜍的坐骨神经—腓肠肌标本的制备及神经干的性质实验报告实验名称蛙的坐骨神经—腓肠肌标本的制备及神经干的性质实验目的要求学习并掌握坐骨神经—腓肠肌标本以及腓肠肌标本制备的方法；学习生理学实验基本的组织分离技术；观察刺激强度，刺激频率与肌肉收缩反应的关系；掌握引导神经干复合动作电位与测定其传导速度的基本原理与方法。

实验材料，仪器，试剂蟾蜍、常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、玻璃分针等）、烧杯、培养皿、纱布、棉线、粗剪刀、蛙板、污物缸、滴管、生理信号采集系统、张力传感器、铁架台、计算机、任氏液等。

实验原理两栖类动物的一些基本生命活动与生理功能与温血动物相似，而其离体组织所需要的生活条件比较简单，易于控制与掌握。

因此在生理实验中常用蟾蜍的神经肌肉标本来观察兴奋性、兴奋过程、刺激的规律以及骨骼肌收缩的特点等。

任氏液是—种比较接近两栖动物内环境的液体，可以用来延长青蛙心脏在体外跳动时间、保持两栖类其他离体组织器官生理活性等。

腓肠肌由许多的纤维组成，刺激腓肠肌时，不同的刺激强度会引起肌肉的不同反应。

当刺激强度过小时，不应期肌肉发生收缩反应，此时的刺激为阈下刺激。

而能引起肌肉发生收缩的最小刺激强度，为阈刺激，但全部肌纤维同时收缩时，则出现最大的收缩反应。

这时，即使再加大刺激强度，肌肉的收缩强度也不会随之而增大。

可以引起肌肉发生最大收缩反应的最小刺激强度为最适刺激。

肌肉组织对于一个阈上强度的刺激，发生一次迅速地收缩反应，即单收缩。

单收缩的过程分为三个时期，潜伏期、收缩期、舒张期。

刺激坐骨神经能引起腓肠肌产生收缩。

在其他条件不变情况下，不断增大刺激频率可引起肌肉收缩形式发生改变。

若刺激频率较小，两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩与舒张所持续的时间（即单收缩）时，肌肉收缩表现为一连串的单收缩；若增大刺激频率，使两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩的收缩期时间，而小于单收缩时，肌肉呈现不完全强直收缩；若继续增加刺激频率，使两次刺激间隔时间小于一次肌肉收缩的收缩期时间，肌肉则表现出完全强直收缩。

实验二坐骨神经－腓肠肌标本的制备一．目的和要求1．学习蛙类动物双毁髓的实验方法2．学习掌握坐骨神经－腓肠肌标本的制备方法3．了解急性离体器官，组织实验二．动物与器材1．动物：蟾蜍2．器材：常用手术器械（手术剪、手术镊、眼科剪、眼科镊、毁髓针、玻璃分针）、辣盘、锌铜弓、培养皿、蛙钉、滴管、烧杯、棉线3．试剂：任氏液――提供母液，需按1：10稀释三．原理把蟾蜍的腓肠肌和连同它相连的坐骨神经从体内剥离出来，制成“神经－肌肉”标本；如果在神经的游离端一侧轻轻的触动神经，或者通以适当的电流作为刺激，那么在经过一个极短的时间后，可以看到肌肉出现一次快速的缩收和舒张。

而且，只要刺激不造成组织的损伤，上述反应可以重复出现。

这说明，神经或肌肉表面受到刺激的点，一定产生了某种信号，他们沿着神经纤维或肌细胞传导，最后导致整个肌肉发生受挫。

按该信号的传导速度和可重复性分析，只能是电信号。

用近代精密的电测量设备，即可确定在神经被刺激的点产生了一个微弱的电信号，它以一定的速度传向肌肉，而肌肉的收缩则发生在这种电反应之后。

上述神经－肌肉标本实际是整个体内反射弧的一部分，后者在进行正常活动时，先由感受器细胞对外在环境变化进行跨膜信号传导，随后才发生电信号在传入和传出神经纤维上的传导和细胞间的信息传递。

而肌肉运动主要时由于产生的动作电位。

四．方法与步骤1．双毁髓：左手握蟾蜍，背部向上，用无名指和小指夹在其后肢，中指抵制前肢，食指按压其头部前端，拇指压住躯干背部，使头向前俯；右手持毁髓针，找到两耳后腺之间的凹陷处即枕骨大孔位置，垂直刺入约1～2mm，然后将针尖向前刺入颅腔，搅动数下，捣毁脑组织（可感觉针触及颅骨）。

此时为单毁髓动物。

再将毁髓针退回垂直刺入状态，扔留1～2mm的针尖位于枕骨大孔处，将针尖转向右方，与脊椎平行刺入椎管，捣毁脊髓。

只蟾蜍后肢瘫痪，不再动弹。

2．剥制后肢标本：将双毁髓的蟾蜍背面向上放于蜡盘上，左手拿眼科镊轻提起两前肢间背部的皮肤，右手持眼科剪横向剪开皮肤，暴露耳后腺后缘水平的脊柱。

坐骨神经-腓肠肌标本制备一、实验目的要求1、学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法。

2、学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本及腓肠肌标本的制备方法。

3、了解电刺激的极性法则。

二、实验原理1、蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动与生理功能与温血动物相似，而其离体组织生活条件易于掌握，在任氏液的浸润下，神经肌肉标本可较长时间保持生理活性。

因此，在生理学实验中常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观察神经肌肉的兴奋性、兴奋过程以及骨骼肌收缩特点等。

2、细胞的静息膜电位为外正内负，电刺激可改变可兴奋细胞的膜电位差。

膜电位减小时，细胞去极化，细胞兴奋；膜电位增大时，细胞超极化，细胞兴奋性被抑制。

蘸有任氏液的锌铜弓接触活组织时，可产生沿锌片—活组织—铜片流向的电流对细胞产生刺激效应。

三、实验材料与仪器1、实验材料：牛蛙2、实验器材：手术剪、手术镊、手术刀、眼科剪、眼科镊、毁髓针、蛙板、固定针、滴管、培养皿、玻璃分针锌铜弓、污物缸、粗棉线、任氏液四、实验步骤1、洗净实验动物→毁髓→剥制后肢→分离坐骨神经→游离腓肠肌→游离股骨头→标本检验→电刺激极性法则的验证2、双毁髓一只手握住牛蛙，使其背部向上。

用拇指压住牛蛙背部，食指按压其头部前端，另一只手持毁髓针，由两眼之间沿中线向下触划，触及凹陷处即为枕骨大孔。

将毁髓针垂直刺入枕骨大孔。

将针尖向前刺入颅腔内搅动，此时为单毁髓；将毁髓针退回枕骨大孔，针尖转向后方，与脊椎平行刺入椎管内捣毁脊髓，完成双毁髓。

3、坐骨神经-腓肠肌标本制备（1）剥制后肢标本:轻提双毁髓蛙，自背面耻骨联合上方约1公分处横向剪断脊柱。

轻轻托起后肢，看清坐骨神经位置，沿脊柱两侧横向切口剪断体壁，去除断口以上肢体与内脏放入污物缸。

剥去后肢皮肤后放入任氏液中备用。

（2）分离两后肢：用粗剪刀纵向剪开脊柱，并剪断两后肢相连的肌肉，一只用于剥制标本，一只放入任氏液中保存。

（3）分离坐骨神经：将后肢标本脊柱端腹面向上，趾端向外侧用蛙钉将标本固定在蛙板上。

第1篇一、实验目的1. 熟悉蟾蜍腓肠肌标本的制备方法。

2. 掌握刺激强度、频率对肌肉收缩的影响。

3. 观察神经肌肉接头兴奋传递和骨骼肌兴奋的电变化与收缩之间的时间关系及其各自特点。

4. 理解神经肌肉兴奋性的生理机制。

二、实验原理蟾蜍腓肠肌标本是生理学实验中常用的实验材料，因其离体组织生活条件易于掌握，且与哺乳类动物生理功能相似。

通过观察蟾蜍腓肠肌在不同刺激强度、频率下的收缩反应，可以了解神经肌肉兴奋性的生理机制，以及刺激与反应之间的关系。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：蟾蜍、任氏液、生理盐水、手术刀、剪刀、镊子、电刺激器、换能器、记录仪等。

2. 实验仪器：显微镜、电刺激器、换能器、记录仪、生理盐水浴槽等。

四、实验步骤1. 制备蟾蜍腓肠肌标本：a. 将蟾蜍处死，用生理盐水冲洗干净。

b. 用手术刀沿脊柱两侧剪开皮肤，暴露腰骶丛神经。

c. 游离坐骨神经和腓肠肌，剪去无关分支。

d. 将腓肠肌和坐骨神经分别结扎，用生理盐水浸泡。

2. 连接仪器：a. 将坐骨神经连接到电刺激器。

b. 将腓肠肌连接到换能器。

c. 将换能器连接到记录仪。

3. 观察刺激强度对肌肉收缩的影响：a. 调整电刺激器的输出强度，从低到高依次刺激坐骨神经。

b. 观察并记录腓肠肌的收缩反应，分析刺激强度与肌肉收缩之间的关系。

4. 观察刺激频率对肌肉收缩的影响：a. 调整电刺激器的输出频率，从低到高依次刺激坐骨神经。

b. 观察并记录腓肠肌的收缩反应，分析刺激频率与肌肉收缩之间的关系。

5. 观察神经肌肉接头兴奋传递和骨骼肌兴奋的电变化与收缩之间的时间关系：a. 观察并记录腓肠肌在刺激前后的电位变化。

b. 分析电位变化与肌肉收缩之间的关系。

五、实验结果与分析1. 刺激强度与肌肉收缩的关系：实验结果显示，随着刺激强度的增加，腓肠肌的收缩幅度也随之增加。

当刺激强度达到一定阈值时，肌肉收缩达到最大幅度。

当刺激强度继续增加时，肌肉收缩幅度不再增加。

2. 刺激频率与肌肉收缩的关系：实验结果显示，随着刺激频率的增加，腓肠肌的收缩幅度逐渐减小。

蟾蜍的坐骨神经一腓肠肌标本的制备及神经干的性质实验报告实验名称蛙的坐骨神经一腓肠肌标本的制备及神经干的性质实验目的要求学习并掌握坐骨神经一腓肠肌标本以及腓肠肌标本制备的方法；学习生理学实验基本的组织分离技术；观察刺激强度，刺激频率与肌肉收缩反应的关系；掌握引导神经干复合动作电位和测定其传导速度的基本原理和方法。

实验材料，仪器，试剂蟾蜍、常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、玻璃分针等）、烧杯、培养皿、纱布、棉线、粗剪刀、蛙板、污物缸、滴管、生理信号采集系统、张力传感器、铁架台、计算机、任氏液等。

实验原理两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织所需要的生活条件比较简单，易于控制和掌握。

因此在生理实验中常用蟾蜍的神经肌肉标本来观察兴奋性、兴奋过程、刺激的规律以及骨骼肌收缩的特点等。

任氏液是—种比较接近两栖动物内环境的液体，可以用来延长青蛙心脏在体外跳动时间、保持两栖类其他离体组织器官生理活性等。

腓肠肌由许多的纤维组成，刺激腓肠肌时，不同的刺激强度会引起肌肉的不同反应。

当刺激强度过小时，不应期肌肉发生收缩反应，此时的刺激为阈下刺激。

而能引起肌肉发生收缩的最小刺激强度，为阈刺激，但全部肌纤维同时收缩时，贝y出现最大的收缩反应。

这时，即使再加大刺激强度，肌肉的收缩强度也不会随之而增大。

可以引起肌肉发生最大收缩反应的最小刺激强度为最适刺激。

肌肉组织对于一个阈上强度的刺激，发生一次迅速地收缩反应，即单收缩。

单收缩的过程分为三个时期，潜伏期、收缩期、舒张期。

刺激坐骨神经能引起腓肠肌产生收缩。

在其他条件不变情况下，不断增大刺激频率可引起肌肉收缩形式发生改变。

若刺激频率较小,两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩和舒张所持续的时间（即单收缩）时，肌肉收缩表现为一连串的单收缩；若增大刺激频率，使两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩的收缩期时间，而小于单收缩时，肌肉呈现不完全强直收缩；若继续增加刺激频率，使两次刺激间隔时间小于一次肌肉收缩的收缩期时间，肌肉则表现出完全强直收缩。