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梅花鹿鹿茸的质量分析及开发利用高铭坤;杜智恒【摘要】梅花鹿茸是我国传统名贵中药,使得在国内的中药材市场上伪劣品、混淆品越来越多.研究表明,粗蛋白、Ca、P、Na、Fe、Ba、Sr、谷氨酸及甘氨酸是鹿茸的特征成分,与鹿茸品质特征密切相关.完善鹿茸鉴定方法,建立综合评价鹿茸质量以及对梅花鹿鹿茸的开发与利用有着极其深远的意义.系统阐述了梅花鹿鹿茸的质量评价及开发利用,为梅花鹿鹿茸的进一步研究及应用提供借鉴.【期刊名称】《中国林副特产》【年(卷),期】2018(000)003【总页数】4页(P80-83)【关键词】梅花鹿鹿茸;质量分析;鉴定方法;开发利用【作者】高铭坤;杜智恒【作者单位】东北农业大学动物科学技术学院 ,哈尔滨 150040;东北农业大学动物科学技术学院 ,哈尔滨 150040【正文语种】中文【中图分类】S879梅花鹿(Cereus nippon)，又称花鹿、鹿，隶属于哺乳纲偶蹄目反刍亚目鹿科鹿属，是国家II级重点保护动物。
其广泛分布于北美大陆、欧亚大陆及非洲大陆。
在我国华北、东北、西南及西北等地皆有分布[1]。
前者习称花鹿茸，后者习称马鹿茸，鹿茸末端呈圆形，外面被有绒状的茸毛，内部为结缔组织和软骨组织，其间布满血管，有血液流通，代谢旺盛，生长速度快[2]。
鹿茸性温、味甘咸，归肝、肾二经[3]。
鹿茸作为药材，始载于《神农本草经》，有壮元阳，补气血，益精髓，强筋骨之功效。
现代医学研究表明，鹿茸具有多种药理学功能，如抗氧化、抗炎镇痛、促进创伤愈合、抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤、改善记忆力、增强机体免疫力等[4-7]。
由于其生理活性强、功效彰、效益显等特点，在我国中药材市场具有巨大潜力和重要地位，在临床上的作用和功效也无可替代。
近几年，由于花鹿茸价格昂贵且在市场中求大于供，使得国内的鹿茸制品在中药材市场上伪劣品、混淆品越来越多，而目前关于鹿茸的品质鉴定体系还不完善。
因此，完善鹿茸鉴定方法，建立综合评价鹿茸质量对花鹿茸的开发与利用有着极其深远的意义。
摘要摘要我国驯鹿种群是３００年前，随鄂温克人为躲避战乱而迁移到此。
这一驯鹿种群在大兴安岭当地的生态环境中，经过数百年的封闭、隔离饲养，形成了其特有的生活习性，也是栖息在最南部少有的驯鹿种群。
我国一直未开展有关驯鹿人工饲养的科学研究工作。
目前，鄂温克猎民饲养驯鹿仍沿用多年来所形成的固有的传统模式，采用半野生饲养方式，对驯鹿进行租放管理。
把驯鹿散放在暂住点的周围，无人看管，自由采食，不进行补饲，不为其筹备饲料，不论天气多么恶劣，驯鹿仍依赖自然采食而维持其生存。
驯鹿的繁殖是采用自然交配，种群处于自然淘汰状态，近交衰退严重。
这使驯鹿的养殖业的发展受到了极大的限制。
驯鹿人工授精技术的应用，可以极大地提高种鹿的质量，使良种基因得到最大限度地传播，种鹿利用率高：避免疾病传播：避免种公鹿争斗而造成损失。
驯鹿是唯一一种雌雄都长茸的鹿。
驯鹿在传统中药中，一直被作为伪品处理。
现今常用的鉴定驯鹿雌雄鹿茸方法有性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定等，在分子水平上的鉴定一直没有人研究。
驯鹿雌雄鹿茸分子鉴定的研究为茸鹿伪品鉴别试剂盒提供了进一步的完善。
我国驯鹿一直是闭锁繁育，种群退化明显。
驯鹿遗传多样性的研究．为我国驯鹿的育种工作提供了分子基础，为以后的分子育种工作提供了可能，也为我们研究群体遗传和遗传分化、系统发育提供了基础资料。
在本次研究中主要分为三个部分。
第一，驯鹿的人工授精。
通过对１１头母驯鹿人工授精的初步研究，结果同期发情和人工授精的结果都很理想，同期发情率和受精率均为１００％。
第二，驯鹿的分子生物学鉴定。
本次试验采用分子生物学鉴定的方法，对雌、雄驯鹿茸的ＳＲＹ基因进行扩增，从扩增的图像可以看到，我们采用的引物能够准确的对雌、雄驯鹿茸进行区分。
应用ＤＮＡＭＡＮ４．０对驯鹿、梅花鹿、马鹿进行聚类分析，结果梅花鹿与马鹿同源性为Ｏ．９９，梅花鹿、马鹿与驯鹿同源性为０．３７。
第三，驯鹿的遗传多样性研究。
本次试验采用２４个引物进行ＲＡＰＤ—ＰＣＲ扩增，在其中筛选出１４个扩增条带清晰引物。
基于COI与SRY序列建立梅花鹿、马鹿及其杂交鹿茸的分子鉴别方法为了建立梅花鹿、马鹿及其杂交鹿茸的特异性PCR鉴别方法。
采集不同来源的梅花鹿、马鹿鹿及其杂交鹿的鹿角或鹿茸样品共48份，其中24份为市场流通的待测样品。
分别利用COI与SRY基因序列作为其父母本的鉴别标记，对已知样品的COI与SRY基因进行扩增、测序，进行同源比对后根据其变异位点设计特异鉴别引物，分别基于COI与SRY基因建立对梅花鹿、马鹿及其杂交鹿的鹿茸的特异PCR鉴定方法，并随机对市场流通的24份待测鹿茸样品进行鉴别分析。
该实验所构建双位点特异PCR体系，基于COI的鉴别位点，可通过PCR扩增获得232 bp的梅花鹿特异片段，而产生518 bp的马鹿特异片段；而基于SRY 的鉴别位点，通过PCR扩增获得803 bp的梅花鹿特异片段，而产生425 bp的马鹿特异片段。
随机抽取市场流通中的24个待测鹿茸样品，经鉴定有3个样品屬于马·花杂交的鹿茸样品。
该实验建立对梅花鹿、马鹿及其杂交鹿的鹿茸的PCR 鉴别方法简便、可靠。
标签：梅花鹿；马鹿；杂交；双位点特异PCR体系；COI；SRY[Abstract] For rapid identification of Cervus nippon，C. elaphus and their hybridize samples，the specific PCR for mutual authentication of them was established based on the SNPs in COI and SRY sequence. C. nippon，C. elaphus and their hybridize samples were collected from different origins，total DNA of 24 identified samples were extracted，and the COI and SRY gene was seqenced. SNPs in the COI and SRY sequences of the samples were found by Clustul X 2.1 program. Primers for identifying C. nippon and C. elaphus were designed according to the SNP site，two multi-PCR reaction system were established to identify them. In addition，24 samples which were randomly collected in different herbal medicine market were identified. The band special for C. nippon （232 bp）and band special for C. elaphus （518 bp）based on COI sequence，and the band special for C. nippon （803 bp）and band special for C. elaphus （425 bp）based on SRY sequence，were found using multi-PCR reaction，and three of the twenty-four samples were identified as the hybridize samples. The multi-PCR reaction system could be used to identify C. nippon，C. elaphus and their hybridize samples .[Key words] Cervus nippon；Cervus elaphus；hybridize；multi-PCR reaction system；COI；SRY鹿茸是我国传统名药之一，始载于《神农本草经》，具有促进生长发育、强壮身体、抗炎、免疫调节、抗衰老、促进创伤愈合等功能[1-4]。
基于熔解曲线分析技术的鹿茸药材分子鉴别高分辨率熔解曲线（high resolution melting，HRM）是一种主要用于基因分型和突变扫描的分子诊断技术，在中药真伪鉴定中有着广泛应用前景。
文章将高分辨率熔解曲线技术应用于鹿茸真伪鉴别，利用COⅠ序列，在退火温度为60 ℃，45个循环数的条件下，建立正品鹿茸药材熔解曲线模型，并筛选确定其DNA模板浓度、引物浓度、Mg2+浓度的适宜范围。
结果表明，鹿茸药材在模板DNA质量浓度为10～100 mg·L-1、引物浓度0.2 μmol·L-1，Mg2+浓度 2.0 mmol·L-1的条件下，梅花鹿熔解曲线为双峰，其Tm分别为（81.96±0.07），（84.51±0.03）℃;马鹿熔解曲线为双峰，其Tm为（82.58±0.13），（85.95±0.05）℃。
该方法可以实现简单、快速、高通量、可视化的鹿茸药材真伪鉴定。
标签：高分辨熔解曲线;鹿茸药材;分子鉴定Molecular identification of hairy antler by analysis of high resolution meltingCHEN Kang1，2，JIANG Chao1，YUAN Yuan1*，HUANG Lu-qi1，JIN Yan1（1. State Key Laboratory of Dao-di Herbs，National Resource Center for Chinese Materia Medica，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China;2. Anhui University of Chinese Medicine，Hefei 230038，China）[Abstract]High resolution melting （HRM），an important technology for genotyping and mutation scanning，has broad prospects in the authenticity of traditional Chinese medicine. This paper selected universal COⅠprimers and used HRM to establish a new method for authenticity of Hairy Antler. PCR was conducted at the annealing temperature of 60 ℃and 45 cycles. The range of the DNA template concentration，the primer concentration and the Mg2+ ion concentration were further optimized. The results showed that the Tm values of Cervus nippon were （81.96±0.07），（84.51±0.03）℃and Cervus elaphus was（82.58±0.13），（85.95±0.05）℃with 10-100 mg·L-1 DNA template，0.2 μmol·L-1 primer，2.0 mmol·L-1 Mg2+. This method can authenticate of hairy antler and is simple，fast，high-throughput，visualization.[Key words]high resolution melting; hairy antler; molecular identificationdoi：10.4268/cjcmm20150409鹿茸始载于《神农本草经》，具有壮肾阳、益精血、强筋骨、调冲任、托疮毒的功效，能够提高机体工作能力、减轻疲劳，改善睡眠、饮食及蛋白质代谢障碍，增加肾脏利尿功能[1]。
鹿茸化学成分的研究进展
王玉;张辉
【期刊名称】《吉林中医药》
【年(卷),期】2006(026)012
【摘要】鹿茸为脊索动物门哺乳纲鹿科的动物梅花鹿Cervus Nippon Temminck 或马鹿Cervuselaphus L．的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角。
鹿茸始载于《神农本
草经》，列为中品，是我国的传统名贵中药之一。
历代本草对鹿茸的治疗作用均有记载。
鹿茸具有壮肾阳，益精血，强筋骨，调冲任，托疮毒等作用。
用于阳痿滑精，宫冷不孕，赢瘦，神疲，畏寒，眩晕耳鸣耳聋，腰脊冷痛，筋骨痿软，崩漏带下，阴疽不敛…。
现将近年来公开发表的文献，主要从化学方面进行简单的综述如下：【总页数】3页(P73-75)
【作者】王玉;张辉
【作者单位】长春中医药大学药学院,吉林,长春,130021;长春中医药大学药学院,吉林,长春,130021
【正文语种】中文
【中图分类】R282.74
【相关文献】
1.鹿茸化学成分及提取方法研究进展 [J], 侯召华;张宇;金春爱;赵昌德;孙晓东;崔松焕
2.鹿茸的化学成分及生物活性研究进展 [J], 裴纹萱;李飞;董玲
3.鹿茸化学成分与药理作用研究进展 [J], 薄士儒;李庆杰;王春雨;袁相恋;王全凯
4.鹿茸炮制方法、化学成分以及药理作用研究进展 [J], 王亚苹;张凯月;张辉;高颖
5.梅花鹿茸的化学成分和生理活性研究进展 [J], 黄伟;杨世海;鞠贵春
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马鹿茸、梅花鹿茸不同部位无机元素含量测定分析董万超;刘春华;赵立波;赵伟刚;张宝香;张秀莲;赵景辉;李江【期刊名称】《特产研究》【年(卷),期】2004(026)003【摘要】目的测定分析中国新疆塔里木马鹿茸、东北马鹿茸和东北梅花鹿茸不同部位中无机元素含量.方法采用原子吸收光谱法和电感耦合等离子体发射光谱法.结果从所测鹿茸各部位均检测出26种无机元素.其中包括5种人体必需的常量元素Ca、P、Na、Mg、K和11种人体必需的微量元素Fe、Cr、Cu、Sr、Ni、Zn、Mo、Co、Mn、V、Sn.结论各鹿茸不同部位的无机元素种类相同,同一元素在同一鹿茸不同部位的含量有一定差异;同一元素在不同鹿茸相同部位中的含量也有差异.【总页数】5页(P32-36)【作者】董万超;刘春华;赵立波;赵伟刚;张宝香;张秀莲;赵景辉;李江【作者单位】中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,吉林,132109;新疆塔里木鹿业有限公司,新疆,塔里木,841000【正文语种】中文【中图分类】S825;R927.2【相关文献】1.东北梅花鹿茸不同部位多糖与无机元素质量分数的差异 [J], 汪树理;孙继红;李晓红;王艳梅2.梅花鹿茸、马鹿茸不同部位氨基酸、总磷脂、钙、磷含量的研究 [J], 陈丹3.不同地区梅花鹿茸中无机元素含量的对比分析 [J], 王泽帅;陆雨顺;李珊珊;姜辉;孙印石4.花鹿茸及马鹿茸不同部位精脒的含量测定 [J], 董方言;弥宏;陈颖;谷伟玲;胡茁5.广州产梅花鹿茸和马鹿茸不同部位氨基酸含量的比较 [J], 汪树理;杨保田;王艳梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
