华东理工大学仪器分析高效液相色谱法3
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高效液相色谱习题一、填空题1.高效液相色谱分析是将流动相用高压泵输送,使压力高达 5 M Pa以上,并采用新型的化学键合固定相,是分离效率很高的液相色谱法。
2.高效液相色谱法的特点是分离性能高、分析速度快、检测器灵敏度高、应用范围广。
3.高效液相色谱法和气相色谱法的共同之处是分离功能、分析功能、在线分析。
4.高效液相色谱分析根据分离机理不同可分为四种类型,即液固色谱、液液色谱、键合相色谱、凝胶色谱。
5.高效液相色谱中的液一液分配色谱采用的新型固定相叫化学键合相,它是利用化学方法将固定液官能团键合在载体表面上的。
6.通常把固定相极性大于流动相极性的一类色谱称为正相色谱。
反之称为反相色谱。
7.高效液相色谱仪通常由储液器、输液泵、梯度淋洗器、进样器、色谱柱、检测器、色谱工作站七部分组成。
8.高效液相色谱仪中使用最广泛的检测器为紫外检测器,另外还有折光检测器、荧光检测器等等。
9.高效液相色谱主要用于分析沸点高的、分子量大的、受热易分解的以及具有生理活性物质的分析。
二、判断题√、√、⨯、⨯、√、√、⨯、√、⨯、√、⨯、√、√、⨯、√、⨯、⨯、√、⨯、√、√、⨯、⨯、⨯、⨯、⨯、⨯、⨯、√、⨯1.液一液色谱流动相与被分离物质相互作用,流动相极性的微小变化,都会使组分的保留值出现较大的改变。
(√)2.利用离子交换剂作固定相的色谱法称为离子交换色谱法。
(√)3.紫外吸收检测器是离子交换色谱法通用型检测器。
(×)4.检测器性能好坏将对组分分离产生直接影响。
(×)5.高效液相色谱适用于大分子,热不稳定及生物试样的分析。
(√)6.高效液相色谱中通常采用调节分离温度和流动相流速来改善分离效果。
(×)7.键合固定相具有机械性能稳定,可使用小粒度固定相和高柱压来实现快速分离。
(√)8.在液相色谱中为避免固定相的流失,流动相与固定相的极性差别越大越好。
(×)9.正相分配色谱的流动相极性大于固定相极性。
高效液相色谱分析原理及流程高效液相色谱以经典的液相色谱为基础,是以高压下的液体为流动相的色谱过程。
通常所说的柱层析、薄层层析或纸层析就是经典的液相色谱。
所用的固定相为大于100um的吸附剂(硅胶、氧化铝等)。
这种传统的液相色谱所用的固定相粒度大,传质扩散慢,因而柱效低,分离能力差,只能进行简单混合物的分离。
而高效液相所用的固定相粒度小(5um-10um)、传质快、柱效高。
高效液相色谱法(HPLC)是20世纪60年代后期发展起来的一种分析方法。
近年来,在保健食品功效成分、营养强化剂、维生素类、蛋白质的分离测定等应用广泛。
世界上约有80%的有机化合物可以用HPLC来分析测定。
高效液相色谱分析原理(一)高效液相色谱分析的流程由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统,然后输出,经流量与压力测量之后,导入进样器。
被测物由进样器注入,并随流动相通过色谱柱,在柱上进行分离后进入检测器,检测信号由数据处理设备采集与处理,并记录色谱图。
废液流入废液瓶。
遇到复杂的混合物分离(极性范围比较宽)还可用梯度控制器作梯度洗脱。
这和气相色谱的程序升温类似,不同的是气相色谱改变温度,而HPLC改变的是流动相极性,使样品各组分在最佳条件下得以分离。
(二)高效液相色谱的分离过程同其他色谱过程一样,HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。
它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。
开始样品加在柱头上,假设样品中含有3个组分,A、B和C,随流动相一起进入色谱柱,开始在固定相和流动相之间进行分配。
分配系数小的组分A不易被固定相阻留,较早地流出色谱柱。
分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长,较晚流出色谱柱。
组分B的分配系数介于A,C之间,第二个流出色谱柱。
若一个含有多个组分的混合物进入系统,则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱,达到分离之目的。
不同组分在色谱过程中的分离情况,首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异,这是热力学平衡问题,也是分离的首要条件。
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仪器分析练习题(二)——高效液相色谱法部分一、选择题1。
分离一组高聚物(分子量>2000)时最宜采用的色谱方法是( D )A. 气固色谱B. 反相键合相色谱C。
离子交换色谱 D. 凝胶色谱2. Si—O—Si-C型的18烷基固定相可用于( B )A。
正相色谱 B。
反相色谱C.离子交换色谱 D。
空间排阻色谱3。
反相离子对色谱法分离试样组分时,随着对离子浓度的增大,组分的保留时间( A )。
A。
增大 B。
减小C。
不变 D. 不能确定4. 下列试剂中可作为正相色谱流动相的是( C D )。
A. 水 B。
甲醇C.乙腈 D. 正已烷5. 在惰性担体表面健合上基团-SO3ˉ后的离子交换树脂称为( B )。
A.强碱性阳离子交换树脂 B. 强酸性阳离子交换树脂C.强碱性阴离子交换树脂 D. 强酸性阴离子交换树脂6. 分离一组高沸点的物质时最宜而是采用的色谱方法是( D )。
A。
气液色谱 B。
气固色谱C. 毛细管气相色谱D. 液相色谱7。
应用正相色谱法分析一组组分时,组分的出峰顺序为( A ).A。
极性小的组分先出峰 B. 极性大的组分先出峰C. 分子量小的先出峰D. 分子量大的先出峰8. 火焰光度检测器是( C )检测器。
A. 通用型、质量型 B。
通用型、浓度型C。
选择型、质量型 D。
选择型、浓度型9。
分析化学高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)是一种分离和测定化学物质的重要分析方法,具有高分离效率、高灵敏度、宽线性范围和广泛的应用范围等优点。
下面将从仪器原理、工作原理和应用等方面对HPLC进行详细分析。
一、仪器原理:HPLC仪器主要由溶剂系统、进样器、柱温箱、液相分离柱、检测器和数据处理系统等组成。
1.溶剂系统:通常采用双头柱泵供应稳定的流动相。
溶剂通过比例调节阀混合形成所需的溶剂混合物。
2.进样器:它将少量的样品溶液注入到流动相中,通常使用自动进样器进行样品进样。
3.柱温箱:控制流动相的温度,以提高分离的效果。
柱温一般在室温到高温之间进行控制。
4.液相分离柱:是HPLC的核心部分,其中填充有液相固定相。
根据不同的分析目标和样品性质,可以选择不同类型的液相柱,如反相色谱柱、离子交换柱等。
5.检测器:常见的检测器有紫外-可见光谱检测器(UV-VIS)、荧光检测器、折射率检测器等。
根据不同化学物质的性质和要求,可以选择不同的检测器。
6.数据处理系统:包括记录和处理仪器所得到的信号。
常见的数据处理系统有计算机数据采集系统,可以进行数据的分析和处理,生成相应的色谱图。
二、工作原理:HPLC通过运用固定相与移动相之间的亲疏水性差异来实现化学物质的分离。
样品在液相中与固定相发生相互作用,不同化合物的相互作用程度不同,因此在液相中呈现出不同的流动速度。
根据样品分离的顺序,不同的化合物在一定时间内通过液相分离柱,进而被检测器检测到。
HPLC中的流动相一般由溶剂和缓冲液组成,并通过色谱柱中的固定相将待测试的物质分离开来。
其中,缓冲液(通常称为背后电解质)可以调节流动相的pH值,改变待测试物质的性质,从而影响其分离。
三、应用:HPLC广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全和生化分析等领域。
1.药物分析:HPLC可以用于药物分析中,以检测药物的含量、纯度和杂质成分。
药物的测定可以通过校准曲线来进行分析。
2.环境检测:HPLC可以用于环境监测中,例如水质分析、大气污染物分析等。