下载文档原格式
临床检验主管检验师临床免疫学和免疫检验-荧光免疫技术复习资料汇编一、概述荧光物质在吸收激发光的能量后，使原来处于基态的电子跃迁到激发态，当其回复至基态时，激发态的电子以发射光的形式释放出能量，这种发射光称为荧光。
（一）荧光荧光物质在吸收激发光的能量后，使原来处于基态的电子跃迁到激发态，当其回复至基态时，激发态的电子以发射光的形式释放出能量，这种发射光称为荧光。
荧光物质（二）其他荧光物质铕（Eu3＋）为三价稀土镧系元素，其螯合物经激发后也可发射特征性的荧光，激发光波长范围宽，发射光波长范围窄，荧光衰变时间长，最适合用于时间分辨荧光免疫测定。
二、荧光抗体技术荧光抗体技术是以荧光素标记抗体，与切片中组织或细胞抗原反应，经洗涤分离后，在荧光显微镜下观察呈现特异性荧光的抗原抗体复合物及其部位。
荧光抗体技术包括荧光抗体制备、标本制作、荧光抗体染色和荧光显微镜检查等内容。
（一）荧光抗体的制备1.抗体要求：用于标记的抗体应该具有高特异性和高亲和力。
2.荧光素要求：①与蛋白质结合后不易解离，而未结合者易于清除；②荧光效率高；③荧光色泽与背景组织对比鲜明；④不影响蛋白质原有的生化与免疫性质；⑤标记方法简单、安全无毒；⑥与蛋白质的结合物稳定，易于保存。
3.抗体的荧光素标记：搅拌法和透析法。
4.荧光素标记抗体的纯化：去除未结合的游离的荧光素。
可采用透析法或层析分离法。
5.荧光抗体的鉴定：荧光素与蛋白质的结合比率（组织切片的荧光抗体染色以F/P＝1.5为宜，用于活细胞染色以F/P＝2.4为宜）、抗体效价、抗体特异性。
6.荧光抗体的保存：小量分装，-20℃冻存可保存1～2年。
真空干燥后可长期保存。
稀释后的抗体不宜长时间保存，在4℃可保存1～3天。
（二）标本的制作临床标本主要有组织、细胞和细菌三大类。
制作标本要力求保持抗原的完整性、切片要求尽量薄、干扰物质要充分洗去、安全。
（三）荧光抗体染色与结果判断1.直接法用特异荧光抗体直接滴加于标本上，使之与抗原发生特异性结合。
第十二章固相膜免疫测定
一、A1
1、在使用胶体金斑点金免疫渗滤试验检测样本时，发现胶体金检测质控正常，检测结果为阴性，而ELISA 检测为阳性，可能的原因是（）。
A、样本中待检物含量低，胶体金方法灵敏度不够
B、ELISA试剂的非特异反应
C、胶体金试剂不稳定
D、胶体金方法比ELISA特异性好
E、ELISA试剂灵敏度过高
2、下列有关胶体金特性的叙述中，错误的是（）。
A、胶体金颗粒稳定、均匀地分散悬浮在液体中
B、电解质可使胶体金沉淀
C、较大颗粒的胶体金是橙黄色的
D、蛋白质有保护胶体金稳定性的作用
E、胶体金颗粒越小，其吸收波长越短
3、当前免疫电镜技术中应用最广的标记物是（）。
A、辣根过氧化物酶
B、硝酸银
C、胶体金
D、铁蛋白
E、SPA
答案部分
一、A1
1、
【正确答案】A
【答案解析】在使用胶体金斑点金免疫渗滤试验检测样本时，由于样本中待检物含量低，胶体金方法灵敏度不够等原因，胶体金检测质控正常，检测结果为阴性，而ELISA检测为阳性。
【答疑编号100065979】
2、
【正确答案】C
【答案解析】胶体金的呈色性为：较大颗粒的胶体金呈紫红色；中等大小的胶体金是酒红色；最小的胶金是橙黄色。
故C选项说法错误。
【答疑编号100065971】
3、
【正确答案】C
【答案解析】胶体金标记免疫电镜技术是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质，使其与抗体相吸附，从而将抗体标记。
【答疑编号100065967】。
科目：1-基本知识；2-相关专业知识；3-专业知识；4-专业实践能力临床免疫学和免疫学检验部分单元细目要点要求科目一、概论1．基本概念（1)免疫概念熟练掌握1（2)免疫功能熟练掌握1（3)免疫学检验及应用熟练掌握32．免疫应答（1)概念熟练掌握1（2)免疫应答基本过程熟练掌握1（3)体液免疫应答掌握1（4)细胞免疫应答掌握1（5)免疫应答的调节了解13．免疫组织及免疫器官（1)免疫系统概念熟练掌握（2)中枢免疫器官掌握1（3)外周免疫器官掌握14免疫细胞（1)T细胞功能及表面标志掌握1（2)B细胞功能及表面标志掌握1（3)NK细胞特点了解1（4)单核-巨噬细胞了解5．免疫球蛋白（1)概念熟练掌握1（2)免疫球蛋白化学组成及结构掌握1（3)各类免疫球蛋白特征与功能①IgG②IgM③IgA④IgE⑤IgD 熟练掌握熟练掌握熟练掌握掌握了解11111（4)免疫球蛋白血清型了解1（5)免疫球蛋白生物学活性了解16．补体（1)补体概念熟练掌握1（2)补体系统概念熟练掌握17．细胞因子（1)概念掌握1（2)细胞因子分类掌握1（3)细胞因子受体及分类了解18．免疫学检验（1)临床免疫学内涵熟练掌握2（2)免疫学检验及应用熟练掌握2二、抗原抗体反应1．概述概念熟练掌握12．抗原抗体反应原理（1)抗原抗体结合力掌握1（2)抗原抗体亲和性和亲和力掌握1（3)亲水胶体转化为疏水胶体掌握13．抗原抗体反应的特点（1)特异性熟练掌握1（2)比例性熟练掌握1（3)可逆性熟练掌握1（4)阶段性熟练掌握14．抗原抗体反应的影响因素（1)抗原抗体的生物学因素熟练掌握1（2)电解质、酸碱度、温度、时间熟练掌握15．抗原抗体反应的类型基本类型熟练掌握3三、免疫原及抗血清制备1．免疫原制备（1)颗粒性抗原的制备掌握3（2)可溶性抗原的制备①组织和细胞粗抗原制备②超速离心分离法③选择性沉淀法④凝胶过滤⑤离子交换层析⑥亲和层析⑦免疫球蛋白片段⑧纯化抗原的鉴定了解了解了解了解了解了解了解了解3 3 3 3 3 3 3 3（3)半抗原的制备①半抗原的概念②载体的选择③半抗原与载体的连接掌握掌握掌握3 3 3（4)佐剂种类和作用了解32．抗血清制备（1)免疫动物的选择掌握3（2)免疫方法与途径掌握3（3)免疫血清的分离、鉴定和保存掌握33．抗体的纯化和鉴定（1)特异性IgG抗体的纯化了解3（2)单价特异性抗血清了解3四、单克隆抗体及基因工程抗体的制备技术1．概念（1)单克隆抗体熟练掌握3（2)多克隆抗体熟练掌握1（3)基因工程抗体掌握12．杂交瘤技术基本原理（1)基本原理掌握3（2)B细胞杂交瘤技术掌握3（3)T细胞杂交瘤技术了解3（4)阳性杂交瘤细胞的克隆化培养了解33．杂交瘤抗体的制备技术（1)单克隆抗体的产生了解3（2)单克隆抗体的纯化了解3（3)单克隆抗体的性质鉴定掌握34．基因工程抗体（1)人源化抗体了解1（2)小分子抗体了解1（3)抗体融合蛋白了解1（4)双特异性抗体了解1（5)抗体库技术及应用了解2五、凝集反应1．概述（1)凝集反应的概念熟练掌握1（2)凝集反应的特点熟练掌握12．直接凝集反应（1)玻片凝集反应及应用熟练掌握3（2)试管凝集反应及应用熟练掌握33．间接凝集反应（1)间接凝集反应、反向间接凝集、间接凝集抑制试验及用途熟练掌握4（2)胶乳凝集试验及用途熟练掌握4（3)明胶凝集试验及用途掌握4（4)抗人球蛋白试验及用途熟练掌握4（5)协同凝集试验及用途掌握4（6)自身红细胞凝集试验及用途了解4六、沉淀反应1．概念沉淀反应熟练掌握32．液相内沉淀反应（1)絮状沉淀反应熟练掌握4（2)环状沉淀反应掌握4（3)免疫浊度试验熟练掌握3．凝胶内沉淀反应（1)单向扩散试验①试管法②平板法熟练掌握熟练掌握4 4（2)双向扩散试验①试管法②平板法掌握熟练掌握4 44．免疫浊度法（1)免疫浊度法原理熟练掌握1（2)免疫透射比浊法原理及用途熟练掌握3（3)免疫速率反射比浊法原理及用途熟练掌握3（4)免疫胶乳浊度法原理及用途了解3七、免疫电泳技术1．概述（1)免疫电泳技术概念掌握1（2)免疫电泳技术基本原理掌握32．免疫电泳技术（1)对流免疫电泳掌握4（2)火箭免疫电泳了解4（3)免疫电泳熟练掌握4（4)免疫固定电泳掌握43．应用医学检验中的应用熟练掌握2八、放射免疫技术1．概述（1)放射免疫技术概念熟练掌握3（2)放射免疫技术原理熟练掌握3（3)放射免疫技术特点掌握3（4)基本类型熟练掌握2（5)常用的放射性核素掌握22．放射免疫分析（1)基本原理掌握3（2)基本方法掌握43．免疫放射分析（1)基本原理掌握3（2)基本方法掌握44．应用实际应用熟练掌握4九、荧光免疫技术1．荧光的基本知识（1)荧光现象了解1（2)荧光技术中有关的概念和参数掌握1（3)荧光物质掌握12．荧光抗体技术（1)荧光抗体的制备和鉴定掌握4（2)免疫荧光显微技术熟练掌握43．荧光免疫测定（1)时间分辨荧光免疫测定熟练掌握4（2)荧光偏振免疫测定熟练掌握4（3)流式细胞术熟练掌握4（4)临床应用掌握4十、酶免疫技术1．酶免疫技术的特点（1)酶和酶作用底物熟练掌握2（2)酶标记抗体或抗原熟练掌握2（3)固相载体熟练掌握2（4)免疫吸附剂熟练掌握22．酶免疫技术分类（1)均相酶免疫测定熟练掌握4（2)异相酶免疫测定熟练掌握43．酶联免疫吸附试验（ELISA) （1)基本原理熟练掌握3（2)方法类型及反应原理熟练掌握44．膜载体的酶免疫测定（1)斑点酶免疫吸附试验掌握4（2)免疫印记法熟练掌握4（3)斑点免疫渗滤试验掌握4（4)斑点免疫层析试验掌握45．临床应用熟练掌握4十一、生物素-亲和素免疫放大技术1．生物素-亲和素系统的特点（1)灵敏度和特异性掌握1（2)稳定性和适用性掌握12．生物素的理化性质与标记（1)生物素及其活化了解1（2)生物素标记蛋白质了解23．亲和素、链霉亲和素理化性质与标记（1)亲和素及其活化了解1（2)链霉亲和素及其活化了解1（3)亲和素（或链霉亲和素)的标记了解24．生物素-亲和素系统的应用（1)生物素-亲和素系统基本类型及原理掌握3（2)生物素-亲和素系统在酶免疫测定中应用掌握4十二、免疫组织化学技术1．免疫组织化学技术的特点（1)标本的处理掌握2（2)抗体的处理与保存掌握2（3)免疫染色掌握3（4)设立对照试验掌握2（5)免疫组化的结果判断掌握32．酶免疫组织化学技术（1)酶标记抗体免疫组化染色法掌握4（2)非标记抗体免疫酶组化染色法掌握4（3)酶标记亲和素-生物素技术掌握43．荧光免疫组织化学技术（1)直接法掌握4（2)间接法掌握4（3)补体法了解4（4)双标记荧光免疫法了解44．免疫金（银)组织化学技术（1)免疫胶体金标记的原理掌握1（2)免疫胶体金标记物制备的特点掌握2（3)免疫金（银)组织化学染色法掌握45．免疫标记电镜技术（1)免疫标记电镜技术的原理熟练掌握1（2)常用（铁蛋白标记、酶标记、胶体金标记)的免疫标记电镜技术掌握46．临床应用掌握3十三、免疫细胞的分离及检测技术1．免疫细胞的分离（1)外周血单个核细胞分离掌握3（2)淋巴细胞的分离熟练掌握3（3)T细胞亚群的分离掌握3（4)分离细胞的保存及活力测定掌握32．淋巴细胞表面标志的检测（1)T细胞表面标志的检测熟练掌握4（2)B细胞表面标志的检测熟练掌握4（3)NK细胞表面标志的检测熟练掌握43．淋巴细胞功能检测技术（1)T细胞功能的检测了解4（2)B细胞功能的检测了解4（3)NK细胞功能的检测了解44．免疫细胞检测的临床意义掌握十四、吞噬细胞功能检测及应用1．中性粒细胞功能的检测（1)细胞运动功能的检测了解3（2)吞噬和杀菌功能的检测了解32．巨噬细胞功能的检测（1)炭粒廓清试验了解3（2)吞噬功能检测了解3（3)巨噬细胞溶酶体酶的测定了解3（4)巨噬细胞促凝血活性测定了解33．临床应用掌握4十五、细胞因子的测定技术1．细胞因子的概述（1)概念掌握1（2)共同特性掌握1（3)类型掌握22．测定方法及应用（1)生物学测定方法了解4（2)免疫学测定方法掌握4（3)分子生物学测定方法掌握4（4)临床应用掌握4十六、细胞黏附分子的测定技术1．细胞边面黏附分子的测定方法类型了解32．可溶性黏附因子的测定方法类型了解33．临床应用了解4十七、免疫球蛋白检测及应用1．免疫球蛋白（Ig)的概述（1)Ig的概念熟练掌握1（2)Ig的化学结构了解1（3)Ig的血清型掌握1（4)Ig的生物学活性掌握1（5)五种Ig的特性掌握12．Ig测定及临床意义（1)IgG、IgA、IgM的测定及临床意义掌握4（2)IgD的测定及临床意义掌握4（3)IgE测定及临床意义掌握43．M蛋白的检测及意义（1)M蛋白的概念掌握2（2)M蛋白测定方法掌握4（3)意义掌握44．冷球蛋白测定（1)冷球蛋白的特性掌握2（2)意义掌握4十八、循环免疫复合物（CIC)检测及应用1．抗原特异性CIC（1)概念了解3（2)测定方法了解（3)特异性CIC检测方法（4)双特异性CIC检测方法2．非抗原特异性CIC （1)测定方法了解3（2)应用了解4十九、补体检测及应用1．概述（1)补体的组成及命名熟练掌握1（2)补体的理化性质熟练掌握1（3)补体的生物学功能熟练掌握12．补体的活化途径（1)经典途径掌握1（2)替代途径掌握1（3)MBL途径了解1（4)补体激活的调节了解13．有关补体测定的试验（1)CH50测定熟练掌握4（2)补体结合试验掌握4（3)单个补体成分测定①免疫溶血法②免疫化学法掌握掌握3 34．补体测定的应用（1)补体测定的临床应用熟练掌握4二十、自身抗体检测及应用1．概念（1)自身免疫熟练掌握2（2)自身免疫病熟练掌握2（3)自身抗体熟练掌握22．自身抗体的特性概念熟练掌握23．常见自身抗体的检测（1)类风湿因子①概念②检测方法③临床应用熟练掌握熟练掌握熟练掌握243（2)抗核抗体①概念②检测方法③常见荧光图形及临床意义④抗双链DNA的检测熟练掌握熟练掌握熟练掌握熟练掌握2444（3)抗ENA抗体①概念②检测方法③临床应用掌握熟练掌握掌握243（4)抗中性粒细胞胞浆抗体①概念②检测方法③临床应用了解掌握了解243（5)抗心磷脂抗体①概念②检测方法③临床应用了解掌握了解243（6)抗平滑肌抗体了解4（7)抗角蛋白抗体了解4（8)抗乙酰胆碱受体抗体了解4（9)抗线粒体抗体了解44．自身抗体检测的临床应用（1)自身抗体检测的一般原则了解2（2)实验室方法的选择及结果的确认了解4二十一、MHC与HLA检测及应用1．MHC的一般特性（1)概念掌握1（2)MHC-I类分子了解1（3)MHC-II 类分子了解1（4)MHC-III类分子①概念②原理③技术要点④临床应用了解了解掌握了解了解122432.HLA分型（1)细胞学分型法①概念②单向MLC③双向MLC掌握掌握掌握244（2)分子生物学分型法①概念②聚合酶链反应与SSP分型法③PCR-SSO分型法④RFLP与PCR-RFLP分型法⑤PCR-SSCP分型法⑥SBT分型法了解了解了解了解了解了解2444443．HLA分型的实际应用（1)HLA与器官移植掌握3（2)HLA与自身免疫性疾病掌握3（3)HLA与输血反应掌握3（4)HLA与法医鉴定掌握3二十二、流式细胞仪分析技术及应用1．概述概念掌握22．流式细胞仪的分析及分选原理（1)工作原理掌握2（2)散射光的测定了解2（3)荧光测量了解2（4)细胞分选原理了解23．数据的显示与分析参数与数据显示方式了解24．流式细胞仪免疫分析的技术要求（1)免疫检测样品制备了解4（2)免疫分析中常用的荧光染料与标记染色了解2（3)流式细胞免疫学技术的质量控制了解25．流式细胞术在免疫学检查中的应用（1)淋巴细胞及其亚群分析掌握1（2)淋巴细胞功能分析了解2（3)淋巴造血系统分化抗原及白血病免疫分型了解2（4)肿瘤耐药基因分析了解2（5)在AIDS病检测中的分析掌握3（6)自身免疫性疾病相关HLA抗原分析了解3二十三、免疫自动化仪器分析1．概述（1)免疫测定的概念熟练掌握2（2)自动化仪器的技术指标熟练掌握22．自动化免疫比浊分析技术（1)概念掌握3（2)散射免疫比浊分析掌握2（3)定时散射比浊分析了解2（4)速率散射比浊分析熟练掌握2（5)免疫透射比浊分析熟练掌握2（6)免疫浊度分析的注意事项掌握43．化学发光自动免疫分析（1)基本原理掌握1（2)化学发光免疫分析中的标记物质及类型掌握2（3)化学发光免疫分析的类型熟练掌握3（4)化学发光免疫分析在临床免疫检测中的应用掌握44．荧光免疫自动化分析（1)时间分辨荧光免疫测定掌握3（2)荧光偏振免疫测定了解3（3)荧光酶免疫分析了解3（4)在临床免疫检测中的应用掌握4二十四、免疫学检验的质量管理1．免疫学检验的质量管理的基本要求（1)免疫学检验的质量管理的基本目的熟练掌握1（2)分析前阶段的质量保证熟练掌握（3)检测方法选择原则熟练掌握3（4)标准品的正确使用熟练掌握3（5)SOP文件的建立熟练掌握3（6)室内质控熟练掌握3（7)室间质评熟练掌握3（8)实验室管理要求熟练掌握22．咨询服务（1)日常咨询服务掌握2（2)建立正常参考范围熟练掌握2（3)检验项目临床应用主要评价指标掌握2二十五、超敏反应性疾病及其免疫检测1．概述概念熟练掌握32．I型超敏反应（1)概念熟练掌握。
第十二章固相膜免疫测定第一节概述固相膜免疫测定以微孔膜作为固相。
固相膜的特点在于其多孔性、非共价键高度吸附抗体或抗原和易于漂洗等，固相膜像滤纸一样，可被液体穿过流出，液体也可以通过毛细管作用在膜上向前移行。
标记物可用酶或各种有色微粒子，如彩色胶乳、胶体金或胶体硒等。
一、常用的固相膜固相膜免疫测定中常用的膜为硝酸纤维素（NC）膜以及玻璃纤维素（fiberglass）膜、尼龙（nylon）膜、聚偏氟乙烯（PVDF）膜等。
其中最常用为NC膜。
二、固相膜的技术要求1.孔径：用于穿流法的膜一般选择0.4μm左右，用于横流法的膜可选择5～10μm。
2.流速：孔径大，流速快。
3.蛋白质结合力：吸附力很强，以μg/cm2表示。
4.均一性：优质的膜应具有良好的均一性，这样才能保证试剂批内的均一性。
第二节免疫金标记技术利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标志物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测。
这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色（IGSS）。
一、胶体金的制备（一）制备原理：一般采用还原法，常用的还原剂有枸橼酸钠、鞣酸、维生素C、白磷、硼氢化钠等。
向金溶液内加入还原剂，使金离子还原成金原子，形成金颗粒悬液，也称金溶胶。
（二）技术要点：金溶胶的光散射性与溶胶颗粒的大小密切相关，一旦颗粒大小发生变化，光散射也随之发生变异，产生肉眼可见的显著的颜色变化，这就是金溶胶用于免疫沉淀或免疫凝集试验的基础。
（三）注意事项1.玻璃容器的清洁：玻璃表面污染会干扰胶体金颗粒的生成，用前经过强酸洗，后硅化。
2.试剂、水质和环境：氯金酸极易吸潮，对金属有强烈的腐蚀性，不能使用金属药匙，避免接触天平1%水溶液在4℃可稳定数月不变，实验用水一般用双蒸馏水，实验室中的尘粒要尽量减少，否则实验的结果将缺乏重复性。
二、免疫金制备（一）制备原理：蛋白质被吸附到胶体金颗粒表面而结合的过程。
临床医学检验技师考试大纲-免疫学和检验【前言】以下是我为大家整理的临床医学检验技师考试大纲之免疫学和检验，仅供参考！科目：1-基本学问2-相关专业学问3-专业学问4-专业实践力量单元细目要点要求科目一、概论 1.免疫学简介（1）免疫学概念与免疫应答娴熟把握 1 （2）免疫组织与器官娴熟把握 1 （3）免疫细胞娴熟把握 1 （4）免疫分子娴熟把握 1 2.临床免疫学（1）免疫病理与免疫性疾病把握 1 （2）移植免疫把握 1 （3）肿瘤免疫把握 1 （4）感染免疫把握 13.临床免疫学与免疫检验（1）免疫学技术的进展了解1 （2）临床免疫学与免疫检验了解 1二、抗原抗体反应 1.抗原抗体反应原理（1）抗原抗体结合力了解 1 （2）抗原抗体亲和力和亲合力了解 1 （3）亲水胶体转化为疏水胶体了解 1 2.抗原抗体反应的特点（1）特异性娴熟把握 1 （2）可逆性娴熟把握 1 （3）比例性娴熟把握 1 （4）阶段性娴熟把握 1 3.影响抗原抗体反应的因素（1）反应物自身因素把握 1（2）环境因素把握 1 4.免疫学检测技术的类型基本类型把握 3 三、免疫原和抗血清制备1.免疫原的制备（1）颗粒性抗原的制备把握 3 （2）可溶性抗原的制备和纯化了解 3 （3）半抗原免疫原的制备把握 3 2.免疫佐剂（1）佐剂的种类了解 1 （2）佐剂的作用机制了解 1 3.抗血清的制备（1）免疫动物的选择了解 3 （2）免疫程序了解 3 （3）动物采血法了解 3 4.抗血清的鉴定和保存（1）抗血清的鉴定了解 3 （2）抗血清的保存了解 3 5.抗血清的纯化（1）特异性IgG 抗体了解 3 （2）单价特异性抗血清了解 3 四、单克隆抗体及基因工程抗体的制备1.杂交瘤技术的基本原理（1）杂交瘤技术把握 3 （2）阳性杂交瘤细胞的克隆化培育与冻存了解 32.单克隆抗体的制备（1）单克隆抗体的产生了解3 （2）单克隆抗体的纯化了解 3（3）单克隆抗体的性质鉴定把握 3 （4）单克隆抗体的特性了解 3 3.基因工程抗体制备（1）人源化抗体了解 1 （2）小分子抗体了解 1 （3）抗体融合蛋白了解 1 （4）双特异性抗体了解 1 （5）噬菌体抗体库技术了解 2 4.单克隆抗体的应用（1）检验医学诊断试剂了解 2（2）蛋白质的提纯了解 2 （3）小分子抗体的应用了解 2 （4）抗体融合蛋白的应用了解 2 （5）双特异抗体的应用了解 2 （6）抗体库技术的应用和前景了解 2 五、凝集反应 1.凝集反应的特点概念娴熟把握 1 2.直接凝集反应（1）玻片凝集试验娴熟把握 3 （2）试管凝集试验娴熟把握 3 3.间接凝集反应（1）间接凝集反应的类型娴熟把握 4 （2）间接血凝试验娴熟把握 4 （3）胶乳凝集试验把握 4 （4）明胶凝集试验把握 4 （5）间接凝集反应的应用把握4 七、放射免疫技术 1.放射免疫技术（1）基本类型及原理把握 3（2）常用的放射性核素娴熟把握 3 （3）标记物制备及鉴定了解 3 （4）抗血清鉴定了解 2 （5）方法学评价了解2 2.放射免疫分析（1）基本原理了解3 （2）试验方法及测定方法了解 43.免疫放射分析（1）基本原理了解 3（2）IRMA与RIA的比较了解 4 4.放射免疫分析技术的应用实际应用把握 4八、荧光免疫技术 1.概述（1）荧光的基本学问了解 1 （2）荧光物质把握 12.荧光抗体技术（1）荧光抗体的制备把握 4 （2）标本的制作娴熟把握 4 （3）荧光抗体染色与结果推断娴熟把握 4 （4）荧光显微镜的基本结构把握 4 3.荧光免疫分析的类型（1）时间辨别荧光免疫测定娴熟把握4 （2）荧光偏振免疫测定了解 4（3）荧光酶免疫测定了解 4 4.荧光免疫技术在医学检验中的应用（1）荧光抗体技术的应用把握 2 （2）荧光免疫测定的应用把握2 九、酶免疫技术 1.酶免疫技术的特点（1）酶和酶作用底物把握 2 （2）酶标记抗体或抗原把握 2 （3）固相载体娴熟把握 2 2.酶免疫技术分类（1）均相酶免疫测定娴熟把握 4 （2）异相酶免疫测定娴熟把握 4 3.酶联免疫吸附试验（ELISA）（1）基本原理娴熟把握 3（2）方法类型及反应原理娴熟把握 4 4.酶免疫测定的应用把握 4 十、化学发光免疫分析技术 1.概述（1）化学发光把握 2 （2）化学发光效率了解 2 2.化学发光剂和标记技术（1）化学发光剂了解 2 （2）发光剂的标记技术了解 4 3.化学发光免疫分析的类型（1）直接化学发光免疫分析了解3 （2）化学发光酶免疫分析把握 3（3）电化学发光免疫分析娴熟把握 3 （4）临床应用把握 4 十一、生物素-亲和素放大技术 1.生物素的理化性质与标记（1）活化生物素了解 1 （2）生物素标记蛋自质了解1 2.亲和素、链霉亲和素理化性质与标记（1）亲和素及其活性了解 1 （2）链霉亲和素及其活性了解 1 （3）亲和素（或链霉亲和素）的标记了解2 3.生物素_亲合素系统的特点（1）灵敏度了解3 （2）特异性了解 3 （3）稳定性了解3 （4）适用性了解 3 （5）其他了解 3 （1）生物素-亲和素系统基本类型及原理了解 3 （2）生物素-亲和素系统在酶免疫测定中应用了解 44.生物素-亲和素系统的应用（3）生物素-亲和素系统在荧光免疫技术中的应用了解 4 （4）生物素-亲和素系统在放射免疫测定中的应用了解 4（5）生物素-亲和素系统在分子生物学中的应用了解 4 十二、固相膜免疫测定 1.概述（1）常用的固相膜了解 3 （2）固相膜的技术要求了解3 2.免疫金标记技术（1）胶体金的制备了解 3 （2）免疫金制备了解 3 3.膜载体免疫测定的种类与原理（1）免疫渗滤试验娴熟把握 4 （2）免疫层析试验娴熟把握4 （3）斑点酶免疫吸附试验了解 4 （4）酶联免疫斑点试验了解 4 （5）免疫印迹法把握 4 （6）放射免疫沉淀试验了解 4 （1）标本的处理了解 2 （2）抗原的保存与修复了解2 1.概述（3）抗体的处理与保存了解2 （4）免疫组化的结果推断了解3 （5）质量掌握了解 2 2.免疫荧光组织化学技术（1）组织处理了解4 （2）荧光抗体的标记及染色了解 4 十三、免疫组织化学技术 3.酶免疫组织化学技术（1）组织处理了解 4 （2）酶标记抗体免疫组化染色了解 4 （3）非标记抗体免疫酶组化染色了解 4 （4）酶免疫组化染色中常用的酶及显色底物了解 3 4.亲和组织化学染色（1）生物素-亲和素法了解 4 （2）葡萄球菌A蛋白法了解 4 （3）凝集素法了解 4 （4）链酶亲合素-生物素法了解4 5.免疫标记电镜技术（1）免疫标记电镜技术的原理了解 1 （2）免疫标记电镜技术标本制备的要求了解 2 （3）常用的免疫标记电镜技术了解 4 6.免疫组织化学技术的应用（1）免疫组织化学技术的临床应用把握 3 （2）免疫组织化学技术的拓展了解 2 十四、免疫细胞的分别及其表面标志检测技术 1.免疫细胞的分别（1）外周血单个核细胞分别把握 3 （2）淋巴细胞的分别娴熟把握 3 （3）T细胞和B细胞的分别了解 3 （4）T细胞亚群的分别了解 3 （5）不同细胞分别方法的综合评价了解 2 （6）分别细胞的保存及活力测定把握 3 2.淋巴细胞标志及亚群分类（1）T细胞表面标志及其亚群娴熟把握 4 （2）B细胞表面标志娴熟把握 4 （3）NK细胞表面标志把握 4 3.其他的免疫细胞（1）单核-吞噬细胞系统了解 2（2）树突状细胞了解 2 4.免疫细胞表面标志的检测及应用（1）免疫细胞表面标志的检测方法了解 4 （2）淋巴细胞表面标志检测的临床意义了解 3 十五、免疫细胞功能检测技术 1.淋巴细胞的功能检测（1）T细胞功能检测把握 4 （2）B细胞功能检测把握 4 （3）NK细胞活性测定了解 4 2.吞噬细胞功能检测技术（1）中性粒细胞功能检测了解 3（2）巨噬细胞功能检测了解 3 3.免疫细胞功能检测的临床应用把握 4十六、细胞因子与细胞粘附因子的测定 1.生物学测定方法（1）促进细胞增殖和抑制细胞增殖测定法了解 3（2）细胞毒活性测定法共同特性了解 3（3）抗病毒活性测定法了解 3 （4）趋化活性测定法了解 3 （5）生物学活性测定方法学评价了解 2 2.免疫测定方法（1）ELISA方法了解 4 （2）流式细胞分析法了解 4 （3）酶联免疫斑点试验了解 4 （4）免疫学测定方法学评价了解4 3.细胞因子与细胞粘附因子测定的临床应用（1）临床应用了解 4 （2）特定疾病诊断的帮助指标了解 4 （3）评估疾病的免疫状态、推断治疗效果及预后了解 4 十七、流式细胞仪分析技术及应用 1.概述（1）工作原理了解 1 （2）散射光的测定了解 2 （3）荧光测量了解 2 （4）细胞分选原理了解 1 2.数据的显示与分析（1）参数了解 2 （2）数据显示方法了解 2 （3）设门分析技术了解 2 3.流式细胞仪免疫分析的技术要求（1）免疫检测样品制备了解 4 （2）免疫分析中常用的荧光染料与标记染色了解 2 （3）免疫胶乳颗粒技术的应用了解 4 （4）流式细胞免疫学技术的质量掌握了解 2 4.流式细胞术在免疫学检查中的应用（1）淋巴细胞及其亚群的分析把握 4 （2）淋巴细胞功能分析了解 4 （3）淋巴造血系统分化抗原及白血病免疫分型了解 4（4）肿瘤耐药相关蛋白分析了解 4 （5）AIDS病检测中的应用娴熟把握 4 （6）自身免疫性疾病相关HLA抗原分析娴熟把握 4（7）移植免疫中的应用了解 4 十八、体液免疫球蛋白测定 1.血清IgG、IgA、IgM测定（1）血清IgG、IgA、IgM测定娴熟把握 4 （2）血清IgG、IgA、IgM测定的临床意义娴熟把握 42.血清IgD和IgE测定（1）IgD测定及临床意义把握4 （2）IgE测定及临床意义把握 43.尿液及脑脊液Ig测定（1）尿液Ig测定及临床意义把握 4 （2）脑脊液Ig测定及临床意义把握 44.血清IgG亚类测定及临床意义了解 4 5.M蛋白测定及临床意义娴熟把握 4 6.轻链测定及临床意义把握 4 7.冷球蛋白的检测把握4 十九、补体检测及应用 1.概述（1）补体成分的含量与理化特性娴熟把握 1 （2）补体的活化途径娴熟把握 1 2.补体总活性测定把握 2 3.单个补体成分的测定（1）免疫溶血法了解 3 （2）免疫化学法把握 3 4.补体结合试验（1）试验原理了解 4 （2）试验方法了解 4 （3）方法评价了解 3二十、免疫检验自动化仪器分析 1.自动化免疫浊度分析系统（1）免疫透射比浊法把握 3 （2）免疫胶乳比浊法了解 3 （3）免疫散射比浊法娴熟把握 3 （4）免疫比浊分析的影响因素和临床应用把握 4 2.自动化发光免疫分析系统（1）吖啶酯标记化学发光免疫分析仪把握 3 （2）酶联发光免疫分析仪了解 3 （3）电化学发光免疫分析仪把握 3 （4）在临床免疫检测中的应用娴熟把握 4 3.自动化荧光免疫分析系统（1）时间辨别荧光免疫分析仪把握 3 （2）荧光偏振免疫分析仪了解3 4.自动化酶联免疫分析系统把握3 1.概述（1）与质量保证相关的定义娴熟把握 1 （2）试验方法诊断效率评价娴熟把握 3 2.免疫检验的质量掌握原则（1）标本的正确收集及处理娴熟把握 3（2）标准化操作及流程了解 3 （3）标准品和质控品的应用娴熟把握 3 二十一、临床免疫检验的质量保证（4）试验室的环境、设施和设备了解 3 3.质量保证、室内质控和室间质评之间的关系了解 3 4.常用免疫检验的质量掌握（1）免疫检验质量掌握中常用统计学方法的选择娴熟把握 3 （2）定性免疫检验把握3 （3）定量免疫检验把握 3（4）半定量免疫检验把握 3 5.免疫检验室内质量掌握的数据处理（1）室内质控数据的评价和管理了解 3 （2）室内质控的局限性了解3 （3）免疫检验质量保证的意义了解 3 二十二、感染性疾病与感染免疫检测 1.细菌感染性疾病的免疫检测（1）链球菌感染娴熟把握 3（2）伤寒沙门菌感染把握 3 （3）结核分枝杆菌感染娴熟把握 3 2.真菌感染性疾病的免疫检测（1）深部真菌感染把握 3（2）类真菌感染了解 3 3.病毒感染性疾病的免疫检测（1）流感病毒感染把握 3（2）轮状病毒感染把握 3 （3）肝炎病毒感染娴熟把握 3 （4）冠状病毒感染把握 3 4.先天性感染的免疫检测（1）弓形虫感染把握 3 （2）风疹病毒感染把握 3 （3）巨细胞病毒感染把握 3 （4）单纯疱疹病毒感染把握 3 5.寄生虫感染的免疫检测（1）疟原虫感染把握 3（2）血吸虫感染了解 3 （3）丝虫感染了解 3 （4）华支睾吸虫感染了解 3 （5）猪囊尾蚴感染了解 3 1.I型超敏反应（1）I型超敏反应发生气制把握 1 （2）常见I型超敏反应性疾病把握 3 （3）I型超敏反应免疫学检测娴熟把握 4 2.Ⅱ型超敏反应（1）Ⅱ型超敏反应发生气制把握 1 （2）常见Ⅱ型超敏反应性疾病把握 3 （3）Ⅱ型超敏反应免疫学检测娴熟把握 4 二十三、超敏反应 3.Ⅱ型超敏反应（1）Ⅱ型超敏反应发生气制把握 1 性疾病及其免疫检（2）常见Ⅱ型超敏反应性疾病把握 3 测（3）Ⅱ型超敏反应免疫学检测娴熟把握 44.Ⅱ型超敏反应（1）Ⅱ型超敏反应发生气制把握 1 （2）常见Ⅱ型超敏反应性疾病把握 3 （3）Ⅱ型超敏反应免疫学检测娴熟把握 4 二十四、自身免疫性疾病及其免疫检测 1.概述自身免疫性疾病的共同特征把握 3 2.自身免疫性疾病与免疫损伤（1）自身抗原把握 1（2）免疫调整特别了解 1 （3）遗传因素了解l 3.常见的自身免疫性疾病（1）由Ⅱ型超敏反应引起的自身免疫性疾病了解 3 （2）自身抗体-免疫复合物引起的自身免疫性疾病了解3 （3）T细胞对自身抗原应答引起的自身免疫性疾病了解 3 4.常见自身免疫性疾病的自身抗体检测（1）自身抗体的特性把握 3 （2）抗核抗体的检测与应用娴熟把握 4 （3）抗ENA抗体谱的检测与应用娴熟把握 4（4）与小血管炎相关的自身抗体检测与应用了解 4 （5）与RA相关自身抗体的检测与应用把握 4（6）与自身免疫性肝病相关自身抗体的检测与应用把握4 （7）与桥本甲状腺炎相关自身抗体的检测与应用了解 4 （8）与神经系统自身免疫性相关自身抗体的检测与应用了解 4 5.自身抗体检测的临床应用（1）自身抗体检测的一般原则了解 2 （2）试验室方法的选择及结果的确认了解 26.自身免疫性疾病的相关试验检测（1）免疫球蛋白和补体检测及临床意义把握 3 （2）淋巴细胞检测及临床意义了解 3 （3）细胞因子检测及临床意义了解 3 （4）循环免疫复合物检测及临床意义把握 3 二十五、免疫增殖性疾病及其免疫检测 1.概念及分类了解2 2.免疫球蛋白特别增殖性疾病的免疫损伤机制（1）浆细胞特别增殖了解 2 （2）正常体液免疫抑制了解 2 （3）特别免疫球蛋白增生造成的病理损伤了解 2 （4）溶骨性病变了懈 2 3.常见免疫球蛋白增殖病（1）多发性骨髓瘤把握 3 （2）巨球蛋白血症把握 3 （3）重链病了解3 （4）轻链病了解 3 （5）良性单克隆丙种球蛋白血症了解 3 4.免疫球蛋白特别增殖常用的免疫检测（1）血清区带电泳娴熟把握 4 （2）免疫电泳娴熟把握 4 （3）免疫固定电泳娴熟把握 4 （4）血清免疫球蛋白定量娴熟把握 4 5.特别免疫球蛋白的测定（1）M蛋白的检测娴熟把握 4 （2）尿液轻链蛋白的检测把握 4（3）特别免疫球蛋白检测的应用原则把握 4二十六、免疫缺陷病的分类和特点 1.免疫缺陷病的分类和特点（1）免疫缺陷病分类把握 3 （2）免疫缺陷病特点把握 2 2.原发性免疫缺陷病（1）原发性B细胞缺陷了解 3 （2）原发性T细胞缺陷 3 （3）重症联合免疫缺陷3 （4）原发性补体系统缺陷 3 3.继发性免疫缺陷病（1）继发性免疫缺陷的常见缘由把握 3 （2）获得性免疫缺陷综合征把握3 4.免疫缺陷病检验（1）B细胞缺陷的检测把握 4 （2）T细胞缺陷的检测把握4 （3）吞噬细胞缺陷的检测了解 4 （4）补体系统缺陷的检测了解 4 （5）获得性免疫缺陷的检测娴熟把握 4 二十七、肿瘤免疫与免疫学检验1.肿瘤抗原（1）依据肿瘤抗原的特异性分类了解 2 （2）依据肿瘤抗原产生气制分类了解 22.机体抗肿瘤的免疫学效应机制（1）抗肿瘤的细胞免疫机制了解 1 （2）抗肿瘤的体液免疫机制了解 13.肿瘤免疫学检验（1）肿瘤标志物娴熟把握 3让知识带有温度。
第十二章固相膜免疫测定第一节概述固相膜免疫测定以微孔膜作为固相。
固相膜的特点在于其多孔性、非共价键高度吸附抗体或抗原和易于漂洗等，固相膜像滤纸一样，可被液体穿过流出，液体也可以通过毛细管作用在膜上向前移行。
标记物可用酶或各种有色微粒子，如彩色胶乳、胶体金或胶体硒等。
一、常用的固相膜固相膜免疫测定中常用的膜为硝酸纤维素（NC）膜以及玻璃纤维素（fiberglass）膜、尼龙（nylon）膜、聚偏氟乙烯（PVDF）膜等。
二、固相膜的技术要求1.孔径：用于穿流法的膜一般选择0.4μm左右，用于横流法的膜可选择5～10μm。
2.流速：以ml/（cm2·min）表示。
孔径大，流速快。
3.蛋白质结合力：吸附力很强，以μg/cm2表示。
4.均一性：优质的膜应具有良好的均一性，这样才能保证试剂批内的均一性。
第二节免疫金标记技术利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标志物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测。
这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色（IGSS）。
一、胶体金的制备（一）制备原理：一般采用还原法，常用的还原剂有枸橼酸钠、鞣酸、维生素C、白磷、硼氢化钠等。
向一定浓度的金溶液内加入一定量的还原剂，使金离子还原成金原子,形成金颗粒悬液，也称金溶胶。
（二）技术要点：金溶胶的光散射性与溶胶颗粒的大小密切相关，一旦颗粒大小发生变化，光散射也随之发生变异，产生肉眼可见的显著的颜色变化，这就是金溶胶用于免疫沉淀或免疫凝集试验的基础。
（三）注意事项1.玻璃容器的清洁：玻璃表面污染会干扰胶体金颗粒的生成，用前经过强酸洗，后硅化。
2.试剂、水质和环境：氯金酸极易吸潮，对金属有强烈的腐蚀性，不能使用金属药匙，避免接触天平1%水溶液在4℃可稳定数月不变，实验用水一般用双蒸馏水，实验室中的尘粒要尽量减少，否则实验的结果将缺乏重复性。
临床检验主管检验师临床免疫学和免疫检验—临床免疫检验的质量保证复习资料汇编临床实验室的测定数据是为患者疾病的诊疗或临床实验研究服务的，因而为保证患者临床诊疗或临床实验研究的有效性，就要求临床实验室采取一系列有效的措施证明其测定数据能够达到所确定的质量标准，这就是质量保证的内容，涵盖了实验室内进行的涉及临床检测的所有活动。
第一节概述一、与质量保证相关的定义1.质量保证（QA）：为一产品或服务满足特定的质量要求提供充分可信性所要求的有计划的和系统的措施。
2.室内质量控制（IQC）：由实验室工作人员采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和控制本室常规工作的精密度，提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性，并确定当批的测定结果是否可靠，可否发出检验报告。
3.室间质量评价：为客观地比较某一实验室的测定结果与靶值的差异，由外单位机构，采取一定的方法，连续、客观地评价实验室结果，发现误差并校正结果，使各实验室之间的结果具有可比性。
4.准确度：待测物的测定值与其真值的一致性程度。
准确度不能直接以数值表示，通常以不准确度来间接衡量。
对一分析物重复多次测定，所得均值与其真值或参考靶值之间的差异亦即偏倚即为测定的不准确度。
5.偏倚：待测物的测定值与一可接受参考值之间的差异。
偏倚又分批内偏倚和批间偏倚，批内偏倚反映的是该批测定的系统误差，如校准不准、非特异显色等。
批间偏倚所反映的问题要更大一些，如试剂或校准物变质所致的误差。
6.精密度：在一定条件下所获得的独立的测定结果之间的一致性程度。
与准确度一样，精密度同样也是以不精密度来间接表示。
测定不精密度的主要来源是随机误差，以标准差（SD）和（或）变异系数（CV）具体表示。
SD或CV越大，表示重复测定的离散度越大，精密度越差，反之则越好。
准确度好的实验，其精密度不一定好；准确度差的实验，其精密度则不一定差；反之亦然。
7.重复性条件：是指在短的间隔时间内，在同一实验室对相同的测定项目使用同一方法和同一仪器设备，由相同的操作者获得独立的测定结果的条件。
临床检验主管检验师临床免疫学和免疫检验酶免疫技术复习资料汇编概念：酶免疫技术是将抗原抗体反应的特异性和酶高效催化反应的专一性相结合的一种免疫检测技术。
既保留了抗体或抗原的免疫学活性，又保留了酶对底物的催化活性和生物放大作用。
可通过酶对底物的显色反应，对抗原或抗体进行定位、定性或定量的测定分析，提高了抗原抗体反应的敏感性。
一、酶免疫技术的特点既保留了抗体或抗原的免疫学活性，又保留了酶对底物的催化活性和生物放大作用。
可通过酶对底物的显色反应，对抗原或抗体进行定位、定性或定量的测定分析，提高了抗原抗体反应的敏感性。
（一）酶的要求一个酶蛋白分子每分钟可催化103～104个底物分子转变成有色产物，用酶标记抗体或抗原建立酶免疫测定法，可使免疫反应的结果得以放大，保证测定方法的灵敏度，为此用于标记的酶应符合下列要求：1.酶的活性要强，转化率高，纯度高。
2.易与抗体或抗原偶联，活性保持稳定。
3.作用专一性强，无内源性酶或抑制物。
4.易于判断或测量，方法简单、敏感和重复性好。
5.无害，易得。
（二）常用的酶1.辣根过氧化物酶（HRP）；HRP来源于蔬菜植物辣根中，分子量40kD，是由无色的糖蛋白（主酶）和亚铁血红蛋白（辅基）结合而成的复合物。
辅基是酶活性基团，最大吸收峰在波长403nm处；而主酶则与酶活性无关，最大吸收峰在275nm。
HRP的纯度用RZ表示，它是以HRP分别在403nm和275nm处的吸光度比值来表示的。
用于酶免疫技术的HRP，其RZ值应大于3.0。
RZ值仅说明血红素基团在HRP中的含量，并非表示HRP制剂的真正纯度，而且RZ值高的HRP并不意味着酶活性也高，RZ值与酶活性无关。
2.碱性磷酸酶（AP）AP是一种磷酸脂水解酶，可以从大肠杆菌或小牛肠黏膜提取，但两种来源的AP理化性质有所不同：菌源性AP分子量80kD，酶作用最适pH为8.0；肠黏膜AP分子量为100kD，最适pH为9.6；后一种AP的活性高于前者。
资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除第十二章固相膜免疫测定第一节概述固相膜免疫测定以微孔膜作为固相。
固相膜的特点在于其多孔性、非共价键高度吸附抗体或抗原和易于漂洗等，固相膜像滤纸一样，可被液体穿过流出，液体也可以通过毛细管作用在膜上向前移行。
标记物可用酶或各种有色微粒子，如彩色胶乳、胶体金或胶体硒等。
一、常用的固相膜固相膜免疫测定中常用的膜为硝酸纤维素（NC）膜以及玻璃纤维素（fiberglass）膜、尼龙（nylon）膜、聚偏氟乙烯（PVDF）膜等。
二、固相膜的技术要求1.孔径：用于穿流法的膜一般选择0.4μm左右，用于横流法的膜可选择5～10μm。
·min2.流速：以ml/（cm2）表示。
孔径大，流速快。
表示。
3.蛋白质结合力：吸附力很强，以μ2 g/cm均一性：优质的膜应具有良好的均一性，这样才能保证试剂批内的均一性。
4.免疫金标记技术第二节利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标志的快速免疫检测。
这定性或半定量物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于）。
一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色（IGSS一、胶体金的制备、白磷、硼氢化钠等。
枸橼酸钠、鞣酸、维生素C （一）制备原理：一般采用还原法，常用的还原剂有向一定浓度的金溶液内加入一定量的还原剂，使金离子还原成金原子,形成金颗粒悬液，也称金溶胶。
密切相关，一旦颗粒大小发生变化，光散射也（二）技术要点：金溶胶的光散射性与溶胶颗粒的大小随之发生变异，产生肉眼可见的显著的颜色变化，这就是金溶胶用于免疫沉淀或免疫凝集试验的基础。
（三）注意事项1.玻璃容器的清洁：玻璃表面污染会干扰胶体金颗粒的生成，用前经过强酸洗，后硅化。
，避免接触天平不能使用金属药匙 2.试剂、水质和环境：氯金酸极易吸潮，对金属有强烈的腐蚀性，℃可稳定数月不变，实验用水一般用双蒸馏水，实验室中的尘粒要尽量减少，否则4称盘。
其1%水溶液在。
实验的结果将缺乏重复性二、免疫金制备（一）制备原理：免疫金是指胶体金与抗原或抗体等大分子物质的结合物，在免疫组织化学技术中，习惯上称之为金探针。
蛋白质被吸附到胶体金颗粒表面而结合的过程。
（二）技术要点：原则上可选择待标记蛋白质等电点，也可略为偏碱。
1.胶体金溶液的pH2.蛋白质最适标记量（三）注意事项。
稳BSAPEG、明胶等均为良好的高分子稳定剂，多种蛋白质、葡聚糖、 PEG2000和是最常用的稳定剂只供学习与交流．资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除定剂有两大作用：①为保护胶体金的稳定性，使之便于长期保存；②为防止或减少免疫金复合物的非特异性吸附反应。
第三节膜载体免疫测定的种类与原理一、斑点免疫渗滤试验（IFA）用于检测各种传染病的抗体和肿瘤标记物等，以及用于检测尿液HCG的“金标”早孕诊断试剂。
（一）原理：将抗原或抗体点加在固相载体硝酸纤维素薄膜上，将膜贴于吸水材料上，依次在膜上滴加标本、免疫胶体金及洗涤液等试剂进行抗体或抗原反应，过量试剂很快渗入吸水材料中。
抗原抗体反应后，形成大分子胶体金复合物，从而使阳性结果在膜上呈现红色斑点。
液体通过微孔滤膜时，渗滤液中的抗原或抗体与膜上的抗体或抗原相接触，起到亲和层析的浓缩，达到快速检测的目的，同时洗涤液的渗入在短时间内即可达到彻底洗涤的目的，简化了操作步骤。
（二）方法类型1.双抗体夹心法测抗原：用抗体结合在微孔滤膜中央，滴加待检标本，抗原抗体反应后，滴加金标抗体，加洗涤液洗涤后，阳性者即在膜中央呈红色斑点。
2.间接法测特异性抗体：用抗原包被在微孔滤膜上，滴加待测标本，滴加洗涤液洗涤后，滴加金标抗抗体，加洗涤液洗涤后，阳性者即在膜中央呈红色斑点。
该法由于血清标本中非目的IgG的干扰，易导致假阳性结果。
（三）实验材料1.滴金反应板，为胶体金免疫渗滤试验中的主要试剂成分之一，由塑料小盒、吸水垫料和点加了抗原或抗体的醋酸纤维素膜片三部分组成；2.胶体金标志物；3.洗涤液；4.抗原参照品或抗体阳性对照品。
（四）技术要点本方法实验操作非常简单，其操作要点为：1.将反应板平放于实验台面上，于小孔内滴加含待测抗原的标本1～2滴，待完全渗入，与膜上的抗体反应而结合在膜上。
2.于小孔内滴加胶体金标记抗体试剂1～2滴，待完全渗入，使胶体金标记抗体与结合在膜上的抗原反应。
3.于小孔内滴加洗涤液2～3滴，待完全渗入，洗去未结合的胶体金标记抗体。
4.结果观察在膜中央有清晰的淡红色或红色斑点者判为阳性反应，反之则为阴性反应。
斑点呈色的深浅相应地提示阳性强度。
二、斑点免疫层析试验（一）原理：免疫层析试验的原理与免疫渗滤相同，不同点在于液体的移动不是通过直向的穿流，而是基于层析作用的横流。
在一塑料片条上依次粘贴如下组分：①吸水纸；②玻璃纤维膜，膜上固定着干燥的金标抗体；③硝酸纤维素膜，膜上包被着线条状的抗体；④吸水纸。
（二）方法类型：多用于检测抗原，但亦可用于检测抗体。
常见方法类型有：1.双抗体夹心法测抗原2.竞争法测小分子抗原3.间接法测抗体：为了消除待测血清标本中大量的非特异性IgG与特异性IgG竞争结合金标记抗人IgG，降低了试验敏感性，胶体金间接免疫层析法测抗体常设计成反流免疫层析法。
（三）技术要点只供学习与交流．资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除1.在5～20分钟内观察结果。
2.结果判断：阴性为出现1条棕红线质控条带；阳性为出现2条棕红线条带；无棕红线条带出现为试剂失效。
（四）临床应用该技术不能准确定量，只能作为定性或半定量试验。
目前主要应用于正常体液中不存在的物质（如传染病抗原和抗体以及毒品类药物等）和正常含量极低而在特殊情况下异常升高的物质（如HCG等）的检测。
三、斑点酶免疫吸附试验加少量抗原于硝酸纤维素（NC）膜上，干燥后进行封闭；然后滴加样品血清；洗涤后再滴加酶标二抗，最后滴加能形成不溶有色物的底物溶液（如HRP标志物，常用二氨基联苯胺）；阳性者即可在膜上出现肉眼可见的染色斑点。
优点：灵敏度较普通ELISA高，试剂用量少，操作简单，NC膜可长期保存不影响活性。
四、酶联免疫斑点试验（ELISPOT）（一）原理：T细胞分泌的细胞因子或B细胞产生的特异性抗体被PVDF膜上特异性单克隆抗体捕获。
再与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。
BCIP/NBT底物孵育后，PVDF膜出现“紫色”的斑点为阳性反应。
（二）ELISPOT与ELISA的区别1.ELISA通过显色反应，在酶标仪上测定吸光度，与标准曲线比较得出可溶性蛋白总量。
2.ELISPOT通过显色反应，在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点，可直接在显微镜下或通过仪器对斑点进行计数，1个斑点代表1个细胞，从而计算出分泌该蛋白的细胞的频率。
3.由于是单细胞水平检测，ELISPOT比ELISA和有限稀释法等更灵敏，能从20万～30万个细胞中检出1个分泌该蛋白的细胞。
4.捕获抗体为高亲和力、高特异性和低内毒素McAb，在研究者以刺激剂激活细胞时，不会影响活化细胞分泌细胞因子ELISPOT技术应用领域非常广泛，如移植中排斥反应的预测、疫苗发展、Th1/Th2分析、自身免疫病研究、肿瘤研究、过敏性疾病研究、感染性疾病研究、抗原决定簇图谱分析、化合物和药物免疫学反应的筛选等五、免疫印迹法（IBT）又称Western-blot，将SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨力与抗原抗体反应的高特异性相结合。
第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。
抗原等蛋白样品经SDS处理后带负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶中从阴极向阳极泳动，分子量越小，泳动速度就越快。
此阶段分离效果肉眼不可见（只有在染色后才显出电泳区带）。
第二阶段为电转移。
此阶段分离的蛋白质条带肉眼仍不可见。
第三阶段为酶免疫定位。
将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜依次与特异性抗体（常为多克隆抗体）和酶标第二抗体作用后，加入底物，使区带染色。
常用的HRP底物为3，3-二氨基联苯胺（呈棕色）和4-氯-1-萘酚（呈蓝紫色）。
阳性反应的条带清晰可辨。
并可根据SDS-PAGE时加入的分子量标准，确定各组分的分子量。
免疫印迹中需要注意的问题只供学习与交流．资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除1.抗体的性质影响免疫印迹成败的一个主要因素是抗原分子中可被抗体识别的表位的性质。
只有那些能识别耐变性表位的抗体可与抗原结合，多数多克隆抗血清中或多或少地含有这种类型的抗体，所以在免疫印迹实验中常选用多克隆抗体。
2.IBT的灵敏度有若干种方法常用于提高免疫印迹的灵敏度，一种是在电泳之前应用免疫沉淀法将抗原进行纯化和浓缩。
该法可浓缩浓度极低的抗原，并可在电泳和免疫印迹之前将其与无关的蛋白质分离，使对极低浓度抗原的研究成为可能。
其他提高检测灵敏度的方法都是针对增强信号本身强度设计的，其中包括使用信号更好和更强的荧光试剂或使条带局部酶的活性增强。
3.IBT法在临床应用中存在一定的局限性本法综合了SDS-PAGE的高分辨力和ELISA法的高特异性和敏感性，是一个有效的分析手段，不仅广泛应用于分析抗原组分及其免疫活性，并可用于疾病的诊断。
在艾滋病病毒感染中此法作为确诊试验。
当血清HIV抗体阳性时，抗体结合到膜上的病毒蛋白上，最后用放射性核素标记的抗人IgG检测。
如能检测出HIV蛋白抗原即为阳性，如仅p24阳性，则结果可疑，就对原标本重判。
WB试验能检测到gpl20、p66、p51、gp41、p31、p24和17kD的抗原。
其敏感性较ELISA高,但比RIPA差。
并可用HIV-1和HIV-2划分，由于自身抗体的存在，仍有假阳性。
六、放射免疫沉淀试验（RIPA）以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法，是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法，同时弥补了免疫印迹法的不足。
【习题】免疫印迹法区带显色常用的底物是A.邻苯二胺B.四甲基联苯胺C.ABTSD.对硝基苯磷酸酯E.3，3-二氨基联苯胺『正确答案』E 『答案解析』免疫印迹法区带显色常用的底物是3，3-二氨基联苯胺。
以下有关免疫印迹法错误的说法是A.通过SDS-PAGE电泳分离蛋白质样品B.将蛋白质从凝胶转移到固相膜上C.酶使底物显色检测固相膜上的蛋白质区带D.被称为Northern blotE.本法分辨力高，特异性和敏感性也高『正确答案』D『答案解析』免疫印迹法（ IBT）又称Western-blot，将SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨力与抗原抗体反应的高特异性相结合。
只供学习与交流．。
