霉菌鉴定结果
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第1篇一、实验目的1. 探究苹果表面霉菌的生长情况。
2. 学习霉菌的培养、分离和纯化方法。
3. 观察霉菌的形态特征,并进行初步鉴定。
二、实验材料与试剂1. 实验材料:- 新鲜苹果若干个- 无菌水- 无菌棉签- 灭菌的培养基(如沙堡琼脂培养基)- 灭菌的接种环- 灭菌的玻璃器皿(如培养皿、试管等)2. 实验试剂:- 酒精- 碘酒- 水合氯醛- 水解乳糖三、实验方法与步骤1. 样品处理:- 取新鲜苹果,用无菌水清洗表面,用无菌棉签擦拭表面,收集擦拭液。
- 将擦拭液进行梯度稀释,以便后续分离和纯化。
2. 霉菌分离:- 将稀释后的样品分别接种于沙堡琼脂培养基上。
- 将接种后的培养基置于恒温培养箱中,37℃培养2-3天。
3. 霉菌纯化:- 观察培养基上生长的菌落,选取单菌落进行纯化。
- 使用接种环挑取单菌落,接种于新的沙堡琼脂培养基上。
- 重复上述步骤,直至获得纯化的霉菌菌株。
4. 霉菌形态特征观察:- 将纯化的霉菌菌株接种于沙堡琼脂培养基上,37℃培养2-3天。
- 观察菌落形态,包括菌落大小、颜色、边缘、表面等特征。
5. 霉菌鉴定:- 对纯化的霉菌菌株进行形态学观察,包括菌丝形态、孢子形态等。
- 根据形态特征,对霉菌进行初步鉴定。
四、实验结果与分析1. 霉菌分离:- 在沙堡琼脂培养基上,观察到多种形态的菌落,表明苹果表面存在多种霉菌。
2. 霉菌纯化:- 通过纯化操作,获得纯化的霉菌菌株。
3. 霉菌形态特征观察:- 纯化的霉菌菌株在沙堡琼脂培养基上形成圆形、表面光滑、边缘整齐的菌落。
- 菌丝呈白色,有横隔,无色或略带黄色。
- 孢子呈椭圆形,无色。
4. 霉菌鉴定:- 根据形态特征,初步鉴定纯化的霉菌菌株为青霉属。
五、实验结论1. 苹果表面存在多种霉菌,其中青霉属较为常见。
2. 通过培养、分离和纯化操作,可以有效地从苹果表面分离出霉菌。
3. 霉菌的形态特征可以用于初步鉴定霉菌种类。
六、实验注意事项1. 实验过程中要注意无菌操作,避免污染。
Sdu微生物大实验土壤微生物的分离纯化与鉴定【实验目的】1、从各地区土壤中筛选含几丁质酶的真菌及含果胶酶的菌株;2、通过从土壤中分离纯化菌株,掌握培养基的制备与灭菌技术、微生物的筛选、分离纯化方法和无菌操作技术。
3、复习以前学过的各种染色方法,掌握生理生化试验的原理与方法。
4、掌握微生物的鉴定技术、菌种保藏技术。
【实验原理】1、微生物的分离与纯化:从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
此次实验采取平板分离法,该方法操作简便,普遍用于微生物的分离与纯化,其基本原理主要包括两个方面:a.选择适合于待分离微生物的生长条件或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物生长,而抑制其它微生物生长的环境,从而淘汰大部分不需要的微生物。
b.微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体,因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。
获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板法或平板划线法等技术来完成。
微生物的观察可以用显微镜观察其细胞形态,也可以用肉眼观察其菌落形态。
前者是微生物的显微镜观察技术,后者是微生物的肉眼观察技术。
2、霉菌:霉菌可产生复什分枝的菌丝体,分基内菌丝和气生菌丝,气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝,由繁殖菌丝产生孢子。
霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多(约 3-10μm ),常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍,因此,用低倍显微镜即可观察。
观察霉菌的形态有多种方法,常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法,本实验采用载玻片培养观察法。
3、果胶酶筛选培养基:配制以果胶为唯一碳源的筛选培养基,在该培养基上,只有能分解利用果胶的菌株才能够生长,依此来从土壤中筛选出能够产果胶酶的菌株。
刚果红(Congo Red,简称CR)是一种染料,它可与果胶形成红色复合物,但并不和果胶水解后的产物发生这种显色反应,在含有果胶的培养基中加入刚果红时,刚果红能与培养基中的果胶形成红色复合物。
霉菌与其他微生物的培养与检测实验报告
实验目的:掌握霉菌与其他微生物的培养与检测方法,了解其特性与影响因素。
实验步骤:
1. 准备培养基和相应的培养器材。
2. 采集不同环境中的样品,使用无菌技术将其分离到不同的培养基上。
3. 将培养基与分离的样品混匀后,倒入培养皿中。
4. 标记培养皿,放入恰当的条件下培养,如适宜的温度和湿度。
5. 在培养过程中观察并记录微生物的生长情况,包括菌落的形态、颜色等。
6. 根据观察和记录结果,进行初步鉴定或进一步筛选。
7. 对不同微生物进行镜检或其他特定检测方法,如PCR等。
实验结果:
根据观察和记录,可以得到不同微生物在不同培养基上的生长情况和特征。
如霉菌的菌落呈现出不规则的形状和颜色,而细菌则呈现出均匀的圆形或长条形的菌落。
此外,对于分离菌落较多的培养皿,可以进一步进行筛选和鉴定,确定其中的主要微生物种类。
实验结论:
通过这次实验,我们可以得到多种不同微生物的分离培养,了解其特性和影响因素,可以为后续的微生物鉴定和研究提供基本数据和参考依据。
同时,我们还可
以通过这些基本实验方法,对环境中的微生物进行可行的检测和分析。
1、检验食品中的霉菌、酵母菌有何意义?试举例食品中产毒素的霉菌、酵母菌?酵母菌是人类较早应用于制作面包、酿酒等的一类微生物。
近年来的应用越来越广,酵母菌体可供食用和作饲料,并可提取核酸、辅酶A、细胞色素C、凝血质等贵重药品;利用其代谢产物,制取维生素、有机酸和酶制剂等;同时,也可用于石油发酵和石油脱蜡等;霉菌除用于传统的酿酒、制酱和做其他发酵食品外,近年来在发酵工业中广泛用来生产酒精、柠檬酸、青霉素、灰黄霉素、赤霉素、淀粉酶、发酵饲料等。
腐生型酵母能使食物、纺织品和其他原料腐败变质;少数嗜高渗压酵母菌如鲁氏酵母、蜂蜜酵母可使蜂蜜、果酱败坏;有的是发酵工业的污染菌,它们消耗酒精,降低产量或产生不良气味,影响产品质量。
面包内含有淀粉,容易滋生霉菌,霉菌会分解淀粉,产生有毒黄曲霉素,是强致癌物质。
根霉经常出现在淀粉质食品上,引起食品霉烂变质,有些曲霉菌能产生对人体有害的物质,如黄曲霉毒素。
2、如何在菌落形态上鉴定霉菌、细菌、酵母菌?细菌:小而突起,大而平坦,透明或半透明,易挑取,粘稠,有臭味,质地均匀菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致,圆形菌落,颜色有白色、黄色等。
放线菌:正面有白点而且正背面颜色不同,干燥,小而紧密,与培养基结合牢固(难以挑取),不透明,泥香味,菌落背面有同心圆形纹路。
这点可以和细菌菌落区分。
酵母菌:菌落为淡黄色,光滑,半透明,比细菌菌落大。
霉菌:有菌丝,干燥,大而疏松,有霉味而且透明,菌落大型,肉眼可见许多毛状物,如绒毛状或棉絮状,棕色、青色等,可见黑色的分生孢子群。
菌落最初往往是浅色或白色,当菌落上长出各种颜色的孢子后,由于孢子有不同形状、构造和色素,菌落表面常出现肉眼可见的不同的结构和色泽,如黄、绿、青、黑、橙等各色。
有的霉菌由于产生的色素能扩散到培养基内,使培养基正面和反面显示出不同颜色,故菌落特征也是鉴定霉菌的主要依据之一。
3、该实验只进行霉菌总数的测定而如何进行霉菌的分离与鉴定?(在土壤中,将10-2、10-3各1ml稀释液接于马丁氏培养基)一、配制培养基(根据试剂瓶上的配比)每个培养皿装15~20ml,有7个培养皿,每组近似配150ml(20*7=140ml取最大范围);二、取两个100或150ml的三角瓶,其中一个用于装90ml的蒸馏水,使用硅胶塞(用于配样品),另一个用于装50~60ml蒸馏水(五根试管,5*9=45ml),用报纸包扎;三、包扎枪头(10个),将培养基放置于一个铁笼子,再将枪头和两瓶水放置于另一个铁笼子,进行湿热灭菌。
化妆品中霉菌和酵母菌的检验2014年8月26日下载(2008-05-22 15:45:21)转载▼标签:杂谈化妆品中霉菌和酵母菌的检验科学2006-3-5 23:47化妆品中霉菌和酵母菌的检验1 概述1.1 化妆品真菌污染的现状真菌在自然界中分布甚广,化妆品的酸碱度,温度湿度和营养适合其生长繁殖。
目前国内外有资料表明,化妆品中真菌污染是相当严重的。
Wilson对眉目化妆品进行微生物检查,结果真菌污染率为12%,从睫毛油里检出茄病镰刀菌,密封的眼用化妆品染菌率为1.5%,在使用过程中急剧增至60%。
所染真菌中曲霉,念珠菌居首。
我国部分省市化妆品中霉菌染菌率也不低,一般为7~62.7%。
有资料报道在100份化妆品中分离到真菌15个(属14种)。
优势菌为酵母属,其次为青霉属和曲子霉属等。
Kuehne等人对233名妇女眉笔眼影霉菌检查,结果有115人(份)检出不同真菌19属(种),计有草酸青霉、黄曲霉、交链孢霉和致病的白色念珠菌和新型隐球菌等。
1.2 化妆品的真菌病1.2.1 念珠菌病:由白色念珠菌(白色假丝酵母)引起的急性、亚急性或慢性真菌病,可侵犯皮肤、粘膜或指甲,也可侵犯内脏或血行播散引起鹅口疮、唇炎、甲沟炎、泛发性皮肤念珠病、念珠性肉芽肿、支气管及肺念珠病、心内膜炎及脑炎和血行播散性念珠菌病等。
1.2.2 青霉病:由少数青霉菌引起呼吸道及肺部感染,使皮肤暴露部位出现湿疹样改变,还可致敏引起鼻炎及哮喘。
1.2.3 新型隐球菌病:由新型隐球酵母及其变种引起的一种深部真菌病,可侵犯肺、骨骼、皮肤淋巴结及内胖器官,主要侵犯中枢神经系统,引起隐球菌性脑膜炎。
1.2.4 曲霉病:由曲霉菌引起,可侵犯皮肤,指甲、外耳道、鼻窦、眼、气管、肺、心膜、子官、脑膜等器官形成炎性肉芽肿。
1.2.5 眼真菌病:真菌性角膜炎可由曲霉菌、镰刀菌、白色念珠菌等真菌引起角膜溃疡,见表3-2-1。
作者年份倒数菌种及株数Fazakas195520烟曲霉5,黄曲霉2,放线菌4,毛霉2,其他7Gingerich1963125曲霉16,白色念珠菌17,镰刀菌12,其他80Palack197133镰刀菌15,头孢霉11,念珠菌2,弯孢霉21,曲霉2,其他2渡道郁绪197759曲霉21,头孢霉16,白色念珠菌14,其他8齐绪哲、谭玉章1957~196513白色念珠菌7,曲霉3,镰刀菌1,酵母菌1,头孢霉1范德章1978204曲霉123,镰刀菌43,其他391.2.6 真菌毒素中毒:引起皮肤光过敏性皮炎、湿疹及皮肤变态,严重者导致机体中毒。
【转帖】常见曲霉菌鉴定真菌2006-11-25 17:13:51 阅读798 评论2 字号:大中小订阅作者:龙太郎鉴定依据:①菌落:菌落生长速度,表面质地、颜色、形态和气味等。
其中颜色是曲霉菌分类的依据之一②分生孢子头:分生孢子头的形状、颜色和大小。
分生孢子头由顶囊、瓶梗、梗基和分生孢子链组成,为曲霉的特征性结构③分生孢子梗或分生孢子柄:注意分生孢子梗的长短、颜色、表面粗糙或光滑、是否有隔等④具有性生殖的曲霉能产生闭囊壳:为封闭式的薄壁子囊果,含子囊和子囊孢子;⑤足细胞,也为曲霉的特征性结构。
曲霉菌的结构:1、烟曲霉菌在SDA培养基上菌落生长快,棉花样,开始为白色,2~3天后转为绿色,数日后变为深绿色,呈粉末状。
分生孢子头的顶囊烧瓶状,小梗单层,排列成木栅状,布满顶囊表面3/4,顶端有链形分生孢子,分生孢子球形,有小棘,绿色:烟曲霉菌菌落:下列图片为烟曲霉分生孢子头:2、黄曲霉菌:在SDA培养基上菌落生长快,黄色,表面粉末状。
分生孢子头顶囊球形或近球形,小梗双层,第一层长,布满顶囊表面,呈放射状排列,黄色,顶端有链形孢子。
黄曲霉菌菌落:黄曲霉菌分生孢子头:3、土曲霉菌在SDA培养基上菌落生长快,小,圆形,淡褐色或褐色。
分生孢子头的顶囊半球形,小梗双层,第一层短,第二层长,呈放射状排列,分布顶囊表面2/3,顶端有链形孢子。
土曲霉菌落:土曲霉分生孢子头:4、黑曲霉菌在SDA培养基上菌落生长快,表面黑色,粉末状。
分生孢子头的顶囊球形或近球形,小梗双层,第一层粗大,第二层短小,呈放射状排列,布满整个顶囊,黑色,顶端有链形孢子。
黑曲霉菌落:黑曲霉分生孢子头:5、杂色曲霉菌在SDA培养基上菌落生长慢,菌落圆形紧密,绒毛状,羊毛状,颜色有数环,从青绿到红绿。
分生孢子头的顶囊近球形,小梗双层,第一层长,第二层短,呈放射状排列,布满顶囊4/5,顶端有链形孢子。
杂色曲霉菌菌落:杂色曲霉菌分生孢子头:杂色曲霉菌分生孢子头电镜下图片:6、构巢曲霉菌在SDA培养基上菌落暗绿色,中央呈粉末状,边缘绒毛状。
霉菌试验标准和条件(总4页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面,使用请直接删除霉菌试验一、概述二、霉菌的试验方法三、防霉措施四、有关标准概述霉菌的危害霉菌试验的定义霉菌试验的目的霉菌对材料和产品的影响直接危害是霉菌生长食取材料中的有机成分,直接导致结构破坏、强度降低、物理性质变化等。
间接危害是霉菌分泌的新陈代谢排泄物有机酸和其他离子化合物,造成电解或老化效应,某些触媒剂,还促成氧化或分解作用的发生,间接导致材料及部件的损坏。
长霉造成的故障模式:---引起电子或电气设备失灵---减低绝缘材料的电性能---造成燃油系统的腐蚀和堵塞---破坏密封---使金属件腐蚀---使玻璃产生蚀刻低压与霉菌这两个因素的组合不会增大二者本身的影响太阳辐射与霉菌因为太阳辐射产生热,所以这个组合不可能产生影响,和高温与霉菌的组合相同。
此外未经过滤的太阳辐射中的紫外线具有显着的杀菌作用盐雾与霉菌这是一个相容的组合湿度与霉菌湿度有助于霉菌和微生物的生长,但不会增大它们的影响高温与霉菌霉菌和微生物的生长,需要比较高的温度,但是,在71℃(160 ℉)以上,霉菌和微生物就不能生长了低温与霉菌低温影响霉菌的生长。
在零度以下,霉菌保持在假死状态霉菌试验的定义霉菌试验是气候环境试验的一个项目。
用于考核产品或材料抵抗霉菌侵袭的能力。
它于一般环境试验一样,考虑产品在实际运输、储存或使用中,最易遭受霉菌危害的环境条件,在试验室中用人工模拟创造霉菌生长最适宜环境进行试验。
霉菌试验的目的为确定产品抗霉菌侵蚀能力,必须制定一个与实际工作条件相似,能判断霉菌的侵蚀作用和给出正确评价的试验方法。
它将为产品的选材、结构和设计提供依据以保证产品能在有大量霉菌存在的气候环境中安全可靠地运行二、霉菌试验方法:1、霉菌试验的分类:天然暴露试验:直接暴露在选定的湿热环境中。
有室内、室外的暴露试验和埋土试验的方法。
霉菌的鉴定方法参照微生物学实验手册[118]。
(1)菌落特征的鉴定观察:
观察菌落形状、特征,菌落颜色,培养基颜色是否有变化等。
(2)菌株特征及孢子形态观察:
挑取菌株的少量菌丝于载玻片上,显微镜下观察菌丝的颜色、特点,有无特殊构造,成熟子实体的颜色、形态等。
(3)霉菌的糖化能力测定实验:
配制含有4%淀粉的溶液100ml,加入一定体积菌液并发酵24H后,测定溶液中还原糖的含量,采用DNS法测定溶液中还原糖的含量。
霉菌的糖化能力表示为F。
(1) 原理
碱性条件下,3,5-二硝基水杨酸(DNS)溶液与还原糖溶液共热被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质),还原糖则被氧化成糖酸及其它产物。
在一定范围内,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系,在540 nm 波长下测定棕红色物质的吸光度。
(2) 1mg/ ml葡萄糖标准液
准确称取100 mg分析纯葡萄糖(预先在80 ℃烘至恒重),置于小烧杯中,用少量蒸馏水溶解后,定量转移到100 ml的容量瓶中,以蒸馏水定容至刻度,摇匀,冰箱中保存备用。
(3) 3,5-二硝基水杨酸试剂
将6.3 g 3,5-二硝基水杨酸和262 ml 2mol/L NaOH溶液,加到500 ml含有185 g酒石酸钾钠的热水溶液中,再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸钠,搅拌溶解。
冷却后加蒸馏水定容至1000 ml,贮于棕色瓶中备用。
(4) 制作葡萄糖标准曲线
取7支25 ml刻度试管,编号0~6,分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 ml 葡萄糖标准溶液于7支试管中,并以蒸馏水补至2.0 ml,然后各加入DNS试剂1.5 ml。
摇匀,在沸水浴中加热5 min,取出后立即冷却至室温,再以蒸馏水定容至25 ml刻度处,颠倒混匀。
在540 nm波长下,用0号管调零,分别读取1~6号管的吸光度。
以吸光度为纵坐标,葡萄糖毫克数为横坐标,绘制标准曲线(图3-1)。
得到回归方程y=49.665x+1.3421,其相关系数R2=0.9951。
(5) 还原糖测定
取上清液0.2ml到试管中,再加入3,5-二硝基水杨酸1.5ml、蒸馏水1.8ml,摇匀后,在沸水浴中加热5min,取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温,再以蒸馏水定容到25ml,混匀后,540nm波长下比色,记录吸光值。
通过标准曲线查
的还原糖含量。
图3-1还原糖含量标准曲线
Fig. 3-1 Standard curve of glucose content
(4)霉菌的适宜生长温度测定:
将菌种接种于相同的培养基上放入不同温度的恒温箱中培养,观察记录生长情况。
温度梯度设置为26℃--38℃,每个梯度至少三个平行实验,实验重复三次。
根据表中所示分离纯化后的菌种鉴定结果中的形态特征和生理生化实验的结果,结合霉菌特征,鉴定分离出的MⅠ、MⅡ、MⅢ三种霉菌分别为黑根霉、鲁毛霉和白地霉。
黑根霉(Rhizopus nigricans)是真菌的一种,属于真菌门接合菌亚门的根霉属,菌丝无隔,常利用它的糖化作用,比如甜酒曲中的主要菌种就是黑根霉.匐枝根霉亦称黑根霉,也叫面包霉,分布广泛,常寄生在面包和日常食品上,或混杂于培养基中,瓜果蔬菜等在运输和贮藏中的腐烂及甘薯的软腐都与其有关,菌丝体分泌出果胶酶,分解寄主的细胞壁,感染部位很快会腐烂.
表5.2 霉菌的温度试验
Table 5.2 Mildew temperature experiment
菌株26℃28℃30℃32℃34℃36℃38℃MⅠ++ +++ ++ + - - - MⅡ++ +++ ++ + + + + MⅢ+ +++ ++ + + + +
备注:+表示可以生长,-表示不可以生长,++,+++表示生长旺盛
表5.3霉菌的鉴定结果
Table 5.3 The results of mildew identification results
菌株形态特征糖化力(%) 鉴定结果
MⅠ在琥红培养基上呈稠密的棉絮
状,先白后变灰黄至浅黑色,
孢囊梗灰褐至暗褐色,光滑,
2-5 株成,束孢子囊球形或椭圆
形,浅褐色,囊托楔形,大而
明显,假根发达,呈根状,褐色,
一般无厚垣孢子,有时有少量
2.01
毛霉目毛霉科
根霉属中的黑
根霉
MⅡ在琥红培养基上呈絮状,黄色,
菌丛矮,孢囊梗呈短的稀疏的假
轴状分枝,产生 2-3个孢子囊,
孢子囊黄色至黄褐色,球形或长
圆形,孢囊孢子椭圆形,拟椭
圆形,厚垣孢子数量甚多,大
小不一,黄色至褐色
19.87
毛霉目毛霉科
毛霉属中的鲁
毛霉
MⅢ在琥红琼脂上会产生白色的、呈
毛绒状或粉状的膜。
具有真菌丝,
有的分枝,横隔或多或少。
繁殖
方式为裂殖,形成的节孢子单个
或连接成链,孢子呈长筒形、方
形,也有椭圆或圆形,末端钝圆。
<1
丝孢目丛梗孢
科地霉属中的
白地霉。