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马铃薯茎尖脱毒培养关键因素研究

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我国马铃薯茎尖培养脱毒和脱毒试管苗微繁研究进展

我国马铃薯茎尖培养脱毒和脱毒试管苗微繁研究进展
发现污染后最好请微生物研究人员作鉴定后对症下药为避免抗药性产生最好轮流使用抗生素如对杆菌而言青霉素庆大霉素头孢唑啉钠都有效在用抗生素处理后试管苗长足后尽快接种以防抗生素失效后细菌重新发作故用抗生素处理应每批接种使用抗同一种细菌的不同抗生素处理连续处理次后方可不经处理接入新培养基尤其是单独使用抑菌抗生素即只能杀死活跃分裂期细菌而对静止期细菌无效
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内 蒙 古农 业科 技
职教专辑
霉素类植物生长物质， 多数研究者采用 !"# ， 且浓 度 在 $% $& ’ $% ($)* + , 的 居 多 ， 少 数 人 采 用 $% &)* + , 或 -% $)* + ,. 笔者以 /0 1 2""$% -)* + , 1 3 4 5"$% -)* + , 1 !"# $% -)* + , 诱导 6 个生产 用种， 均获成功。 先将茎 -77& 年肖玉兰采用分阶段培养方案： 尖接种在分化培养基 8 /0 1 泛酸钙 ()* + , 1 肌醇 &$)* + , 1 !"$% 6)* + , 1 蔗 糖 (&* + , 1 琼 脂 3* + ,9， #$: 后转入茎尖生长培养基 8 /0 1 5"$% &)* + , 1 !"$% 6)* + , 1 2""$% $$()* + , 1 蔗 糖 (&* + , 1 琼脂 3* + , 9 ； 李静华等则采取先以 - + (/0 1 ;< "" -)* + , 1 (= 6 4 > 丁酯 $% &)* + , 1 ?@ -)* + , 培养， 泛绿后转入 - + (/0 1 A@ -)* + , 1 (= 6 4 > 丁酯 $% &)* + , 。茎尖成活率一般在 (6B ，成活 株中脱毒苗占 &$B 。 -% -% # 培养条件 液体培养的以 (- ’ (&C ，光 照 #$$$ ’ 6$$$DE 进行培养；固体培养的多采用 (&C 或上下浮动不超过 (C ，稍宽一点的范围是 -F ’ (&C 或 ($ ’ (&C 。 光照强度多为 ($$$DE 或以 ($$$DE 为中心上下浮动不超过 -$$$DE，也有严格 限定在 (&$$ ’ #$$$DE 的。光周期则多采用 -3G + :， 也有用 -(G + :， 少有用 -$G + : 的。 若以滤纸桥法 液体培养， 在光照强度 -$$$ ’ #$$$DE 、 光照 -3G + : 的条件下， 经 -($: 的培养， 茎尖即可长成小苗。 -77F 年李天然认为：马铃薯茎尖在 -$$DE 下培养 (F:，然后扩大为 ($$DE ，而在芽长到 -H) 左右时 必须扩大光量达 6$$$DE ， 否则生长不好。 -% -% 6 病毒种类 依司怀军所述，马铃薯茎尖 培养 脱毒按 从易到 难的顺 序为： I,JK、 IK"、 IKL、 I"/ K、 IK/、 IKM、 IK0， 另有类病毒 I0@K: 较 IK0 更难脱去， 而很多实验证明有些病毒也可 （烟草花叶病毒） 侵入分生组织， 如 IKM、 均 @/K 可侵入茎尖， 所以顶端分生组织可以汰除病毒， 但 并不是所有的均可汰除，因而必须采用与热处理 结合的顶端分生组织培养方法， 先热处理母株， 然 后切取顶芽进行培养。二法相结合处理可除去部 分单用茎尖培养难以汰除的病毒。 /N,,NO 和 0PQHN ’ 0)RPG 以 ## ’ #SC 热处理 长根的茎 6( ’ &3: 后剥取 $% - ’ $% #)) 茎尖培养 去除了 F&B IKM 和 3(B IK0= 这一方法适用于以 未能完全脱除病毒的试管苗的再脱毒处理。其他 以块茎为处理对象的研究，恒温处理温度中间值 分别为 ##% &C = #S% &C = #FC ， 在此范围内， 选择

马铃薯茎尖脱毒技术体系优化研究

马铃薯茎尖脱毒技术体系优化研究

马铃薯茎尖脱毒技术体系优化研究马铃薯是一种粮、菜、饲、工业原料兼用型经济作物,其产量高、营养丰富、适应性强、分布广。

但是在马铃薯的连年种植过程中,产量和品质逐年下降,退化是造成这一后果的主要原因,而解决退化的有效措施就是生产脱毒种薯。

马铃薯茎尖培养脱毒苗是马铃薯脱毒种薯产业的基础,优质快速地茎尖培养为以后脱毒苗和脱毒薯的生产赢得了时间和效益,当前脱毒马铃薯茎尖培养效率低,成苗率和脱毒率达不到预期目的,因此优化马铃薯茎尖脱毒培养方法非常必要。

本试验对茎尖培养的培养基和脱毒方法对脱毒效果的影响进行了系统研究,得出了以下主要结果: 1.激素对马铃薯茎尖分化成苗的影响本试验以MS培养基为基础培养基,添加不同种类及不同浓度的植物生长调节剂,共24个处理组合,研究了不同植物生长调节剂及不同浓度配比对茎尖分化成苗的影响。

结果表明,诱导茎尖分化的成苗不仅与植物生长调节剂的绝对浓度有关,又与不同种类植物生长调节剂的配比有关。

其他条件相同的情况下,添加GA<sub>3</sub>浓度为0.1mg/L时的成苗率比浓度为0.2mg/L时的成苗率高,且差异显著,说明GA<sub>3</sub>的浓度对马铃薯的成苗具有极大影响。

试验得出,培养基中加入0.1mg/LGA<sub>3</sub>有助于马铃薯茎尖更好的生长和分化,0.2mg/L GA<sub>3</sub>对茎尖分化的成苗率有抑制效应。

同等条件下培养基中添加0.1mg/L的IAA和0.2mg/L的IAA相比较,0.2mg/L IAA的成苗率较高,达50%,0.05 mg/L的NAA和0.1mg/L的NAA相比较,0.05mg/L NAA的成苗率较高,可达56.98%,但0.05mg/L的NAA比0.2mg/LIAA成苗率更高,说明使用0.05mg/LNAA作为生长素对马铃薯茎尖的分化生长有较好的促进作用。

马铃薯茎尖脱毒技术研究

马铃薯茎尖脱毒技术研究

马铃薯茎尖脱毒技术研究本试验以马铃薯茎尖分生组织为实验材料,应用单一试剂和组合试剂法对马铃薯茎尖进行消毒预处理,消毒试剂包括酒精、漂白粉、氯化汞、次氯酸钠、次氯酸钙和过氧化氢六种试剂。

通过分析植株染菌和成活等生长情况来判断消毒的效果。

在消毒时长与无菌水冲洗次数上进一步优化,采取酒精处理30s、60s和120s,无菌水冲洗2、4和6次,氯化汞处理2min、3.5min和5min构成三因素三水平正交实验,依据染菌和成活情况确定最优的灭菌组合,结果表明氯化汞处理 3.5min,酒精处理120s,无菌水冲洗6次,马铃薯的脱毒苗无菌成活率可达90%以上采用黄皮薯“中薯一号”、白皮薯“早大白”、紫皮薯“紫薯”,研究不同品种的茎尖分生组织经脱毒培养后的成活情况,结果表明中薯一号的成活率可达到70%,而紫薯的成活率为0%,表明不同品种的茎尖脱毒效果和效率存在显著的差异。

研究了“中薯1号”不同类型的外植体茎尖的脱毒培养情况,包括母薯上、自然环境下植株上的侧芽和培养箱中脱毒幼苗的侧芽茎尖三种。

结果表明母薯上茎尖脱毒培养出的苗染菌率较高,生长情况比较差的,成活率只有50%；培养箱中的是经过脱毒预处理且在无菌环境下生长的侧芽,虽没有自然环境下的苗长势旺盛,但成活率能达到80%,所以采用无菌苗的侧芽尖进行脱毒培养效果最好。

进行了培养基组分的优化,设计了在MS培养基中加入不同浓度的激素PIX以及不同果汁添加物的试验,结果表明激素PIX对促进马铃薯脱毒苗缩短节间,增加茎粗,抑制徒长,促进壮苗有着显著的效果。

当PIX浓度为0.5mg/1和1.Omg/l时,马铃薯的脱毒苗长得最壮,分枝最多,叶子最多,且颜色为绿色,有的是墨绿色。

不同浓度的果汁添加物对脱毒苗均有促进或抑制作用,它们能提供脱毒苗在生长过程中所需要一些微量营养成分、生理活性物质和生长物质等,其中低浓度的水萝卜汁最有助于马铃薯脱毒苗的生长。

马铃薯茎尖脱毒及组培快繁技术研究

马铃薯茎尖脱毒及组培快繁技术研究
用 量 非 常 少 ， 不 易 溶 于水 ， 以采 用 特殊 的 配 置 方 法 ， 且 所
配 置 成 ５ ０ ｇ Ｌ的 溶 液 待 用 。 当两 个 品 种 的种 薯 芽 长 ０ ／ ｍ
到 ２ ３ｃ ～ ｍ时 ． 选 生 长 健 壮 的 芽 ， 清 水 冲 洗 芽 部 表 挑 用
面 污 物 ．在 无 菌 操 作 室 采用 ｌ 种 不 同 的方 法 进 行 表 面 ２ 消 毒 ， 最 近 制 作 的蒸 馏 水 冲洗 四 五 次 ， 表 面 消 毒 剂 用 将 彻 底 清 除 ， 同表 面消 毒 剂 处 理 时 间 见 表 １ 不 。
２１ ０２年第 １ ６期
马铃 薯茎 尖脱毒及组培快 繁技术研究
田 成 津
（ 海 大 通 县 农 业 生 态 环境 与 可再 生 能 源 工作 站 ， 海 大通 青 青 ８ ００ ） １ １０
摘 要 ： 以下寨 ６ ５和青薯 １８为实验 对 象， 用不同培养基 ， ６ 采 对马铃薯 两个 品种进 行脱毒及组培 ， 对培养 基及 关键技 术措 施进行 了分析 ， 结果表 明 ： 与青 薯 １ ８ 不 同培 养 中生长表现不 同， ６在 下寨 ６ ５茎尖组织在 Ｍ Ｓ中加入 Ｂ ２ Ａ ｍ／ ｇ Ｌ的培养基 中生长表现 突出， 而青薯 １８茎尖组织在 Ｍ ６ ｓ中加入 Ｂ ２ｍ ／ Ａ ｇ Ｌ的培养基 中成苗率较 高。 同等条件下 ， 在 加入 ＩＡ ．０ ｇＬ的培养基宜用于下寨 ６ 脱毒苗 的组织快繁 ，加入 ＩＡ０ ３ ｍ ／ Ａ ５ ｍ ／ ０ ５ Ａ ． ０ ｇ Ｌ的培 养基宜用于青薯 １８脱毒 ６
厂化生产提供帮助 。
１ 材 料 和 方 法
１ １ 供 试 材 料 ．
１２ １ 催 芽 于 １ 月 中 旬 左 右 ， 拣 表 皮 光 滑 、 常 ． ． １ 挑 正 薯 形 、 小 均 匀 、 病 害 和 无 损 伤 薯 块 ， 置 在有 供 暖 的 大 无 放 房 间 ， 内温 度 ２ 室 ４℃ 左 右进 行 催 芽 。 催 芽 前 薯 块 正 处 在 于 休 眠期 ， 用 ０ ０ ～ ０ １ ｇ Ｌ的 Ｇ ３ 处 理 薯 块 ， 采 ．５ ．０ ／ ｍ Ａ来 浸 没 于 Ｇ ３溶 液 中 １￣ ２ ｉ ， Ａ ０ ０ ｎ 以打 破 休 眠 ［。 ｍ ４ ］ １２ ２ 种 薯 处 理 ．． 采 用 Ｍ 培 养 基 ， 入不 同 配 比的 激 Ｓ 加 素 ， 备 Ｂ 、Ａ 、Ａ 、Ｂ 准 ＡＮ Ａ Ｇ 。ＩＡ和 ＩＡ 由 于 激 素 在 培 养 基 中 Ａ，

马铃薯茎尖脱毒培养技术研究

马铃薯茎尖脱毒培养技术研究
在 ４０Ｘ解剖镜下剥离茎尖 ，一手用镊子将芽按住 ，一手用无 菌 解 剖针 将 叶 片逐 层 剥掉 ，直至 露 出 圆滑 的生 长 点 ，用 解 剖针 切 取带 １～２个叶原基的 ０．３ｍｍ 茎尖 ，接 种到培养瓶内 ，保证切面 接触培养基 ；同时在剥离过程中，操作要敏捷准确 ，防止茎尖在空 气 中暴 露 时 间 长 ，水分 蒸 发 使茎 尖 变干 ；将 接 种 的培 养 瓶置 于 培 养箱进行培养 ，定期观察其生长状态和污染情况。 ３茎 尖脱 毒的 影 响 因素
马 铃薯 茎 尖脱毒 就 是利用 该原 理 ，把茎 尖 剥离 接 种到 培 养基 上 ，进而培养马铃薯种薯或微型薯 。 ２ 操 作 方 法
剪取促芽后的马铃薯块茎上合适大小的芽若干个 ，冲洗干净 后放于烧杯内用纱布封 口，置于 自来水下反复冲洗 ４０分钟，吸干 表面水分放进超净工作台进行深层消毒；先用 ７５％酒精浸泡 ２０～ ４５ｓ，无菌水冲洗 ３次 ；再用 ｏ．１％的升汞浸泡 ８￣１０ｍｉｎ，无菌水冲洗 ５次 ，冲洗时轻轻晃动烧杯时消毒剂彻底被漂洗掉 ，之后置于无 菌 滤纸 待用 。
毒 效果 的 因素进 行 了详 细分析 ，进 一步 阐述 了对病毒 检 测的 常 用方 法。
关 键词 ：马铃 薯 ；茎 尖脱毒 ；病毒 检 测
中图分 类号 ：￥５３２
文 献标 识码 ：Ａ
文章编 号 ： １６７４—０４３２（２０１３）一１０—２３—２
马铃薯是我国重要的粮食作物 ，近年来 ，政府加大力度发展 现代 马 铃 薯 产业 ，促 进 了马 铃 薯 产业 的 快速 发 展 ，种植 面 积 和 鲜 薯产量均居世界首位 ，产业链条逐步拓展 ，经济效益稳步提升。但 是 ，马铃薯是通过块茎进行的无性繁殖 ，在连年种植过程 中土壤 和种薯本身携带的病害逐年严重 ，导致品种退化 ，严重降低了马 铃薯的产量和品质。１９５５年法国 Ｍｏｎｅｌ通过剥离马铃薯茎尖获 得 了不 带病 毒 的 马铃 薯 脱 毒苗 ，引起 了 科学 界 的广 泛 关 注 ，世 界 各地纷纷采用马铃薯茎尖脱毒快繁应用于大田生产 ，提高马铃薯 产量 ，改善其品质。 １马 铃薯 茎 尖脱 毒原 理

马铃薯茎尖脱毒培养技术的研究

马铃薯茎尖脱毒培养技术的研究

危害马铃薯的病毒有30种之多，如 X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A 病毒、花叶病毒、纺锤形块茎病毒 等。由于马铃薯是无性繁殖作物， 病毒逐代积累，日益严重，引起严 重退化。马铃薯病毒可使块茎产量 减少50%~80%。
一、马铃薯脱毒技术:
马铃薯在营养繁殖时易受病毒的浸染， 当条件适合时，病毒就会在植株内增殖， 转运和积累，随着世代传递，病毒危害 逐年加重，一般可造成减产50％以上。 研究发现，有30多种病毒易感染马铃薯， 并引起品种退化，严重影响马铃薯的生 产。通过微茎尖组织培养技术能从马铃 薯体内脱除PLRV、PVY、PVA、PAF、 PVG、PVM、PSW等病毒。
因此，采用组织培养技术，通过一 定良种繁殖体系，生产优质种薯， 是保证马铃薯高产、稳产的一项有 效措施。
1．脱毒种薯生产程序
采用微茎尖组织培养的方法，诱导出苗， 采用联免疫吸附试验法或指示植物方法 鉴定马铃薯病毒和类病毒，经鉴定后， 无主要病毒及类病毒的试管苗可定为脱 毒试管基础苗。
试管基础苗在无菌条件下，采用固体、 液体培养基相结合的方法，进行扩繁基 础苗，在防虫网室栽植或封闭温室扦插， 生产出原原种（或称脱毒小薯）。用原 原种在一定隔离条件下产生原种1代， 以后逐级称为原种2代、良种1代、良种 2代。
培养条件：温度21~25℃、光量20003000 lx(勒克斯)、光照12h/d。 2-3周愈伤，4-5周绿点，3--6月长成2-3 厘米小芽，越慢越好，出芽很快的扔掉。
（2） 继代和生根
培养成功的马铃薯脱毒苗，经ELISA（试剂盒） 鉴定后（试管苗应每3月检测一次，每年4次） 鉴定后，采用固体、液体培养基相结合方法扩 繁。取试管苗单节切段扦插在（或平放）固体 培养基上，每瓶可插20个左右茎段，经20d左 右发育成5~10cm高小植株，继续进行切段繁 殖，此法速度快，每月可繁殖5~8倍，试管苗 多节接种在液体培养基上，进行浅层静止液体 培养。

马铃薯茎尖脱毒及组培快繁技术研究

马铃薯茎尖脱毒及组培快繁技术研究摘要：以下寨65和青薯168为实验对象，采用不同培养基，对马铃薯两个品种进行脱毒及组培，对培养基及关键技术措施进行了分析，结果表明：与青薯168在不同培养中生长表现不同，下寨65茎尖组织在MS中加入BA2 mg/L 的培养基中生长表现突出，而青薯168茎尖组织在MS中加入BA2 mg/L的培养基中成苗率较高。

在同等条件下，加入IAA 0.50 mg/L的培养基宜用于下寨65脱毒苗的组织快繁，加入IAA 0.30 mg/L的培养基宜用于青薯168脱毒苗的组织快繁。

关键词：马铃薯；茎尖脱毒；组织快繁我国是马铃薯生产第一大国，2008年种植面积达到573.33万hm2，鲜薯总产达8 800万t，平均单产约15.45t／hm2，总产位居世界第一[1]。

马铃薯是无性繁殖作物，体内病毒的积累可使品种种性退化、品质和产量降低，对其生产造成严重危害[2]。

因为大部分病毒不能感染马铃薯茎尖组织，通过茎尖脱毒，生产脱毒种薯用于生产是防止马铃薯退化的切实可行的措施[3]。

马铃薯脱毒及组培快繁中所用基质和培养条件等关键技术方面的报道较多，但对下寨65和青薯168报道较少，本文既通过对马铃薯下寨65和青薯168两个品种进行脱毒及组培试验研究，为西部高原地区当家品种脱毒种薯的工厂化生产提供帮助。

1材料和方法1.1供试材料采用当家品种下寨65和青薯168。

1.2试验方法1.2.1催芽于11月中旬左右，挑拣表皮光滑、正常薯形、大小均匀、无病害和无损伤薯块，放置在有供暖的房间，室内温度24 ℃左右进行催芽。

在催芽前薯块正处于休眠期，采用0.05～0.l0 mg/L的GA3来处理薯块，浸没于GA3溶液中10～20 min，以打破休眠[4]。

1.2.2种薯处理采用MS培养基，加入不同配比的激素，准备BA、NAA、GA3、IBA和IAA，由于激素在培养基中用量非常少，且不易溶于水，所以采用特殊的配置方法，配置成500 mg/L的溶液待用。

马铃薯茎尖脱毒培养关键因子探析


Ｔｈｅ Ｋｅ ｙ Ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｏ ｆ Ｐｏ ｔ ａ ｔ ｏ Ｓ ｈｏ ｏ ｔ －ｔ ｉ ｐ Ｃห้องสมุดไป่ตู้ ｌ ｔ ｕｒ ｅ
（ Ｐ ｏ ｔ ａ ｔ ｏ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｗｕ ｌ ａ ｎ ｃ ｈ ａ ｂ ｕ Ｃ ｏ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｌ ａ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ， Ｗｕ ｌ ａ ｎ ｃ ｈ ａ ｂ ｕ ０ １ ２ ０ ０ ０ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
题， 提 出 了结 合 化 学 处理 提 高脱 毒 率 的 有 效措 施 ， 指 出 茎尖 脱 毒 培 养 中 尚存 在 的 一 些 问题 以及 相 应 对 策 。 关键 词 ： 马铃薯 ； 茎 尖 脱毒 ； 组 织培 养
中 图分 类 号 ： Ｓ ５ ３ ２ 文献 标 识 码 ： Ａ １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｊ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ７ — ０ ９ ０ ７ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ４ ． ０ １ ９ 文章 编 号 ： １ ０ ０ ７ — ０ ９ ０ ７ ｛ ２ ０ １ ３ ） ４－ ０ ０ ０ ３ ６ — ０ ２
操 作 流 程 如下 ：
国第 一 ２ ０ １ ２年 种 植 面 积 有 所 下 降 ． 但 仍 然 保 持 在 ６ ６ ． ７ ９万
ｈ ｍ０ ． 总产可达 １ ０ ０ ０万 ｔ 左右
１ ． ２ ． １ 选材
于 马 铃薯 生 长 季 在 田间选 取 生 长 健 壮 、品 种 特性
马铃 薯 产 业 对 我 国农 村经 济 发 展 、国家 粮 食 安 全 起 到 了 非 常 重 要 的作 用 由于 马 铃薯 栽 培 属 于 无 性 繁殖 ， 导致 马 铃 薯 如 果 自身 携 带有 病 毒 的话 ． 多代 无 性 繁 殖可 以导 致病 毒 的积 累 ． 造 成 产 量 以 及 品 质 的逐 年 下 降 ， 也 就 是 品种 退 化 。 目前 ． 病 毒 病 是 制 约 马 铃 薯 产 业发 展 的 主 要 因素 。马 铃 薯 茎尖 脱 毒 培 养 手 段 是 解 决 马 铃 薯 病 毒病 最 常 使 用 的方 法 之 一 。通 过分 离 茎 尖 分 生 组 织

马铃薯茎尖脱毒组织培养技术研究综述

马铃薯茎尖脱毒组织培养技术研究综述作者：杨小琴李善才李增伟胡晓燕孙利军来源：《现代农业科技》2009年第22期摘要综述了近几年来马铃薯茎尖脱毒技术的研究进展,从马铃薯生产概况及危害马铃薯的主要因素、茎尖剥离发展历史及原理、茎尖脱毒技术要点、影响马铃薯茎尖脱毒效率的因素方面作了概述并对其发展前景进行了展望,以为马铃薯茎尖脱毒技术发展奠定基础。

关键词马铃薯;茎尖;脱毒;组织培养中图分类号S532文献标识码A文章编号 1007-5739(2009)22-0085-02ReasarchReviewOn Virus-freeTechnology ofPotatoStep-tip Tissue CultureYANG Xiao-qinLI Shan-caiLI Zeng-weiHU Xiao-yanSUN Li-jun(Yulin Institution of Agricultural Sciences,Yulin Shaanxi 719000)AbstractIn the paper,the recent studies on step-tip tissue culture of potato were reviewed. The respects about potato production situation,factors of potato production,historical development, theory and outline of virus-free on step-tip,and influencing factors on virus-free on step-tip tissue culture were summaried.Then the development prospect was presented so as to lay a foundation for the development of potato step-tip virus-free tissue culture.Key wordspotato;step-tip;virus-free;tissue culture马铃薯栽培分布较广,世界上共有148个国家栽培,主要分布在欧洲和亚洲。

马铃薯茎尖组织培养脱毒技术要点

实践技能练习马铃薯茎尖组织培养脱毒技术要点1.马铃薯茎尖组织培养脱毒技术1.1脱毒方法1.1.1选择优质健康的材料所选的植株必须是表现典型品种特性的植株,符合脱毒品种的特征包括株型、叶形、花色等植物学性状及成熟期等农艺性状;植株生长健壮,无明显的病毒性、真菌性、细菌性病害症状;单株产量和大薯率高;适时早收,选择符合品种特性,无病斑、虫蛀和机械创伤的大薯块。

1.1.2选择培养基MS培养基适用于大多数双子叶植物,B5和N6适合大多数单子叶植物,马铃薯茎尖培养基以MS+GA3 0.05mg/l +6-BA0.5～0.1mg/l +NAA0.1～0.2mg/l+2%蔗糖+0.9%琼脂配方效果比较好。

1.1.3剥离和接种薯块休眠后进行室内催芽,待芽长至1～2cm还未展叶时,将芽剪下,然后放入烧杯,用纱布封口,在自来水下冲洗半个小时,取出放到操作台上进行消毒。

消毒方法是将芽在75%的酒精中过一遍(约20秒),然后用次氯酸钠溶液稀释为2%～3%,浸泡2分钟,然后用无菌水清洗3～5次。

将消毒过的芽放在垫有吸水纸的培养皿上,每次消毒的芽不要太多,以防放置时间过长,茎尖褐变(消毒过程中所用器具均已事先高温灭菌)。

在操作台使用前先打开紫外线消毒30分钟,然后关闭紫外线灯,打开风机。

实验前换专用服装,双手用75%酒精擦拭消毒,取消毒处理过的芽,以无菌镊子固定,在30～40倍解剖镜下进行茎尖分生组织剥离。

用解剖针小心地除去茎尖周围的叶片组织,暴露出顶端圆滑的生长点,用解剖针切取0.1～0.3mm,带有1～2个叶原基。

茎尖剥离时为防止解剖镜近距离灯光烤伤茎尖分生组织,解剖镜光源要用冷光源照明。

切取的茎尖分生组织随即接种到培养基上,切面接触琼脂,置于培养室进行离体培养。

1.1.4培养条件将已接种外植体的试管置温度23℃～25℃,光照3000lx、在光周期13～16小时/天的培养室中培养2～4周即可成苗。

2.茎尖培养的关键技术环节2.1剥取适当大小的茎尖通常培养茎尖越小,产生幼苗的无毒率越高,但成活率越低。

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茎 尖培 养 又 叫分 生 组 织 培养 ，是 包 括 马铃 薯 在 ３
基金项 目： 乌 兰 察 布 职 业 学 院 科 研 项 目（ １ ２ ｗ ｚ ｋ ｙ Ｏ １ ３ ）
作者简介 ： 刘海英（ １ ９ ７ ５ 一 ） ， 女， 硕士 ， 讲师， 从 事 马 铃 薯 组 织 培 养 和 病 毒 检 测 教 学 与研 究 工 作 。Ｅ － ｍａ ｉ ｌ ： ｌ ｈ ｙ ８ ２ １ ＠１ ６ ３ ． ｃ ｏ ｎ ｒ
经 验交 流２ ０ １ ３ ． ８
． 啦 业 蝴 挝地
马铃薯茎尖脱 毒培养关键 因素研究
刘 海英 陈 建保 康 俊 段伟 伟 张祚 恬 （ 内蒙古 乌兰 察布 职业 学 院马铃 薯工 程 系 乌兰察 布 ０ １ ２ ０ ０ ０ ）
摘要 ： 对 马铃 薯 茎尖脱 毒培 养 关键 因素进 行 了分 析 ， 阐述 了马铃 薯 茎 尖脱毒 培 养的 理论 基础 、 影 响 马铃 薯 茎 尖脱毒培 养 的 因素和 条件 ， 指 出 了茎尖培 养脱毒 中尚存在 的一 些 问题 以及相 应 对策 。
关键 词 ： 马铃 薯 ； 茎 尖脱毒 ； 组 织培 养
马铃薯是 粮 、 菜、 饲、 加工兼 用型作 物 ， 适 应 性 内 的许 多植 物 脱 除病 毒 的重 要 方法 ，分 生组 织 顶端
广、 营养丰富、 经济 效 益 高 ， 已成 为世 界 上继 水 稻 、 小 培养 法 已 发展 成 为适 用 于几 乎 所 有无 性 繁殖 作 物脱
左右 。
次 。植 物 分生 组织 中生 长 素 的含 量或 活 性 一般 远 远
具 有抑 制病 毒增 殖 的效果嘲 。 马 铃薯 产 业 对 我 国农 村 经济 发 展 、 国家粮 食 安 高 于其他 组织 ，
全起 到 了非 常重 要 的作用 。但 是 马铃 薯 是无 性 繁 殖 １ ． ２ 马铃 薯茎 尖分 生组 织脱 毒 的操作 流程 茎 尖分 生组 织 培 养 的 目的 是通 过 脱 除感 染 马 铃
一
１ ５ ３—
一 ｌ 舡
１ ． ２ ． ２ 材料 的 消毒
２ ０ １ ３ ． ８ 经 验 交 流
从块茎上 剪取 １ ２ ｃ ｍ 长 的芽 培养 基 ， 譬 如液 体 培 养基 ， 用 滤 纸 桥 作 支持 物 ， 效 果
放在烧 杯里 ， 上面 盖上纱 布 ， 在 自来水 下冲洗 ４ ０ ｍ ｉ ｎ ， 较好［ ９ １ 。植物 生长调 节剂 的种类 和浓 度对茎 尖生 长发 然后 移 入无 菌操 作 台 ， 先用 ７ ５ ％酒 精浸 泡 ３ ０ Ｓ ， 无菌 育 影 响 很 大 ．常 用 ０ ． ５ ｕ ｌ ／ Ｌ的 ６ 一 Ｂ Ａ和 ０ ． １ ｕ ｌ ／ Ｌ的 水 冲洗 ２次 ， 再用 ２ ％次 氯 酸钠 浸泡 ８ ｍ ｉ ｎ ． 然 后 用无 Ｎ Ａ Ａ和 ０ 。 １ ｕ ｌ ／ Ｌ的 Ｇ Ａ ３来调 控 茎 尖 生长 和 发 育 ， 不 菌水 冲洗 ３ — ４遍 ， 每次 冲 ５ ｍｉ ｎ ， 沥干 水后 ， 放 在 培养 同品种 对激 素 的种 类 和浓 度要 求不 一 样 ．主要 通 过
和９ ８ ２ ． ５万 ｔ ， 稳居 全 国第 一 。２ ０ １ ２年 种 植 面积 有 所 活力 最 强 ， 病 毒在 代 谢 旺盛 、 细胞 生 长和 分 裂快 速 的 下降， 但仍然 保持 在 ｌ ０ ０ １ ． ８万亩 ， 总产 可达 １ ０ ０ ０万 ｔ 分 生组 织 细胞 中增 殖 速 度 没 有 分 生 组 织 细 胞 快 ： 再
作物 ， 体 内病 毒 的积 累可 使 品种 种 性 退 化 ， 造成 产 量
和 品 质 的降低 。这 是 制 约马 铃 薯产 业 发 展 的主 要 因 薯 的病 毒 和类 病 毒 等 使 优 良品种 的种 性 得 以恢 复 。 素 。 而茎 尖 脱毒 培 养 是 马铃 薯 脱毒 的最 常用 的方 法 并提 供 生产无 病 毒种薯 的基 础 材料 。所 以 ， 它是一 种 之一 ［ １ １ ， 其 生 理基 础 就 是 病毒 一 般 不 能感 染 到 马铃 薯 基 于优 良品种 所 实 施 的保 障种 薯 质 量 的技 术 措 施 ，
的一 种 有效方 法嘲 。
识， 到收 获时需 要 单收单 藏 。自然度 过休 眠期 或采取
１ 马 铃 薯 茎 尖 脱 毒 原 理 及 方 法
１ ． １ 马铃 薯 茎尖 脱毒 原理
人工 打 破休 眠期 。譬 如采 取 将块 茎 放人 ３ ７ ℃恒 温 培
养箱 中 ， 光 照时 间 １ ６ ｈ ／ ｄ ， 光照强度 ２ ０ ０ ０ Ｌ ｘ ， 处 理
的 分 生组 织 ，因此 通 过分 离 分 生组 织 而 进行 组 织 培 分生 组织 培养 的标 准操 作 流程 如下 。 养 ，可 以获得 无 病 毒植 株 ，然后 以无 病 毒植 株 为 材 １ ． ２ ． １ 选 株 在 马 铃 薯 生 长 季 在 田 间选 择 生 长 健
料 ，进 行 快 速繁 殖 是 目前 国际 上 防治 马 铃薯 病 毒 病 壮 、 品种 特性 典 型 一致 的植 株 ，备选 植 株挂 牌 做 标
麦 和 玉米 之 后 的第 四大粮 食 作 物 。 内蒙 古是 我 国马 除病 毒 的 有效 手段 。病 毒在 马 铃薯 体 内的分 布 具有 铃 薯 的 主产 省 区 ， 主要 优 势 是海 拔 较 高 ， 降 雨集 中时 不均 性 ，马铃薯 的 ｘ病 毒和 类病 毒 感染 分 生组 织 和 其余病 毒却 仅存 在 于维 管系 统组 织 。首先分 期 与 生 长 需 求一 致 ， 且 雨 热 同季 、 气候冷凉 、 传 毒 介 维管 束 ． 体少 ， 非常适 合 马铃 薯 的生产 。 ２ ０ １ １年 内蒙古 自治 区 生组 织 没 有 维管 系 统 ，这 就使 通 过维 管 系统 传 染 的 其次 ， 植物 分 生组 织 代谢 马铃薯种植面积和总产量分别达到 了 １ ０ ６ ９ ． １万 亩 病毒 不 会 感染 到分 生组 织 ；