高效液相色谱法测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量

高效液相法测定大黄结康片中大黄素和大黄酚的含量目的：建立高效液相色谱法测定大黄结康片中大黄素和大黄酚的含量。

方法：采用高效液相色谱法；色谱柱为ODS-C18柱（4.6mm×150mm）流速1.0ml/min，流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15），检测波长在254nm。

结果：此方法线性关系良好，大黄素的线性范围为0.192～0.960ug （r=0.9997）、大黄酚的线性范围为0.416～2.080ug（r=0.9998），大黄素和大黄酚与其制剂的其它组分可完全分离其平均回收率为98.92%，RSD为1.97%，（n=5）。

结论：本法简单、准确，重现性良好，可用于大黄结康片中大黄素和大黄酚的总量测定。

标签：高效液相色谱法；大黄结康片；大黄素；大黄酚大黄结康片是由大黄、莪术等七味中药组成的复方制剂。

具有活血祛瘀，通络散结之功效，其中大黄的药理作用研究主要集中在蒽醌类化合物，有效成分为恩醌类衍生物，如大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚等[1]。

经多年临床应用，对手术后血瘀症有较好疗效[2]。

为有效控制其质量，我们选择大黄中大黄素和大黄酚总量作为指标，建立了HPLC测定法[3-5]，其实验结果准确，重现好。

1 仪器、试剂及样品日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10A紫外可见检测器，WDL-95工作站；CSF-1A超声波发生器（上海超声波仪器厂生产）；MA260S型电子分析天平（上海第二天平仪器厂）；索氏提取器。

甲醇为色谱纯；磷酸、氯仿、硫酸均为分析纯。

大黄素、大黄酚对照品，由中国药品生物制品检定所提供。

阴性样品均按样品方法制备。

2 方法与结果2.1 色谱条件[6]色谱柱ODS-C18柱4.6mm×150mm，流速1ml/min，柱温30℃，检测波长254nm，流动相甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15）。

2.2 供试品溶液的制备取本品内容物约0.4001g，精密称定，置50ml锥形瓶中，精密加甲醇25ml 称定重量，回流提取30分钟，在称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续虑液5ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液10ml，超声处理5min，再加氯仿10ml，加热回流1小时，冷却，移至分液漏斗中，用少量氯仿，洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取三次，每次约10ml，合并氯仿液，挥去氯仿，残渣加甲醇使溶解，移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45um）虑过，取续滤液，即得。

高效液相色谱法同时测定大黄中14种成分的含量建立高效液相色谱法同时测定大黄中大黄素、大黄酚、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚、番泻苷A、番泻苷B、没食子酸、儿茶素、（-）-表儿茶素-3-没食子酸酯、异莲花掌苷、4-4′-羟基苯基-2-丁酮、莲花掌苷、4′-羟基苯基-2-丁酮-4′-O-β-D-（2″-O-桂皮酰基-6″-O-没食子酰基）-葡萄糖苷14个成分含量的方法。

采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱（4.6 mm × 150 mm，5 μm），采用0.05%的磷酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相，梯度洗脱，流速1.0 mL·min-1，柱温40 ℃，检测波长268 nm。

结果表明在线性范围内14个成分线性良好（r>0.999 9）；日内精密度和日间精密度均小于3.1%；平均回收率在91.80%～104.1%。

同时，对收集到的10个掌叶大黄和10个唐古特大黄合格样品进行定量测定，发现掌叶大黄中含量比较高的成分是芦荟大黄素，唐古特大黄中含量比较高的是4-4′-羟基苯基-2-丁酮，各样品中所有化合物的含量差异都比较大。

所建立的含量测定方法能同时测定大黄中14个成分的含量，为大黄药材多成分含量测定和质量控制提供一种简便的方法。

标签：大黄；高效液相色谱法；蒽醌类；苯丁酮苷类；鞣质类；含量测定[Abstract] To establish an HPLC （high performance liquid chromatography）method for the simultaneous content determination of gallic acid，（+）-catechin，（-）-epicatechin-3-O-gallate，isolindleyin，4-（4′-hydroxyphenyl）-2-butanone，emodin，chrysophanol，physcion，aloe-emodin，rhein，lindleyin，4-（4′-hydroxyphenyl）-2-butanone-4′-O-β-D-（2″-O-galloyl-6″-O-cinnamoyl）-glucopyranoside，sennoside A and sennoside B in Rhei Radix et Rhizoma. The analysis was performed on Agilent Zorbax SB-C18 （4.6 mm×150 mm，5 μm）with 0.05% phosphoric acid solution （A）- acetonitrile （B）as mobile phase for gradient elution. The flow rate was 1 mL·min-1，with column temperature of 40 ℃and the wavelength was set at 268 nm. All calibration curves showed good linearity （r > 0.999 9）within the concentration range. Both the intra- and inter-day precision for 14 analytes was less than 3.1%，with the mean recovery at the range of 91.80%-104.1%. Meanwhile，quantitative determination was carried out for 10 qualified samples from Rheum palmatum and 10 qualified samples from R. tanguticum. respectively. It was found that the content of 4-（4′-hydroxyphenyl）-2-butanone and aloe-emodin were higher in the R. tanguticum and R. palmatum，respectively，and the content of all the compounds was different in each sample. The established HPLC method for simultaneous content determination of 14 compounds from Rhei Radix et Rhizoma could be used for quantitative assessment and quality control of Rhei Radix et Rhizoma.[Key words] Rhei Radix et Rhizoma；HPLC；anthraquinones；butanone glycosides；tannins；content determination大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄R. tanguticum Maxim. ex Balf. 或药用大黄R. officinale Baill.的干燥根和根茎[1]。

HPLC法测定清热凉血软膏中大黄素、大黄酚的含量目的：建立清热凉血软膏中大黄素、大黄酚的含量测定方法。

方法：高效液相色谱法。

色谱柱：Dionex Ultimate 3000-C18（4.6mm×250mm，5μm）;流动相：甲醇-0.1%磷酸（80∶20）;检测波长：254nm;流速：1.0ml/min。

结果：大黄素在0.010～0.200μg/ml范围内线性良好，回归方程为Y=59.069X+0.0301（r=0.9999），平均加样回收率为100.33%，RSD为 1.743% （n=5）;大黄酚在0.020～0.400μg/ml范围内线形良好，回归方程为Y=88.598X+0.1158（r=0.9999），平均加样回收率为100.253%，RSD为1.942% （n=5）。

结论：本方法操作简便快速、灵敏度高、重现性好，可以用于清热凉血软膏的质量控制。

标签：清热凉血软膏;大黄素;大黄酚;高效液相色谱法Determination of the Contents of Emodin and Chrysophonl in Qingreliangxue Ointment by HPLCDING Ke，LV Yan，ZHU TaoDepartment of Chinese Pharmacy，The First Affiliated hospital of Zhejiang Chinese Medical University，Zhejiang，Hangzhou 310005，ChinaAbstract：Objective To establish a HPLC method to determinate the contents of Emodin and Chrysophanol in Qingreliangxue Ointment. Methods The analysis was used on a Dionex Ultimate 3000-C18（4.6mm×150mm，5μm）;methanol-0.1%H3PO4（80∶20）as mobile phase; the flow rate was 1.0mL/min;the detection wavelength was 254 nm. Results A good linearity can be found in the range of 0.010～0.200μg （r=0.9999）in Emodin，the average recovery rate was 100.33%，RSD was1.743%（n=5）;the linear ranges of chrysohonl at 0.020～0.400μg （r=0.9999），the average recovery rate was 100.253%，RSD was 1.942%（n=5）.Conclusion This method is reliable，rapid and accurate. It can be used to control the quality of Qingreliangxue Ointment.Keywords：Qingreliangxue Ointment; Emodin;Chrysophanol; HPLC清热凉血软膏（以下简称“清凉膏”）主要由大黄、当、紫草等中药组成，具有清热解毒、消肿止痛、活血散淤等功效，临床适用于跌打损伤，关节肿痛，丹毒疱疹，特异性炎症等病症，是浙江省中医院传统中药软膏（浙准制字20100233）。

高效液相色谱法测定上清丸中大黄酸＼大黄素＼大黄酚的含量目的：建立以HPLC法测定上清丸中大黄酸、大黄素、大黄酚含量的方法。

方法：采用Symmetry C18柱，以甲醇-0.1%磷酸=80:20为流动相，检测波长：430nm，流速1.0mL?min-1，柱温:室温。

结果：大黄酸、大黄素、大黄酚分别在7.92～79.2ng（r=0.9998）、14.5～145ng（r=0.9991）、27.24～272.4ng（r=0.9994）线性关系良好，平均加样回收率分别为99.7%、99.2%、99.4%，RSD分别为0.95%、1.25%、1.27%。

結论：本方法操作简便、灵敏度高、重现性好，适用于上清丸中大黄酸、大黄素和大黄酚的含量测定。

标签：高效液相色谱法；上清丸；大黄酸、大黄素、大黄酚【Abstract】Objective: To establish a HPLC for determination of rhein、emodin、chrysophanol in Shangqing Pills. Method: A Symmetry C18 Column was used. The mobile phase was methanol-0.1% Phosphoric Acid =80:20，the detecting wavelength was at 430nm，the flow rate was 1.0mL?min-1，the column temperature was room temperature. Result: The linear relationship of rhein、emodin、chrysophanol were 7.92～79.2ng（r=0.9998）、14.5～145ng（r=0.9991）、27.24～272.4ng（r=0.9994）, the recoveries were 99.7%, 99.2%, and 99.4%,respectively, the RSD were 0.95%, 1.25%, and 1.27%,respectively. Conclusion: This method was easy and simple to handle, has good repeatability, flexibility and high sensitivity. It can be used for the determination of rhein、emodin、chrysophanol in Shangqing pills.【key words 】HPLC; Shangqing pills; rhein; emodin; chrysophanol上清丸由菊花、白芷、黄芩、黄柏等12味药而制成的大蜜丸，收载于《卫生部药品标准中药成方制剂第十册》，具有清热散风、解毒、通便等功效，对头晕耳鸣、目赤、鼻窦炎、通便等有很好的作用［1］。

反相高效液相色谱法测定清解合剂中大黄素、大黄酚含量焦志海
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2009(18)9
【摘要】目的建立测定清解合剂中大黄素、大黄酚含量的反相高效液相色谱(RP-HPLC)法.方法色谱柱为Kromasil C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液(75∶25),流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为45 ℃.结果大黄素与大黄酚进样量分别在21.12～105.6 ng和29.28～146.4 ng范围内与峰面积积分值线性关系良好,平均加样回收率分别为98.13%和98.43%,RSD分别为0.87%和0.71%(n=6).结论 RP-HPLC法专属性强、灵敏度高、干扰小、结果可靠,可用于清解合剂的质量控制.
【总页数】2页(P26-27)
【作者】焦志海
【作者单位】湖南省怀化医专附属医院暨怀化市第三人民医院,湖南,怀化,418000【正文语种】中文
【中图分类】R284.1;R286.0
【相关文献】
1.反相高效液相色谱法测定清降丸中大黄素及大黄酚的含量 [J], 史文斌
2.反相高效液相色谱法测定保婴镇惊丸中大黄素和大黄酚含量 [J], 巩长芹
3.反相高效液相色谱法测定延肾胶囊中大黄素和大黄酚的含量 [J], 曹健;王芳;雷健;
张卿;张恩娟
4.反相高效液相色谱法同时测定熊胆丸中大黄素和大黄酚含量 [J], 乐文君
5.应用反相高效液相色谱法测定润肠清颗粒中大黄素和大黄酚的含量 [J], 马魏;关亚会
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HPLC法测定四季三黄片中大黄素、大黄酚的含量目的采用高效液相法测定四季三黄片中大黄素、大黄酚的含量。

方法用高效液相色谱检测法，Elite C18色谱柱，流动相为甲醇∶水（87∶13，pH=4.5），流速为1.000 mL/min，检测波长254nm，柱温：室温。

结果大黄素和大黄酚分别在10.1～50.5μg/mL和9.97～99.7μg/mL范围内线性关系良好，平均回收率分别为100.8%和100.2%。

结论该方法简便、灵敏、可靠、准确、重现性好。

标签：四季三黄片；大黄素；大黄酚；含量测定四季三黄片由大黄、黄芩、栀子、黄柏四味药组成。

该药消炎退热，通便利水，用于口鼻生疮，咽疼齿痛，口干舌燥，目眩头晕，大便秘结，小便赤黄[1]，具有消炎退热、通便利水的功效[2]，临床上主要用于口舌生疮、咽喉肿痛、头晕目眩等症[3]。

其主要成分大黄为蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L）、唐古特大黄（Rheum tanguticum Maxim. Ex Balf）或药用大黄（Rheum officinale Bail）的干燥根及根茎。

具有泻热通便、解毒消痈、行瘀通经、清热除湿之功效。

临床用于胃肠实热积滞、大便秘结、腹部胀满、热毒疮疡、暴赤眼痛、口舌生疮、齿龈肿痛、湿热壅滞之黄疸、小便不利、大便干结等[4]。

其中大黄素和大黄酚是大黄的主要有效成分[5]。

目前测定大黄素和大黄酚含量的方法多为HPLC法，也有薄层扫描法。

本研究采用HPLC法对四季三黄片中大黄的主要有效成分大黄素和大黄酚进行含量测定[6]。

结果表明，使用该法测定时，其线性关系好、准确度高、稳定性好、专属性强、重复性好，可用于大黄素和大黄酚的质量控制方法。

1 仪器与试剂1.1 仪器LC–10AT型高效液相色谱泵（日本岛津）；SPD–10A型紫外检测器（日本岛津）；N–2000双通道色谱工作站（浙江大学智达信息有限公司）；色谱柱Hypersil–ODS（4.6 mm×150 mm，5 ?m，大连依利特科学仪器有限公司）；AG135型电子天平（瑞士，梅特勒-托利多）；HS10260D型超声波清洗机（天津市恒奥科技发展有限公司）等。

论文标题高效液相色谱法测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量班级药学30801专业名称药学系部名称制药工程系河北化工医药职业技术学院毕业设计（论文）原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重承诺：所呈交的毕业设计（论文），是我个人在指导教师的指导下进行的研究工作及取得的成果。

尽我所知，除文中特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或组织已经发表或公布过的研究成果，也不包含我为获得及其它教育机构的学位或学历而使用过的材料。

对本研究提供过帮助和做出过贡献的个人或集体，均已在文中作了明确的说明并表示了谢意。

作者签名：日期：指导教师签名：日期：使用授权说明本人完全了解大学关于收集、保存、使用毕业设计（论文）的规定，即：按照学校要求提交毕业设计（论文）的印刷本和电子版本；学校有权保存毕业设计（论文）的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务；学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文；在不以赢利为目的前提下，学校可以公布论文的部分或全部内容。

作者签名：日期：学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。

除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。

对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。

本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。

作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。

本人授权大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。

涉密论文按学校规定处理。

作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日目录摘要 (3)第一章：大黄的概述 (3)§1-1基本信息 (3)§1-2化学成分 (4)§1-3药效作用 (4)1-3-1消化系统的影响 (4)1-3-2对血液系统的影响 (4)1-3-3抗感染作用 (5)§1-4不良反应 (5)§1-5现代研究 (5)第二章：高效液相色谱法测大黄中大黄素和大黄酚的含量 (6)§1-1仪器与试剂 (6)1-1-1仪器 (6)1-1-1试剂 (6)§2-2方法与结果............................................................. (7)2-2-1色谱条件 (7)2-2-2对照品的制备 (7)2-2-3供试品的制备 (7)2-2-4阴性对照溶液的制备 (7)2-2-5干扰试验 (7)2-2-6标准曲线的绘制 (7)2-2-7精密度试验 (7)2-2-8重复性试验 (7)2-2-9稳定性试验 (7)2-2-10加样回收率试验 (8)2-2-11样品的测定 (8)第三章：讨论 (8)§3-1药材含量测定中提取剂的确定 (8)§3-2HPLC法中检测波长的确定 (8)§3-3HPLC法中线形范围的确定 (9)参考文献 (9)第一章：摘要论文题目：高效液相色谱法测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量摘要摘要内容：大黄是我国临床常用的中药之一，有“泻热通畅、凉血解毒、逐瘀通经、攻积导滞、利胆退黄”之功效，大黄中的有效成分有蒽醌类、芪类、苯丁酮类、鞣质类、色原酮类、萘类、有机酸、糖、蛋白质、甾醇等150多种成分。

清肾颗粒质量标准研究目的建立清肾颗粒的质量标准。

方法采用薄层色谱法对大黄、白花蛇舌草、黄连进行定性鉴别。

采用高效液相色谱法测定大黄中大黄酸、大黄素、大黄酚的含量，Kromasil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），甲醇-0.1%磷酸（70∶30）为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长245 nm，柱温30 ℃。

结果薄层色谱斑点清晰，阴性无干扰。

大黄酸、大黄素、大黄酚分别在0.003 3～0.42 μg、0.008 0～0.51 μg、0.009 9～0.32 μg范围内与峰面积的线性关系良好，相关系数分别为0.999 9、1.000 0、1.000 0，平均回收率分别为98.84%（RSD=1.30%，n=6）、99.04%（RSD=1.34%，n=6）、100.35%（RSD=1.89%，n=6）。

结论本定性定量检测方法准确、快速，可用于清肾颗粒的质量控制。

标签：清肾颗粒；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法清肾颗粒由大黄、白花蛇舌草、黄连等14味中药组成，具有清热化湿、祛瘀泄浊的功效，临床用于慢性肾功能衰竭湿热证的治疗，为安徽中医药大学第一附属医院的院内制剂。

其中大黄为君药，白花蛇舌草、黄连均为臣药且用量较大。

大黄的主要活性成分为大黄酸、大黄素、大黄酚等蒽醌类成分[1]，故采用高效液相色谱法（HPLC）对清肾颗粒中大黄含有的大黄酸、大黄素、大黄酚进行含量测定，并对其进行方法学验证。

采用薄层色谱法对清肾颗粒中的大黄、白花蛇舌草、黄连进行薄层色谱鉴别，建立清肾颗粒的质量标准。

1 仪器与试药KX-30DE型数控超声波清洗器，岛津LC-20AT高效液相色谱仪。

大黄酸对照品（批号110757-200206）、大黄素对照品（批号110758-200110）、大黄酚对照品（批号04-2001）、大黄对照药材（批号121249）、盐酸小檗碱（批号110713-200609）、黄连对照药材（批号120913- 200609）、去乙酰车叶草酸甲酯（批号111786- 200801）、白花蛇舌草对照药材（批号121183-201003）均购自中国食品药品检定研究院。