对生物膜载体相关问题的研究
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生物膜法的应用现状及发展前景分析生物膜法的应用现状及发展前景分析引言生物膜法是一种利用微生物在固体载体上形成的生物膜来处理废水、废气和固体废弃物的技术。
生物膜法已经被广泛应用于废水处理、土壤修复、气体净化等领域。
本文将对生物膜法的应用现状进行分析,并展望其未来的发展前景。
一、生物膜法的应用现状1. 废水处理生物膜法在废水处理领域具有广泛应用。
其中最典型的例子就是生物滤池。
生物滤池利用生物膜附着在滤料上,通过微生物降解废水中的有机物和氨氮,从而达到净化水质的目的。
生物滤池在废水处理领域具有体积小、效率高、操作简单等优点,已被广泛应用于城市污水处理、工业废水处理等方面。
2. 土壤修复生物膜法在土壤修复领域也有重要的应用。
例如,生物土壤冶金法利用生物膜诱导土壤中的微生物降解、转化重金属污染物,可以有效修复受到重金属污染的土壤。
此外,生物土壤防护墙是一种利用生物膜形成的防护层保护土壤不受侵蚀和污染,已被广泛应用于农田保护、土地修复等方面。
3. 气体净化生物膜法在气体净化方面也有应用。
例如,生物滴滤塔利用生物膜固定在填料表面,通过气液交换和微生物降解的作用来去除废气中的有机物和臭味物质。
生物滴滤塔在城市垃圾处理厂、食品加工厂等废气处理中起着重要的作用,它既可以净化废气,又可以回收有价值的物质。
二、生物膜法的发展前景1. 提高治理效率目前,生物膜法在废水处理、土壤修复等领域取得了显著的成果,但仍存在着效率不高的问题。
今后,通过提高生物膜附着微生物的降解活性,优化膜材料和工艺流程,可以进一步提高生物膜法的治理效率。
2. 开发新型生物膜材料传统的生物膜法主要利用自然界存在的生物膜形成附着微生物的载体。
未来,可以借鉴纳米技术和材料科学的成果,开发出新型的生物膜材料,例如纳米纤维、离子液体等,以提高生物膜法的应用效果。
3. 结合其他技术生物膜法和其他技术的结合,可以提高废水处理、土壤修复等过程的效果。
例如,生物膜法可以与电化学技术结合,形成电子传递通路,加速有害物质的降解。
生物膜介导的信号通路研究进展及其应用生物膜介导的信号通路是生物体内非常重要的一部分,它参与着许多重要的生物学过程,例如细胞分化和组织形成等。
近年来,许多研究表明,生物膜介导的信号通路在许多不同疾病的发生和发展中也起着极其重要的作用。
因此,对于生物膜介导的信号通路的研究一直都是生物学界的重点之一。
本文将介绍生物膜介导的信号通路的研究进展及其应用。
一、生物膜介导的信号通路概述生物膜是细胞表面的一层薄膜,由不同种类的脂质分子和其他膜蛋白质构成。
生物膜中的脂质分子是至关重要的,因为它们能够形成一种微环境,同时也是许多信号分子的载体。
信号分子是一类控制基因表达和细胞行为的化学物质。
它们通过与细胞表面的受体结合,从而触发特定的信号通路,修饰蛋白质、细胞因子等生物分子的活性。
受体是生物膜上的一类介质,是信号分子与细胞之间的桥梁,通过它们,信号分子可以与细胞内的一系列蛋白质结合,从而激活信号通路。
形成“信号背景噪声”是细胞膜上的信号通路的主要问题之一。
二、生物膜介导的信号通路的研究进展在信号通路中,受体与信号分子的结合是最初的一步。
许多研究表明,受体的分子结构和生物膜内脂质分子之间的相互作用是非常重要的。
目前,研究人员主要使用X射线晶体学技术解析了许多受体和膜蛋白质的结构,通过这种方法我们可以更好的掌握它们的结构和功能。
然而,这种方法的局限性在于它只能揭示受体表面的静态结构,而无法反映其内部的动态变化,也无法直接观察到受体与信号分子之间的相互作用。
近年来,随着计算机模拟方法的发展,许多研究者开始尝试使用计算机模拟的方法来研究信号通路中受体和信号分子的相互作用。
这种方法能够模拟分子间的相互作用,以及它们在生物膜内的动态运动过程。
目前,这种方法已经在多个领域得到广泛应用,并且在改进计算方法和硬件条件下拥有巨大潜力。
通过计算机模拟方法,我们可以更好地理解受体的动态性和分子间相互作用对信号转导的影响,从而为药物研发提供更为有效的途径。
生物膜结构与功能的解析与应用生物膜是生物体内一种重要的组织结构,它在细胞的分离、保护、传递信息等方面起着关键作用。
本文将探讨生物膜的结构与功能,并介绍其在生物科学和医学领域的应用。
一、生物膜的结构生物膜是由脂质分子和蛋白质组成的双层结构。
脂质分子主要是磷脂,它们具有亲水头部和疏水尾部的特性,使得脂质分子能够在水中形成自组装的双层结构。
蛋白质则嵌入在脂质双层中,起到传递信号、调节通道等功能。
生物膜的结构不仅仅是简单的双层,还包括许多微观结构。
其中,胆固醇是生物膜中的重要成分之一,它能够增加膜的稳定性和流动性。
此外,生物膜还含有许多膜蛋白,这些蛋白质能够形成通道,使得物质能够通过膜进行传递。
二、生物膜的功能生物膜具有多种功能,其中最重要的是细胞的分离和保护。
生物膜能够将细胞内外环境分隔开来,保护细胞内部的结构和功能不受外界环境的干扰。
此外,生物膜还能够调节物质的进出,维持细胞内外物质的平衡。
另外,生物膜还具有传递信息的功能。
生物膜上的膜蛋白能够与外界的信号分子结合,传递信号到细胞内部,从而调节细胞的生理活动。
这种信号传递过程在细胞的生长、分化和凋亡等过程中起到重要作用。
三、生物膜在生物科学中的应用生物膜在生物科学领域有广泛的应用。
首先,生物膜的研究有助于揭示细胞的结构和功能。
通过对生物膜的解析,科学家们可以了解细胞内外环境的交流方式,进而深入研究细胞的生理活动和疾病发生机制。
其次,生物膜的结构和功能也为药物研发提供了重要的参考。
药物需要通过生物膜进入细胞内部才能发挥作用,因此了解生物膜的结构和功能对药物的研发具有重要意义。
科学家们可以通过模拟生物膜的结构,设计出更加适合渗透生物膜的药物。
四、生物膜在医学领域的应用生物膜在医学领域也有广泛的应用。
首先,生物膜的研究有助于诊断和治疗疾病。
许多疾病都与生物膜的结构和功能异常有关,比如癌症、感染等。
通过对生物膜的研究,医生可以更好地理解疾病的发生机制,并开发出更有效的治疗方法。
生物膜在生命科学中的应用研究生物膜是由脂质、蛋白质和碳水化合物等分子组成的一种薄膜结构,广泛存在于生命科学领域中。
生物膜具有许多重要的生物学功能,如提供细胞的机械支撑、维持细胞内外溶质的平衡、作为信号转导的重要平台等。
生物膜在生物医学领域的应用在生物医药领域中,生物膜的研究和应用已经成为一个非常热门的研究方向。
生物膜不仅参与了人体中许多重要的生物学过程,如免疫反应、神经传递等等,而且还能够被人工制备成为一种新型的药物输送系统。
具体来说,生物膜可以用来制备纳米药物载体,这些载体具有良好的药物包裹和释放能力,可以大大提高药物的疗效和安全性。
此外,生物膜还可以用作感染控制、伤口愈合等领域中的敷料材料,能够有效地防止病原体的进一步传播,并促进人体组织的恢复。
生物膜在环境科学领域的应用生物膜在环境科学领域中也具有重要的应用。
水处理是其中的一个重要方向。
通过利用生物膜中微生物的代谢过程,能够将有机物、无机物等物质去除或降低其浓度,从而将水质净化。
此外,生物膜还可以用于土壤修复中,能够加速有机污染物的降解、增加土壤通透性,从而促进土壤的恢复和保护。
生物膜在工业生产中的应用在工业生产中,生物膜也起到了不可替代的作用。
例如在制药、食品、化妆品等领域中,经常需要进行微生物发酵,生物膜就相当于微生物发酵的载体。
不仅可以提高微生物的生长率和代谢效率,还能够降低生产成本和提高产品品质。
生物膜还可以用于制备固定化酶、生产生物质能源等方面。
结语生物膜的应用范围非常广泛,涉及到生命科学、环境科学、工业制造等众多领域。
有理论支撑和实验数据的证明,使得生物膜的研究和应用越来越受到科研工作者的重视。
未来,生物膜研究仍将是一个具有潜力的研究方向,相信在科学家们的不懈努力下,生物膜技术会给我们带来更加广泛的应用前景。
生物膜在生物学作用中的关键作用和影响生物膜是生物体内广泛存在的一种膜结构,其主要由磷脂、蛋白质和碳水化合物等组成,是细胞和细胞器之间的重要隔离和交流界面。
在生物学领域,生物膜不仅仅是一个简单的存在形式,它具有着极其重要的作用和影响。
一、免疫保护作用人体的免疫系统是由一系列细胞和分子组成的复杂系统,它可以保护机体免受外来病原体和毒素的攻击。
而生物膜作为免疫系统的重要组成部分,是免疫细胞与外部环境之间的主要隔离界面。
其中,白细胞的细胞膜作为一种生物膜,在免疫细胞迅速识别和消灭入侵病原体的过程中扮演着至关重要的角色。
此外,生物膜还具有从外部环境中排除有害物质的功能,提供免疫保护作用。
二、传输和信息传递作用在细胞内,生物膜作为一个主要的界面,在维持细胞内稳态、传输物质、进行信号传递方面发挥着至关重要的作用。
在细胞膜上的许多蛋白质和脂质分子,参与着信号分子的识别、接收、传递和调节等过程,构成了一个极其复杂的信号传递网络。
具体来说,它可以参与离子通道、转运蛋白等的工作,确保细胞内的物质传递和信号传递顺利进行。
三、细胞信号调节作用细胞的内部环境是一个复杂多变的生物化学反应体系,生物膜又是其中的重要角色之一。
生物膜上的许多蛋白质和脂质成员,通过自身的特定结构和作用,参与着细胞内反应的调节和控制。
例如,细胞外多肽能够与膜上受体结合,从而激活受体,受体发生构象改变后进一步激活细胞内相关的酶和效应物质,进而调控细胞信号转导和代谢等生理过程。
四、药物传递作用药物传递是分子生物学和药理学中的重要分支之一,是指药物与生物体内靶标发生具有生物学效应的相互作用的过程。
生物膜作为药物传递的重要载体,不仅可以参与药物从细胞外到细胞内的透过过程,还可以通过转运蛋白等多种方式将药物分子内部传递,最终达到目标作用。
随着现代医学技术的不断进步,越来越多的靶向药物和纳米药物正在开发和应用,而这些药物载体的选择和设计与生物膜的特点和作用有密切关系。
生物膜介导的耐药机制1.引言1.1 概述在生物体中,细菌和其他微生物会通过形成生物膜来构建一种复杂的结构。
生物膜是一种由微生物聚集并附着在表面上形成的多细胞体系,被分泌的粘合剂将细菌黏附在一起,形成坚固且复杂的结构。
这种生物膜不仅能够保护微生物免受外界环境的侵害,还能促进其在特定环境中的黏附、生存和繁殖。
然而,生物膜对抗生素的耐药性也是一种普遍存在的问题。
生物膜介导的耐药机制是指生物膜中的微生物通过改变其生理状态和代谢特征来对抗抗生素的效果,从而产生抗药性。
一方面,生物膜中的微生物通常会进入一种所谓的"休眠状态",使其代谢活跃度降低,从而减少抗生素对其的杀菌作用。
另一方面,生物膜本身具有物理屏障的作用,能够阻碍抗生素进入细胞内部,从而减少其对细菌的效果。
这种生物膜介导的耐药机制对于治疗细菌感染带来了巨大的挑战。
常规的抗生素治疗往往无法有效穿透生物膜层,使细菌在膜保护下存活并继续繁殖。
此外,生物膜中存在的休眠菌群也使得抗生素无法达到其最佳效果。
因此,研究生物膜介导的耐药机制,寻找对抗细菌生物膜的方法,成为当前医学领域的一个热点问题。
深入了解和研究生物膜的特性和耐药机制,有助于开发新的治疗方法和药物,提高对抗细菌感染的效果。
这项研究对于我们理解和解决耐药性问题具有重要意义,也为未来的抗生素开发提供了新的思路和方向。
1.2文章结构1.2 文章结构本文将首先在引言部分概述生物膜介导的耐药机制的重要性及其对药物抗性的影响。
接下来,正文部分将分为两个主要部分:生物膜的定义和结构以及生物膜介导的耐药机制。
在生物膜的定义和结构部分,我们将介绍生物膜的基本概念、形成方式以及其在细菌、真菌和其他微生物中的普遍存在。
随后,我们将转向生物膜介导的耐药机制,深入探讨生物膜如何通过形成物理屏障、调节药物渗透以及促进细菌生存等方式来增加微生物对抗生素的抵抗能力。
最后,在结论部分,我们将总结和强调生物膜介导的耐药机制的重要性,并提出一些可能的应对策略以应对这一挑战。
对生物膜载体相关问题的研究崔炜 杨爽(中国矿业大学环境与测绘学院 江苏徐州 221008)摘 要:生物膜法作为一种水处理方法已得到广泛的应用,而生物膜的产生和生长离不开载体材料的使用。
本文就生物膜载体的类型和表面性能对微生物附着的影响因素进行了介绍,分析了不同载体的硝化作用,并简单介绍了一种新型的生物膜载体。
关键词:生物膜 载体 表面性能 硝化1.概述近十余年来,生物膜法已广泛应用于城市污水和工业废水的二级生物处理中,并与其他方法结合形成新型的复合处理工艺。
与活性污泥法相比,生物膜法具有以下优点:生物膜体积小、微生物量高、水力停留时间较短、生物相相对稳定、对毒物和冲击负荷抵抗性强、处理效果高等。
对污水起生物降解作用的主要是生物膜,而生物膜的产生和生长离不开载体材料的使用。
载体在废水处理中有很重要的作用,如表1所示。
在生物膜法中应用的载体应满足如下条件:①易流化,但不易流失;②易成膜,但无毒害作用;③能提供大的比表面积,以增加生物附着量;④价格低廉,容易取材。
表1 载体在废水处理中的作用[1]载体材料 载体作用支持作用 吸附作用 化学作用 砂、塑料、玻璃等 + - -粉末活性炭、树脂等 + + -云石、黏土、氢氧化铁等 + + +2.生物膜载体的类型载体通常指的是细胞及酶固定过程中所需要的介质。
目前,在废水生物处理中所应用的生物膜载体,从根本上可分为两大类,即无机类载体和有机类载体。
2.1无机类载体在当今生物膜技术发展中常用的无机类载体有砂子、碳酸盐类、各种玻璃材料、沸石类、陶瓷材料、炭纤维、矿渣、活性炭、金属等。
部分无机类载体的特性见表2。
大部分无机类载体具有机械强度较高、化学性质较稳定、比表面积较大的特点,从最早使用的砂石到现在被广泛使用的活性炭等载体,都在生物膜技术的发展过程中起到了不可估量的作用,应用于不同类型的反应器,见表3[2]。
通常情况下,微生物以附着的形式固定在载体表面从而形成生物膜,但是在特殊情况下,有一些微生物是以包裹附着的形式实现固定化的,如高效厌氧反应器UASB、EGSB、ABR、IC等,它们通过投加小粒径颗粒载体或利用废水中某些金属离子作为核心进行颗粒化污泥的培养。
这是因为小粒径颗粒载体与废水之间有最大的接触,为微生物的附着生长提供了较大的比表面积,不但可以使附着生物量维持很高的浓度,而且相对疏散;同时可以在启动后很短时间内达到与用大粒径颗粒做载体同样的处理效果。
但是,无机类载体也有其自身的缺点,如密度较大,不适宜做流态化运动,使其在悬浮生物膜反应器工艺中的应用受到限制。
表2 部分无机载体的特性载体材料 石英砂 无烟煤 焦炭 颗粒活性炭 炉渣粒径(mm) 0.25~0.5 0.5~1.2 0.25~3.0 0.96~2.14 0.315~0.63比重(g/cm3) 2.50 1.67 1.38 1.50 1.6无机类载体从最早的发现应用到现在的广泛应用,国内外的许多研究者对其进行了深入的研究。
国外在这方面研究的比较早,70年代以后,研究者向复合式活性污泥-生物膜反应器中填加粉末活性炭(PAC)载体以改进活性污泥法污水处理厂的性能,结果发现这种载体具有加快有机物代谢、抗冲击和毒物负荷、改善活性污泥性能和减少曝气池表面形成泡沫等优点[3]。
还有研究表明,加入密度为1.3g/cm3的无烟煤不仅可以达到与加入PAC同样的效果,而且还可以降低工程造价。
多年来,我国学者在这方面也进行了多方面的研究比较。
浙江农业大学刘双江等人用粒径小于0.42mm的粉砂做载体,在膨胀率为20%的厌氧附着膜膨胀床(AAFEB)中处理COD 为300~900mg/L的废水,结果发现,在温度为16~18℃,HRT为2.28h,有机物负荷率为5.29kgCOD/(m3.d),进水COD为621mg/L时,COD去除率可达到87.7%。
另有研究表明,在厌氧流化床(AFB)中分别用砂石和活性炭做载体,进行比较发现,用活性炭做载体的AFB 启动快,COD去除率高。
此外,在ABF中,有人用0.2mm载体代替0.5mm载体,发现反应器的效率有所改进,这是因为小粒径的载体有较大的比表面积和较大的流态化速度,使生物膜更易生长,所以AFB通常用粒径多在0.2~0.7mm的球形或半球形颗粒做载体。
表3 部分无机类载体所适用的反应器类型载体 反应器所持生物膜湿重 反应器类型(kg/cm2)平板玻璃 0.073 生物膜反应器铝 板 2.0 生物膜反应器矿 渣 0.24-1.7 流化床岩 石 0.24-1.7 流化床玻 璃 4-12.2×10-3 搅动式生物膜反应器玻 璃 1×10-3 搅动式生物膜反应器玻 璃 0.2 生物膜反应器玻 璃 12×10-4 生物膜反应器不 锈 钢 - 管状生物膜反应器活 性 炭 - 生物滤床玄 武 岩 - 气提式反应器2.2有机类载体有机类载体是生物膜技术发展中应用最广泛的主要载体材料。
这类载体主要有PVC、PE、PS、PP、各类树脂、塑料、软性或半软性纤维等,其中具有不同功能的聚合物类载体,如PVC、PE、PS、PP等发展很快,在实际中应用最为广泛。
表4是一些常用有机类载体所适用的反应器类型[2]。
表4 常用有机类载体所适用的反应器类型载体 反应器所持生物膜湿重 反应器类型(kg/cm2)塑料 0.25 RBC塑料 0.48-1.44 滤床塑料 0.12-2.55 滤床网球 0.71 滤床PVC 0.1-0.25 完全混合式反应器PP 0.1-0.25 完全混合式反应器PE 0.1-0.25 完全混合式反应器PS 0.1-0.25 完全混合式反应器PS 0.05-0.1 气提式搅拌床PS 0.05-0.1 三相流化床离子交换树脂 - 完全混合式反应器塑料软性材料 - 稳定塘由于无机类载体自身的缺点,使其在一些方面的应用受到限制。
在这种情况下,大量不同种类的有机类载体在生物膜反应器技术中的应用愈来愈广泛。
例如,在厌氧生物滤池中,用塑料做载体,其比表面积和孔隙率都很大,比如波纹板状塑料载体的比表面积达100~200m2/m3,孔隙率达80%~90%,使有机负荷大为提高,在中温发酵条件下可达5~15kgCOD/(m3.d),也不易堵塞,在生产实践中被广为采用。
德国研究者[4]向复合式活性污泥-生物膜反应器的曝气池中投加15%~30%容积的多孔泡沫塑料小方块做载体,结果发现,可固定的污泥浓度(MLSS)为10~19kg/m3,甚至高达30kg/m3,而且悬浮的MLSS介于4~7kg/m3以满足污泥容积指数(SVI)的要求,便于沉淀分离,提高了活性污泥处理厂的性能。
序批式生物膜反应器采用软性纤维作为其生物膜载体,发现即使悬浮液连续曝气,软性纤维上生物膜内部也能进行有效的反硝化作用,能更有效的去除COD和NH4+–N,平均去除率分别为95%和57%[5]。
在稳定塘的中试实验中,采用比表面积为1236m2/m3的盾式软纤维作为生物膜附着生长的载体,结果发现,当载体层厚度占稳定塘容积的22%时COD、BOD以及NH4+–N的去除率达到最大值[6]。
3.载体表面特性对微生物附着的影响微生物在生物膜载体表面的附着、固定是一个十分复杂的动态过程,影响因素很多。
载体的性能,如表面粗糙度、机械强度、表面带电荷性、孔隙率、比表面积等都会不同程度地影响微生物附着的动力学过程。
3.1表面粗糙度在所有的影响因素中,表面粗糙度在很大程度上被认为是影响微生物在载体表面附着、固定的一个最重要因素。
载体表面的粗糙度有利于细菌在其表面的附着、固定,原因主要有两个方面:一是与光滑表面相比,粗糙的载体表面增加了微生物与载体间的有效接触面积;二是为了避免水力剪切作用的冲刷,微生物总是优先附着在载体表面的粗糙部分,如凹处、缝隙等。
有研究表明,载体表面的凹处及隙缝有效得改善了甲烷菌在不同聚合材料上的附着固定,并且当载体表面粗糙度增加时,细菌在不同载体表面的附着固定能力得到极大改善。
因此,载体表面粗糙度越大,附着的微生物就越多。
3.2机械强度一般来讲,生物膜反应器从启动到稳定运行需要较长的时间。
为了使废水中的污染物能在较短时间内完成与生物膜的接触吸附,通常进行不同程度的搅动,这种搅动产生非常强烈的水力剪切作用。
大量研究结果表明:生物膜的载体材料必须具有足够的机械强度,以抵抗这种强烈的水力剪切作用,防止载体在运动、碰撞过程中破碎而使其功能有所损失。
在污水处理过程中,如果载体材料本身的机械强度不够,载体一旦破碎,则不仅影响微生物在载体表面的固定化数量,更严重的是将导致处理出水水质的波动。
塑料类载体的机械强度良好,常应用于水力负荷高的处理工艺中。
3.3表面带电特性载体表面的电荷特性对微生物在生物膜表面的固定也有直接影响。
在一般的生物处理过程中,微生物生存环境下的pH值通常在7左右,使其表面带有负电荷。
因此,为了加速完成微生物在生物膜表面的附着、固定化过程,同时也是为了提高微生物与载体之间的结合程度,我们应该选择表面带有正电荷的材料作为载体,或是通过一定的表面改良技术,如化学氧化、低温等离子体处理等使载体(通常是聚合物)表面带有正电荷。
在动态实验中,将硝化细菌在未处理的PS表面以及经过低温等离子体F e3+覆盖技术处理的PS表面分别附着固定,结果发现细菌在带有正电荷的载体表面更容易实现固定[7]。
3.4孔隙率与比表面积生物膜载体的孔隙率直接决定其比表面积的大小。
孔隙率越小,比表面积越大,载体表面附着的微生物量越多,所以在生产过程中通常将载体加工成各种形状以增大载体的比表面积,更有利于生物膜的形成。
4.生物膜载体的硝化作用在目前的废水处理中,大部分工艺都是去除水中的BOD和氨氮,出水中硝酸盐氮的含量会偏高,如果处理不当,很容易会导致二次污染。
在生物脱氮过程中,由于硝化菌生长缓慢,硝化作用成为整个反应过程的制约阶段,这使得一般的悬浮生长系统在处理过程中发生污泥流失后很难在较短时间内恢复。
因此,人们倾向于用生物膜法进行脱氮处理,而且可以起到简单有效的效果,载体材料在其中发挥了很大的作用。
不同的载体对反硝化菌固着及硝态氮处理能力有不同程度的影响。
研究表明,炭纤维及活性炭粒的生物固着量及硝态氮的处理能力大于塑料类载体(泡沫聚氨酯和改性聚乙烯),而且炭纤维的处理能力明显优于活性炭,对兼性微生物更具有相容性。
同时,不同材料的同一种载体对生物固着量及硝态氮的处理能力的影响也有所不同。
表5列出了炭纤维载体对微生物固着化的影响[8]。
研究者通过实验发现[9],改性炭纤维表面官能团和平衡含水率对动态挂膜厚度也有较大的影响,如图1、图2所示。
我们可以看到,随着炭纤维表面含氧官能团和平衡含水率的增加,其动态挂膜厚度逐渐减少。