下载文档原格式
一、实验目的1. 了解土壤中挥发酚的分布及含量。
2. 掌握土壤挥发酚的提取和测定方法。
3. 分析土壤中挥发酚的来源及影响因素。
二、实验原理挥发酚是指沸点低于200℃的酚类化合物，主要包括苯酚、甲酚、二甲酚等。
土壤中挥发酚主要来源于农药、石油产品、有机合成材料等。
本实验采用4-氨基安替比林分光光度法测定土壤中挥发酚的含量。
三、实验材料与仪器材料：1. 土壤样品（采集自某地）2. 水合氯醛、4-氨基安替比林、铁氰化钾、盐酸、硫酸等试剂3. 50mL具塞比色管、移液管、容量瓶、锥形瓶、振荡器等仪器：1. 721型分光光度计2. 磁力搅拌器3. 电子天平4. 坩埚四、实验步骤1. 样品前处理：a. 将土壤样品在105℃下烘干至恒重，然后研磨成粉末。
b. 称取1.0000g土壤样品于锥形瓶中。
c. 加入10mL水合氯醛，振荡溶解。
d. 加入20mL盐酸，振荡溶解。
e. 加入20mL硫酸，振荡溶解。
f. 将溶液煮沸5分钟，冷却后加入20mL水。
g. 加入5mL 4-氨基安替比林，振荡均匀。
h. 加入1mL铁氰化钾，振荡均匀。
i. 加入20mL水，振荡均匀。
2. 测定：a. 以水为空白，在510nm波长处测定吸光度。
b. 根据标准曲线计算土壤样品中挥发酚的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据标准溶液的浓度和吸光度绘制标准曲线。
2. 土壤样品中挥发酚含量测定：根据标准曲线计算土壤样品中挥发酚的含量。
3. 结果分析：通过实验结果分析，得出以下结论：a. 土壤样品中挥发酚含量与标准曲线线性关系良好。
b. 土壤样品中挥发酚含量与土壤类型、地理位置等因素有关。
c. 某些农药、石油产品、有机合成材料等可能成为土壤中挥发酚的主要来源。
六、实验讨论1. 本实验采用4-氨基安替比林分光光度法测定土壤中挥发酚的含量，方法简便、快速、准确。
2. 实验结果表明，土壤中挥发酚含量与土壤类型、地理位置等因素有关。
3. 为进一步降低土壤中挥发酚含量，应采取以下措施：a. 减少农药、石油产品、有机合成材料等的使用。
水质水中挥发酚类测定 4-氨基安替比林分光光度法HJ503-20091.目的通过4-氨基安替比林分光光度法测定水中挥发酚的浓度，分析方法检出限、回收率及精密度，判断本实验室的检测方法是否合格。
2.适用范围2.1.1本标准适用于地表水、饮用水、工业废水和生活污水中挥发酚的4-氨基安替比林分光光度法的测定。
1.2 检测方法是4-氨基安替比林分光光度法。
1.3 检测依据是GB/T5750.4-2006和HJ503-20093. 职责3.1 检测人员负责按操作规程操作，确保测量过程正常进行，消除各种可能影响试验结果的意外因素，掌握检出限、方法回收率与精密度的计算方法。
3.2 复核人员负责检查原始记录、检出限、方法回收率及精密度的计算方法。
3.3技术负责人负责审核检测结果及检出限、方法回收率、精密度分析结果。
4.分析方法4.1．水样预处理4.1.1 量取250 mL水样置于蒸馏瓶中，加数粒小玻璃珠以防暴沸，再加二滴甲基橙指示液，用磷酸溶液调节至pH4(溶液呈橙红色)，加5.0 mL硫酸铜溶液(如采样时已加过硫酸铜，则补加适量)。
如加入硫酸铜溶液后产生较多量的黑色硫化铜沉淀，则应摇匀后放置片刻，待沉淀后，再滴加硫酸铜溶液，至不再产生沉淀为止。
4.1.2 连接冷凝器，加热蒸馏，至蒸馏出约225 mL时，停止加热，放冷。
向蒸馏瓶中加入25 mL水，继续蒸馏至馏出液为250 mL为止。
蒸馏过程中，如发现甲基橙的红色褪去，应在蒸馏结束后，再加1滴甲基橙指示液。
如发现蒸馏后残液不呈酸性，则应重新取样，增加磷酸加入量，进行蒸馏。
4.2．标准曲线的绘制：于一组8个分掖漏斗中，分别加入100mL水,依次加入0；0.50；1.00；2.00；3.00；5.00；7.00；10.00mL苯酚标准使用液，再分别加水至至250 mL。
加2.0mL缓冲溶液混匀，此时pH值为10.0±0.2，加1.5 mL4-氨基安替比林溶液，混匀。
挥发酚检验原始记录
挥发酚分析原始记录
样品来源：
使用仪器名称：紫外可见分光光度计仪器型号：仪器编号：
分析方法(水质挥发酚的测定4-氨基安替比林分光光度法HJ503-2009
(《生活饮用水标准检验方法》感官性状和物理指标GB/T5750.4-20069.14-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法
(《海洋监测规范》第4部分：海水分析GB/17378.4-200719挥发性酚-4-氨基安替比林分光光度法检出限(0.0003mg/L 标准溶液名称酚批号 102316 生产厂家环境标样研究所储备液浓度 500mg/L 使用液浓度 1.00mg/L 配制日期有效期使用液配制过程准确吸取1ml 储备液，定容到500ml. 标准曲线a=b=r= 曲线制备日期测定条件460nm，2cm比色皿计算公式Ab:空白试验的吸光度值；采样日期样品种类样品状态温度取样量(ml) 稀释倍数吸光度As 测定结果
(mg/L) 备注样品前处理：
检测人：校核人：审核检测日期：
XX有限公司年月日颁布
第1版第0次修订
注：“XXXL”表示未检出共页第页。
分光光度法分析原始记录实验目的：本实验通过分光光度法分析一种未知溶液中其中一种化合物的浓度，以及该化合物在不同波长下的吸光度。
实验步骤：1.首先，准备一系列稀释溶液，包括未知溶液的不同浓度和纯溶剂作为对照组。
2.使用试剂架和波长选择器装置将分光光度计调整到所需波长。
3.将样品溶液（包括对照组）均匀地放置在试剂皿中，并将试剂皿放在分光光度计的样品槽中。
4.打开分光光度计，选择所需波长，并将零点校准到纯溶剂。
5.依次测量每个样品的吸光度，记录在实验记录表中。
实验数据记录表：实验记录表1：未知溶液浓度与吸光度的关系浓度 (mol/L) ，吸光度-------------，--------0.001，0.2350.002，0.4150.003，0.5840.004，0.7210.005，0.838实验记录表2：未知溶液在不同波长下的吸光度波长 (nm) ，吸光度-----------，--------400，0.542420，0.612440，0.677460，0.728480，0.782500，0.819520，0.845540，0.867560，0.892580，0.915600，0.939数据处理：1.通过实验记录表1，可以绘制未知溶液浓度与吸光度的曲线图，以观察其趋势。
2.对于实验记录表2，可以选择其中一个波长，绘制未知溶液浓度与吸光度之间的关系曲线，以计算该化合物的浓度。
结果分析：1. 从实验记录表1的浓度与吸光度的关系曲线中，可以确定未知溶液的浓度为0.006 mol/L。
2. 从实验记录表2的波长与吸光度的关系曲线中，可以选择波长540 nm进行测定，计算出未知溶液中该化合物的浓度为0.008 mol/L。
结论：通过分光光度法分析，得到了未知溶液中其中一种化合物的浓度，为0.006 mol/L，并确定了该化合物在波长540 nm下的吸光度为0.867、根据浓度与吸光度的关系可以计算出该化合物的摩尔吸光系数，并进一步对其进行鉴定和定量分析。
水质水中挥发酚类测定 4-氨基安替比林分光光度法HJ503-20091.目的通过4-氨基安替比林分光光度法测定水中挥发酚的浓度，分析方法检出限、回收率及精密度，判断本实验室的检测方法是否合格。
2.适用范围2.1.1本标准适用于地表水、饮用水、工业废水和生活污水中挥发酚的4-氨基安替比林分光光度法的测定。
1.2 检测方法是4-氨基安替比林分光光度法。
1.3 检测依据是GB/T5750.4-2006和HJ503-20093. 职责3.1 检测人员负责按操作规程操作，确保测量过程正常进行，消除各种可能影响试验结果的意外因素，掌握检出限、方法回收率与精密度的计算方法。
3.2 复核人员负责检查原始记录、检出限、方法回收率及精密度的计算方法。
3.3技术负责人负责审核检测结果及检出限、方法回收率、精密度分析结果。
4.分析方法4.1．水样预处理4.1.1 量取250 mL水样置于蒸馏瓶中，加数粒小玻璃珠以防暴沸，再加二滴甲基橙指示液，用磷酸溶液调节至pH4(溶液呈橙红色)，加5.0 mL硫酸铜溶液(如采样时已加过硫酸铜，则补加适量)。
如加入硫酸铜溶液后产生较多量的黑色硫化铜沉淀，则应摇匀后放置片刻，待沉淀后，再滴加硫酸铜溶液，至不再产生沉淀为止。
4.1.2 连接冷凝器，加热蒸馏，至蒸馏出约225 mL时，停止加热，放冷。
向蒸馏瓶中加入25 mL水，继续蒸馏至馏出液为250 mL为止。
蒸馏过程中，如发现甲基橙的红色褪去，应在蒸馏结束后，再加1滴甲基橙指示液。
如发现蒸馏后残液不呈酸性，则应重新取样，增加磷酸加入量，进行蒸馏。
4.2．标准曲线的绘制：于一组8个分掖漏斗中，分别加入100mL水,依次加入0；0.50；1.00；2.00；3.00；5.00；7.00；10.00mL苯酚标准使用液，再分别加水至至250 mL。
加2.0mL缓冲溶液混匀，此时pH值为10.0±0.2，加1.5 mL4-氨基安替比林溶液，混匀。
水为新制备的去离子水。
标准溶液由单位统一购置的有证标准物质。
无酚水：按HJ 503—2009《水质挥发酚的测定4-氨基安替比林分光光度法》制备。
酚标准贮备液为挥发酚标准溶液: 编号GBW(E)080376，100mg/L 。
4-氨基安替比林按HJ 503—2009《水质挥发酚的测定4-氨基安替比林分光光度法》附录要求提纯。
2 方法依据和校准曲线的绘制依据：HJ 503—2009《水质挥发酚的测定4-氨基安替比林分光光度法》，绘制校准曲线：首先校准系列的制备：于一组8个分液漏斗中，分别加入100mL 无酚水，依次加入0.00、0.25mL 、0.50mL 、1.00mL 、3.00mL 、5.00mL 、7.00mL 、10.00mL 酚标准使用液(1µg/mL)，再分别加水至250mL 。
按照操作步骤显色、萃取、吸光度测定。
绘制校准曲线。
3 实验结果汇总本实验中使用Excel “散点图”绘制校准曲线，9次实验挥发酚校准曲线原始记录见表1。
4 实验数据分析根据表1原始记录可得(图1)，参与挥发酚制作校准曲线的实验数据n=72个，拟制得的校准曲线为：y=0.043x -0.0042，r=0.9995，校准曲线的重心为(3.34，0.170)，即： x=3.34，y =0.170 (即所有点位x 、y 的平均值)。
0 引言挥发酚是中国水质环境监测评价项目之一，通常指沸点230℃以下的酚类，属于一元酚。
酚类主要来自炼油、煤气洗涤、炼焦、造纸、合成氨、木柴防腐、和化工废水等。
常存在于地下水及生活污水中，人体摄入一定量会出现急性中毒症状；长期饮用被酚污染的水，可引起头痛、出疹、瘙痒、贫血及各种神经系统症状。
因其对人及水生生物有极高的毒性而备受关注。
挥发酚的现行检测方法有4-氨基安替比林分光光度法、溴化容量法、流动注射分析法、气相色谱法等。
而经典通用的方法是4-氨基安替比林分光光度法，该方法具有较高的灵敏度、精密度与准确度。
目次前言 (iv)1 适用范围 (1)2 规范性引用文件 (1)3 术语和定义 (1)方法1 萃取分光光度法4 方法原理 (1)5 干扰及消除 (1)6 试剂和材料 (2)7 仪器和设备 (3)8 样品 (3)9 分析步骤 (3)10 结果计算 (4)11 精密度和准确度 (4)12 质量保证和质量控制 (5)方法2 直接分光光度法13 方法原理 (5)14 干扰及消除 (5)15 试剂和材料 (5)16 仪器和设备 (5)17 样品 (5)18 分析步骤 (5)19 结果计算 (6)20 精密度和准确度 (6)21 质量保证和质量控制 (6)附录A（规范性附录）酚贮备液的标定 (7)附录B（资料性附录） 4-氨基安替比林的提纯 (8)水质挥发酚的测定4-氨基安替比林分光光度法警告：乙醚为低沸点、易燃和具麻醉作用的有机溶剂，使用时周围应无明火，并在通风橱内操作，室温较高时，样品和乙醚宜先置冰水浴中降温后，再尽快进行萃取操作；三氯甲烷为具麻醉作用和刺激性的有机溶剂，吸入蒸气有害，操作时应佩戴防毒面具并在通风处使用。
1 适用范围本标准规定了测定地表水、地下水、饮用水、工业废水和生活污水中挥发酚的4-氨基安替比林分光光度法。
地表水、地下水和饮用水宜用萃取分光光度法测定，检出限为0.000 3 mg/L，测定下限为0.001 mg/L，测定上限为0.04 mg/L。
工业废水和生活污水宜用直接分光光度法测定，检出限为0.01 mg/L，测定下限为0.04 mg/L，测定上限为2.50 mg/L。
对于质量浓度高于标准测定上限的样品，可适当稀释后进行测定。
2 规范性引用文件本标准内容引用了下列文件中的条款。
凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
GB 7489—87 水质溶解氧的测定碘量法HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
挥发酚 volatile phenolic compounds随水蒸气蒸馏出并能和4-氨基安替比林反应生成有色化合物的挥发性酚类化合物，结果以苯酚计。
分析检测分光光度法测定水中挥发酚含量的不确定度评定张丽琴（山西省检验检测中心食品与粮食检验技术研究所，山西太原 030012）摘 要：本文依据《化学分析测量不确定度评定》（JJF1135—2005），按照《生活饮用水标准检验方法 感官性状和物理指标》（GB/T 5750.4—2006）中的4-氨基安替比林三氯甲烷萃取分光光度法，测定饮用 水中的挥发酚含量，对实验过程中的各因素引入的不确定度进行计算，得到该实验的扩展不确定度为 0.000 326 mg/L，影响该实验不确定度的主要因素为标准曲线的拟合过程。
关键词：不确定度；挥发酚；饮用水Evaluation of Uncertainty in Determination of volatile Phenol Content in water by PhotometerZHANG Liqin(Institute of Food and Grain Inspection Technology, Shanxi Inspection and Testing Center,Taiyuan 030012, China)Abstract: This paper determines the volatile phenol content of the factors introduced in drinking water by the 4-aminotebilin trichloromethane extraction method (JJF1135-2005), the sensory traits and physical indicators (GB/T 5750.4-2006), and the main factor of the standard curve.. The uncertainty introduced by each factor in the experiment process is calculated. The expanded uncertainty of this experiment is 0.000 326 mg/L. It is concluded that the main factor affecting the uncertainty of the experiment is the fitting process of the standard curve.Keywords: uncertainty; volatile phenol; drinking water依据《生活饮用水标准检验方法感官性状和物理指标》（GB/T 5750.4—2006）中的4-氨基安替比林三氯甲烷萃取分光光度法，测定饮用水中的挥发酚含量实验过程复杂，容易出现误差的环节较多，因此，对实验结果进行不确定度评价是很有必要的，测量不确定度是表示合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果相联系的参数[1]，衡量检测结果是否准确，本文依据《化学分析测量不确定度评定》（JJF1135—2005），对一加标饮用水盲样进行了检测，分析了不确定度的来源及影响，为以后检验工作中误差规避和结果分析提供了依据。
水质水中挥发酚类测定4-氨基安替比林分光光度法HJ503-20091. 目的通过4-氨基安替比林分光光度法测定水中挥发酚的浓度，分析方法检出限、回收率及精密度，判断本实验室的检测方法是否合格。
2. 适用范围2.1.1 本标准适用于地表水、饮用水、工业废水和生活污水中挥发酚的4-氨基安替比林分光光度法的测定。
1.2 检测方法是4-氨基安替比林分光光度法。
1.3 检测依据是GB/T5750.4-2006和HJ503-20093. 职责3.1 检测人员负责按操作规程操作，确保测量过程正常进行，消除各种可能影响试验结果的意外因素，掌握检出限、方法回收率与精密度的计算方法。
3.2 复核人员负责检查原始记录、检出限、方法回收率及精密度的计算方法。
3.3 技术负责人负责审核检测结果及检出限、方法回收率、精密度分析结果。
4. 分析方法4.1 ．水样预处理4.1.1量取250mL水样置于蒸馏瓶中，加数粒小玻璃珠以防暴沸，再加二滴甲基橙指示液，用磷酸溶液调节至pH4（溶液呈橙红色），加5.0mL硫酸铜溶液（如采样时已加过硫酸铜，则补加适量）。
如加入硫酸铜溶液后产生较多量的黑色硫化铜沉淀，则应摇匀后放置片刻，待沉淀后，再滴加硫酸铜溶液，至不再产生沉淀为止。
4.1.2连接冷凝器，加热蒸馏，至蒸馏出约225 mL时，停止加热，放冷。
向蒸馏瓶中加入25 mL水，继续蒸馏至馏出液为250 mL为止。
蒸馏过程中，如发现甲基橙的红色褪去，应在蒸馏结束后，再加 1 滴甲基橙指示液。
如发现蒸馏后残液不呈酸性，则应重新取样，增加磷酸加入量，进行蒸馏。
4.2．标准曲线的绘制：于一组8个分掖漏斗中，分别加入100mL水，依次加入0; 0.50; 1.00;2.00；3.00；5.00；7.00；10.00mL苯酚标准使用液，再分别加水至至250mL。
力口2.0mL 缓冲溶液混匀，此时pH值为10.0 士0.2加1.5mL4氛基安替比林溶液，混匀。
水中挥发酚类的测定——4-氨基安替比林分光光度法5、4—氨基安替比林直接光度法方法原理酚类化合物于pH10.00±0.2介质中，在铁氰化钾存在下，与4—氨基安替比林反应，生成橙红色的吲哚酚安替比林染料，其水溶液在510nm波长处有最大吸收。
研究指出：酚类化合物中，羟基对位的取代基可阻止反应进行；但卤素、羧基、磺酸基、羟基和甲氧基除外，这些基团多半是能被取代下的；邻位硝基阻止反应生成，而间位硝基是不完全地阻止反应：氨基安替比林与酚的偶合在对位较邻位多见，当对位被烷基、芳基、酯、硝基、苯酰基、亚硝基或醛基取代，而邻位未被取代时，不呈现颜色反应。
用光程为20mm的比色皿测定，酚的最低检出浓度为0.1mg/L。
6、试剂（1）苯酚标消贮备液：称取1.00g无色苯酚(C6H5OH)溶于水，移入l000ml 容量瓶中，稀释至标线，置于4℃冰箱内保存，至少稳定一个月。
（2）贮备液的标定（标定原理：溴酸钾-溴化钾，酸性，生成溴单质，和苯酚发生定量反应，过量的溴酸钾氧化碘化钾析出碘，用硫代硫酸钠滴定。
硫代硫酸钠用碘酸钾-碘化钾标定）（3）苯酚中间液：将苯酚贮备液用水稀释至10μg/ml的酚标淮个间液。
使用时当天配制。
（4）缓冲溶液（pH为10）：称取20g氯化铵溶于100ml氨水中，加塞，置于冰箱中保存。
（5）2%的4-氨基安替比林溶液：称取2g的4-氨基安替比林溶于水，稀释至100ml，置于冰箱中保存，可使用一周。
注：固体试剂易潮解、氧化，宜保存于干燥器中。
（6）8%的铁氰化钾溶液：称取8g铁氰化钾溶于水，稀释至100ml，置于冰箱中保存，可使用一周。
（7）硫酸铜（1g/L）（8）磷酸（9）5%硫酸亚铁：称取5g硫酸亚铁固体，溶入100m l水中。
报告编号：安徽安环康检测科技有限公司分析方法验证报告项目名称生活饮用水中挥发酚类的测定GB/T5750.4-2006分析方法 4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法方法编号 1.10验证人员葛桂萍验证日期 2020.（公章）二〇年月日1 方法范围. 1 范围本标准规定了用4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法测定生活饮用水及其水源水中的挥发酚。
本法适用于测定生活饮用水及其水源水中的挥发酚。
本法最低检测质量为0. 5ug挥发酚（以苯酚计）。
若取250 ml. 水件，则具最低检测质量为0.002 mg/L挥发酚（以苯酚计）2 方法原理在pH10.0±0.2和有氨化剂铁氟化钾存在的溶液中，酚与4-氨基安容吡啉形成红色的安替吡啉染料，用三氯甲烷萃取后比色定量。
3 试剂与材料3. 1 本法所用纯水不得含酚及游离余氮、无酚纯水的制备方法如下：于水中加人氢氧化钠至PH 为12以上，进行蒸馏。
在碱性溶液中，酚形成酚钠不被蒸出。
3. 2 三氯甲烷。
3. 3 硫酸铜溶液（100 g/L) : 称取10g硫酸铜（CuSO4·5H2O) , 溶于纯水中，井稀释至100 ml 3. 4 氨水－氯化铵缓冲溶液（pH9.8) : 称取20g氯化铵（NH4CI) , 溶于100mL氨水（p20=0. 88g/mL) 中。
3. 5 4-氨基安替吡啉溶液（20g/L) : 称取2. 0g4-氨基安替吡啉（4-AAP, C11H13ON3 ) 溶于纯水中，并稀释至100mL.储于棕色瓶中，临用时配制。
3. 6 铁氰化钾溶液（80g/L) : 称取8. 0g铁氰化钾［K3Fe(CN)6 ] , 溶于纯水中，并稀释至100ml.储于棕色瓶中，临用时配制，3. 7 硫酸溶液（1+9) .3.8 酚标准储备溶液[p(C6 H5OH) =1000ug/mL]3.9 酚标准使用溶液[p(C6H5OH) =1.00ug/mL] :临用时将酚标准储备液用纯水稀释成［p(C6H5OH) =10.0ug/ml] .再用此液稀释成［p(C6H5OH) =1.00ug/ml. ] 酚标准使用溶液。
1．检验依据HJ 998-2018土壤和沉积物 挥发酚的测定 4-氨基安替比林分光光度法 2. 主要仪器和设备 紫外-可见分光光度计 3．分析步骤依据HJ 998-2018土壤和沉积物 挥发酚的测定 4-氨基安替比林分光光度法 样品8 4. 验证结果4.1校准曲线及线性范围表1 挥发酚标准曲线回归方程：y=0.0027x-0.0007 r ＝0.9999 4.2 检出限在10个空白样品中分别加入5倍检出限浓度的标准物质（即3.00mL10mg/L 的挥发酚标准使用溶液），进行测定，按HJ 168-2010规定MDL=S n t ⨯-)99.0,1(进行计算，结果如下：表2 方法检出限测定结果（N=10）计算得出方法检出限为：DL=0.3mg/kg根据挥发酚，w=1V2×m其中：V1—浸提液的总体积，ml，V1=300；V2—比色时分取体积，ml，V2=50；m—取样量，g，本实验为20.0g。
4.3 精密度取2个高低浓度的样品，按照步骤8.4，分别做6次平行实验，计算出挥发酚的浓度、平均值，标准偏差，并求出相对标准偏差，结果见表3。
表3精密度测试数据4.4 准确度（加标实验）将样品1和2分别进行加标，样品1加标50μg，样品2加标500μg，计算加标回收率，结果见表4。
表4 加标实验测试数据5. 结论5.1 本实验检出限为0.3mg/kg，该方法检出限为0.3mg/kg，符合方法要求；5.2测定2个高低浓度的样品，样品1的平均值为3.2 mg/kg，相对标准偏差为4%，样品1的平均值为50.4mg/kg，相对标准偏差为2%；5.3分别对样品1和2分别进行加标，样品1加标50μg，样品2加标500μg，计算加标回收率范围分别为80.6%~93.8%和85.6%~90.0%。
