食品中铁的测定-二氮杂菲分光光度法(学生用)

实验二邻二氮杂菲分光光度法测定铁含量
一、原理：利用分光光度法找出吸光度A与物质含量之间的定量关
系。

二、实验内容
1、吸收曲线的测绘
(1)、实验数据
(2)、吸收曲线
结论：最大吸收波长为510nm 2、工作曲线测绘
（1）、实验数据
(2)、工作曲线
结论：在λmax=510nm做出标准工作曲线如上图所示，拟合出直线方程为：y=0.0018x+0.0082
已知：未知液的吸光度为0.090
带入线性关系式中可求的铁含量:y=45.44μg
所以，未知液的浓度：
C= = =9.089μg /L
三、实验讨论
1、问题：在吸收曲线的测绘中所用的溶液铁含量为80μg，在λ=510nm时吸光度为0.103；在工作曲线测绘中（在λmax=510nm的条件下），溶液铁含量为80μg的吸光度为0.017，两次测量值相差较大。

原因：由于溶液配制完后立刻进行了吸收曲线的测绘，溶液可能未完全均匀混合，导致吸光度测量值偏小。

验证:实验结束，发现问题后，对该溶液在其他波长下的吸光度也进行了测量，发现吸光度值均偏大，说明猜测应该正确。

2、注意事项：①.再吸收曲线测绘时，每改变一次光的波长就要用参比溶液进行调零。

②.标准曲线测绘时，只有第一个点需要用参比溶液调零。

一、论文题目蔬菜、食品中铁的测定二、论文摘要随着社会的发展，人们的生活水平有了很大提高，营养成了一个普遍的话题。

人们每天需要摄入多种营养物质，其中蔬菜、食品（如蛋制品）都是非常重要的。

本实验采用邻二氮杂菲分光光度法直接对芹菜、油菜、青椒等几种蔬菜以及蛋黄中铁的含量进行测定。

实验中要分析测定邻二氮杂菲、盐酸羟胺等试剂以及pH对实验的影响，从而在实际生活生产中为指导人们合理饮食补铁提供理论依据。

本篇论文仅讲解蛋黄中铁含量的测定。

三、关键词蛋黄；干法；条件试验；铁元素的测定；分光光度法；回收实验；标准曲线四、实验目的1、学习样品的预处理方法；2、综合运用所学知识，学会仪器分析法（如分光光度法）测定物质含量的一般条件及其选定方法；3、掌握邻二氮杂菲分光光度法对铁的测定；4、练习灵活运用各种基本操作的能力和查阅资料的能力。

五、实验原理食品中的金属元素，由于常与蛋白质、维生素等有机物结合成难溶或难于解离的物质，因此在测定前破坏有机结合体，释放出被测组分。

通常采取有机物破坏法，该法是在高温条件下加入氧化剂，使有机物质分解。

其中碳、氢、氧等元素生成二氧化碳和水呈气态逸出，而被测的金属元素则会以氧化物或无机盐的形式残留下来。

有机物破坏法又分干法和湿法两种，本实验采用的是干法灰化。

常量组分的测定可采用滴定分析法，微量和痕量组分的测定不宜采用滴定法，而应采用仪器分析法，本实验蛋黄中微量铁的测定可采用分光光度法。

根据比耳定律A=εbc，用标准曲线法测定铁的含量。

在pH=2～9的溶液中，Fe2+与邻二氮杂菲生成稳定的橘红色配合物，此配合物的lgK稳=21.3，摩尔吸光系数ε510nm=1.1×104L·mol-1·cm-1。

在显色前，首先用盐酸羟胺将Fe3+还原为Fe2+其反应式如下：2Fe3++2NH2OH·HCl→2Fe2++N2↑+2H20+4H++2Cl-测定时，控制溶液酸度在pH为5左右较为适宜。

西安电子科技大学化学探究实验课程实验报告实验名称食物中微量铁的测定学院班Array姓名学号同作者实验序号实验日期2020 年7 月16日一、实验目的了解分光光度计的使用方法，并了解此仪器的主要构造。

掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。

掌握朗伯－比耳定律及其应用。

掌握吸收曲线及标准曲线的概念及其应用。

二、实验原理葡萄、大枣、味精及酱油等食品中铁含量的测定可以采用邻菲罗啉可见分光光度法，通过这种测定方法，可以对铁进行定量测定。

分光光度法测定物质含量是应注意的主要是显色反应的条件和测量吸光度的条件。

显色反应的条件有显色剂的用量、介质的酸度、显色时间、显色时溶液的温度、干扰物的消除方法等。

测量吸光度的条件包括应选择的入射光波长，吸光度范围和参比溶液等。

本实验主要选用邻二氮菲光度法测铁在入射光波长、络合物溶液的稳定性、显色剂浓度、溶液pH 值的影响等几个方面确定实验的最佳条件。

三、仪器、药品及实验装置仪器721 型分光光度计，1 cm 吸收池，2 mL ,1 mL, 10 mL 吸量管，50 mL 比色管等试剂1.0×10 -3 mol·L -1 铁标准溶液，100μg·mL-1 铁标准溶液，0.15%邻二氮菲水溶液，10% 盐酸羟胺溶液，乙酸钠溶液，四、实验步骤1.吸收曲线的制作和测量波长的选择在50ml 比色管中按次序准确加入以下溶液，10μg/ml 铁标准溶液5ml，10%盐酸羟胺1ml，再加入1mol/LNaAc5ml，0.15%邻二氮菲3ml。

用水稀释至刻度。

在分光光度计上，用1cm 比色皿以水为参比溶液，从440~580nm 之间测定吸光度（A）。

每隔20nm 测定一次，其中从480~540nm，每隔10nm 测定一次。

最后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收曲线。

从吸收曲线上找出最大吸收的波长，用以进行铁的标定。

2.铁含量的测定（1）标准曲线的制作在6 个50ml 比色管中，用吸管分别加入0.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0ml 10μg/ml 铁标准溶液，10%盐酸羟胺1ml，再加入1mol/LNaAc5ml，0.15%邻二氮菲2ml。

邻二氮菲分光光度法测定铁的实验报告
实验名称：邻二氮菲分光光度法测定铁
一、实验目的
本实验以邻二氮菲分光光度法，测定水样中含铁量的量。

二、实验原理
邻二氮菲分光光度法是一种基于反应物之间形成有效络合的可逆的配位反应，利用反应产物的吸收光谱率，在指定波长处测定样品中某物质的浓度，从而计算出样品中含量。

三、实验器材
此实验所用仪器为分光光度计和移液器，其他耗材为吸管、量筒、大瓶、过滤器等。

四、试剂
含氧水，硅砂，邻二氮菲溶液，硫酸铁标准溶液，柠檬酸水行。

五、步骤
（1）在清洁明了的200mL大瓶中加入含氧水生成调节液，并加入硅砂使其混合均匀；
（2）将样品滴入到移液器中，并且加入适量的邻二氮菲溶液；
（3）将步骤（2）中的混合物滴入200ml大瓶中，然后加入柠檬酸水行；
（4）在分光光度计的520nm处，根据标准曲线法测定样品中的铁量，再根据标准曲线求出样品中铁浓度。

六、实验结果
实验按照步骤进行，通过标准曲线法测出样品中的铁量，结果如下表所示：
样品编号 | 样品中铁量/μg/g
A | 0.25
B | 0.17
C | 0.23
七、实验结论
本次实验通过分光光度法，测试了三个样品中铁量的含量，结果表明样品A中的铁量为0.25μg/g，样品B中的铁量为0.17μg/g，样品C中的铁量为0.23μg/g。

通过本次的实验，说明邻二氮菲分光光度法是一种可靠的测定铁含量的方法。

食品中铁含量的测定食品安全检验技术(理化部分)食品中铁的测定有火焰原子吸收光谱法,二硫腙比色法(邻菲啰啉,磺基水杨酸,硫氰酸盐比色法等)两种国家标准方法.下面对原子吸收分光光度法,分光光度法(邻二氮菲法)进行详细阐述.(一)原子吸收分光光度法1,原理经湿法消化样品测定液后,导入原子吸收分光光度计,经火焰原子化后,吸收波长248.3nm的共振线,其吸收量与铁的含量成正比,与标准系列比较定量.2,主要试剂:(1)高氯酸-硝酸消化液:1+4(体积比)(2)0.5mol/LHNO3溶液(3)铁标准储备液:每毫升相当于1mg铁.(4)铁标准使用液:取10.0mL(3)液于100mL容量瓶中,加入0.5mol/L硝酸溶液,定容.3,主要仪器原子吸收分光光度计(铁空心阴极灯)4,操作方法:样品处理品系列标准溶液的配制仪器参考条件的选择标准曲线的绘制样品测定仪器参考条件的选择:波长248.3nm;光源为紫外;火焰:空气-乙炔;其它条件按仪器说明调至最佳状态. 5,结果计算:式中 X----样品的铁含量,mg/100g(或μg/100mL);ρ----测定用样品液中铁的浓度, μg/mL;ρ0----试剂空白液中铁的浓度,μg/mL;m----样品的质量或体积,g或mL;V----样品处理液总体积,mL; f----稀释倍数.6,说明(1)所用玻璃仪器均经硫酸-重铬酸钾洗液浸泡数小时,再以洗衣粉充分洗刷,其后用水反复冲洗,再用去离子水冲洗烘干.(2)本方法最低检出浓度为0.2μg/mL.(二),分光光度法(邻二氮菲法)1,原理:在pH为2～9的溶液中,二价铁离子与邻二氮菲生成稳定的橙红色配合物,在510nm有最大吸收,其吸光度与铁的含量成正比,故可比色测定.2,试剂①盐酸羟胺溶液:10%②邻二氮菲水溶液(新鲜配制):0.12%③醋酸钠溶液:10%④盐酸:1mol/L⑤铁标准溶液:3,测定方法:①样品处理:干法灰化②标准曲线绘制:吸取10g/mL铁标准溶液0.0mL,1.0mL,3.0mL,4.0mL,5.0mL,分别置于50mL容量瓶中,加入1mol/L盐酸溶液1mL,10%盐酸羟胺1mL,0.12%邻二氮菲1mL.然后加入10%醋酸钠5mL,用水稀释至刻度,摇匀,以不加铁的试剂空白溶液作参比液,在510nm波长处,用1比色皿测吸光度,绘制标准曲线.③样品测定:准确吸取样液5~10mL于50mL容量瓶中,以下按标准曲线绘制操作,测定吸光度,在标准曲线上查出相对应的含铁量(μg).(4)结果计算式中 m----样品质量,g ;V1----测定用样液体积,mLV2----样液总体积,mLX----从标准曲线上查得测定用样液相当的铁含量, μg.。

邻二氮杂菲分光光度法测定铁一、实验目的1.了解分光光度法测定物质含量的一般条件及其选定方法。

2.掌握邻二氮杂菲分光光度法测定铁的方法。

3.了解7200型分光光度计的构造和使用方法。

二、实验原理 1.光度法测定的条件分光光度法测定物质含量时应注意的条件主要是显色反应的条件和测量吸光度的条件。

显色反应的条件有显色剂用量、介质的酸度、显色时溶液的温度、显色时间及干扰物质的消除方法等；测量吸光度的条件包括应选择的入射光波长、吸光度范围和参比溶液等。

本实验因受学时限制只做选择入射光波长的条件实验。

2.邻二氮杂菲-亚铁配合物邻二氮杂菲即邻菲罗啉（phen ）：是测定微量铁的一种较好试剂。

在pH ＝2～9的条件下Fe 2+离子与邻二氮杂菲生成极稳定的橘红色配合物，反应式如下：NN ....+3+Fe +2此配合物的lg K 稳＝21.3，摩尔吸光系数ε510 = 1.1×104。

在显色前，首先用盐酸羟胺把Fe 3+离子还原为Fe 2+离子，其反应式如下：2Fe 3+ + 2NH 2OH·HCl → 2Fe 2+ + N 2 + 2H 2O + 4H + + 2Cl -测定时，控制溶液酸度在pH ＝5左右较为适宜。

酸度高时，反应进行较慢；酸度太低，则Fe 2+离子水解，影响显色。

Bi 3+、Cd 2+、Hg 2+、Ag +、Zn 2+等离子与显色剂生成沉淀，Ca 2+、Cu 2+、Ni 2+等离子与显色剂形成有色配合物。

因此当这些离子共存时，应注意它们的干扰作用。

三、实验用品仪器：7200（或721）型分光光度计，容量瓶(50mL7只和100mL2只)，烧杯(50mL)，移液管(1，5和10mL)，洗瓶，废液杯，吸水纸等。

药品：盐酸羟胺固体及10%溶液（因其不稳定，需临用时配制），0.1%邻二氮杂菲溶液（新配制），2 mol·L -1HCl ，l mol·L -1 NaAc 溶液， NH 4Fe(SO 4)2·12H 2O （s 、分析纯）。

邻二氮菲分光光度法测定铁的含量实验报告班级姓名学号成绩：一、实验预习（一）实验目的1、熟悉可见分光光度计的工作原理及操作规程；2、能够运用邻二氮菲分光光度法测定铁的含量。

（二）实验原理从光源钨灯发出的光，经单色器分出一组平行单色光。

当单色光通过待测溶液时，被溶液中具有一定特征吸收的化合物吸收，吸收大小与溶液中待测物浓度的关系符合朗伯—比尔定律：A= logI0/I=KCL式中：A—吸光度I0—入射光强度I—透射光强度K—吸收系数L—光路长度C—溶液中待测物浓度邻二氮菲和Fe2+在pH=3～9的溶液中，生成一种稳定的橙红色络合，为其吸收曲线如图a所示。

显色前需用盐酸羟胺或抗坏血酸将Fe3+全部还原为Fe2+，然后再加入邻二氮菲，并调节溶液酸度至适宜的显色酸度范围。

有关反应式如下：2Fe3+ + 2NH2OH·HCl = 2Fe2+ + N2 ↑+ 2H2O + 4H+ + 2Cl-图a 最大吸收曲线用分光光度法测定物质的含量，一般采用标准曲线法，即配制一系列标准溶液，在实验条件下依次测量各标准溶液的吸光度（A），以标准溶液的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

在同样实验条件下，测定待测溶液的吸光度，根据测得吸光度值从标准曲线上查出相应的浓度值，即可计算试样中被测物质的质量浓度。

（三）实验用仪器和试剂仪器：可见分光光度计、电子天平、5mL量筒、50mL 量筒、50mL容量瓶、100ml烧杯、250mL烧杯试剂：铁标准溶液、10%盐酸羟胺溶液、0.15%邻二氮菲、CH3COONa·3H2O （四）实验步骤1、1 mol·L-1 CH3COONa溶液将100mL烧杯置于电子天平上，归零，取13.6g CH3COONa·3H2O放入100mL 烧杯中，取下烧杯。

用筒量量取50mL蒸馏水倒入装有CH3COONa·3H2O的烧杯中，搅拌至固体完全溶解备用。