香叶木苷的血浆蛋白结合率研究

2011年4月Vo.l 29No .4April 2011Chi n ese Journal of Chromatography358~361研究论文DOI :10.3724/SP .J .1123.2011.00358*通讯联系人:张秀莉,副研究员,主要研究天然小分子和多肽的分离分析.Te :l (0411)84379521,E m ai:l zhangx i uli @dicp .ac .cn .基金项目:重大新药创制专项(N o .2009ZX 09313 003)和国家自然科学基金面上项目(No .30801513).收稿日期:2010 12 08高效亲和色谱法测定2种中药成分与人血清白蛋白的结合率蔡晓明1, 张 岩2, 于 龙1, 郭志谋1, 张秀莉1*, 梁鑫淼1(1.中国科学院大连化学物理研究所,中国科学院分离分析重点实验室,辽宁大连116023;2.Un ivers ity of C alifon ia Irvi ne ,CA 92697 4625,USA )摘要:采用高效亲和色谱技术(HPAC )对中药成分与人血清白蛋白(HSA )的相互作用进行了研究。

首先采用点击化学的方法制备了表面键合有HSA 蛋白的硅胶固定相并装填成亲和色谱柱,根据药物在该色谱柱上与空白硅胶柱上的保留时间差计算得到药物与蛋白的结合率。

利用该方法测得模型化合物华法令与H SA 的结合率与文献中采用超滤法测得的结果基本一致,表明该方法可用于测定药物与HSA 的结合率。

在此基础上用该方法测定了葛根素和告依春两种中药成分与HSA 的相对结合率分别为10 26%和10 20%。

同时用超滤的方法测定了葛根素与H SA 的结合率为14 25%。

结果表明,HPAC 可以作为研究药物与蛋白相互作用的一种简便可行的方法,其测定结果与超滤方法一致。

关键词:高效亲和色谱法;人血清白蛋白;葛根素;告依春;结合率;超滤中图分类号:O 658 文献标识码:A 文章编号:1000 8713(2011)04 0358 04Detection of drug hu m an seru m albu m in b ind i ng ratios of t woCh i nese m edici nal ingred ients by h igh perfor m anceaffinity chro matographyCAI Xiao m i n g 1,Z HANG Yan 2,YU Long 1,GUO Zhi m ou 1,ZHANG X iuli 1*,LI ANG X in m iao1(1.CAS K ey L abora tory of Sepa ra tion Sc ien ce for An a ly tica l Che m istry ,D a lian In stitu te o fChe m ica l Phy sics,Chin ese Acade m y o f Scie n ces,Da lian 116023,Ch i n a;2.Un iver sity o f Ca lifon ia Ir vin e,CA 92697 4625,U SA )A bstract :The i n teraction of t wo Chinese m edici n al i n gredi e nts and hum an seru m al b u m in (HSA )has been investigat ed by high perf or m ance affi n it y chro m atography (HPAC ).HSA bounded silica based stati o nary phase w as prepared based on t he click chem istry strategy ,and packed in a colu m n (nam ed as HSA col u m n).The drug HSA binding rati o was calculated fro m t he diff erence of t he drug s ret enti o n ti m es on the H SA colu m n and silica col u m n (blank col u m n).T he warfari n HSA bindi n g rati o det er m ined by t his m ethod was s i m ilar to t he refer ence reported value by ultrafiltration m et hod .The results i n dicat ed that the new HSA colu m n and t he HPAC m et hod can be used for t he detection of binding ratio of drug and HSA .T he bi n di n g ratios of puerari n and goitri n deter m i n ed by the HPAC m ethod were 10 26%and 10 20%,respecti v e l y .And the binding rati o of puerarin deter m i n ed by ultrafiltrati o n was 14 25%.A ll t hese results showed t hat HPAC is a usef ul m et hod t o i n vestigate the interacti o n bet ween drugs and protein .K ey words :high perf or m ance affinity chro m atography (HPAC);hu m an seru m albu m i n ;puer ari n ;goitrin ;binding ratio ;ultrafiltration 人血清白蛋白(hu m an seru m albu m in ,HSA)是由585个氨基酸残基组成的一条单肽链,相对分子质量约为66500,是血浆中含量最丰富的重要载体蛋白[1]。

2021251引用本文：魏莹，肖莉，杨兰，等.不同产地佛手的香叶木苷及橙皮苷含量同时测定法［J］.安徽医药，2021，25（1）：32⁃34.DOI：10.3969/j.issn.1009⁃6469.2021.01.008.◇药物分析◇不同产地佛手的香叶木苷及橙皮苷含量同时测定法魏莹1，肖莉2，杨兰1，廖思维1，李艳平1，张建武1作者单位：1川北医学院药学院药物研究所，四川南充637000；2四川大学华西基础医学与法医学院，四川成都610041通信作者：张建武，男，副教授，硕士生导师，研究方向为心脑血管疾病和抗肿瘤方面，E⁃mail：基金项目：南充市校科技战略合作专项（19SXHZ0231）；川北医学院2015年校级科研发展项目（CBY15⁃A⁃YB22）摘要：目的佛手药材中香叶木苷和橙皮苷含量测定方法的建立。

方法2015年9月至2018年6月，以DiamonsilC18（250 mm×4.6mm，5μm）为色谱柱，乙腈（A）-0.1%醋酸水（B）（20∶80）等度洗脱为流动相，285nm为检测波长，1.0mL/min的流速，25℃的柱温，10µL的进样量。

结果香叶木苷、橙皮苷进样量分别在12.32~616ng（r＝0.9998），8.128~1016ng（r＝0.9999）范围内与峰面积呈良好线性关系，平均回收率（n＝6）分别为99.32%、100.87%；相对标准偏差（RSD）分别为2.29%、2.24%。

结论该法简便、准确、可靠，可作为佛手药材中香叶木苷、橙皮苷含量测定的有效方法。

关键词：色谱法，高压液相；芸香科；含量测定；佛手；香叶木苷；橙皮苷Simultaneous determination of diosmin and hesperidinin bergamot from different areasWEI Ying1，XIAO Li2，YANG Lan1，LIAO Siwei1，LI Yanping1，ZHANG Jianwu1 Author Affiliations：1College of Pharmacy，Institute of Medicine，North Sichuan Medical University，Nanchong，Sichuan637000，China；2West China School of Basic Medical Sciences and ForensicMedicine，Sichuan University，Chengdu，Sichuan610041，ChinaAbstract：Objective Establishment of a method for determination of diosmin and hesperidin in bergamot medicinal materials. Methods From September2015to June2018，the chromatographic column was Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5µm），mobile phase was acetonitrile（A）-0.1%acetic acid water（B）inisometric elution（20：80）.The detection wavelength was285nm and the flow rate wass1.0mL min⁃1at25℃，and the injection volume was10µL.Results The contents of diosmin and hesperidin had good linear relationship with the peak area in the ranges of12.32~616ng（r＝0.9998）and8.128~1016ng（r＝0.9999）respective⁃ly，and the average recoverie rate（n＝6）of five components was99.32%with RSD of2.29%and100.87%with RSD of2.24%re⁃spectively.Conclusion The method is simple，accurate and reliable，and can be used as an effective method for the determination of diosmin and hesperidin in bergamot.Key words：Chromatography，high pressure liquid；Rutaceae；Content determination；Bergamot；Diosmin；Hesperidin佛手为临床常用理气药，具有疏肝理气，和胃止痛，燥湿化痰的作用，来源于芸香科植物佛手的干燥果实；常用于治疗肝胃气滞、胸胁胀痛、咳嗽痰多、胃脘痞满等症［1］。

香叶木苷在大鼠体内的药代动力学研究
马英丽;马超
【期刊名称】《中国中药杂志》
【年(卷),期】2007(32)5
【摘要】目的：建立香叶木苷血药浓度的高效液相色谱测定方法，并探讨其在大鼠体内的药代动力学特点。

方法：大鼠灌胃香叶木苷225，325，425mg·kg^-1后，于不同时间点采血，用HPLC测定其血药浓度并用3p97软件拟合，求算药动学参数。

结果：香叶木苷血药浓度的回归方程为Y=3．05×10^-3C＋
1．55×10^-3，R=0．9964，在0．5—100μg·mL^-1线性关系良好，最低检测限为0．2μg·mL^-1。

方法回收率大于92％。

大鼠灌胃香叶木苷以高，中，低3个剂量后，其体内过程经3p97拟合符合一室模型。

结论：首次建立了香叶木苷血药浓度的HPLC检测方法，该方法专属性强，灵敏度高，可用于该药的体内定量分析。

【总页数】3页(P418-420)
【关键词】香叶木苷;HPLC;药代动力学;一室模型
【作者】马英丽;马超
【作者单位】黑龙江中医药大学药学院
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
【相关文献】
1.雷公藤多苷对白芍总苷在正常大鼠体内药代动力学的影响 [J], 陈凯丽;易剑峰;孙兰;孙文;翟文静;
2.液相色谱-串联质谱法研究四物汤中芍药苷和芍药内酯苷在大鼠体内药代动力学[J], 黄开福;王学美;孟志云;高月;李俭;甘慧;吴卓娜;朱晓霞;顾若兰
3.类叶升麻苷在大鼠体内的药代动力学及组织分布研究 [J], 甘萍;霍仕霞;白鹏;高莉;彭晓明;何燕;闫明
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MTT法检测香叶木苷对脐静脉内皮细胞增殖抑制的影响苏秀莉;卢卫红;张浩;赵越【摘要】Objective: To research the determination of dosmin on human umbilical vein endothelial cells in order to optimize the concentration of the optimal dosing and optimal dosing time. Method: 1) Human umbilicus vein endothelial cells were divided into two groups of control group and six experimental groups which had six different concentrations of dosmin. MTT method assay was used to detect the activeness of cells and got the optimal dosing. 2) Human umbilicus vein endothelial cells were divided into three groups of A(24h) ,B(48h) ,C (72h) and every group set control group. After adding dosmin to center hours, MTT method assay was used to detect the activeness of cells and got the optimal dosing time. Conclusion; The optimal dosing is 20μg/mL,the optimal dosing time is 48h and the IC50 is 254. 8μg/mL.%目的:测定香叶木苷对脐静脉内皮细胞的影响,优化出最佳加药浓度和最优加药时间.方法:1)将细胞分为对照组和实验组(终浓度10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL、60μg/mL),MTT法检测细胞活性,根据抑制率和抑制率曲线确定了最佳加药浓度.2)将细胞分为A组(24h)、B组(48h)、C组(72h),每组设置对照,加药(20μg/mL)后分别按照各组时间用MTT法检测细胞活性,根据抑制率和抑制率曲线确定了最优加药时间.结论:经实验选择出的最佳加药浓度为20μg/mL,最优加药时间为48h,其IC50为254.8μg/mL.【期刊名称】《中医药信息》【年(卷),期】2012(029)006【总页数】4页(P101-104)【关键词】香叶木苷;脐静脉内皮细胞;MTT比色法【作者】苏秀莉;卢卫红;张浩;赵越【作者单位】哈尔滨工业大学,黑龙江哈尔滨150001;哈尔滨工业大学,黑龙江哈尔滨150001;哈尔滨工业大学,黑龙江哈尔滨150001;哈尔滨工业大学,黑龙江哈尔滨150001【正文语种】中文【中图分类】R283.5香叶木苷(dosmin，3'，5，7 －三羟基 4'－甲氧基黄酮－7－芸香糖)是从茜草科药用植物蓬子菜(Galium verum L．)中提取出的含量丰富黄酮苷类化合物［1］，蓬子菜是中国东北的一种野生植物，这种植物以维生素的优良的食物来源而著称，它还包含绿原酸，水杨酸和黄酮类等物质，在东北民间药用历史悠久，具有清热祛湿、活血止痒的功效，近10余年来，临床应用不同剂型治疗下肢静脉炎疗效显著。

黄芩提取物中黄酮类成分血浆蛋白结合率的测定冯志强;韩坚;谢智勇;廖琼峰;张蕾【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2012(028)002【摘要】Aim To establish a RP-HPLC method for determination of concentration of four major flavonoids, namely baicalin ( BL ), wogonoside ( WL ), wogonin ( W ) and oroxylin A ( OA ), in the total flavonoids extract of scutellaria baicalensis Georgi in rat plasma and to study the plasma protein binding rate. Methods The equilibrium dialysis was carried out to determine the plasma protein binding rate of the target compounds. The plasma samples were extracted by protein precipitation with methanol. With the use of maackiain as the internal standard, the concentration of the multicomponent inside and outside the dialysismembranes was determined by HPLC method. Results The plasma protein binding rates of baicalin and wogonoside decreased with increasing of concentration in a concentration-dependent manner( BL: 82.03% →77.25% →67. 17% ; WL: 82. 24%→ 76. 08% →69. 87% ), while were not the same of wogonin and oroxylin A. The average plasma protein bingding rates of wogonin and oroxylin A were ( 89. 66 ± 1. 19 )% and ( 88. 56 ± 1. 87 )% , respectively. Conclusions The HPLC method established in the paper is simple, sensitive, little interfe-rential and stable. The four major compounds in the total fla-vonoids extract of scutellaria baicalensis Georgi have high capacityin binding plasma protein in rat in vitro.%目的建立同时测定黄芩总黄酮部位中4 种黄酮类成分在大鼠血浆中药物浓度的方法,并测定其体外血浆蛋白结合率.方法平衡透析法测定黄芩黄酮类成分血浆蛋白结合率,以高丽槐素为内标,生物样本用甲醇沉淀蛋白进行预处理,采用HPLC法测定4种黄酮类成分在透析内、外液中的浓度.结果在低、中、高3 种浓度下,黄芩苷(BL)和汉黄芩苷(WL)的血浆蛋白质结合率随给药浓度的增大而降低(BL:82.03%→77.25%→67.17%;WL:82.24%→76.08%→69.87%),而汉黄芩素(W)和千层纸素A(OA)则呈现非质量浓度依赖性,其平均血浆蛋白结合率分别为(89.66±1.19)%、(88.56±1.87)%.结论该文所建立的测定方法简便、灵敏、专属性强.4个黄酮类成分在大鼠体外均有较高的血浆蛋白结合率.【总页数】4页(P286-289)【作者】冯志强;韩坚;谢智勇;廖琼峰;张蕾【作者单位】广州中医药大学中药学院,广东,广州,510006;中山大学药学院,广东,广州,510080;广州中医药大学中药学院,广东,广州,510006;中山大学药学院,广东,广州,510080;广州中医药大学中药学院,广东,广州,510006;广州中医药大学中药学院,广东,广州,510006【正文语种】中文【中图分类】R-332;R282.71;R284.1;R341;R969.1【相关文献】1.超高效液相色谱-串联质谱法同时测定黄芩提取物中4种黄酮类成分 [J], 段云2.HPLC法测定枳芩颗粒中黄酮类成分的含量 [J], 高红宁;潘雨柔;殷奕;毛春芹;陆兔林3.HPLC法同时测定三角草中黄酮类成分异荭草苷和异牡荆素的含量 [J], 陈冠;王蕾;王宏;江茜;刘琳娜4.高效液相色谱法测定金银花中黄酮类成分槲皮素的血浆蛋白结合率 [J], 修玮5.翻白草中黄酮类成分含量测定及其质量评价研究 [J], 孔晓妮;吕华瑛;周洪雷因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

香叶木素药理作用研究进程香叶木素是天然黄酮类化合物的一种，化学名称为3'，5，7-三羟基-4'-甲氧基黄酮。

香叶木素为黄色粉末，熔点为256~258℃，分子式为C16H12O6，分子量为300.26。

可溶于甲醇、乙醇等有机溶剂。

香叶木素在自然界中分布广泛，主要以游离型或糖苷型存在，存在于菊花、留兰香、蜘蛛香等天然药物和柠檬、柑橘、花生等果实中。

目前关于香叶木素的研究相对较少，主要集中在抗肿瘤方面，文章归纳总结香叶木素的药理作用，以便为将来的研究提供帮助。

1抗氧化作用香叶木素作为天然黄酮类化合物之一，具有强烈的抗氧化作用。

邹ＸＸ等证明香叶木素对DPPH、O2-具有一定的清除作用。

且随着浓度的增加，清除率呈上升趋势，即呈现量效关系。

卫ＸＸ等比较加入香叶木素前后含有1，1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基（DPPH）的95％乙醇溶液在517nm波长下吸光度值的变化，发现加入香叶木素后，溶液吸光度值减小，说明香叶木素与DPPH的单电子配对，溶液中的DPPH浓度才降低，证明香叶木素具有清除DPPH自由基能力，抗氧化活性较强，且活性强于VitC。

香叶木素通过抑制细胞内活性氧（ROS）生成可以有效地减弱偶氮二异丁脒盐酸盐（AAPH）诱导的红细胞溶血度和氯化铜（CuCl2）诱导的等离子体氧化，显著地恢复AAPH诱导的细胞内抗氧化酶（SOD、GPx、CAT）活性到正常水平，同时抑制细胞内丙二醛（MDA）的形成。

因此，香叶木素在细胞内具有抗氧化作用，机制与非酶和酶的防御系统有关。

2抑菌作用在全球范围内，越来越多的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）在治疗上的选择有限，天然化合物已被证明对MRSA具有抗菌作用。

香叶木素对MRSA菌株没有直接的抗菌活性，然而，香叶木素显著抑制MRSA丙酮酸激酶的活性，且呈剂量依赖性，这可能导致ATP的缺乏，影响到细菌射流泵，使香叶木素对MRSA产生抑菌作用。

金黄色葡萄球菌是一种重要的致病菌，它产生的细胞DU素-溶血素（Hla）能引起组织损伤，并在这种病原体的DU性中发挥关键作用。