呼吸道标本采集
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痰和呼吸道分泌物标本采集规范一、微生物学【概述】痰标本采集方便,无创伤性,临床应用广泛,对病原学诊断具有重要价值。
痰标本的正确采集、处理是临床细菌检验成功的关键,标本采集与处理的规范化是准确、及时向临床提供重要的感染信息的基础。
目前咳痰标本仍是最常用、最简单的采样方法,必须指导或辅助患者深咳痰,及时送检,并通过镜检筛选合格标本。
损伤性采样技术仅在选择病例(抗生素治疗反应不佳;可疑特殊病原体感染,如寄生虫、痰菌阴性肺结核、混合感染或二重感染等)使用。
【操作方法】1、咳痰标本采集要求患者在清晨用药前留取,因为晨痰量多,且含菌量也多。
留取前刷牙,用清水漱口3次,以除去口腔内大部分杂菌,之后用力咳痰。
咳痰较困难者可用3%~5%氯化钠溶液雾化蒸气吸入进行导痰;对咳嗽乏力或昏迷患者,可用普通吸痰管经鼻腔或口腔吸引下呼吸道分泌物;对不能咳痰的婴幼儿或病重患者,如须采集痰标本做结核杆菌培养,可插胃管抽吸胃液标本送检,也可留取12~24h痰液,经漂浮浓集后检查,以提高结核杆菌检出率。
若做细菌或真菌培养,痰液必须盛于无菌容器内送检。
观察痰量应留取24h痰液,必要时在容器内加入少许防腐剂。
2、咽拭子采样上呼吸道感染可通过咽拭子获取标本。
标本采集前数小时内不得用消毒药物漱口或涂抹病灶局部。
用咽拭子采集标本时应小心、认真、准确,避免触及舌、口腔黏膜和唾液,以防污染。
如咽拭子标本发现致病菌,如肺炎链球菌、流感杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等,且数量较多时,提示有该菌所致感染存在。
3、纤维支气管镜抽吸采样以利多卡因做咽喉部局部麻醉后,插入纤维支气管镜(纤支镜),达到肺炎病灶引流支气管内,纤支镜吸引口依次连接标本采集瓶或试管及负压吸引装置,用负压将下呼吸道分泌物经纤支镜吸人标本采集瓶内送检。
气管切开或气管插管患者也可用普通无菌吸痰管直接经人工气道插至大约叶支气管水平,接负压装置将痰液经吸痰管吸入标本采集瓶内。
纤支镜直视下可准确采集病灶部位的分泌物,但插入时纤支镜顶端和内孔常受咽喉部正常菌群污染,所以纤支镜吸引物常规培养结果不能完全代表肺部感染的病原体。
呼吸道标本谁采集摘要:在检验科工作了十几年,关于标本采集这块是相当混乱。
最近这些年,年轻的检验人员开始变得不抽血了,还会有人问抽血不是护士抽吗?我为什么要学呢?抽血到底是谁的责任?那么检验科的医生们到底有没有这个资格来抽血,成了现如今的争议。
我查了许多资料,都没有明确指明,只是说抽血需要经过培训的医护人员,也就是说不管你什么专业培训一下就可以了吗?这种说法似乎相当不负责。
那么如果从另外一个角度,就是静脉采血是一种侵入性医疗操作,那么不具备医师资格证的师傅们是不是应该放下手,不要再做这么危险的事了。
再比如呼吸道标本采集之争,那么呼吸道标本采集是否是临床的责任呢还是检验人员的责任?关键词:呼吸道标本采集虽然我没有找到非常确切具体的资料,不过也可以看看一些间接证据:1.北京友谊医院发热门诊采集流感样病例的咽拭子流行性感冒(流感)的流行是世界范围内广泛关注的公毒进行分型。
实时PCR 操作使用 AgPath-IDTM 一步法实共卫生问题,不仅有世界范围的大流行,且还有不同程度的。
时PCR 试剂盒及 ABI Prism 7500 Tagmsn 仪器(美国地区流行,轻者影响学习和工作,重者导致患者死亡。
甲型 Applied Biosvstems Internationa1公司)。
PCR 条件:反转录直感 H1N1pdm09自2009年4月在墨西哥和美国出现后,已50℃30min;95℃10min,95℃15,55℃455,循环在全球范围内流行,而且受到毒力变化病毒株 H1N1pdm09 45 次[1]。
的影响,不同区域,不同时间流感流行的特点均不相同[]。
引物及探针序列:FluA(H1N1)正义.5-AACATGTTA本研究对北京友谊医院发热门诊就诊患者的流行病学资料CCCAGGGCATTTCGC-3':FluA(H1N1)反义,5'-GTGGT-进行回顾性分析,以期对临床工作有一定的指导作用。
新型冠状病毒感染的肺炎患者下呼吸道标本采集操作规程
下呼吸道标本分为三种:痰液、支气管细胞灌洗液、支气管分泌物,主要以痰液为主。
采集方法包括:自行咳痰法、吸引器经口鼻吸痰法、支气管镜下留取标本法。
一、目的:
取患者下呼吸道分泌物做病毒分离,以帮助诊断。
二、评估:
1、评估患者:
(1)双人核对医嘱,打印标签,准备无菌痰杯或一次性痰液收集器。
(2)核对患者,了解患者病情、咳嗽咳痰情况。
(3)向患者解释,取得配合。
2、评估环境:
安静整洁、宽敞明亮、室温适宜、光线充足。
三、操作前准备:
(1)人员准备:防护级别:三级防护(医用防护口罩、一次性帽子、防护服、护目镜、防护面屏、乳胶手套2双、防护靴套)。
(2)物品准备:治疗车上层:无菌痰杯或一次性痰液收集器、温开水、漱口杯、负压吸引装置一套(检查处于备用状态)、一次性吸引器连接管、密封袋2个、75%酒精、纱布数块、快速手消液、必要时备口咽通气道。
呼吸道标本细菌学检验标准操作程序1.检验目的规范呼吸道标本细菌学检验操作规程,确保检验结果准确可靠。
2.适用范围呼吸道标本培养和涂片检查。
3.标本采集与运送3.1 采集时间以晨痰为好。
3.2 采集方法3.2.1 自然咳痰法用清水反复漱口后从气管深部咳出痰,吐入无菌容器内。
3.2.2 气管镜下采集法在病灶附近用导管吸或用支气管刷直接取得标本。
3.2.3 气管穿刺法在环甲膜下穿刺抽取痰液,收集标本,适用于厌氧菌培养。
3.2.4 呼吸机采集法使用呼吸机的病人,可利用呼吸机吸取深部痰入专用采集器内送检。
3.2.5 为了明确扁桃体炎、会厌炎、鼻咽部化脓性感染的病原体,可以采集拭子送检。
首先拭子用无菌生理盐水沾湿,然后用力在感染部位擦拭,采集标本与无菌管送检。
3.3 标本运送3.3.1 采集标本后立即送到实验室,放置时间不应超过2h。
3.3.2 延迟送检或待处理标本应置于4℃冰箱保存(疑为肺炎双球菌、流感嗜血杆菌等苛氧菌感染除外),以免杂菌生长,但必须在24h内处理。
3.3.3 对可疑烈性呼吸道传染病的患者检验标本,在采集、运送及保存过程中必须注意生物安全防护。
4.检验步骤4.1接种:用无菌拭子蘸取脓性部分,接种于血平板和巧克力平板第一区,再用一次性接种环分区划线接种。
4.2 涂片在接种的同时进行涂片。
用铅笔在磨砂部位编号,每片只涂一份标本。
4.3 培养:血平板、巧克力平板置35℃二氧化碳培养箱培养18-48h。
4.4 涂片染色镜检:涂片革兰染色,自然干燥后镜检。
先用低倍镜浏览整片,计数平均每个低倍视野WBC、上皮细胞的数量。
标本合格与否参考表1,合格标本再用油镜观察,主要观察片中主要细菌类型、WBC内吞噬什么细菌等,以作为看板时决定什么细菌要做的依据。
表1 痰液标本分级4.5 培养结果观察4.5.1 口咽部正常寄生的需氧菌主要是腐生的奈瑟菌、草绿色链球菌,4.5.2 有明确意义的病原菌: A群溶血性链球菌(咽炎)、流感嗜血杆菌(b型5y以下儿童急性会厌炎、急性支气管炎)、肺炎链球菌(急性支气管炎常继发于病毒感染、大叶性肺炎)、百日咳鲍特菌(咳嗽、支气管扩张)、金黄色葡萄球菌(肺炎)、军团菌(肺炎)、白喉棒状杆菌。
呼吸道标本的采集与送检要求1.采集标本的选择:常用的呼吸道标本有咽拭子、喉拭子、鼻拭子、支气管肺泡灌洗液、痰液等。
对于喷嚏液或唾液等非特异性标本的采集,不推荐用于病原体的检测。
2.采集时间:最佳的标本采集时间是在症状出现后24小时内采集,对于特定病原体如流感病毒等,应在症状出现48小时内采集。
3.采集方法:采用无菌的采集器具,如棉签、拭子等。
采集咽拭子时,应当将拭子的头部置于扁桃体和咽后壁的分泌物位置,不应担心引起患者咳嗽反射。
鼻拭子的采集方法是将拭子插入鼻腔内,盘旋擦拭鼻腔黏膜。
4.采集指导:采集者应经过专业培训并熟悉标本采集的技术要领。
采集过程中需要保持呼吸道的湿润,确保采集到的标本质量。
5.标本保存与运输:采集得到的标本应立即置于透明的标本袋中,封口完好。
若运输时间不长,可将标本放入4℃冰箱保存,不得冷冻。
如果运输时间较长,应采用冷冻方式运输(-20℃)。
运输过程中应尽量避免震动或损坏。
6.标本的处理:采集得到标本后,应尽快送往实验室进行处理。
痰液在送往实验室前应保持在4℃存放。
对于支气管肺泡灌洗液等标本,需要在接收实验室前制备样本。
7.实验室检测:送往实验室后,应当及时进行病原体的检测。
常用的检测方法包括细菌培养、病毒核酸检测(如PCR)、真菌培养等。
根据病情需要,还可以进行药敏试验、抗体检测等。
8.结果解读与报告:实验室所得结果需要专业人员进行解读,并及时生成报告。
报告应如实反映标本的检测结果,并提供相应的临床意义和建议。
在进行呼吸道标本的采集与送检时,需要确保采集者具备必要的知识与技能,并严格按照采集与送检要求进行操作,以保证最终的结果准确可靠,为诊治提供有力的支持。
㊃COVID-19特稿标准/指南㊃DOI:10.3969/j.issn.1673-5501.2020.01.005呼吸道标本的采集㊁储存和运送规范杨童玲1,3 夏爱梅1,3 胡晓静1 余艮珍2 史 欢2 顾 莺1 张晓波1 王传清1 张崇凡1 黄国英1作者单位 1复旦大学附属儿科医院 上海,201102;2华中科技大学同济医学院附属同济医院 武汉,430030;3共同第一作者通讯作者 张崇凡,E-mail:xt211311@aliyun.com;黄国英,E-mail:gyhuang@shmu.edu.cn流感病毒检测最常见的是采集呼吸道标本,可采用拭子㊁刷子㊁吸出物和灌洗液获取呼吸道标本,可以采集鼻咽㊁口咽㊁鼻孔等㊂曾使用培养法或直接法荧光抗体法进行检测[1,2],现以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法,可以通过样本中少量的病毒核酸扩增而提高检测率[3]㊂急性严重呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)感染流行期间,RT-PCR是SARS-CoV-2感染确诊的首选方法[4,5]㊂检测准确性最高的标本是下呼吸道标本,但属于有创性操作㊂由于核酸扩增检测可以检测更低浓度的病毒,并且不需要细胞的存在,因此喉部拭子或唾液样本可能是进行分析的合适样本[6],但其检出率低于83%[7]㊂相对无创而准确率高的是鼻咽抽吸物标本,能提供高浓度的感染细胞㊂对于儿童,采集一个口咽拭子和一个鼻部拭子的准确性相当于鼻咽拭子的准确性[8],是检测准确性与无创性采集的理想搭配㊂但临床上为了避免假阴性,通常会同时采集一个口咽拭子和一个鼻咽拭子㊂口咽拭子的采集相对比较简单,鼻咽拭子的采集需要经过培训,而且鼻咽拭子的采集过程可能会引发患者打喷嚏或者咳嗽而导致气溶胶的产生,存在交叉感染的风险[9]㊂本文基于新型冠状病毒肺炎(COVID-19)作为乙类传染病甲类管理办法,介绍呼吸道标本的采集㊁贮存和运送[10,11]㊂1 采集对象SARS-CoV-2感染的COVID-19疑似病例㊁疑似聚集性病例,其他需要进行SARS-CoV-2感染诊断或鉴别诊断病例,确诊的COVID-19是否康复的鉴别病例,或其他需要进一步SARS-CoV-2感染筛查检测的环境或生物材料㊂2 采集者从事SARS-CoV-2检测标本采集的技术人员应经过生物安全培训且为合格者和具备相应的实验技能㊂按照‘儿童新型冠状病毒感染/肺炎疑似和确诊病例快速筛查和临床实践指南“[12]的要求使用三级防护,最好使用全面型电动送风呼吸器面罩进行有效防护㊂3 采集标本SARS-CoV-2初步诊断测试,中国疾病预防控制中心(CDC)建议收集和检测咳嗽患儿的上呼吸道(鼻咽和口咽拭子)和下呼吸道(痰,如果可能)的样本㊂按照国家卫健委COVID-19诊疗方案(试行第六版)的要求,尽可能留取痰液标本,气管插管患者采集下呼吸道分泌物标本㊂4 采集标本时机临床怀疑SARS-CoV-2感染应立即向当地卫生部门报告,当地公共卫生工作人员将确定患者是否符合SARS-CoV-2感染调查对象的标准㊂临床标本应在临床或公共卫生实验室采集,用于常规呼吸道病原体检测㊂临床实验室不应从SARS-CoV-2感染者采集的样本中分离病毒㊂一旦确定了符合SARS-CoV-2感染对象,应尽快采集样本㊂5 采样管及其保存液上㊁下呼吸道标本采集后均置于含3mL病毒保存液的采样管中,推荐以Eagle's基础培养液为基础的保存液㊂保存液中也应添加胎牛血清或牛血清白蛋白等稳定病毒的蛋白质外壳的添加液㊂除此之外,还应添加青霉素㊁链霉素㊁庆大霉素及多黏菌素B等抑制细菌生长,保存液提供的样本基本是活病毒,可以最大程度保持样本的原始性,后续不仅可以用于病毒的核酸提取检测,还可用于病毒的培养和分离㊂6 采样拭子应选用合成纤维或人造纤维,不推荐海绵或棉花拭子,棉花的纤维对蛋白质吸附较强,导致病毒不易洗脱到保存液中,也不推荐尼龙类的纤维,其吸水性不佳,导致采样量不足,影响检出效率㊂7 样本的储存和拒收原则上样本应立即送检㊂以下是各种储存必需的条件:①采集后,应贴上相应的标签,样本可在4ħ以下保存㊃91㊃中国循证儿科杂志 2020年2月第15卷第1期72h,②如果预计提取检验会延迟,则将样本储存在-70ħ或更低的温度,③提取的核酸应储存于-70ħ或更低的温度㊂拒收的样本包括:①没有保存在2 8ħ或-70ħ或以下的样本;②样本标签或资料不完整;③样本类型不合适;④样本量不足㊂8 样本的运送①运送人员防护要求:需对运送人员进行专业培训,做好二级防护,目前中国的标本运送由CDC的专业人员来取,工作人员通道进入,污染通道离开㊂②样本需要双层密封袋密封,每袋装1份标本,将样本储存在4ħ,并使用密封的标本转运箱(内附有冰袋)立即运送㊂在每个样本容器上贴上患者的具体信息㊁样本的具体信息㊂为每个提交的样本填写卫生行政部门要求的表格㊂③如果样本在-70ħ下冷冻,运输时则将其放在密封的标本转运箱(内附有干冰)连夜运送,如无-70ħ保存条件,则于-20ħ冰箱暂存㊂9 加强沟通临床和实验室工作人员之间的及时沟通很重要,这样才能在处理可能SARS-CoV-2感染病例的标本时将感染的风险降到最低㊂10 上呼吸道标本采集10.1 口咽拭子 ①视野要求:口咽拭子取样时,应该在良好的照明条件下,使用一次性压舌板来确保咽喉部有足够的视野,压舌板将舌压到一边,避开舌头,拭子擦拭扁桃体(图1A㊁B)㊂②口咽拭子材质的要求:只能使用带塑料柄的合成纤维棉签,不能使用海藻酸钙拭子或带木柄的拭子,因为它们可能含有灭活某些病毒和抑制PCR检测的物质㊂③患儿体位和口腔防护要求:患儿取坐位或卧位,采集者坐在患儿对面,以能够看清患儿口咽部扁桃体为准,采集的时候要让患儿头部上抬30度,采集时患儿应该用口罩罩住鼻部,减少喷嚏或咳嗽飞沫飞溅(图1C)㊂④取材要求:将口咽拭子深入口咽部,在原位最好保持10s以吸收分泌物,用拭子棉签同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,轻度用力拭抹咽后壁部位,应避免触及舌部㊂将口咽拭子棉签头浸入采样管中,尾部弃去,旋紧管盖㊂10.2 鼻咽拭子采集(图1D㊁E) ①鼻咽拭子材质要求同口咽拭子㊂②准备含3mL病毒保存液的采样管备用㊂③患儿体位和口腔防护要求:患儿头部后仰70度,采集时患儿应该用口罩罩住下颌,减少咳嗽飞沫飞溅,取材人站在患儿侧方,防止飞沫飞溅㊂④鼻咽拭子棒长度要求:可以用鼻咽拭子棒测量一下,量出耳根到鼻孔的距离,并用手指做标记㊂⑤体验要求:将采样拭子以垂直鼻子(面部)方向插入鼻腔,与上颚平行,拭子伸入距离最少应达耳垂部位到鼻尖长度的一半,如果能够达到先前估计的深度最好,可有阻挡感㊂⑥取材要求:深入鼻咽部,使拭子在鼻内停留15 30s,轻轻旋转3 5次,以吸收分泌物,然后抽出拭子㊂⑦取材后要求:将鼻咽拭子棉签头浸入采样管中,尾部弃去,旋紧管盖㊂图1 上呼吸道标本采集注 A:扁桃体;B:鼻咽11 下呼吸道标本11.1 支气管灌洗液 将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气管,见患儿有咳嗽反射后再稍微深入1cm后,注入5mL温生理盐水,开放负压,旋转收集器头部并缓慢退出,收集抽取的黏液于病毒采样管中㊂11.2 肺泡灌洗 该方法适合危重患儿,患儿往往因为呼吸衰竭或肺不张需要行气管插管或纤维支气管镜灌洗,便于获取肺泡灌洗液标本,需要在支气管镜室局麻下行电子支气管镜术㊂支气管镜由左鼻孔进入气管㊁支气管后,镜端固定于右/左肺中叶开口,经气管活检孔缓缓加入灭菌温生理盐水,每次8mL灌洗2 3次,灌洗后吸出[13],收集至采样管中㊂11.3 鼻咽和气管抽吸 婴幼儿多需要采用该途径采集标本,使用痰液收集器连接负压吸引器,痰液收集器前端的吸痰管深入到患儿气道内,见患儿有咳嗽反射后再稍微深入1cm后开放负压,吸出2 3mL呼吸道分泌物至采样管中㊂参考文献[1]LoensK,VanHeirstraetenL,Malhotra-KumarS,etal.Optimalsamplingsitesandmethodsfordetectionofpathogenspossiblycausingcommunity-acquiredlowerrespiratorytractinfections.JClinMicrobiol,47(1):21-31[2]RobinsonJL,LeeBE,KothapalliS,etal.Useofthroatswab㊃02㊃ChinJEvidBasedPediatr Feburary2020,Vol15,No1orsalivaspecimensfordetectionofrespiratoryvirusesinchildren.ClinInfectDis,46(7):e61-64[3]CentersforDiseaseControlandPrevention(CDC).EvaluationofrapidinfluenzadiagnostictestsfordetectionofnovelinfluenzaA(H1N1)Virus-UnitedStates,2009.MMWRMorbMortalWklyRep,58(30):826-829[4]国家卫生健康委.关于印发新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)的通知(2020-02-18).http://www.nhc.gov.cn/,2020.02.18[5]CormanVM,LandtO,KaiserM,etal.Detectionof2019novelcoronavirus(2019-nCoV)byreal-timeRT-PCR.EuroSurveill,2020,25(3).doi:10.2807/1560-7917[6]WangWK,ChenSY,LiuIJ,etal.DetectionofSARS-associatedcoronavirusinthroatwashandsalivainearlydiagnosis.EmergInfectDis,2004,10(7):1213-1219[7]RobinsonJL,LeeBE,KothapalliS,etal.Useofthroatswaborsalivaspecimensfor181detectionofrespiratoryvirusesinchildren.ClinInfectDis,46(7):e61-64[8]SpencerS,ThompsonMG,FlanneryB,etal.ComparisonofRespiratorySpecimenCollectionMethodsforDetectionofInfluenzaVirusInfectionbyRT-PCR:ALiteratureReview.JClinMicrobiol,57(9),pii:e00027-19[9]TellierR.ReviewofaerosoltransmissionofinfluenzaAvirus.EmergInfectDis,2006,12(11):1657-1662[10]国家卫生健康委.新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南(第三版).2020.01.28[11]InformationforLaboratoriesCOVID-19RequestsforDiagnosticPanelsandVirus.https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/tool-virus-requests.html[12]复旦大学附属儿科医院.儿童新型冠状病毒感染/肺炎疑似和确诊病例快速筛查和临床实践指南.中国循证儿科杂志,15(1):1-4[13]黄宝兴,邓继岿,王红梅.1693例难治性肺炎患儿支气管肺泡灌洗液病原体培养分析.中国感染控制杂志,14(6):379-382.(收稿日期:2020-01-31 修回日期:2020-02-11)(本文编辑:张萍)㊃12㊃中国循证儿科杂志2020年2月第15卷第1期。