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一、体外肝细胞损伤模型建立(CCｌ4与H2O2)ﻫ 1 大鼠肝细胞得分离与培养大鼠4％戊巴比妥麻醉,门静脉插管,先以无钙灌流液灌流,继以3７℃通入Ｏ２得Ⅳ型胶原酶灌流液继续循环灌流15 min。
将肝脏移至一平皿内,轻轻撕去肝包膜后,加入含5％小牛血清得清洗液,用吸管吹打成单个肝细胞悬液,２00目尼龙网过滤,低速离心(５0０r·miｎ-1,1 mｉｎ,4℃)弃上清,同法用清洗液反复洗3次、然后用完全1640培养液(内含10％小牛血清,10５U·L－1青霉素,1０0 mg·L—1链霉素与10 mg·L-1胰岛素)制成１×109个·L-１肝细胞悬液、分离得肝细胞经0、6%台盼蓝拒染法测得细胞活力大于９0％,高碘酸雪夫反应显示糖原法鉴定9９％为肝实质细胞。
将上述肝细胞悬液分别加入２４孔(每孔１mｌ)与96孔(每孔０。
１ml)培养板中,置３７℃,5%CO2培养箱中培养。
１2～１6 h后可见肝细胞贴壁于培养板孔底上生长、ﻫ2 CCl4诱导肝细胞坏死性损伤模型得建立肝细胞培养12 h后,吸弃上清,更换培养液并加入不同浓度得ＣＣl4〔(1～1６mｍｏｌ·Ｌ-1),以少量得二甲亚砜助溶,二甲亚砜终浓度为0、1％(体积分数)〕,作用不同时间(1～12h)后,收集２4孔板中培养上清检测AST,以及肝细胞得MDA含量与ＧSHpｘ活性;同步测定96孔板中培养肝细胞得MTT反应。
根据检测结果制备CＣｌ4诱导肝细胞损伤得量效与时效曲线、选择最造损伤浓度与损伤时间制备肝细胞得损伤模型,同时设溶媒对照组,每组至少设３个复孔、３H2O2诱导肝细胞坏死性损伤模型得建立同法更换培养液,加入不同浓度得H２O2(０.２～３。
2 ｍmol·Ｌ—１),作用不同时间(0、5～4 h)后,收集24孔板中培养上清检测AＬT,测定肝细胞得MDA含量;同步测定９６孔板中培养肝细胞得MTT反应。
运动人体科学2023年(第13卷)第34期电刺激C2C12细胞构建运动损伤修复模型郑娅雯1袁梦1刘秀娟2*张欣2(1.南京体育学院研究生部;2.南京体育学院运动健康学院江苏南京210014)摘要：电脉冲刺激（EPS）是研究收缩诱导运动性适应的主要工具，为探究电脉冲刺激对C2C12细胞蛋白表达和代谢的影响，并观察刺激后的指标恢复变化，试图建立骨骼肌C2C12细胞运动损伤修复模型。
将C2C12细胞培养和分化为肌管后，根据电压强度不同分为4组：C组（对照组）、V1组（10V）、V2组（23V）、V4（40V），在相同频率20 ms、1 Hz条件下电刺激40 min，尝试诱发C2C12肌管细胞的收缩与损伤，按恢复时间点收集0h、2 h、4 h、8 h、24 h、48 h后的细胞培养液和细胞，分别检测肌酸激酶（CK）活力、乳酸脱氢酶（LDH）活性和丝裂原活化蛋白（P38）含量变化。
结果显示，40 V组C2C12细胞经过电刺激后，P38含量极显著增加，CK活力极显著增加，LDH活性极显著增加，并随着恢复时间延长而逐步减少。
故在40 V、40 min、20 ms、1 Hz的方案下，电刺激C2C12细胞可以构建骨骼肌运动损伤模型，且这种损伤在此后4~8 h内得以恢复。
关键词：电刺激 C2C12细胞 运动损伤修复 建模中图分类号： G804文献标识码：A文章编号： 2095-2813(2023)34-0001-03电脉冲刺激（Electrical Pulse Stimulation，EPS）应用于细胞系和培养的原代骨骼肌细胞的骨骼肌肌管已被证明是研究收缩诱导运动性适应的主要工具［1］，其中C2C12细胞是体外研究骨骼肌内部机制的常用细胞模型［2］，可以表达各种成熟骨骼肌中存在的标志蛋白，因此为体外研究成肌细胞增殖和分化的首选模型［3］。
用电脉冲刺激模拟神经元刺激激活体外培养的骨骼肌细胞，从而促进骨骼肌细胞收缩达到模拟运动的效果。
MPP诱导SHSY5Y细胞慢性损伤帕金森病模型的建立及鹿茸多肽的保护作用1. 本文概述本文旨在探讨MPP（1甲基4苯基吡啶离子）诱导SHSY5Y细胞慢性损伤帕金森病（Parkinsons Disease, PD）模型的建立，并研究鹿茸多肽（ Velvet Antler Peptides, VAP）对SHSY5Y细胞的保护作用。
帕金森病是一种慢性进展的中枢神经系统变性疾病，主要表现为中脑黑质多巴胺能神经元的变性死亡，导致纹状体多巴胺含量降低，进而引发一系列临床症状。
MPP作为一种常用的诱导剂，可以模拟PD 病理过程中的氧化应激和线粒体损伤，因此在PD的研究中广泛应用。
在本研究中，我们首先通过MPP处理SHSY5Y细胞，建立一种稳定、可靠的PD细胞模型。
SHSY5Y细胞是一种人源神经母细胞瘤细胞系，具有多巴胺能神经元的某些特性，因此常被用作研究PD的体外模型。
我们将评估MPP处理对SHSY5Y细胞的存活率、形态变化、细胞凋亡以及多巴胺能神经元标志物的表达等方面的影响，从而验证模型的有效性。
随后，我们将研究鹿茸多肽对MPP诱导的SHSY5Y细胞损伤的保护作用。
鹿茸多肽是从鹿茸中提取出的一种生物活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗凋亡等多种生物活性。
我们将通过添加不同浓度的鹿茸多肽，观察其对MPP损伤细胞的存活率、细胞凋亡以及氧化应激水平等指标的影响，从而评估其保护作用及其机制。
本文的研究结果将为深入了解PD的发病机制以及寻找新的治疗策略提供有益的参考。
同时，也为鹿茸多肽在神经退行性疾病治疗中的应用提供实验依据。
2. 材料与方法本研究选用人类神经母细胞瘤SHSY5Y细胞株作为实验模型。
细胞由细胞库提供，并在实验室中进行扩增培养。
细胞培养基为含有10胎牛血清(FBS)、1青霉素链霉素的DMEM培养基，于37C、5 CO2的条件下进行培养。
为了建立慢性损伤的帕金森病模型，我们使用1甲基4苯基1,2,3,6四氢吡啶（MPP）作为神经毒素。
·综述·血管内皮细胞损伤模型及中药保护作用研究进展马桂鑫，赵文文，陈修平*中药质量研究国家重点实验室澳门大学中华医药研究院澳门大学，澳门特别行政区摘要：血管内皮细胞损伤参与了多种心脑血管疾病发生发展的病理过程。
合适的内皮损伤模型是探讨内皮细胞损伤的分子机制、筛选相关保护作用药物的重要工具。
引起内皮损伤的因素众多，机制与病理意义各异。
氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）、末端晚期糖基化终末产物（AGEs）、过氧化氢（H2O2）、同型半胱氨酸（Hcy）、血管紧张素II（Ang II）等已被成功应用于建立内皮细胞损伤模型。
总结了目前最为常用的内皮细胞损伤模型。
同时，对这些模型具有保护作用的中药进行概述，以期为靶向内皮细胞的药物筛选以及相关中药的研究和开发提供参考。
关键词：内皮细胞；损伤模型；氧化低密度脂蛋白；末端晚期糖基化终末产物；过氧化氢；同型半胱氨酸；血管紧张素II；中药中图分类号：R285 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)02 - 0276 - 08DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.02.023Research progress in injury model of vascular endothelial cells and protective effect of Chinese materia medicaMA Gui-xin, ZHAO Wen-wen, CHEN Xiu-pingState Key Laboratory of Quality Research in Chinese Medicine, Institute of Chinese Medical Sciences, University of Macau, Macao, ChinaKey words: endothelial cells; injury model; oxidized low density lipoprotein; advanced glycation end products; hydrogen peroxide; homocysteine; angiotensin II; Chinese materia medica血管内皮细胞是覆盖于血管内膜表面的单层扁平或多角形的细胞，在维持血管渗透性、传递血管信息和分泌血管活性物质等方面起关键作用。
平滑肌细胞过氧化氢损伤模型平滑肌细胞是一种重要的细胞类型，存在于人体中的多个器官中，如血管、消化道和呼吸道等。
它的功能是调节器官的张力和平滑肌收缩，从而实现正常的生理功能。
然而，过氧化氢（H2O2）的积累会对平滑肌细胞造成损伤，进而影响器官的正常功能。
过氧化氢是一种强氧化剂，在细胞内产生的过程中会产生活性氧自由基，进而导致氧化应激反应。
长期以来，人们一直认为过氧化氢主要通过氧化脂质和蛋白质，引发细胞损伤和细胞死亡。
然而，最近的研究表明，过氧化氢对平滑肌细胞的损伤机制更为复杂。
研究发现，过氧化氢可以通过多种途径影响平滑肌细胞的功能。
首先，过氧化氢可以直接氧化和破坏平滑肌细胞的膜脂质，导致细胞的膜完整性受损。
其次，过氧化氢可以通过激活信号转导通路，如磷酸化蛋白激酶（MAPK）和核因子κB（NF-κB），影响细胞的增殖和凋亡。
此外，过氧化氢还可以影响细胞内的钙离子平衡，进而影响平滑肌细胞的收缩和舒张。
研究人员通过建立平滑肌细胞过氧化氢损伤模型，揭示了过氧化氢对平滑肌细胞的损伤机制。
他们发现，过氧化氢可以诱导平滑肌细胞产生大量的活性氧自由基，进而引发氧化应激反应。
这些自由基可以氧化和破坏细胞膜，导致细胞的膜完整性受损。
同时，过氧化氢还可以激活MAPK和NF-κB等信号转导通路，进而引发细胞的凋亡和炎症反应。
为了更好地理解平滑肌细胞对过氧化氢的损伤反应，研究人员还探索了一些可能的保护策略。
他们发现，抗氧化剂可以有效地减轻过氧化氢引起的平滑肌细胞损伤。
抗氧化剂可以清除细胞内的活性氧自由基，减轻氧化应激反应。
此外，一些研究还发现，一些天然产物和药物可以通过调节MAPK和NF-κB等信号转导通路，减轻过氧化氢对平滑肌细胞的损伤。
平滑肌细胞过氧化氢损伤模型的建立为我们深入了解过氧化氢对平滑肌细胞的损伤机制提供了重要的研究工具。
通过揭示这些机制，我们可以更好地理解平滑肌细胞在疾病发生和发展中的作用，并为开发新的治疗策略提供理论依据。
LPS致肝细胞损伤模型的建立研究作者：滕芳芳胡晓斐刘晨晨等来源：《安徽农业科学》2014年第04期摘要[目的]探索LPS体外致人Chang Liver细胞损伤模型的建立方法和意义。
[方法] 分别用20、40、60、80、100 μg/ml浓度的LPS作用Chang Liver细胞24 h，采用MTT法检测LPS 对Chang Liver细胞存活率的影响，分别测定Chang Liver细胞上清中谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、γ-谷氨酰转肽酶（γGT）、乳酸脱氢酶（LDH）的活性，并通过Hoechst 33258荧光染色观察用药24 h后Chang Liver 细胞形态的变化。
[结果] 80和100 μg/ml浓度的LPS作用后Chang Liver细胞存活率显著性降低，胞外AST、ALT、ALP、γGT、LDH酶活性升高，细胞数目减少，细胞形态发生改变，呈现细胞核固缩等细胞凋亡现象。
[结论] 用80 μg/ml的LPS与Chang Liver细胞共培养24 h，可以建立理想的体外肝细胞损伤模型。
关键词LPS； Chang Liver细胞； AST； ALT； Hoechst 33258中图分类号S986.2文献标识码A文章编号0517-6611（2014）04-01071-03基金项目国家自然科学基金面上项目（81273429）；浙江省科技厅重大专项（2013C03036，2011C02003，2011C23034）；舟山市科技计划项目（2012C23023）。
作者简介滕芳芳（1989- ），女，浙江舟山人，硕士研究生，研究方向：海洋功能食品、海洋药物。
*通讯作者，教授，硕士生导师，从事海洋功能食品和海洋药物研究。
脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）是革兰氏阴性菌细胞壁外膜的成分，其主要是由亲水的多糖和疏水的类脂A组成。
LPS可诱导多种细胞凋亡造成多种细胞损伤，如巨噬细胞RAW264.7、人小肺癌细胞NCLH446、神经细胞PC12、人子宫颈癌传代细胞Hela cell等[14]。
以TNF—α刺激A549细胞构建急性肺损伤细胞模型作者：吴炜景张家敏李立平来源：《中国医药科学》2017年第17期[摘要]目的构建急性肺损伤体外细胞模型。
方法以TNF-α 10ng/mL刺激肺泡Ⅱ型上皮A549细胞，采用酶联免疫吸附法检测细胞上清液中IL-4、IL-1 B浓度，比色法检测丙二醛浓度、总超氧化物歧化酶活力，RT-PCR及免疫印迹法分别检测NF-K B mRNA及蛋白的表达水平，流式细胞术检测细胞凋亡率。
结果以TNF-α刺激A549细胞，细胞上清液IL-1β、IL-4浓度上升；细胞内丙二醛增多，超氧化物歧化酶活力下降；NF-кB在基因及蛋白水平表达上调（P[关键词]急性肺损伤；细胞模型；炎症反应；肺泡Ⅱ型上皮细胞；核因子кB；[中图分类号]R563.1；R563.8 [文献标识码]A [文章编号]2095-0616（2017）17-30-03急性肺损伤（acute lung iniury，ALI）是临床常见急危重症，以进行性加重的呼吸困难、顽固的低氧血症为临床特征，其严重阶段可发展为成人呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）。
感染、有害物质吸入、外伤、休克、中毒等多种非心源性致病因素是引起急性肺损伤的常见因素，ALI/ARDs缺乏特效治疗，发病率及病死率均处于高水平，因而其发病机制研究仍受科学家重视。
急性肺损伤模型构建是ALI机制研究的基础，在细胞模型上进行研究，再将实验成果在动物模型上进行验证，有利于降低动物实验的成本，提高成功率。
本研究结合急性肺损伤发生时，肺泡Ⅱ型上皮细胞在炎症反应、氧化应激、细胞凋亡、通路激活等方面的特点，对ALI细胞模型的构建进行探讨。
1材料与方法1.1材料A549细胞由福建医科大学附属第二医院中心实验室提供，RPMI-1640培养基、小牛血清、胰酶来自于Hyclone公司，重组人肿瘤坏死因子-α购自美国的Pepro Tech公司，NF-кB抗体、内参βactin抗体购自美国CST公司，Trizol购买于Invitrogen公司，PCR引物由上海英骏公司合成，RT-PCR及荧光定量PCR试剂购自TaKaRa公司，细胞因子IL-4、IL-1 β ELISA法检测试剂盒、RIPA细胞裂解液、SOD及MDA检测试剂盒、BCA法蛋白浓度测定试剂盒购自江苏碧云天公司。
10种细胞损伤模型建立方法转载请注明来自丁香园发布日期：2012-10-09 14:36 文章来源：丁香园分享到：收藏夹新浪微博腾讯微博开心网豆瓣社区人人网关键词：细胞细胞培养技术专题义翘神州丁香园丁香通点击次数：997现在很多实验都涉及到细胞损伤模型的建立和运用，如CCl4诱导肝细胞损伤模型（体内、体外）、PC12细胞的NO和淀粉样蛋白(Aβ)损伤模型、神经元缺血再灌注损伤模型，以及脉络宁对骨骼肌缺血再灌注损伤保护作用等。
一、体外肝细胞损伤模型建立（CCl4和H2O2）1大鼠肝细胞的分离和培养大鼠4％戊巴比妥麻醉，门静脉插管，先以无钙灌流液灌流，继以37℃通入O2的Ⅳ型胶原酶灌流液继续循环灌流15 min。
将肝脏移至一平皿内，轻轻撕去肝包膜后，加入含5％小牛血清的清洗液，用吸管吹打成单个肝细胞悬液，200目尼龙网过滤，低速离心（500 r·min-1，1 min，4℃）弃上清，同法用清洗液反复洗3次。
然后用完全1640培养液（内含10％小牛血清，105U·L-1青霉素，100 mg·L-1链霉素和10 mg·L-1胰岛素）制成1×109个·L-1肝细胞悬液。
分离的肝细胞经0.6％台盼蓝拒染法测得细胞活力大于90％，高碘酸雪夫反应显示糖原法鉴定99％为肝实质细胞。
将上述肝细胞悬液分别加入24孔（每孔1 ml）和96孔（每孔0.1 ml）培养板中，置37℃，5％CO2培养箱中培养。
12～16 h后可见肝细胞贴壁于培养板孔底上生长。
2CCl4诱导肝细胞坏死性损伤模型的建立肝细胞培养12 h后，吸弃上清，更换培养液并加入不同浓度的CCl4〔（1～16mmol·L-1），以少量的二甲亚砜助溶，二甲亚砜终浓度为0.1％（体积分数）〕，作用不同时间（1～12 h）后，收集24孔板中培养上清检测AST，以及肝细胞的MDA含量和GSHpx 活性；同步测定96孔板中培养肝细胞的MTT反应。
细胞损伤模型一、体外肝细胞损伤模型建立（CCl4和H2O2）1大鼠肝细胞的分离和培养大鼠4％戊巴比妥麻醉，门静脉插管，先以无钙灌流液灌流，继以37℃通入O2的Ⅳ型胶原酶灌流液继续循环灌流15 min。
将肝脏移至一平皿内，轻轻撕去肝包膜后，加入含5％小牛血清的清洗液，用吸管吹打成单个肝细胞悬液，200目尼龙网过滤，低速离心（500 r·min-1，1 min，4℃）弃上清，同法用清洗液反复洗3次。
然后用完全1640培养液（内含10％小牛血清，105 U·L-1青霉素，100 mg·L-1链霉素和10 mg·L-1胰岛素）制成1×109个·L-1肝细胞悬液。
分离的肝细胞经0.6％台盼蓝拒染法测得细胞活力大于90％，高碘酸雪夫反应显示糖原法鉴定99％为肝实质细胞。
将上述肝细胞悬液分别加入24孔（每孔1 ml）和96孔（每孔0.1 ml）培养板中，置37℃，5％CO2培养箱中培养。
12～16 h后可见肝细胞贴壁于培养板孔底上生长。
2CCl4诱导肝细胞坏死性损伤模型的建立肝细胞培养12 h后，吸弃上清，更换培养液并加入不同浓度的CCl4〔（1～16 mmol·L-1），以少量的二甲亚砜助溶，二甲亚砜终浓度为0.1％（体积分数）〕，作用不同时间（1～12 h）后，收集24孔板中培养上清检测AST，以及肝细胞的MDA含量和GSHpx活性；同步测定96孔板中培养肝细胞的MTT反应。
根据检测结果制备CCl4诱导肝细胞损伤的量效和时效曲线。
选择最造损伤浓度和损伤时间制备肝细胞的损伤模型，同时设溶媒对照组，每组至少设3个复孔。
3H2O2诱导肝细胞坏死性损伤模型的建立同法更换培养液，加入不同浓度的H2O2（0.2～3.2 mmol·L-1），作用不同时间（0.5～4 h）后，收集24孔板中培养上清检测ALT，测定肝细胞的MDA含量；同步测定96孔板中培养肝细胞的MTT反应。
根据检测结果制备H2O2诱导肝细胞损伤的量效和时效曲线，选择最适损伤浓度和损伤时间制备肝细胞的损伤模型，同时设溶媒对照组，每组至少设3个复孔。
4检测指标（1）AST、ALT的测定培养的肝细胞经离心（1 800 r·min-1，10 min）后收集上清，按试剂盒说明书步骤测定上清液中AST和(或)ALT活性，结果以U·(106 cell)-1表示。
（2）肝细胞增殖试验采用MTT比色法。
（3）肝细胞谷胱甘肽过氧化物酶（GSHpx）活性的测定先制备GSH标准曲线。
弃肝细胞培养上清，加入0.2％Triton-100水溶液0.5 ml，混匀，2 min后，离心（2 500 r·min-1，10 min），取上清液（肝细胞样品）0.4 ml，另设样品空白管，非酶反应管和试剂空白管，加入各种试剂。
混匀后立即计时，静置12 min后，以样品空白管调零点，于423 nm 波长处读得吸光度（A）值。
在GSH标准曲线上查出对应的GSH波度。
GSHpx酶活力单位是在37℃，pH6.5条件下，每106个肝细胞、每分钟使GSH浓度下降1 μmol为1个酶活力单位。
计算公式为：GSHpx活力单位=（［GSH］非酶管-［GSH］样品管-［GSH］试剂空白管）/3。
结果以U·(106 cell)-1表示。
（4 ）肝细胞丙二醛（MDA）含量的测定先制备MDA标准曲线。
弃肝细胞培养上清，加入生理盐水1 ml，混匀，移入离心管中，离心（2 500 r·min-1，10 min），弃上清，加15％TCA 2 ml，破坏细胞并沉淀蛋白质，加入0.67％TBA 2 ml，于沸水浴中加热30 min。
根据样本的吸光度值在标准曲线上查出对应的浓度，结果以nmol·(106 cell)-1表示。
（5）数据处理数据以±s表示，计量资料组间比较采用t检验。
两变量间相互关系，采用直线相关和回归分析。
二、体内肝损伤模型（酒精）1、材料纯系SD雄性大鼠，体重180g～200g，由浙江大学医学院实验动物中心提供。
食用酒精选用北京酿酒总厂出品的56度红星二锅头。
2、方法将大鼠随机分成5组，饲养在23℃～25℃室内，自由进食、进水；根据大鼠体重，A、B、C、D组每日用56°红星二锅头白酒以10ml/1Kg分别灌胃0、4周、8周和12周；E组于酒精灌胃12周后，停止灌胃4周。
大鼠通过股动脉采血处死，收集血浆和肝脏标本。
3、主要指标检测（1）肝功能：应用日立7170自动生化分析仪测定总蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、球蛋白（Glb）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）等。
（2）氧化抗氧化物质测定：采用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒分别检测丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽-S-转移酶（GST）。
（3）大鼠肝脏病理检查：大鼠处死后立即取出肝脏，称重后一部分以10%的福尔马林液固定作病理，作常规石蜡切块并HE染色，在光学显微镜下进行观察，用半定量法分别判定脂肪变性、及酒精性肝炎炎症活动度三、四氯化碳体外损伤肝细胞模型原代培养的正常大鼠肝细胞培养24h（贴壁良好）后，置培养皿于一密闭的塑料盒，内置四氯化碳0.4M容积，37度90min，造成肝细胞损伤的模型，后转入正常培养，进行下一步实验。
(即熏蒸法)肝细胞培养12h后，吸弃上清，更换培养液并加入CCL4 8mM（事先用DMSO溶解，DMSO终浓度1％），作用6h后收集24孔板中培养上清检测AST以及肝细胞MDA含量盒GSHpx活性，评价损伤程度。
（常用方法）四、醋氨酚体外损伤肝细胞模型肝细胞培养24h后，用清洗液洗2次，培养液洗1次，然后换以20mM醋氨酚的培养液，继续培养12h，取培养液，进行下一步实验。
五、过氧化氢体外损伤肝细胞模型肝细胞培养24h后，吸弃上清液，更换培养液并加入H2O2 0.6mM，作用1h后，收集24孔板中的培养上清液检测AST活性和MDA含量。
六、氰化钾缺氧肝细胞损伤模型肝细胞培养24h后，贴壁生长良好的肝细胞中加入氰化钾2.5mM，继续培养2h，定量检测培养液上清中LDH活性，以及酶的活性反应肝细胞损伤程度。
本模型可以更好的模拟缺氧损伤。
七、硫代乙酰胺（TTA）体外肝细胞损伤模型肝细胞预培养24h后，贴壁生长良好的肝细胞中加入TTA0.18mM，继续培养48h，肝细胞大量损伤和坏死，上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活性升高，造成体外损伤肝细胞模型。
八、内毒素体外损伤肝细胞模型贴壁生长良好的肝细胞中加入内毒素70uL/mL，置37度，5％CO2培养此时上清LDH活性升高造成肝细胞损伤模型，造成体外肝细胞损伤模型。
九、半乳糖胺（GalN）体外损伤模型分离肝细胞，预培养12-24h后，待细胞贴壁生长均匀后，加入5mMGalN的肝细胞培养液，继续培养1.5h，测定培养上清液中ALT，ALT 显著升高时，肝细胞造模成功。
十、帕金森体外模型体外培养的中脑多巴胺能神经元MPTP损伤模型l实验操作：实验采用胚胎龄14一16天的大鼠，剖子宫取胎，取胎鼠中脑腹侧区。
可将多个胚胎来源的组织收集在一起，置Fl2培养基（Gibco）至35mm的培养皿中，以细剪刀剪碎。
将2ml含0.125％的胰酶的F12加入到组织中，该混合物于37℃孵育10分钟后，加入DNase I（Sigma）至终浓度80ng／m1，继续于37oC孵育10分钟。
消化后的组织以尖端被火抛光的移液管轻轻吹打8次。
该细胞悬液以种植培养基稀释（种植培养基：MEM，补充以2mm谷氨酰胺，6mg/ml葡萄糖，1mg／ml谷胱甘肽，10 units／ml青霉素，10ul/ml链霉素和7.5％胎牛血清）。
细胞然后种植于35mm的预先以10ug／m1 po1y1ysine （Sigma）和 2.5ug／ml merosin（Chemicon）铺底的培养皿中，种植密度为50,000细胞／cm2。
培养16小时后，培养基换为无血清培养基。
该培养基为F12和basa1Eag1e’s medium，补充以33mM葡萄糖，2mM谷氨酰胺，15 mM碳酸氢钠，10mM HEPES（pH7.0），1ug／ml谷胱甘肽，20ug/ml胰岛素，100ug/ml转铁蛋白，60uM腐胺，20nM孕酮，20nM亚硒酸钠（NaSe），30nM三碘甲状腺原氨酸，0.5 unit/ml青霉素和0.5mg/ml链霉素。
毒物处理：于第4天以1uMMP+处理48小时。
然后进行分析。
模型评价：倒置显微镜下观察细胞形态、细胞计数、免疫组化检测TH阳性细胞的数目和形态。
体外培养的中脑多巴胺能神经元6-OHDA损伤模型采用上述方法选择胎鼠，分离中脑腹侧部，解剖显微镜下仔细剔除脑膜和血管，用高糖T-BSS 反复冲洗涤之七遍。
并将组织剪碎，移入0.25％胰蛋白酶溶液中，37oC振荡消化30分钟，后加入血清数滴终止消化，用吸管轻轻吹打后，加入不含血清的DMEM培养液混匀，1000rpm，10min离心收集细胞，反复2次，后加入含血清的完全DMEM培养液悬浮细胞，过220目不锈钢筛网使成单细胞悬液，计数后将约3×106个细胞接种人事先涂有多聚赖氨酸的35mm的六孔培养板中，置37oC、5％CO2培养箱中培养。
24小时后待细胞完全贴壁时，置换旧培养液，以后每隔2天更换一次培养液。
培养至第六天时加入100uM的6-OHDA处理3小时后吸出。
在相应备孔中加入完全DMEM培养液洗涤2遍，再加入完全DMEM培养液继续置5％CO2培养箱中培养24小时，采用与上述相同的方法做免疫细胞化学染色，计数TH阳性细胞，确立6-OHDA对体外培养的多已胺能神经元的损伤作用。
十一、Ａβ损伤模型取出生1-2d的乳鼠，用麻醉剂处死。
在D-hanks液中取大脑并分离海马组织，胰蛋白酶消化，获得细胞悬液，胎盘蓝染色进行死活细胞记数，将细胞以5×105/ml的密度接种于预先经L-多聚赖氨酸处理的96孔和24孔培养板,其中24孔板中预先放置有盖玻片。
细胞维持在培养液中，置入5%CO2，饱和湿度的培养箱中培养，24h后全换液，接种当天为第一天,每3d半量更换培养液一次，培养第3天时加入阿糖胞苷,终浓度为10μmol/Ｌ,以抑制神经胶质细胞的过度增殖,24ｈ后更换全部培养液继续培养,第10天进行细胞造模，开始实验。
也可以用PC12细胞株,常规培养Ａβ产物诱导海马神经细胞，建立细胞模型：选择Ａβ25-35片段,用三蒸水配制成100μmol??Ｌ-1,过滤,分装,-20℃冻存;使用前老化处理并配制成所需浓度。
