实验4-血清甘油三酯含量测定

甘油三酯的测定的实验报告实验报告：甘油三酯的测定一、实验目的1.掌握甘油三酯测定的原理和方法。

2.熟悉甘油三酯在临床诊断中的应用。

3.学习使用实验室仪器进行样品检测。

二、实验原理甘油三酯是血液中的一种脂质成分，其测定主要用于评估心血管疾病的风险。

甘油三酯的测定通常采用酶法，利用甘油三酯酶将甘油三酯水解成甘油二酯和脂肪酸，再通过甘油激酶将甘油二酯转化为甘油一酯和磷酸，最后通过磷酸脱氢酶将甘油一酯转化为甘油和磷酸盐。

通过测定反应过程中产生的磷酸盐的量，可以推算出甘油三酯的浓度。

三、实验步骤4.样品准备：采集受试者的血液样本，分离出血清，备用。

5.试剂准备：准备好甘油三酯测定试剂盒，按照说明书上的操作配制好试剂。

6.仪器准备：准备好全自动生化分析仪，调试好仪器参数。

7.样品检测：将血清样品加入试剂中，充分混匀，放入全自动生化分析仪中进行检测。

8.数据记录：记录每个样品的检测结果，包括样品编号、甘油三酯浓度等。

四、数据分析9.数据整理：将检测结果进行整理，计算出每个样品的甘油三酯浓度。

10.数据统计：计算所有样品的甘油三酯浓度的均值、标准差、最大值和最小值等统计指标。

11.数据分析：根据统计结果，对数据进行进一步分析。

例如，可以绘制柱状图或折线图来直观地展示不同性别或年龄组的甘油三酯浓度分布情况。

五、实验结论根据实验数据和分析结果，我们可以得出以下结论：12.本实验采用的酶法测定甘油三酯的方法可靠，可以用于临床诊断。

13.通过对受试者血液样本的测定，我们得到了不同性别和年龄组的甘油三酯浓度分布情况。

这些数据可以为临床医生提供参考，以评估心血管疾病的风险。

14.从数据中可以看出，不同性别和年龄组的甘油三酯浓度存在差异。

因此，在临床实践中，应该根据不同人群的特点制定相应的甘油三酯控制标准。

15.需要注意的是，甘油三酯测定结果受多种因素的影响，如饮食、运动、药物等。

因此，在解释实验结果时应该综合考虑这些因素。

乙酰丙酮显色法测定血清甘油三酯含量【目的】1 ．掌握乙酰丙酮显色法测定血清甘油三酯含量的实验方法。

2 ．熟悉乙酰丙酮显色法测定血清甘油三酯含量的实验原理。

【原理】血清中的甘油三酯，经正庚烷 - 异丙醇混合剂抽提后，用氢氧化钾溶液皂化水解生成甘油和脂肪酸钾。

甘油被过碘酸钠试剂氧化生成甲醛。

甲醛与乙酰丙酮在氨离子存在下，加热生成黄色的 3.5 一二乙酰—1.4 一二氢二甲基吡啶衍生物。

与同样处理过的三油酰甘油酯标准液进行比色后，求得血清中甘油三酯的含量。

此法称为乙酰丙酮显色法又称为 Hantzsch 化学法，是最经典可靠的测定血清甘油三酯含量的实验方法，也是国内各实验室最多采用的方法。

其反应过程如下：1 ．皂化反应甘油三酯+ 3KOH → 甘油 + 3RCOOK2 ．甘油氧化反应甘油+ HIO 4 → HCHO + HCOOH + HIO 3 + H 2 O过碘酸甲醛甲酸碘酸3 ．显色反应【器材】1 ．分光光度计2 ．恒温水浴3 ．微量移液器4 ．混匀器5 ．中号试管【试剂】1 ．抽提剂正庚烷 / 异丙醇以 2/3.5(V/V) 比例混合，即正庚烷 200ml 与异丙醇 350ml 混匀，置棕色瓶中保存。

该试剂在室温下可保存两个月。

2 ． 0.04mol/L 硫酸溶液取浓硫酸 ( 比重 1.84 ， 95%)2.24ml ，缓慢加入约 100ml 蒸馏水中，冷却后再加蒸馏水至 1000ml 。

3 ．皂化剂取氢氧化钾 ( 分析纯 ) 60g ，溶于 600ml 蒸馏水中，再加异丙醇 400ml ，混匀，置棕色瓶中保存，于室温下保存可使用两个月以上。

4 ．氧化剂称取过碘酸钠 650mg ，溶于 500ml 蒸馏水中，然后加无水醋酸铵 77g ，溶解后，再加冰醋酸 60ml 。

5 ．显色剂取 4ml 乙酰丙酮，加到 1000ml 异丙醇中，混匀，置棕色瓶中，室温保存。

6 ．三油酸甘油酯标准溶液：（ 1 ）贮存液 (10mg/ml) ：精确称取三油酸甘油酯 1.00g ，用少量抽提剂溶解后，移入 100ml 容量瓶中，最后以抽提剂稀释至 100ml 刻度处。

甘油三酯测定操作规程甘油三酯（TG）是一种常见的生物体内能量储存物质，也是血液中的一种重要指标。

测定血液中的甘油三酯含量可以用于评估人体的脂质代谢水平和健康状况。

以下是甘油三酯测定的操作规程（SOP）。

一、实验室准备工作：1.1检查实验室仪器设备的工作状态，确保仪器正常运行。

1.2检查试剂的保存情况，确认试剂未过期。

1.3准备所需的实验室耗材和试剂。

二、试剂准备：2.2标准品溶液：准备一系列的浓度不同的甘油三酯标准品溶液，用于构建标准曲线。

三、仪器设置：3.1打开甘油三酯测定仪器，按照仪器说明书进行设置。

3.2按照试剂盒说明书的要求，设置测定参数，包括反应时间、温度等。

四、样品准备：4.1血液样品采集：按照标准操作程序采集受检者的静脉全血样本。

4.2血清分离：将采集的全血样本放置在离心机中，以适当的转速离心一段时间，将血浆和细胞分离。

4.3样品存储：为了保持样品的稳定性，将分离出来的血清样品储存在-80℃的低温冰箱中。

五、试剂操作：5.1标准曲线建立：取一定量的不同浓度的甘油三酯标准品溶液，按照试剂盒说明书中的操作方法进行处理，然后使用甘油三酯测定仪器测定各标准品的吸光度，并绘制标准曲线。

5.2样品处理：取一定量的血清样品，按照试剂盒说明书中的操作方法进行处理，使之适用于甘油三酯测定仪器。

5.3甘油三酯测定：将处理好的标准品和样品加入甘油三酯测定仪器中，按照仪器说明书中的要求进行测定。

六、数据处理：6.1利用标准曲线中各标准品的吸光度值和对应的浓度值进行回归拟合，得到样品中甘油三酯的浓度值。

6.2统计分析：对测定结果进行统计分析，根据实验需求进行数据分析。

七、质量控制：7.1进行质量控制：使用已知浓度和稳定性好的标准品进行质量控制，检查甘油三酯测定实验的准确性和可靠性。

7.2定期检查仪器的准确性和精密度。

7.3记录质量控制的结果和操作过程。

八、实验安全：8.1操作人员要穿戴好实验室安全用具，包括实验手套、眼镜等。

血脂四项实验室检测方法血脂四项实验室检测是指检测血液中的总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的含量，用于评估血脂水平和心血管疾病的风险。

下面将详细介绍血脂四项的实验室检测方法。

一、总胆固醇（TC）检测方法：1.试剂与仪器准备：质控品、标准品、血清分析试剂盒、全自动生化分析仪。

2.样本处理：将待测血清标本离心，用无菌管吸取上清液，将其转移到分析管中。

3.加样：根据试剂盒说明，加入足量的试剂，轻轻摇晃均匀。

4.反应：根据试剂盒说明，在恒温箱中将标本与试剂充分反应。

5.测定：使用全自动生化分析仪测定样本的吸光度，并根据标曲计算出样本中总胆固醇的浓度。

二、甘油三酯（TG）检测方法：1.试剂与仪器准备：质控品、标准品、血清分析试剂盒、全自动生化分析仪。

2.样本处理：待测血清标本离心，用无菌吸管吸取上清液，转移到分析管中。

3.加样：根据试剂盒说明，加入足量的试剂，轻轻摇晃均匀。

4.反应：在恒温箱中将标本与试剂充分反应，使甘油三酯被分解成甘油和游离脂肪酸。

5.测定：使用全自动生化分析仪测定样本的吸光度，并根据标曲计算出样本中甘油三酯的浓度。

三、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）检测方法：1.试剂与仪器准备：质控品、标准品、血清分析试剂盒、全自动生化分析仪。

2.样本处理：待测血清标本离心，用无菌吸管吸取上清液，转移到分析管中。

3.加样：根据试剂盒说明，加入足量的试剂，轻轻摇晃均匀。

4.反应：在恒温箱中将标本与试剂充分反应，使高密度脂蛋白与其他成分分离开来。

5.测定：使用全自动生化分析仪测定样本的吸光度，并根据标准曲线计算出样本中高密度脂蛋白胆固醇的浓度。

四、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）检测方法：1.试剂与仪器准备：质控品、标准品、血清分析试剂盒、全自动生化分析仪。

2.样本处理：待测血清标本离心，用无菌吸管吸取上清液，转移到分析管中。

3.加样：根据试剂盒说明，加入足量的试剂，轻轻摇晃均匀。

甘油三酯(TG)测定操作规程（SOP）一、用途体外定量测定血清、血浆样品中甘油三酯（TG）的含量。

二、临床意义（一）概述甘油三酯（TG）分子量约为885道尔顿，是血液中主要的脂质成分，主要参与体内能量代谢。

（二）临床意义甘油三酯是最常用的高脂血症筛查指标。

甘油三酯升高常见于糖尿病、肾病综合征、脂肪肝及其他肝病、SLE、胰腺炎、糖原累积病等。

妊娠中后期TG升高。

先天性脂蛋白脂肪酶缺陷时TG异常升高。

甘油三酯降低见于甲状腺功能低下，肾上腺皮质功能降低和肝功能严重低下。

甘油三酯与HDL－C间呈负相关，而HDL－C和冠心病的流行呈负相关。

测定血清TG评估HDL－C降低是否由于血中TG过多引起，以制定治疗方案有意义。

血清TG＞2．8mmol／L时，HDL－C下降的机会增大。

（三）医学决定水平0.45mmol/L：此值在正常下限附近，低于此值多与营养不良有关，应进行正确的诊断和治疗。

1.69mmol/L：年轻男性此值接近参考范围上限，为动脉粥样硬化性心血管的一个危险因子，应给予病人提供合适的预防建议。

4.52mmol/L：高于此水平常预示会发生动脉粥样硬化性心血管疾病，应给予适当治疗，如控制饮食和用降脂药物等。

三、检验原理甘油三酯＋H2O−−→−LPL甘油＋脂肪酸甘油＋ATP−→−GK 3-磷酸-甘油＋ADP3-磷酸-甘油＋O2−−→−GPO磷酸二羟丙酮＋H2O2H202＋4-AAP＋4-氯酚−−POD醌亚胺＋H2O−→醌亚胺的生成使505nm波长处吸光度上升，吸光度的变化与TG的含量成正比。

通过与同样处理的甘油三酯校准品比较，即可计算出样品中TG的含量。

四、样品血液样品原则上采集空腹血（禁食12小时）；患者处于平静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响；静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立即松开；正确使用抗凝剂；防止溶血；防止过失性采样。

样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆，防止样品对环境的污染、水分蒸发。

血清甘油三酯酶试剂法测定法1.实验原理脂蛋白酯酶（LPL）、甘油激酶（GK）、甘油-3-磷酸氧化酶（GPO）、过氧化物酶(POD)、Trinder反应偶联比色终点法。

反应式如下：LPL甘油三酯+ H2O 甘油+ 脂肪酸GK甘油+ ATP 甘油-3-磷酸+ ADPGPO甘油-3-磷酸+ O2二羟丙酮磷酸+ H2O2POD2H2O2+ 4-氨基安替比林+ 4-氯酚醌亚胺+ HCl + 4H2O2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。

2.2 类型：血清，肝素或EDTA抗凝血浆。

3. 标本存放：血清稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定1周；-20℃保存至少可稳定1年。

4. 标本运输：常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。

6. 实验材料6.1 试剂申能甘油三脂试剂盒（货号：112 5717170 1 试剂8×70ml）6.1.1 试剂组成Good’s缓冲液pH 7.2 50mmol/L4-氯酚4mmol/LATP 2mmol/L镁离子15mmol/L4-氨基安替比林0.5mmol/L甘油激酶（GK）≥400U/L过氧化物酶（POD）≥2000U/L脂蛋白酯酶（LPL）≥2000U/L甘油-3-磷酸氧化酶（GPO）≥500U/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95 g/L）为防腐剂。

不可入口！避免接触皮肤及粘膜。

应采取必要的预防措施使用试剂6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

血清甘油三酯测定的推荐方法——二步酶法：（讨论稿）38?5.4血标本应在静置的试管中自行凝固,室温约45rain.血清或血浆应在3小时内离心与血细胞分离,吸出后保存.5.5血清或血浆可在4℃密闭保存.一周内TC稳定.一20U至少可存放半年6操作步骤6.1终点法测定标本(血清或血浆)l0l,标准液【Ol,酶试剂1.00ml}设试;}lf空白管}温度与时间:37'C5min,或20一25℃l0min}比色波长:500nm(或520nm).颜色稳定至少60rain.故在达终点后60min内比色.结果计算:"rCrnmot/L=韭×定标血清浓度(retool~L)6.2速率法根据不同仪器及试剂(需增加酶用量)制定测定条件.7方法特性7.1精密度终点法批内CV<』.5.批间CV≤2.57.2准确性以参考方法(ALBK法)的血清为标准液时,本法测定结果与ALBK法基本一致.以Chol水溶液为标准时,结果往往比ALBK法低.故不宜采用Chol水溶液7.3灵敏度显色剂用酚时,TC5.2retool/L (200mg/d1)时的吸光度A约0.30～0.35,故A;0=0.005时的TC浓度约0.08mmol/L (3mg/d1).牡库鞋验信息导撮】994年革1毒革2期7.4测定范围血清与酶试剂用量之比为l:100时(见6.1],测定上界为】3mmol/L(500mg/d1).过高地提高血清用量的比例.会使测定上界降低.7.5特异性血清中多种非胆固醇甾醇会不同程度地与本试剂显色正常人血清中非胆固醇甾醇约占TC的1,故在常规测定中这种影响可以不计.7.B干扰因素终点法中血红蛋白高于2g/L会引起正干扰,胆红素>0.1g/L时有明显负干扰.抗坏血酸与甲基多巴血中浓度高于治疗水平时也使结果偏低.上述干扰物在速率法中影响较小.高甘油三酯血症(血清混浊)在本法中(血清与试剂量l:J00时)一般会明显影响.8参考值TC水平因生活条件(饮食,运动等)而异,随年龄上升.中青年男性略高于女性(北京城区居民平均在4.1～4.7mmol/L.160—180rag/d1).老年女性高于男性(男性平均d.9～5.2retool/L,i90—200mg/dl,女性平均5.4retool/L2】0rag/dl左右).中,老年人合适水平为5.2retool/L以下,5.2--6.5retool/L为临界水平(或轻度升高).≥6.5mmol/L(250mg/dI)为高胆固醇血症.≥7.8retool/L(300reIg/d1)可视为严重的高胆固醇血症.9参考文献(略)(李健斋执笔)《血液流变学基础及临床检测》征订启事由江西科学技术出版社出版.南京市建邶医院戴荣锦主任编着的《血{谩流变学基础及临床检测》一书将于95年初发行全书共28万余字,内容涉及流体力学概念,血液流变学基础理论,国内流行的血液流变学仪器和检测方法.全书理论联系实际,是血液流变学检测工作者的工具书.初,中级检验人员自学资料.中等检验专业学校的补充教材,也是参与血液流变学实践的基层临床医务工作者的参考书.欢迎订阅.请直接与作者联系(邮编210004).临庠栓驻信息导报199]牛幕-毒苇2期,?39?忸血看断,廿.;抽湾④～血清甘油三酯测定的推荐方法——二步酶法.,(讨论稿)堑墨垦兰三兰V许叶吕邦泰(宁波市临床检验中心,淅江宁波3I5.0.)牛,//[缩写名词]To甘油三酯FG游离甘油LpL脂蛋白酯酵GK甘油檄酶GPO甘油磷酸氧化酶POD辣根过氧化物酶ATP三磷酸腺苷ADP二磷酸腺苷4--CP4一氰酚4一AAP4一氪基安替比林PAPPOD,4--AAP,4一cP三者的简称AKP碱性磷酸酶1引言酶法测定TG方法很多,其中GPO—PAP法比其它方法具有更多的优越性而被推荐.综观其优点:具有方法简便,易于自动化I线性范围宽以及灵敏,精密和相对特异等,适合常规测定,但由于不经抽提,血清中存在的多种物质会引起干扰,其中FG的干扰最引人注目, 能引起血浆中FG增高的原因很多,诸如某些疾病,代谢紊乱,紧张,静脉营养,接受含甘油的药物治疗以及注射肝素后均可增高.目前,排除FG干扰的方法有二种,一是用不含脂酶的TG试剂作一FG空白减去(称外空白法)此法可同时测定FG值,但试剂成本和工作量均增加一倍.且脂血标本会产生负干扰,除非用不含脂酶和GK的酶试剂作标本空反应过程如下:白,但又增加工作量和费用,另一有效的方法是试剂分二步加入的预孵育法(称内空白法), 此法不增加费用,手工操作多加一步试剂,井能输入绝大部分牌号的自动分析仪,操作简便, 由于此法排除了酶法测定TG的主要干扰,且精密度和准确性均较好,为了配合脂类测定标准化工作的开展,本学会推荐此法作为TG测定的常规方法,对方法的细节规定如下.2原理将GPO—PAP法的试剂分成二部分,其中LPL(或/和脂酶)和双色原中的d--AAP组成试剂Ⅱ,其余部分成为试剂1,血清加试剂1,37℃孵育,因无LPL,TG不能水解,FG在GK和GPO作用下反应,生成HO.但因体系中不含d—AAP,Trinder反应不能完成.甘油——_=;==_.一磷酸甘油—_竺I:—磷酸二羟丙酮ATPADPH0+02H,0+0P0D然后加入试剂Ⅱ(LPL和4AAP),TG反应,最后生成红色苯醌亚胺,见下式TG+3H2OILPL+甘油+3FA0K3一磷酸甘油磷酸二羟丙酮AT/PA,DP2H2(02022H2O"{-Hc,一/,d—CP+4一AAP苯醌亚胺d0苯醌亚胺吸收峰波长为500nm,由于吸收峰较平坦,波长在480—520nm范围内均可测定.3仪器3.1手工操作光度计,分光光度计(普及型)和半自动分析仪均适用,微量加样器,吸管以及稀释仪均应校准3.2自动分析能完成二步反应程序的自动分析仪均适用.4试剂4.1原料试剂的纯度要求脂酶(EC3.1.1.3)来源于酒曲菌属或假单胞菌属, 杂酶中ATP酶应≤0.001%,无葡萄糖氧化酶和尿酸酶}比活性≥2400U/mg冻干物(25"C, 橄榄油)LPL(EC3.t.1.34)来源于假单胞菌属.杂酶中葡萄糖氧化酶≤0.001-尿酸酶≤0.05%,ATP酶40.00.5.比活性100U/mg冻干物(25'C.胆固醇油酸盐).GK(EC2.7.1.30)来源于芽胞杆菌属或念珠菌属,杂酶中测不出氧化酶,古甘油应<5.g/l00U,比活性≥5U/mg冻干物(25"C,甘油,ATP),芽胞杆属GK的三级结构和热稳定性均比念珠菌属GK要好.GPO(EC1.1.3.一)来源于小球菌属或纤维单胞菌属.杂酶中乳酸氧化酶≤0.002,尿酸酶≤0.001,不古过氧化氢酶,比活性≥60U/rag冻干物(37℃,L—a一磷酸甘油) POD(EC1.11.1.7)来源于辣根.杂酶中过氧化氢酶≤0.7,ATP酶0.001.纯度值(Ad03nm/A2)≥3.0,比活性≥250U/ms冻干物.(25℃,愈刨木酚,H2Oz).ATP含量≥98Tritonx一100不含过氧化物.Tris,一cP.4--AAP和胆酸钠等均为分析纯试剂.4.2试剂配制Tris—HC]缓冲液:0.15mol/L,pH7.6,4--CP2.5retool/L,硫酸镁10retool/L.胆酸钠3.5retool/L,Tritonx一1000.1g/L.ATPi.0mmol/I..临库检验信息导植1994牛第1春第2期酶溶液I:GK500U,GPO3000U,POD1000U,溶于50mlTris—Hcl缓冲液中.酶溶液Ⅱ:脂酶或LPL30000U,4一AAPlmmol溶于50mlTrist—Hcl缓冲液中. 4.3应用试剂配制4.3.1手工操作用应用试剂I:酶溶液I5ml加Trjs—HCd5ml混匀.应用试剂I:酶溶液Ⅱ5ml加Tris--HCI45ml混匀.4.3.2自动分析用应根据各分析仪试剂I和I的用量调整缓冲液与酶的比例(但缓冲液与酶I和酶I的最终比例9t0.5t0.5不变).一般分析仪试剂I和I的用量为3:I,但Monarchl000或2000,试剂I最多只能加8Ol,而试剂I可以多加,试剂I和I的用量以l,3较合适,分析仪应用试剂的配制见下表.附表分析仪应用试剂的配翩应用试剂配制比例析蓑兰一l00o程序特殊的分析仪可根据上述原则配制应用试剂.4.dTG测定参考物人血清中的TG,含有不同链长的脂肪酸和不同数量的不饱和键,以及TG的疏水性并被包裹在脂蛋白颗粒核心, 因此要制备与血清中TG完全相同的一级标准似乎是不可能的.TG反应的终产物是甘油.故常用甘油作参考物,但甘油本身不是分析物.不参加反应的全过程,只能认为是一种指示反应的参考物,且不能作为二步酶法的参考物.三油酸甘油酯.虽然不能完全代表血清中TG的脂肪酸组成,但与血清中TG的脂肪酸平均链长相似,可用高纯度的产品配成水溶液作TG 测定的参考物.2mmol/L三油酸甘油酯水溶液的配制精密称取三油酸甘油酯l77mg(可直接称入l00ml容量瓶中),加Tritonx一1005ml,摇动,使成乳浊状,置56℃水溶约l0分钟.澄清临庳挂驻信息导掖1994年苹1卷羊2期后加蒸馏水90ml,冷却至室温,再加蒸馏水至刻度线,2ml安培分装置4℃至少稳定二年,注意:切勿冰冻,冰冻后溶液变混(加热后会澄清),久冻后值会降低.5标本采集,处理和贮存5.1受检者在抽血前一周应保持平时的饮食习惯,停用影响血脂的药物(如降脂药和避孕药等),禁食12小时后清晨空腹取坐位(除卧床不起者外)至步5分钟后来血,用止血带时间不超过一分钟,静脉穿刺成功后立即松开止血带抽血.5.2血标本静置室温自行凝固,及时分离血清,取出备甩,血凝固后如不及时分离血清,红细胞中的磷酸酶会选出,水解血清中的甘油酯, 干扰测定.EDTA或肝素抗凝血浆亦可用作测定,注意在分离浆时要有足够的离心力和离心时间使血小板完全沉淀,否则测定体系中的表面活性剂能使务血小板破碎,释放出AKP干扰测定,用血浆测定结果比血清低3.5.3如不能及时测定,血清或血浆应贮于密闭的窖器内,置4℃一周内TG稳定,--20℃数月内稳定.B操作步骤6.1手工操作分别加10gl标本,标准溶液和蒸馏水于测定管,标准管和空白管中,各管均加0.5ml试剂I,混匀,37℃水浴5分钟}然后各管再加入0.5ml试剂I,混匀后37℃水浴10分钟,波长500rim,空白管校零,读取标准管与测定管A值,按下式计算结果:器善号×标准管含量;TOmmot/6.2自动分析参数波长:50Onm,反应温度: 37℃,标准:2.0mmol/L,空白:试剂,标本:3pl}试剂I:240l,反应时间:d分钟试剂I:80gl,反应时间j8分钟.注:1.如用双波长,次波长为620nm2.如标本增加,试剂I和I亦相应增加,标本试剂比以ll00左右为宜.3.按本法配制的试剂6分钟到达终点,某些仪器反应时间限制得较短,如Techni—con为9分钟,Ciba--Corning为10分钟,第一步反应4分钟,第二步反应只能5或6分钟,但对测定结果影响不大.d.Monarch程序中第二试剂先和标本混合反应,试剂I应放在第二试剂的位置,试剂I则放在第一试剂位置.7本法的技术指示7.1排除Ft3能力预孵育4分钟能完全排除2mmol/L的FG7.2试剂空白吸光度A500rim≤0.05.7.a反应到达终点时间指TG反应,不包括预孵育37℃≤8分钟.7.4显色后的稳定性≥30分钟.7.5灵敏度2mmol/L(177mg/d1)的TG,A50Onm应>/0.2.7.6特异性脂酶或LPL除能水解TG外还能水解甘油一酯和甘油二醋(血清中二者约占TG的3),亦被计算在TG中,实际上测定的是总甘油酯.7.7线性范围11.3mmol/L(1O00mg/d1).7.8精密度批内CV≤3.0'批间CV≤5.0.7.9准确度本法结果和V anHandeI法及减FG空白的GPO—PAP法一致.7.10干扰本法显色(Trinder)反应中存在干扰,干扰因素与胆固酵测定类同.胆红素≥100vmol/L或抗坏血酸≥170pmol/L时出现负干扰,血红蛋白的干扰是复杂的,它本身的红色会引起正干扰,溶血后,红细胞中的磷酸酶可水解磷酸甘油产生负干扰,当Hb~Ig/L时反映为负干扰I≥1g/L时出正干扰,但Hb≤2g/L时干扰不显着,明显溶血标本不宜作TG 测定.5种常用抗凝剂在规定的抗凝浓度内不影响结果.34种常用药物(不包括降脂药,避孕药或注射肝素)在治疗浓度时不影响测定结果.脂血标本(TG浓度在本法线性范围内)无明显干扰.8对试剂盒的质量要求a.1技术指标试剂盒的各项技术指标均应达到上述水准.8.2稳定性未开封的试剂至少在6个月内稳定(上述指标不变),这就需要加入稳定剂,并要求加入的稳定剂对反应无干扰,应用试剂贮4℃至少稳定三天,此期间不应出现可见的红色,技术指标不应降低.8.3橙明度液态试剂配成应用液后,以及冻干,干粉或片剂复溶后应无微细的颗粒和肉眼眼可见的红色,A500nm≤0.05.8.4试剂盒应标明出厂日期及有效期,说明书应列出试剂配方和技术指标.9参考值TG水平与种族,年龄,性别以及生活习惯(如饮食,运动等)有关.我国人的TG水平显着低于欧美白人,国内李健斋等根据北京市人群的调查提出成年人的合适TG水平<2.26mmo[/L(<200mg/d1)I>11.3mmol/L (1000mg/d[)为严重的高TG血症.临康世齄信息导报1994牛苇l毫蓦2期lo参考文献(略)附注:鉴于目前TG测定的二步酶法试剂盒只有十别厂家生产,使用该法的实验室亦只局限在少数地区t因此,现阶段在推荐二步酵法的同时允许一步酵法并存, 然后逐步过渡到统一采用去FG的二步酶法,但一步酵法亦应按照标准化的要求,即除配成单一试荆(试剂中ATP可低至05mmol/L)和一步反应外,其它要求例如原料试剂的纯度要求,参考物.标本的采集,处理和贮存,方法的技术指标(不包括排除FG的能力)以及对试剂的质量要求均同二步酶法.要求生产TG测定试剂盘的厂家尽快发展二步酶法试剂盘的生产.并要求研究实验室和参加脂类测定标准化的实验室率先采用去FG的二步酶法.其它实验室应创造条件逐步统一采用二步酵法.在未统一方法前,实验室报告TG 测定结果时应注明"去FG的值或.未去FG的值.这将有助于临床医生对结果的正确解释.丽珠试剂厂申检试剂全部合格7月22日,由卫生部中国药品生物制品检定所主持的生物制品"贴签"在珠海丽珠集团丽球试剂厂进行.在检定所,市药政部门的专家监督下,贴有"中国药品生物制品检定所生物制品封整"的3批乙肝表面抗原试剂(HB—sAg)和5批丙肝试剂(HCV)被逐一启封,接着,工作人员将特制的"检定合格"的全息防伪标签一一贴在丁试剂盒上.据在场的中国药品生物制品检定所专家说,自卫生都确定"对用于供血员血样检验的体外免疫诊断试剂实行批批国家检定"这一建国后最严格的检定程序及合格标准以来,丽珠试剂厂是国内目前少数申报检验并唯一两个产品,三个以上批号均合格的厂家.为了保障输血安全及控制乙肝,丙肝,艾滋病,梅毒等严重传染性疾病的传播,卫生部于2月向全国颁发文件,要求自今年起对所有用于供血员血样检验的HBsAg,HCV等体外诊断试剂实行批批国家检定,并相应制订了极其严格的抽检程序及合格标准.凡按抽检程序检定合格的产品,由检定所下发特制的全息防伪标签并即时监督贴签,方可出厂销售,进入临床.若不合格,将在中央及地方检定人员监督下销毁报废.据悉,这是迄今为止我国对用于供血员血样检验的体外免疫诊断试剂实行的最严格的抽检程序和最严厉的检定标准.丽珠试剂厂自去年全面推行GMP以来,从增强市场经济条件下全员质量意识人手,一是进一步健全完善了质量保证体系和质量控制系统I二是建立了质量审计制度I三是对生产, 质量管理的每一个部门,每一道工序,每一个岗位都制订了标准操作规程(soP),并严格执行,从而保证了产品质量稳步提高.此次检定合格的乙肝HBsAg达到灵敏度<Ing(adf亚型)等标准,丙肝HCV达到】98份临床Panol, 阴性阳性符合率及总符合率95.转载自《健康报》J994年8月5日第三版。

血清甘油三酯测定标准操作规程1.检验原理（酶法）甘油三酯经脂蛋白酯酶（LPL）作用，可以水解为甘油和游离脂肪酸，甘油在ATP和甘油激酶（GK）的作用下，生成3-磷酸甘油，再经磷酸甘油氧化酶（GPO）作用氧化生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢，过氧化氢与4-氨基安替比咻（4-AA）及和3,5-二氯-2-羟笨磺酸钠（DHBS）在过氧化物酶（PoD）作用下，生成红色酶类化合物，其显色程度与甘油三酯的浓度成正比。

甘油三酯+。

2上J甘油+游离脂肪酸甘油+ATP—二→3-磷酸甘油+ADP3-磷酸甘油+O2磷酸二羟丙酮+乩。

22”2°2+4-AA+DHBS您.>红色醒类物质+4H2O-20°C可保存1年。

样本应避免反复冻融！4.检验方法；仪器法（详见DF-603∕DI-600标准操作规程）5参考范围：6.检验结果的解释：6.1样本含量超出线性范围时，建议用O.9%(W∕V)的氯化钠溶液稀释样本，最大稀释不超过5倍。

7. 2.单位换算:mg∕dl=mmol∕L×88.58.检验方法的局限性8.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。

7.2若试剂浑浊，或以水空白在510nm处吸光度大于0.200时不能使用。

8.试剂性能指标8.1试剂外观：Rl和R2均为无色透明或淡黄色液体，无悬浮物及沉淀。

8.2装量：不低于标识值。

8.3空白吸光度：在51Onm处，光径ICm时，空白吸光度AWO.2008.4线性区间：试剂的线性区间为[1.13-9.04]mmol∕L,在此线性区间内：a)线性相关系数r应不小于0.9900；b)[1.13-2.03]mmol∕L区间内，线性绝对偏差不超过0.20mmol∕L;[2.03-9.04]umol∕L区间内，线性相对偏差不超过±10%。

8.5准确度：相对偏差应不大于±15%。

8.6分析灵敏度:在51Onm处,光径IenI时,测量已知浓度样品换算成ImmoI/L 的甘油三酯时，吸光度变化4A三ol∕L20.0058.7精密度8.7.1批内精密度：CV≤5%8.7.2批间精密度:R≤10%8.8稳定性：(2-8)C下，原包装存放的试剂有效期为12个月.取到期后1个月的试剂进行测试，应满足1-8.7.1的要求。