肺炎克雷伯菌产生的碳青霉烯酶KPC

产KPC酶肺炎克雷伯菌耐药机制的研究进展作者：王国臻王玉格王彬马丽王宪钰李天园来源：《智富时代》2019年第07期【摘要】产碳青霉烯（Klebsiella pneumonia carbapenemase，KPC酶）酶类细菌的出现和扩散已成为全球性公共卫生问题，而碳青霉烯类抗菌药物目前是临床使用的抗菌谱最广、抗菌药物活性最强的一类抗菌药物，在临床上可用于多重耐药的细菌感染，目前引起肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要原因是细菌产生了KPC酶，而最优的治疗方案尚未明确，其耐药机制引起了国内外医者的广泛关注。

【关键词】KPC酶；肺炎克雷伯菌；肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶；耐药性产KPC酶肺炎克雷伯菌的增多已成为国内外医院抗感染治疗的主要问题，据国内的细菌耐药性药物性统计资料显示，革兰阴性杆菌中多重耐药菌株的发生率日趋增加，碳青霉烯类抗菌药物在临床上往往被认为是治疗革兰阴性感染最有效的抗菌药物，尤其是对产超广谱β-内酰胺酶（extended spectrumβlastamases，ESBLs）腸杆菌科细菌有较好的疗效。

随着临床上碳青霉烯类抗菌药物的广泛使用，近年来对碳青霉烯类抗生素敏感性下降甚至耐药的肠杆菌科被陆续检出，KPC型碳青酶烯酶是目前引起肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素耐药的最主要原因，然而肺炎克雷伯菌是目前常见的致病菌，具有较强的毒力和侵袭力，在引起医院感染的细菌中占前五位，也是blaKPC基因最早被检出的肠道菌群细菌。

KPC酶肺炎克雷伯菌的出现，使得临床上抗感染治疗面临严峻的挑战。

为了缩短临床治疗周期和防止抗菌药物滥用的发生，对产碳青霉烯酶的菌株的监测势在必行。

1.肺炎克雷伯菌的特征1.1肺炎克雷伯菌的感染特征肺炎克雷伯菌是肠道菌群之一，临床分离率仅次于大肠埃希菌，是临床检出率最高的致病菌和常见的医院感染菌，其中肺炎克雷伯菌肺炎亚种可引起原发性肺炎和各种肺内感染，包括肠炎和脑膜炎（婴儿），败血症，是酒精中毒者、慢性阻塞型肺部疾病患者并发肺部感染的潜在危险因素。

肺炎克雷伯菌耐药分析【摘要】目的探讨医院分离1094株肺炎克雷伯菌的产酶情况。

方法采用2012年clsi推荐产超广谱β内酰胺酶（esbls）和碳青霉烯酶的检出方法，主要是纸片扩散法和改良hodge试验。

结果1094株肺炎克雷伯菌产esbls率为69.7%，改良hodge试验阳性株22株。

结论肺炎克雷伯菌的产esbls率一直居高，对碳青霉烯类抗生素的耐药现状十分严峻，临床工作人员应做到密切观察，提前预防。

【关键词】肺炎克雷伯菌；产超广谱β内酰胺酶；碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌是一种重要的条件致病菌，常引起血液、痰液、尿液、胆汁、手术切口、软组织损伤等多个部位感染，也在逐渐成为医院感染重要病原菌之一。

1 资料1.1 菌株来源临床分离肺炎克雷伯菌1094株，采用美国bd公司phoenix100全自动细菌鉴仪进行菌株鉴定。

1.2 质控菌株大肠埃希菌atcc25922。

1.3 药敏纸片与培养基药敏纸片均来自于英国oxoid公司；mh 平板来自于郑州安图生物试剂公司。

2 方法2.1 whonet5.5软件进行统计分析。

2.2 esbls检测方法满足任一抑菌环直径头孢他啶/克拉维酸（30/10 μg）头孢他啶（30 μg）≥5 mm或头孢噻肟/克拉维酸（30/10 μg）头孢噻肟（30 μg）≥5 mm条件的肺炎克雷伯菌为esbls阳性株。

2.3 改良hodge试验取atcc25922配制0.5 mcf，1：10稀释成0.05 mcf，将制备的菌悬液均匀涂满整个mh平板，干燥3～5 min，将10 μg美罗培南纸片贴在mh平板中心，然后用无菌棉签蘸取待测菌或质控菌3～5个菌落，从美罗培南纸片边缘向mh琼脂板边缘划线（20～25 mm），16～20 h观察结果。

3 结果3.1 1094株肺炎克雷伯菌产esbls率为69.7%，对头孢他啶的耐药率为68.2%，对头孢噻肟的耐药率为71.3%，对头孢吡肟的耐药率为68.5%。

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌中KPC基因分布杨朵;胡智颖;辛续丽【摘要】目的检测碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌中KPC基因分布情况,为此类菌感染的预防与控制提供理论依据.方法改良Hodge试验检测医院临床分离肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶表型;PCR法检测KPC基因的携带率.结果 642株碳青霉烯类抗生素耐药的肺炎克雷伯菌中,Hodge试验阳性率为96.6％.KPC基因的携带率为50.9％,均为KPC-2型.结论该医院临床分离的碳青霉烯类抗生素耐药肺炎克雷伯菌中KPC基因主要为KPC-2基因.【期刊名称】《中国感染与化疗杂志》【年(卷),期】2016(016)004【总页数】3页(P465-467)【关键词】肺炎克雷伯菌;碳青霉烯酶;KPC基因;Hodge试验【作者】杨朵;胡智颖;辛续丽【作者单位】首都医科大学附属北京世纪坛医院中心实验室,北京100038;首都医科大学附属北京世纪坛医院检验科,北京100038;首都医科大学附属北京世纪坛医院检验科,北京100038【正文语种】中文【中图分类】R378肺炎克雷伯菌是常见的医院感染病原菌，碳青霉烯类抗生素是治疗包括产ESBL在内肺炎克雷伯菌感染的重要抗菌药物。

但近年来碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的出现，给临床感染控制提出了严重挑战。

目前研究认为，对碳青霉烯类抗生素产生耐药机制主要包括细菌外膜蛋白通透性下降、产碳青霉烯酶等［1］，其中产碳青霉烯酶，特别是KPC型酶（Klebsiella pneumoniae carbapenemase，KPC）是肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素产生耐药的重要机制。

我院从2009年首次检出碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌，近年来此类菌已成为本院感染的重要致病菌，了解其对碳青霉烯类抗生素的耐药机制，了解KPC基因的分布情况，将有助于此类菌医院感染的有效控制。

1.1 材料1.1.1 菌株来源 642株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌分离自本院2011年1月-2013年12月临床标本（剔除同一患者的同一部位重复菌株）。

肺炎克雷伯菌产生的碳青霉烯酶KPC（Klebsiella Pneumoniae Carbapenemase）–2001年在美国北卡罗来纳州首次报道–属于A类2f组丝氨酸碳青霉烯酶β-内酰胺酶–水解包括碳青霉烯类抗生素在内的所有β-内酰胺类抗生素,但对头孢他啶和头孢西丁相对较弱–酶抑制剂如克拉维酸有部分抑制作用–编码基因位于质粒上KPC-4和KPC-5活性产KPC菌株的快速播散KPC-4和KPC-5对碳青霉烯类抗生素的水解活性比KPC-2要弱 * 产KPC菌株的快速播散对头孢他啶的水解活性增强–2001：美国对克拉维酸的抑制作用较敏感–2001-2008：美国, 24州–2005：法国(病人曾经在美国住院治疗)–2006：哥伦比亚、以色列–2007：中国–2008：希腊、古巴、苏格兰、英国–2009：巴西、挪威、瑞典、爱尔兰、波兰AAC,2009,53,557-562产KPC酶的菌株* 肺炎克雷伯菌* 其他肠杆菌科细菌：大肠埃希菌、产酸克雷伯菌、沙门菌、肠杆菌属、黏质沙雷菌、弗劳地枸椽酸杆菌和奇异变形杆菌* 铜绿假单胞菌* 恶臭假单胞菌KPC酶的传播* 产KPC-2或KPC-3的肺炎克雷伯菌以克隆形式传播–产KPC菌株首次在美国纽约地区暴发流行: 2003年8月-2004年6月，布鲁克林地区10家医院调查分离到96株产KPC酶肺炎克雷伯菌，80%以上为同一核型–以色列、希腊和中国是美国以外近2年来流行KPC酶的国家：均以克隆传播为主KPC酶的传播* 携带者造成产KPC酶菌株在不同国家散播–2005年，法国报道了美国以外第一例产KPC-2肺炎克雷伯菌，该病人曾经在美国住院治疗；2007年，另外一株产KPC-2的肺炎克雷伯菌则来源于希腊的病人–在挪威报道的6株产KPC细菌中，有3株来源于希腊，1株来源于以色列–以色列产KPC-3酶的肺炎克雷伯菌流行株与美国的菌株有克隆相关KPC酶的传播 KPC酶的传播* 编码KPC酶基因的质粒水平传播 * 转座子Tn4401携带KPC编码基因–Rasheed等研究发现在美国密西根州一家医院–Tn3类转座子，含有转座酶(tnpA) 、解离酶分离的产KPC酶产酸克雷伯菌（1株）和弗劳 (tnpR)、ISKpn6 、KPC-2和ISKpn7 地枸橼酸杆菌（1株）携带相同的95kb质粒，–Naas等认为可能是KPC酶传播的“起源”并编码KPC-2基因–Tn4401在美国、哥伦比亚和希腊均有发现–我国也在同一家医院分离到产KPC-2酶大肠埃–Tn4401已出现在不同来源菌株、不同菌种、不希菌、粘质沙雷菌和肺炎克雷伯菌，进一步研同大小的质粒上究发现携带编码KPC-2基因的质粒完全相同性中国产KPC酶菌株中国产KPC酶菌株* 2007年初我国在亚太地区首次报道了首株 * 不同地区存在不同流行的克隆型，但有少产KPC-2酶肺炎克雷伯菌数交叉传播* 产KPC菌株：浙江、上海、江苏、安徽、 * 编码KPC基因位于不同大小的质粒上，但武汉、天津、哈尔滨在有些地区、不同菌种中有相同质粒的水–浙江省11个地区中有9个地区发现产KPC菌平传播株：主要是肺炎克雷伯菌* 与国外报道不同，我国编码KPC基因位于–其它肠杆菌科细菌：产酸克雷伯菌、产气肠杆不同的转座子上，可出现在不同大小的质菌、大肠埃希菌、弗劳地枸椽酸杆和粘质沙雷粒上菌产KPC酶菌株的耐药性* 单产KPC酶菌株表现只是对碳青霉烯类抗生素低度耐药，合并膜孔蛋白缺失，高度耐药* 可与其它质粒介导的耐药基因同时存在，如qnr、OXA、ESBLs、AmpC、氨基糖苷甲基化酶基因等，可形成所有常规抗菌药物耐药治疗* 产KPC菌株体外药敏试验可对所有常用抗菌药物耐药，但对替加环素、多粘菌素B和多粘菌素E敏感率较高，在国外已用于治疗* 2008年SENTRY 监测项目发现73株产KPC酶肠杆菌科细菌对替加环素敏感率为100%* 但Daly等报道一例用替加环素治疗失败，由产KPC酶肺炎克雷伯菌形成的脓肿，从刚分离时体外MIC值0.5ug/ml，到治疗过程中升到2ug/ml * 因为尿液中浓度低，替加环素不推荐用于治疗尿道感染11.10行ERCP：十二指肠乳头癌* 曾培养到细菌：鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯肝胆外科菌、凝固酶阴性葡萄球菌、白色念珠菌11.18行胰十二指肠切除术* 曾用抗生素：佳宁、美平、舒普深、联邦阿乐11.19血压下降，剖腹探查：胰肠吻合口出血SICU仙、替考拉宁、稳可信、立思丁、米卡芬净12.30再次剖腹探查：肠系膜静脉出血KPC (Klebsiella pneumoniae carbapenemase)* 1998年发现于美国的肺炎克雷伯菌* 有多重的水解活性，如碳青霉烯类、青霉素类、氨曲南、头孢菌素类等，但对头孢他啶、头孢西丁水解力较低* 可以被克拉维酸、三唑巴坦部分抑制* 不被EDTA抑制，加Zn之后活性不增强鲍曼不动杆菌A类酶 ESBLs in AB TEM-1 276株 SHV 20株* PER-1: 土耳其、法国、比利时、玻其中SHV-12 7株利维亚、美国、韩国、中国等* VEB-1: 法国、比利时B-3 1株 PER-1 121株640株鲍曼* SHV-12、SHV-2: 中国大陆* CTX-M-3: 中国大陆CTX-M-3 1株CTX-M-14 2株CTX-M-24 2株 * CTX-M-2: 日本,玻璃维亚2009年11家医院1900株不动杆菌属(鲍曼不动86.1%)株产CTX-M-3鲍细菌的耐药率（%）100曼不动杆菌908069.66670 63.8 65.160.656.9 57.5于一个～55kb 的 60 52.9 55.2 50可接合性质粒 4029.330 23.8接合子耐药率（％）2010过接合实验易于移到大肠埃希菌米诺环素亚胺培南美罗培南阿米卡星头孢他啶头孢吡肟庆大霉素环丙沙星可能来自于肠杆菌头孢哌酮/舒巴坦氨苄西林/舒巴坦哌拉西林/他唑巴坦科细菌！抗菌药物1对头孢哌酮/舒巴坦耐药率较低为23.8%，高于2008年（14.6%）。

68生物技术世界 BIOTECHWORLD肺炎克雷伯菌是医院感染常见的病原菌,此类菌易产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),也有携带质粒介导的头孢菌素酶(Ampc酶)的报道[1]。

碳青霉烯类抗菌药物具有抗菌谱广、抗菌活性强、快速杀菌的作用,常用于对此类菌的治疗。

随着碳青霉烯类抗菌药物的大量使用,肺炎克雷伯菌对此类药物逐渐产生了耐药性,其常见的耐药机制如下[2]:(1)高产Ampc酶合并膜孔蛋白缺失;(2)产生了水解碳青霉烯类药物的碳青霉烯酶;(3)青霉素结合蛋白(PBP)的改变;(4)主动外排系统的活跃。

KPC酶是目前引起肺炎克雷伯菌耐药的主要原因。

自2001年,Yigit [3]等首次报道了KPC-1型(2008年更改为KPC-2型),世界各地陆续出现产KPC酶菌株,有报道显示中国分离的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯耐药主要以KPC-2酶为主。

KPC酶在Bush分类中属2f亚群[4],Ambler分类中属于A类酶,其基因由质粒编码,能够水解碳青霉烯类、青霉素类、头孢菌素类和氨曲南等抗菌药物。

这些菌株的出现常使抗感染治疗陷入无药可用的境地,患者死亡率很高。

由于KPC酶基因位于可移动的质粒上,能够在不同菌种间水平传播而使细菌获得耐药性,容易在医院范围内引起爆发流行,在我国浙江地区已经流行,而东北地区尚无有关KPC酶的报道。

本研究通过改良Hodge试验及对编码KPC-2酶的基因进行检测,了解中国医科大学附属一院住院患者分离的肺炎克雷伯菌产KPC-2酶的情况,现报道如下。

1 材料和方法肺炎克雷伯菌KPC-2酶的临床调查杨春艳(铁岭卫生职业学院 辽宁铁岭 112000)摘要:目的:了解从中国医科大学附属第一医院临床患者分离的肺炎克雷伯菌产生KPC酶的情况。

方法:筛选亚胺培南或(和)美洛培南的最小抑菌浓度2~4 μg／mL或(和)抑菌环直径16~21mm肺炎克雷伯菌,采用CLSI推荐的改良Hodge试验进行碳青酶烯类抗菌药物耐药的表型检测,采用聚合酶链反应(PCR)进行KPC-2的基因型检测。

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的KPC酶检测目的:检测乌鲁木齐市地区两家综合型大型三级甲等医院耐碳青霉烯类的肺炎克雷伯菌的KPC型耐药基因,分析耐碳青霉烯类的耐药机制。

方法:收集2014年8月到2015年5月31株对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的肺炎克雷伯菌。

通过全自动细菌鉴定分析仪VITEK2和MS筛选出耐亚胺培南或美罗培南或亚胺培南美罗培南同时耐药的肺炎克雷伯菌,采用改良Hodge试验和聚合酶链反应(PCR)扩增检测细菌产KPC型碳青霉烯酶,对KPC酶阳性的菌株做质粒转移接合试验,并将质粒转移接合成功的菌株进行测序分析其基因型别。

结果:针对31株碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌,用改良的Hodge试验18株阳性,有20株经PCR基因扩增后的产物经DNA基因测序后,比对结果为KPC-2型碳青霉烯酶,质粒转移接合试验有5株转移成功。

测序结果均为KPC-2型碳青霉烯酶。

结论:乌鲁木齐两家综合型医院耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷伯菌耐药机制主要携带KPC-2型碳青霉烯酶耐药基因,临床与实验室应给予重视。

肺炎克雷伯菌耐药分析作者：陈国华来源：《中国实用医药》2013年第16期【摘要】目的探讨医院分离1094株肺炎克雷伯菌的产酶情况。

方法采用2012年CLSI 推荐产超广谱β内酰胺酶（ESBLS）和碳青霉烯酶的检出方法，主要是纸片扩散法和改良Hodge试验。

结果 1094株肺炎克雷伯菌产ESBLs率为69.7%，改良Hodge试验阳性株22株。

结论肺炎克雷伯菌的产ESBLs率一直居高，对碳青霉烯类抗生素的耐药现状十分严峻，临床工作人员应做到密切观察，提前预防。

【关键词】肺炎克雷伯菌；产超广谱β内酰胺酶；碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌是一种重要的条件致病菌，常引起血液、痰液、尿液、胆汁、手术切口、软组织损伤等多个部位感染，也在逐渐成为医院感染重要病原菌之一。

1 资料1.1 菌株来源临床分离肺炎克雷伯菌1094株，采用美国BD公司PHOENIX100全自动细菌鉴仪进行菌株鉴定。

1.2 质控菌株大肠埃希菌ATCC25922。

1.3 药敏纸片与培养基药敏纸片均来自于英国OXOID公司；MH平板来自于郑州安图生物试剂公司。

2 方法2.1 WHONET5.5软件进行统计分析。

2.2 ESBLs检测方法满足任一抑菌环直径头孢他啶/克拉维酸（30/10 μg）头孢他啶（30 μg）≥5 mm或头孢噻肟/克拉维酸（30/10 μg）头孢噻肟（30 μg）≥5 mm条件的肺炎克雷伯菌为ESBLs阳性株。

2.3 改良Hodge试验取ATCC25922配制0.5 mCF，1：10稀释成0.05 MCF，将制备的菌悬液均匀涂满整个MH平板，干燥3～5 min，将10 μg美罗培南纸片贴在MH平板中心，然后用无菌棉签蘸取待测菌或质控菌3～5个菌落，从美罗培南纸片边缘向MH琼脂板边缘划线（20～25 mm），16～20 h观察结果。

3 结果3.1 1094株肺炎克雷伯菌产ESBLs率为69.7%，对头孢他啶的耐药率为68.2%，对头孢噻肟的耐药率为71.3%，对头孢吡肟的耐药率为68.5%。